儀器分析凌悅菲Contents目1

234錄儀器分析5

高效液相色譜法概述6

高效液相色譜儀構(gòu)成及作用

檢測(cè)器的分類

高效液相色譜法的分類

高效液相色譜法的應(yīng)用

高效液相色譜儀的操作儀器分析

一、基本組成高效液相色譜儀具有穩(wěn)定流量的流動(dòng)相，通過高壓輸液系統(tǒng)將樣品帶入色譜柱，在色譜柱中不同待測(cè)組分得到分離，并先后從色譜柱中流出，經(jīng)過檢測(cè)器和數(shù)據(jù)獲取與處理系統(tǒng)產(chǎn)生不同色譜峰和色譜數(shù)據(jù)。因此，它由高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、餾分收集器以及數(shù)據(jù)獲取與處理系統(tǒng)（稱為色譜工作站）等六部分組成。

思政：換一種氛圍，多事物間的區(qū)分更清晰儀器分析

1.高壓輸液系統(tǒng)高壓輸液系統(tǒng)包括貯液罐、高壓輸液泵和梯度洗脫裝置等。（1）貯液罐貯液罐是存放流動(dòng)相或組成流動(dòng)相的各種溶劑的容器，因此其對(duì)流動(dòng)相必須是化學(xué)惰性的，常用的材質(zhì)為玻璃。容積一般為0.5～2L。為了保持一定的輸液靜壓差，貯液罐放置的位置要高于高壓輸液泵。

儀器分析

1.高壓輸液系統(tǒng)流動(dòng)相或組成流動(dòng)相的各種溶劑放入貯液罐前應(yīng)過濾和脫氣。貯液罐在使用過程中應(yīng)密閉，以防止由于溶劑蒸發(fā)引起流動(dòng)相組成的變化，也可防止空氣中的O2、CO2等氣體重新溶解于已經(jīng)脫氣的流動(dòng)相或組成流動(dòng)相的各種溶劑中。儀器分析

（2）高壓輸液泵高壓輸液泵是高效液相色譜儀的重要部件之一，其作用是提供動(dòng)力，以便在高壓下連續(xù)不斷地輸送流動(dòng)相到色譜柱中，使試樣在色譜柱中完成分離，其性能的好壞直接影響高效液相色譜儀的整體性能，因此，輸液泵應(yīng)能提供恒定平穩(wěn)的輸液量。對(duì)它的性能要求有：流量穩(wěn)定，流量精度應(yīng)為1%左右；耐高壓（30～60Mpa/cm2)且輸出壓力平穩(wěn)；耐各種流動(dòng)相。種類有輸出壓力恒定的恒壓泵（液壓隔膜泵和氣動(dòng)放大泵），輸出流量恒定、無脈動(dòng)的恒流泵。儀器分析

（3）梯度洗脫裝置梯度洗脫裝置是指流動(dòng)相中有2種或2種以上不同溶劑，在分離分析2種以上待測(cè)組分時(shí)，連續(xù)或間斷改變流動(dòng)相中不同溶劑的比例（即流動(dòng)相的組成），使每個(gè)待測(cè)組分均有合適的容量因子（k’），并使所有待測(cè)組分在最短的分析時(shí)間內(nèi)，以適合的分離度獲得圓滿地選擇性的分離。它的優(yōu)點(diǎn)是可以提高色譜柱的柱效、縮短分析時(shí)間、改善檢測(cè)器的靈敏度。它常以低壓梯度（外梯度）和高壓梯度（內(nèi)梯度）兩種方式進(jìn)行洗脫。儀器分析

2.進(jìn)樣器進(jìn)樣器主要有四種：10Mpa/cm2以下的1～10μL微量注射器進(jìn)樣、停流進(jìn)樣、閥進(jìn)樣和自動(dòng)進(jìn)樣器。閥進(jìn)樣較常用、較理想、體積可變也可固定，目前大多采用帶有定量管的六通進(jìn)樣閥，先用微量注射器將樣品在常壓下注入樣品管內(nèi)，然后切換六通閥門到進(jìn)樣位置，由高壓輸液泵輸送流動(dòng)相將樣品帶入色譜柱內(nèi)，優(yōu)點(diǎn)是進(jìn)樣量可變范圍大、進(jìn)樣量準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、易于自動(dòng)化，缺點(diǎn)是易造成譜峰柱前擴(kuò)寬。自動(dòng)進(jìn)樣器是由計(jì)算機(jī)自動(dòng)控制定量閥，按預(yù)先編制的進(jìn)樣操作程序工作。它有利于重復(fù)操作，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化分析。儀器分析

3.色譜柱色譜柱是高效液相色譜儀的核心部件，由柱管和固定相組成。柱管通常為內(nèi)壁拋光的不銹鋼管，形狀幾乎全為直形，長(zhǎng)為10~30cm，內(nèi)徑為2～5mm。影響色譜柱壽命的因素有：①突然的壓力波動(dòng)以及機(jī)械或熱沖擊；②強(qiáng)吸附性的組分聚集在色譜柱的進(jìn)口填料上；③鍵合相的穩(wěn)定性，流動(dòng)相的pH和過高的溫度都會(huì)使鍵合相流失。儀器分析

4.檢測(cè)器檢測(cè)器是高效液相色譜儀的重要部件之一，其作用是將待測(cè)組分經(jīng)色譜柱分離后的溶液濃度轉(zhuǎn)換成光信號(hào)或電信號(hào)，檢測(cè)后直接顯示出來。它應(yīng)具備檢測(cè)效率高、速度高、靈敏度高、重復(fù)性好、范圍廣、噪音低、線性范圍寬等特點(diǎn)。常用的檢測(cè)器有二類，一類是選擇性性檢測(cè)器，另一類是通用檢測(cè)器。檢測(cè)器的主要性能指標(biāo)有靈敏度、最低檢出極限、線性范圍、噪聲和漂移。儀器分析

5.餾分收集器如果所進(jìn)行的色譜分離不是為了純粹的色譜分析，而是為了做其它波譜鑒定，或獲取少量試驗(yàn)樣品的小型制備，餾分收集是必要的，方法有2個(gè)：一是手工收集，少數(shù)幾個(gè)餾分，手續(xù)麻煩，易出差錯(cuò)；二是餾分收集器收集，比較理想，由計(jì)算機(jī)操作系統(tǒng)控制，操作準(zhǔn)確。

6.數(shù)據(jù)獲取與處理系統(tǒng)數(shù)據(jù)獲取與處理系統(tǒng)的作用是將檢測(cè)器捕捉的信號(hào)轉(zhuǎn)換成色譜數(shù)據(jù)或色譜圖，以供分析之用。目前，通過色譜工作站實(shí)現(xiàn)。Contents目1

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高效液相色譜儀構(gòu)成及作用

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高效液相色譜儀的操作儀器分析

二、高效液相色譜法分類高效液相色譜法的類型與經(jīng)典液相色譜法相似，按分離機(jī)制可分為吸附色譜法、分配色譜法（包括化學(xué)鍵合相色譜法）、離子交換色譜法、離子對(duì)色譜法、凝膠色譜法等。

1.化學(xué)鍵合相色譜法化學(xué)鍵合相色譜法（BPC）是以化學(xué)鍵合相為固定相，利用樣品組分在化學(xué)鍵合相和流動(dòng)相中的分配系數(shù)不同而得以分離分析的色譜法。它是由液-液分配色譜法發(fā)展而來的，固定相和流動(dòng)相均為液體，且互不相溶。將固定相的官能團(tuán)通過化學(xué)反應(yīng)共價(jià)鍵合到載體（硅膠）表面的游離羥基上，這種方法制得的固定相稱為化學(xué)鍵合固定相，簡(jiǎn)稱鍵合相。思政：換一種氛圍，多事物間的區(qū)分更清晰儀器分析

化學(xué)鍵合固定相的特點(diǎn)是化學(xué)穩(wěn)定性好、耐溶劑沖洗、熱穩(wěn)定性好、使用周期長(zhǎng)、柱效高、重現(xiàn)性好、可使用的流動(dòng)相和鍵合相種類多、分離的選擇性高，并且可以通過改變鍵合有機(jī)官能團(tuán)的類型來改變分離的選擇性。根據(jù)化學(xué)鍵合固定相與流動(dòng)相的相對(duì)極性強(qiáng)弱，可將化學(xué)鍵合相色譜法分為正相鍵合相色譜法（NBPC）和反相鍵合相色譜法（RBPC）。儀器分析

（1）正相鍵合相色譜法正相鍵合相色譜法的固定相（如表面具有胺基、腈基、醚鍵的極性鍵合相）極性比流動(dòng)相極性大，流動(dòng)相一般為非極性的疏水性溶劑（烷烴類如正已烷、環(huán)已烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調(diào)節(jié)組分的保留時(shí)間。分離時(shí)組分流出的順序是，極性小的組分先流出柱子，極性大的組分后流出柱子。主要用于分離中等極性和極性較強(qiáng)的化合物（如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等），特別適于分離不同類型的化合物。儀器分析

（2）反相鍵合相色譜法反相鍵合相色譜法固定相的極性比流動(dòng)相極性小，常用十八烷基硅烷鍵合硅膠作固定相（稱為ODS柱)，流動(dòng)相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機(jī)溶劑以調(diào)節(jié)保留時(shí)間。分離時(shí)組分流出的順序是，極性大的組分先流出柱子，極性小的組分后流出柱子。由于反相鍵合相色譜法流動(dòng)相的調(diào)整，適用于幾乎所有類型化合物，如極性、非極性；水溶性、油溶性；離子型、非離子型；大分子、小分子；具有官能團(tuán)差別或分子量差別的同系物等。分離分析范圍