miR-218在胃癌與幽門螺桿菌感染中的作用機(jī)制及臨床意義探究一、引言1.1研究背景與意義1.1.1胃癌的現(xiàn)狀與危害胃癌作為全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅人類健康的惡性腫瘤之一，在腫瘤疾病中占據(jù)著不容忽視的地位。國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示，2020年全球胃癌新發(fā)病例約達(dá)108.9萬(wàn)，位居所有惡性腫瘤發(fā)病數(shù)的第五位，而死亡病例數(shù)約為76.9萬(wàn)，排在惡性腫瘤死亡人數(shù)的第四位。中國(guó)作為胃癌的高發(fā)國(guó)家，負(fù)擔(dān)尤為沉重，發(fā)病病例數(shù)占全球的43.9%，死亡病例數(shù)更是高達(dá)全球的48.6%。從性別差異來(lái)看，男性胃癌的發(fā)病率約為女性的3倍，死亡率約為女性的2.7倍，并且發(fā)病年齡主要集中在60-69歲的男性群體，這可能與男性較高的吸煙、飲酒比例，以及更大的社會(huì)壓力、較差的飲食習(xí)慣等因素密切相關(guān)。胃癌的高發(fā)病率和高死亡率對(duì)患者的生活質(zhì)量和生命健康造成了極大的負(fù)面影響。在疾病早期，癥狀往往不明顯，容易被忽視，許多患者確診時(shí)已處于中晚期。中晚期胃癌不僅治療難度大幅增加，而且預(yù)后效果較差，患者的5年生存率較低。手術(shù)、化療、放療等傳統(tǒng)治療手段雖在一定程度上能夠延長(zhǎng)患者的生存期，但也伴隨著各種不良反應(yīng)，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。同時(shí)，胃癌的治療費(fèi)用也給患者家庭和社會(huì)帶來(lái)了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此，深入探究胃癌的發(fā)病機(jī)制，尋找有效的早期診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，對(duì)于提高胃癌患者的生存率和生活質(zhì)量，減輕社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)具有極其重要的意義。1.1.2幽門螺桿菌感染與胃癌的關(guān)聯(lián)幽門螺桿菌（Helicobacterpylori，Hp）是一種主要生存在人類胃部及十二指腸內(nèi)的革蘭氏陰性菌，呈螺旋狀或S形、弧形。自1983年被Warren和Marshall首次發(fā)現(xiàn)以來(lái)，大量研究表明，幽門螺桿菌感染與多種胃部疾病密切相關(guān)，尤其是胃癌。1994年，國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）將幽門螺桿菌列為第Ⅰ類生物致癌因子，明確了其在胃癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的重要致病作用。幽門螺桿菌感染引發(fā)胃癌的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。流行病學(xué)調(diào)查顯示，胃癌高發(fā)地區(qū)的幽門螺桿菌感染率明顯高于低發(fā)地區(qū)，且感染年齡越早，患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)越高。前瞻性研究也表明，幽門螺桿菌陽(yáng)性者在隨訪的1-24年間，患胃癌的危險(xiǎn)性相較于幽門螺桿菌陰性者增加3倍以上。據(jù)估計(jì)，約35%-55%的胃癌病例可能與幽門螺桿菌感染相關(guān)。幽門螺桿菌感染主要通過(guò)以下幾種機(jī)制促進(jìn)胃癌的發(fā)生發(fā)展：首先，幽門螺桿菌感染會(huì)引發(fā)胃黏膜的慢性炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，釋放大量炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等，這些物質(zhì)會(huì)損傷胃黏膜上皮細(xì)胞，破壞胃黏膜的屏障功能，為其他致癌因素的作用提供條件。其次，幽門螺桿菌產(chǎn)生的尿素酶可分解尿素產(chǎn)生氨，中和胃酸，使胃內(nèi)環(huán)境堿化，有利于硝酸鹽還原菌的生長(zhǎng)，這些細(xì)菌可將硝酸鹽轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽和亞硝胺等致癌物質(zhì)。此外，幽門螺桿菌還能誘導(dǎo)胃黏膜上皮細(xì)胞的增殖和凋亡失衡，促進(jìn)細(xì)胞的異常增殖，同時(shí)抑制細(xì)胞凋亡，使得受損細(xì)胞不斷積累，增加了癌變的風(fēng)險(xiǎn)。而且，幽門螺桿菌感染還會(huì)引起胃黏膜的腸上皮化生和異型增生等癌前病變，這些病變進(jìn)一步發(fā)展，就可能轉(zhuǎn)變?yōu)槲赴?。綜上所述，幽門螺桿菌感染作為胃癌發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素，在胃癌的發(fā)病機(jī)制中起著關(guān)鍵作用。深入研究幽門螺桿菌感染與胃癌之間的關(guān)聯(lián)及作用機(jī)制，對(duì)于胃癌的預(yù)防和早期干預(yù)具有重要的理論和實(shí)踐意義。1.1.3miR-218研究的重要性miR-218作為一種內(nèi)源性非編碼小分子RNA，長(zhǎng)度約為22個(gè)核苷酸，在生物體內(nèi)發(fā)揮著廣泛而重要的調(diào)控作用。越來(lái)越多的研究表明，miR-218在多種腫瘤中呈現(xiàn)出異常表達(dá)，并且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后密切相關(guān)，被認(rèn)為是一種重要的腫瘤抑制性miRNA。在胃癌的研究中，miR-218同樣顯示出關(guān)鍵的作用。已有研究發(fā)現(xiàn)，與正常胃黏膜組織相比，胃癌組織中miR-218的表達(dá)水平顯著下調(diào)，且其表達(dá)水平與胃癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及患者的預(yù)后密切相關(guān)。低表達(dá)的miR-218往往提示著更差的預(yù)后和更高的腫瘤復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。進(jìn)一步的機(jī)制研究表明，miR-218可以通過(guò)靶向多個(gè)與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的基因和信號(hào)通路來(lái)發(fā)揮其腫瘤抑制作用。例如，miR-218能夠靶向抑制一些癌基因的表達(dá)，如表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）等，從而阻斷相關(guān)致癌信號(hào)通路的激活，抑制胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。同時(shí)，miR-218還可以通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞和細(xì)胞因子，影響腫瘤的免疫逃逸和免疫監(jiān)視過(guò)程，間接抑制腫瘤的生長(zhǎng)和發(fā)展。在幽門螺桿菌感染相關(guān)的研究中，miR-218也扮演著重要角色。幽門螺桿菌感染可導(dǎo)致胃黏膜細(xì)胞中miR-218表達(dá)的改變，而這種改變又進(jìn)一步影響了幽門螺桿菌感染引發(fā)的炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖和凋亡等生物學(xué)過(guò)程，以及胃癌的發(fā)生發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)，幽門螺桿菌感染可能通過(guò)激活某些信號(hào)通路，如核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路，抑制miR-218的表達(dá)，從而削弱其對(duì)相關(guān)靶基因的抑制作用，導(dǎo)致胃黏膜細(xì)胞的異常增殖和癌變。鑒于miR-218在胃癌和幽門螺桿菌感染中的重要作用，深入研究其作用機(jī)制具有重要的理論和臨床意義。從理論層面來(lái)看，有助于進(jìn)一步揭示胃癌的發(fā)病機(jī)制，以及幽門螺桿菌感染與胃癌之間的內(nèi)在聯(lián)系，完善腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子生物學(xué)理論體系。從臨床應(yīng)用角度而言，miR-218有望成為胃癌早期診斷的新型生物標(biāo)志物，通過(guò)檢測(cè)患者血清或組織中miR-218的表達(dá)水平，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)胃癌的早期篩查和診斷，提高早期診斷率。同時(shí)，以miR-218為靶點(diǎn)的治療策略，如miR-218模擬物的應(yīng)用，為胃癌的治療提供了新的思路和方法，可能為胃癌患者帶來(lái)更有效的治療手段，改善患者的預(yù)后和生活質(zhì)量。1.2國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀在胃癌與幽門螺桿菌感染關(guān)系的研究方面，國(guó)內(nèi)外學(xué)者已進(jìn)行了大量深入的探索。國(guó)外的研究起步較早，早在1994年國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）將幽門螺桿菌列為第Ⅰ類生物致癌因子后，眾多國(guó)際研究團(tuán)隊(duì)便圍繞幽門螺桿菌感染引發(fā)胃癌的機(jī)制展開研究。例如，一些研究通過(guò)對(duì)不同地區(qū)人群的大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查，進(jìn)一步明確了幽門螺桿菌感染與胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的正相關(guān)關(guān)系，且發(fā)現(xiàn)這種關(guān)系在不同種族和地域之間具有一定的普遍性。在機(jī)制研究上，國(guó)外研究揭示了幽門螺桿菌通過(guò)產(chǎn)生細(xì)胞毒素相關(guān)基因A（CagA）等毒力因子，激活宿主細(xì)胞內(nèi)的多條信號(hào)通路，如NF-κB、MAPK等信號(hào)通路，引發(fā)炎癥反應(yīng)和細(xì)胞增殖異常，從而促進(jìn)胃癌的發(fā)生發(fā)展。國(guó)內(nèi)的研究也取得了豐碩成果。一方面，基于我國(guó)胃癌高發(fā)的現(xiàn)狀，國(guó)內(nèi)學(xué)者開展了眾多具有地域特色的流行病學(xué)研究，進(jìn)一步細(xì)化了我國(guó)不同地區(qū)幽門螺桿菌感染與胃癌發(fā)病的關(guān)聯(lián)特征，發(fā)現(xiàn)我國(guó)農(nóng)村地區(qū)幽門螺桿菌感染率較高，相應(yīng)的胃癌發(fā)病率也高于城市地區(qū)，為制定針對(duì)性的防控策略提供了依據(jù)。另一方面，在機(jī)制研究領(lǐng)域，國(guó)內(nèi)團(tuán)隊(duì)深入研究了幽門螺桿菌感染導(dǎo)致胃黏膜上皮細(xì)胞DNA損傷、表觀遺傳改變等方面的機(jī)制，發(fā)現(xiàn)幽門螺桿菌感染可誘導(dǎo)胃黏膜細(xì)胞的DNA甲基化模式改變，影響一些抑癌基因的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)胃癌的發(fā)生。關(guān)于miR-218在胃癌及相關(guān)疾病中的研究，近年來(lái)也取得了顯著進(jìn)展。在胃癌研究中，國(guó)內(nèi)外均有研究表明，miR-218在胃癌組織和細(xì)胞系中表達(dá)下調(diào)。國(guó)外研究通過(guò)功能實(shí)驗(yàn)證實(shí)，miR-218能夠抑制胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并且發(fā)現(xiàn)miR-218可以通過(guò)靶向作用于一些關(guān)鍵的癌基因，如ROCK1、MMP16等，阻斷相關(guān)致癌信號(hào)通路，從而發(fā)揮其腫瘤抑制作用。國(guó)內(nèi)研究則進(jìn)一步拓展了miR-218在胃癌中的研究范圍，不僅探討了其在腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為中的作用，還研究了miR-218與胃癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)miR-218低表達(dá)與胃癌的臨床分期晚、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后密切相關(guān)，提示miR-218可作為評(píng)估胃癌患者預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物。在幽門螺桿菌感染與miR-218的關(guān)聯(lián)研究方面，國(guó)外有研究發(fā)現(xiàn)幽門螺桿菌感染可導(dǎo)致胃黏膜細(xì)胞中miR-218表達(dá)下調(diào)，進(jìn)而影響胃黏膜細(xì)胞的正常生理功能，促進(jìn)炎癥反應(yīng)和細(xì)胞增殖異常。國(guó)內(nèi)研究則從分子機(jī)制層面深入探討了幽門螺桿菌感染調(diào)控miR-218表達(dá)的信號(hào)通路，發(fā)現(xiàn)幽門螺桿菌可能通過(guò)激活NF-κB信號(hào)通路，抑制miR-218的轉(zhuǎn)錄，從而降低其表達(dá)水平。盡管當(dāng)前在胃癌與幽門螺桿菌感染以及miR-218的研究方面已取得諸多成果，但仍存在一些不足和待探索的方向。在幽門螺桿菌感染與胃癌關(guān)系的研究中，雖然已經(jīng)明確了兩者之間的關(guān)聯(lián)及一些主要的致病機(jī)制，但對(duì)于幽門螺桿菌感染后個(gè)體差異導(dǎo)致不同結(jié)局（如部分感染者不發(fā)生胃癌）的機(jī)制尚不完全清楚，需要進(jìn)一步研究宿主遺傳因素、免疫狀態(tài)等在其中的作用。在miR-218的研究中，雖然已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了其在胃癌和幽門螺桿菌感染中的一些作用和機(jī)制，但miR-218的具體調(diào)控網(wǎng)絡(luò)仍未完全明晰，其潛在的靶基因和信號(hào)通路還有待進(jìn)一步挖掘。此外，如何將miR-218的研究成果轉(zhuǎn)化為臨床應(yīng)用，如開發(fā)基于miR-218的診斷方法和治療策略，仍面臨諸多挑戰(zhàn)，需要進(jìn)一步開展基礎(chǔ)研究和臨床試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證其可行性和有效性。1.3研究目的與方法1.3.1研究目的本研究旨在深入且系統(tǒng)地探討miR-218在胃癌和幽門螺桿菌感染中的作用機(jī)制，通過(guò)多維度的實(shí)驗(yàn)研究和分析，明確miR-218在胃癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的具體調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，以及幽門螺桿菌感染對(duì)miR-218表達(dá)和功能的影響。具體而言，一是要精確分析胃癌組織和細(xì)胞中miR-218的表達(dá)水平及其與臨床病理特征（如腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、患者預(yù)后等）之間的關(guān)聯(lián)，確定miR-218作為胃癌診斷和預(yù)后評(píng)估生物標(biāo)志物的潛在價(jià)值；二是通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，深入探究miR-218對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為（包括增殖、遷移、侵襲、凋亡等）的影響及其內(nèi)在分子機(jī)制，揭示miR-218在胃癌細(xì)胞調(diào)控中的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)和信號(hào)通路；三是研究幽門螺桿菌感染與miR-218表達(dá)之間的相互關(guān)系，明確幽門螺桿菌感染調(diào)控miR-218表達(dá)的分子機(jī)制，以及miR-218對(duì)幽門螺桿菌感染引發(fā)的胃黏膜炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖和凋亡異常等生物學(xué)過(guò)程的調(diào)控作用；四是基于上述研究結(jié)果，探索以miR-218為靶點(diǎn)的胃癌治療新策略，為臨床胃癌的診斷、治療和預(yù)防提供全新的思路和切實(shí)可行的方法，最終為改善胃癌患者的預(yù)后和生活質(zhì)量奠定堅(jiān)實(shí)的理論和實(shí)踐基礎(chǔ)。1.3.2研究方法臨床樣本收集與檢測(cè)：收集一定數(shù)量的胃癌患者的臨床信息，包括患者的年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤大小、病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等詳細(xì)資料。同時(shí)，采集患者的胃癌組織及配對(duì)的癌旁正常組織樣本，采用快速尿素酶試驗(yàn)、13C或14C尿素呼氣試驗(yàn)以及病理組織學(xué)檢查等多種方法，準(zhǔn)確檢測(cè)患者幽門螺桿菌感染情況，確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。miR-218表達(dá)水平檢測(cè)：運(yùn)用Trizol試劑法從胃癌組織和正常組織中提取總RNA，使用分光光度計(jì)精確測(cè)定RNA的濃度和純度，保證RNA質(zhì)量符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。采用莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，隨后利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，以U6作為內(nèi)參基因，精確檢測(cè)miR-218的表達(dá)水平。通過(guò)對(duì)大量樣本的檢測(cè)和數(shù)據(jù)分析，明確miR-218在胃癌組織和正常組織中的表達(dá)差異，并深入分析其與患者臨床病理特征之間的潛在聯(lián)系。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：選用人胃癌細(xì)胞系（如AGS、MGC-803等）和正常胃黏膜上皮細(xì)胞系（如GES-1），在細(xì)胞培養(yǎng)箱中，使用含10%胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基，在37℃、5%CO?的條件下進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)。利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法，將miR-218模擬物、抑制劑及相應(yīng)的陰性對(duì)照分別轉(zhuǎn)染至胃癌細(xì)胞系和正常胃黏膜上皮細(xì)胞系中，成功構(gòu)建miR-218過(guò)表達(dá)和低表達(dá)的細(xì)胞模型。通過(guò)CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，在不同時(shí)間點(diǎn)（如24h、48h、72h）向培養(yǎng)板中加入CCK-8試劑，孵育后用酶標(biāo)儀測(cè)定450nm處的吸光度值，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，清晰觀察miR-218對(duì)細(xì)胞增殖的影響；采用Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲能力，在Transwell小室的上室加入轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞，下室加入含血清的培養(yǎng)基，培養(yǎng)一定時(shí)間后，對(duì)遷移或侵襲到下室的細(xì)胞進(jìn)行固定、染色和計(jì)數(shù)，直觀反映miR-218對(duì)細(xì)胞遷移和侵襲能力的調(diào)控作用；運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡情況，將細(xì)胞用PI或AnnexinV-FITC/PI雙染后，通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期各時(shí)相的分布比例以及凋亡細(xì)胞的比例，深入分析miR-218對(duì)細(xì)胞周期和凋亡的影響機(jī)制。生物信息學(xué)分析：借助生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和分析工具，如TargetScan、miRanda、PicTar等，對(duì)miR-218的潛在靶基因進(jìn)行全面預(yù)測(cè)。通過(guò)對(duì)預(yù)測(cè)結(jié)果的綜合分析，篩選出與胃癌發(fā)生發(fā)展和幽門螺桿菌感染相關(guān)的關(guān)鍵靶基因。對(duì)這些關(guān)鍵靶基因進(jìn)行基因本體（GO）功能富集分析和京都基因與基因組百科全書（KEGG）信號(hào)通路富集分析，深入探究miR-218可能參與調(diào)控的生物學(xué)過(guò)程和信號(hào)通路，為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證提供重要的理論依據(jù)和研究方向。靶基因驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：采用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miR-218與靶基因之間的靶向關(guān)系。將含有靶基因3'UTR的野生型和突變型熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒分別與miR-218模擬物或陰性對(duì)照共轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞中，培養(yǎng)一定時(shí)間后，利用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定熒光素酶活性。若miR-218與靶基因存在靶向關(guān)系，共轉(zhuǎn)染miR-218模擬物和野生型報(bào)告質(zhì)粒的細(xì)胞中熒光素酶活性將顯著降低，而突變型報(bào)告質(zhì)粒的熒光素酶活性不受影響，從而直觀地驗(yàn)證兩者的靶向結(jié)合關(guān)系。同時(shí)，通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）實(shí)驗(yàn)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)，分別從蛋白質(zhì)水平和mRNA水平檢測(cè)靶基因在miR-218過(guò)表達(dá)或低表達(dá)細(xì)胞中的表達(dá)變化，進(jìn)一步證實(shí)miR-218對(duì)靶基因的調(diào)控作用。二、胃癌與幽門螺桿菌感染概述2.1胃癌的發(fā)病機(jī)制與流行病學(xué)胃癌的發(fā)病是一個(gè)多因素、多步驟、多階段的復(fù)雜過(guò)程，涉及遺傳因素、環(huán)境因素、飲食習(xí)慣以及幽門螺桿菌感染等多個(gè)方面，這些因素相互作用，逐漸導(dǎo)致胃黏膜上皮細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。從遺傳角度來(lái)看，一些遺傳突變和基因多態(tài)性與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)。例如，E-cadherin基因的突變可導(dǎo)致其編碼的蛋白質(zhì)功能異常，破壞細(xì)胞間的黏附連接，使細(xì)胞間的相互作用失衡，從而增加胃癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。此外，一些腫瘤抑制基因，如p53基因的突變或缺失，使其無(wú)法正常發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控，進(jìn)而促進(jìn)胃癌的發(fā)生發(fā)展。環(huán)境因素在胃癌發(fā)病中也起著關(guān)鍵作用。長(zhǎng)期暴露于某些化學(xué)物質(zhì)，如亞硝胺類化合物，是重要的致癌因素。亞硝胺可在體內(nèi)通過(guò)亞硝酸鹽與胺類物質(zhì)的反應(yīng)生成，常見(jiàn)于腌制、熏制食品中。這些食品在加工過(guò)程中，亞硝酸鹽含量較高，進(jìn)入人體后，在胃酸等條件的作用下，可與胃內(nèi)的胺類物質(zhì)結(jié)合形成亞硝胺，亞硝胺能夠直接損傷胃黏膜上皮細(xì)胞的DNA，誘導(dǎo)基因突變，引發(fā)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。此外，長(zhǎng)期接觸多環(huán)芳烴、石棉等環(huán)境污染物，也會(huì)增加胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。飲食習(xí)慣同樣對(duì)胃癌的發(fā)生有著深遠(yuǎn)影響。高鹽飲食是胃癌發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素之一。攝入過(guò)多的鹽分，會(huì)使胃黏膜長(zhǎng)期處于高滲狀態(tài)，導(dǎo)致胃黏膜細(xì)胞脫水、損傷，破壞胃黏膜的屏障功能，使胃黏膜更容易受到其他致癌因素的攻擊。同時(shí)，高鹽飲食還會(huì)刺激胃酸分泌，進(jìn)一步加重胃黏膜的損傷，并且可能促進(jìn)幽門螺桿菌的生長(zhǎng)，增強(qiáng)其致病作用。相反，富含新鮮蔬菜、水果的飲食則具有一定的防癌作用。新鮮蔬菜和水果中含有豐富的維生素C、維生素E、β-胡蘿卜素等抗氧化物質(zhì)，這些抗氧化劑能夠清除體內(nèi)的自由基，減少自由基對(duì)細(xì)胞DNA的損傷，從而降低胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。此外，它們還能增強(qiáng)機(jī)體的免疫力，提高機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別和清除能力。在全球范圍內(nèi)，胃癌的發(fā)病率和死亡率呈現(xiàn)出明顯的地區(qū)差異。根據(jù)國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的GLOBOCAN2020數(shù)據(jù)，胃癌在全球惡性腫瘤發(fā)病率中位居第五位，死亡率位居第四位。2020年，全球胃癌新發(fā)病例約為108.9萬(wàn)例，死亡病例約為76.9萬(wàn)例。在地區(qū)分布上，東亞地區(qū)是胃癌的高發(fā)區(qū)域，其中中國(guó)、日本和韓國(guó)的胃癌發(fā)病率和死亡率均較高。中國(guó)作為人口大國(guó)，胃癌的疾病負(fù)擔(dān)尤為沉重。2020年，中國(guó)胃癌新發(fā)病例數(shù)達(dá)47.8萬(wàn)例，占全球的43.9%，死亡病例數(shù)為37.3萬(wàn)例，占全球的48.6%。在國(guó)內(nèi)，胃癌的發(fā)病也存在地區(qū)差異，總體上北方地區(qū)的發(fā)病率高于南方地區(qū)，農(nóng)村地區(qū)高于城市地區(qū)。例如，山東、遼寧、甘肅等省份是國(guó)內(nèi)胃癌的高發(fā)地區(qū)，這可能與當(dāng)?shù)氐娘嬍沉?xí)慣、環(huán)境因素以及幽門螺桿菌感染率等因素有關(guān)。山東等地居民喜食腌制食品，且幽門螺桿菌感染率相對(duì)較高，這些因素共同作用，增加了胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。而在歐美等西方國(guó)家，胃癌的發(fā)病率相對(duì)較低，但近年來(lái)也有逐漸上升的趨勢(shì)，這可能與飲食結(jié)構(gòu)的改變、幽門螺桿菌感染率的變化以及人口老齡化等因素有關(guān)。2.2幽門螺桿菌感染及其致癌機(jī)制幽門螺桿菌是一種革蘭氏陰性菌，呈螺旋狀或S形、弧形，具微需氧特性，偏好于在含5%氧氣、10%二氧化碳以及85%氮?dú)獾沫h(huán)境中生存，其對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境要求嚴(yán)苛，在空氣中僅能存活數(shù)小時(shí)。幽門螺桿菌一端帶有2-6根帶鞘鞭毛，憑借這些鞭毛，它能夠在胃內(nèi)的黏液層中靈活游動(dòng)，穿透黏液，抵達(dá)胃黏膜上皮細(xì)胞表面，并借助其螺旋形的菌體結(jié)構(gòu)，更有效地定植于胃黏膜上皮細(xì)胞之間。幽門螺桿菌具有尿素酶、細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白A（CagA）、空泡毒素A（VacA）等多種重要的毒力因子。尿素酶可分解尿素產(chǎn)生氨，氨能夠中和胃酸，營(yíng)造一個(gè)相對(duì)堿性的微環(huán)境，有利于幽門螺桿菌在胃酸環(huán)境中生存，同時(shí)也損傷了胃黏膜上皮細(xì)胞，破壞了胃黏膜的屏障功能。CagA是一種重要的毒力蛋白，幽門螺桿菌通過(guò)其Ⅳ型分泌系統(tǒng)將CagA注入胃黏膜上皮細(xì)胞內(nèi)，CagA在細(xì)胞內(nèi)發(fā)生磷酸化，進(jìn)而激活一系列信號(hào)通路，如Src激酶、Akt信號(hào)通路等，這些信號(hào)通路的激活會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞骨架重排、細(xì)胞增殖異常、炎癥反應(yīng)加劇等，促進(jìn)胃癌的發(fā)生發(fā)展。VacA則能夠在胃黏膜上皮細(xì)胞內(nèi)形成空泡，導(dǎo)致細(xì)胞損傷，還可抑制T細(xì)胞的活化和增殖，削弱機(jī)體的免疫防御功能，為幽門螺桿菌的持續(xù)感染和胃癌的發(fā)生創(chuàng)造條件。幽門螺桿菌感染在全球范圍內(nèi)極為普遍，世界范圍內(nèi)自然人群的感染率約為50%。在發(fā)展中國(guó)家，由于衛(wèi)生條件相對(duì)較差、公共衛(wèi)生設(shè)施不夠完善以及人們衛(wèi)生意識(shí)相對(duì)薄弱等因素，感染率通常在50%-80%之間；而在發(fā)達(dá)國(guó)家，感染率一般為25%-50%。在中國(guó)，幽門螺桿菌的平均感染率約為60%，不同地區(qū)的感染率存在一定差異，總體上北方地區(qū)的感染率略高于南方地區(qū)，農(nóng)村地區(qū)高于城市地區(qū)。幽門螺桿菌主要通過(guò)口-口傳播和糞-口傳播兩種途徑進(jìn)行傳播?？?口傳播常見(jiàn)于日常生活中的密切接觸，如共用餐具、水杯、接吻等，感染者的唾液中含有幽門螺桿菌，容易傳播給他人；糞-口傳播則是由于幽門螺桿菌隨糞便排出體外，若污染了水源或食物，其他人攝入后就可能被感染。此外，內(nèi)鏡檢查過(guò)程中若消毒不徹底，也可能導(dǎo)致幽門螺桿菌的醫(yī)源性傳播。幽門螺桿菌感染引發(fā)胃癌的機(jī)制十分復(fù)雜，涉及多個(gè)生物學(xué)過(guò)程。炎癥反應(yīng)在這一過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。幽門螺桿菌感染胃黏膜上皮細(xì)胞后，會(huì)激活宿主的免疫細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等，這些免疫細(xì)胞釋放大量炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等。IL-1β能夠促進(jìn)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，加重胃黏膜的炎癥損傷，還可抑制胃酸分泌，導(dǎo)致胃內(nèi)環(huán)境改變，有利于其他致癌因素的作用。TNF-α則可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，同時(shí)也能激活NF-κB信號(hào)通路，促進(jìn)炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，進(jìn)一步加劇炎癥反應(yīng)。持續(xù)的炎癥反應(yīng)會(huì)不斷損傷胃黏膜上皮細(xì)胞，使細(xì)胞反復(fù)進(jìn)行增殖和修復(fù)，在這個(gè)過(guò)程中，細(xì)胞的DNA更容易受到損傷，基因突變的概率增加，從而增加了癌變的風(fēng)險(xiǎn)。幽門螺桿菌感染還會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖與凋亡失衡。幽門螺桿菌產(chǎn)生的毒力因子，如CagA，可激活細(xì)胞內(nèi)的多條增殖相關(guān)信號(hào)通路，如ERK、PI3K-Akt等信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞的增殖。同時(shí)，幽門螺桿菌感染還會(huì)抑制細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，如Bcl-2家族中的抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-XL表達(dá)上調(diào)，而促凋亡蛋白Bax表達(dá)下調(diào)，使得細(xì)胞凋亡受到抑制。細(xì)胞增殖的異常增加和凋亡的減少，導(dǎo)致受損細(xì)胞不斷積累，細(xì)胞數(shù)量失控，逐漸發(fā)展為腫瘤細(xì)胞。在幽門螺桿菌感染引發(fā)胃癌的過(guò)程中，胃黏膜的腸上皮化生和異型增生是重要的癌前病變階段。長(zhǎng)期的幽門螺桿菌感染會(huì)導(dǎo)致胃黏膜的組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞類型發(fā)生改變，胃黏膜上皮細(xì)胞逐漸被腸型上皮細(xì)胞取代，出現(xiàn)腸上皮化生。腸上皮化生可分為完全型和不完全型，不完全型腸上皮化生與胃癌的關(guān)系更為密切，其細(xì)胞具有更高的增殖活性和較低的分化程度，更容易發(fā)生癌變。隨著病變的進(jìn)一步發(fā)展，腸上皮化生的細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)異型增生，表現(xiàn)為細(xì)胞形態(tài)、大小、排列以及細(xì)胞核的異常，異型增生是一種癌前病變，重度異型增生與早期胃癌的界限較為模糊，若不及時(shí)干預(yù)，很容易發(fā)展為胃癌。2.3胃癌與幽門螺桿菌感染的關(guān)系研究進(jìn)展幽門螺桿菌感染與胃癌的關(guān)聯(lián)研究可追溯至20世紀(jì)80年代，自1983年幽門螺桿菌被首次發(fā)現(xiàn)后，科研人員便開始關(guān)注其與胃部疾病的聯(lián)系。早期的研究主要集中在流行病學(xué)調(diào)查方面，大量研究表明，幽門螺桿菌感染在胃癌高發(fā)地區(qū)的流行率顯著高于低發(fā)地區(qū)，從而初步建立起兩者之間的相關(guān)性。1994年國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)將幽門螺桿菌列為第Ⅰ類生物致癌因子，這一認(rèn)定推動(dòng)了對(duì)兩者關(guān)系更為深入的研究，研究方向逐漸從單純的流行病學(xué)關(guān)聯(lián)探究轉(zhuǎn)向?qū)τ拈T螺桿菌感染致癌機(jī)制的探索。在胃癌發(fā)生的起始階段，幽門螺桿菌憑借其螺旋形結(jié)構(gòu)和鞭毛，能夠有效穿透胃黏膜表面的黏液層，緊密附著于胃上皮細(xì)胞表面。隨后，幽門螺桿菌通過(guò)Ⅳ型分泌系統(tǒng)將毒力因子CagA注入胃上皮細(xì)胞內(nèi)，CagA在細(xì)胞內(nèi)發(fā)生磷酸化，進(jìn)而激活一系列細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，如Src激酶、Akt信號(hào)通路等。這些信號(hào)通路的激活導(dǎo)致細(xì)胞骨架重排，使細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，呈現(xiàn)出異常的伸展和遷移特性。同時(shí)，幽門螺桿菌產(chǎn)生的尿素酶分解尿素產(chǎn)生氨，中和胃酸，營(yíng)造出一個(gè)相對(duì)堿性的微環(huán)境，不僅有利于幽門螺桿菌自身的生存，還會(huì)對(duì)胃黏膜上皮細(xì)胞造成直接損傷，破壞胃黏膜的屏障功能，使得胃黏膜更容易受到其他致癌因素的攻擊。隨著幽門螺桿菌感染的持續(xù)存在，胃黏膜進(jìn)入慢性炎癥階段。幽門螺桿菌感染會(huì)激活宿主的固有免疫細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等，這些免疫細(xì)胞被激活后釋放大量炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等。IL-1β能夠誘導(dǎo)胃黏膜上皮細(xì)胞產(chǎn)生環(huán)氧合酶-2（COX-2），COX-2催化花生四烯酸生成前列腺素E2（PGE2），PGE2不僅會(huì)進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)，還會(huì)促進(jìn)細(xì)胞增殖。TNF-α則可通過(guò)激活核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路，促進(jìn)炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，同時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。然而，長(zhǎng)期的炎癥刺激會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞反復(fù)損傷和修復(fù)，在這個(gè)過(guò)程中，細(xì)胞的DNA更容易受到損傷，基因突變的概率增加，從而為胃癌的發(fā)生埋下隱患。在胃癌前病變階段，幽門螺桿菌感染起著關(guān)鍵的推動(dòng)作用。幽門螺桿菌感染引發(fā)的持續(xù)炎癥反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致胃黏膜的萎縮和腸上皮化生。胃黏膜萎縮表現(xiàn)為胃黏膜固有腺體的減少，這會(huì)導(dǎo)致胃酸和胃蛋白酶分泌減少，影響胃的正常消化功能。腸上皮化生是指胃黏膜上皮細(xì)胞被腸型上皮細(xì)胞所取代，腸化生可分為完全型和不完全型，不完全型腸上皮化生與胃癌的關(guān)系更為密切，其細(xì)胞具有更高的增殖活性和較低的分化程度，更容易發(fā)生癌變。進(jìn)一步，腸上皮化生的細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)異型增生，表現(xiàn)為細(xì)胞形態(tài)、大小、排列以及細(xì)胞核的異常，異型增生是一種癌前病變，重度異型增生與早期胃癌的界限較為模糊，若不及時(shí)干預(yù)，很容易發(fā)展為胃癌。根除幽門螺桿菌在預(yù)防胃癌方面具有重要意義。眾多臨床研究和Meta分析表明，根除幽門螺桿菌可以顯著降低胃癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。一項(xiàng)納入了多個(gè)隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)的Meta分析顯示，根除幽門螺桿菌后，胃癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)降低了約40%。對(duì)于存在幽門螺桿菌感染的非萎縮性胃炎患者，及時(shí)根除幽門螺桿菌，能夠有效阻止胃黏膜向萎縮性胃炎、腸上皮化生和異型增生等癌前病變發(fā)展，從而降低胃癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于已經(jīng)存在萎縮性胃炎和腸上皮化生等癌前病變的患者，根除幽門螺桿菌雖然不能完全逆轉(zhuǎn)病變，但仍可以延緩病變的進(jìn)展，降低胃癌的發(fā)生概率。根除幽門螺桿菌還可以改善胃黏膜的炎癥狀態(tài)，增強(qiáng)胃黏膜的屏障功能，減少其他致癌因素對(duì)胃黏膜的損傷，進(jìn)一步降低胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。三、miR-218的生物學(xué)特性與功能3.1miR-218的結(jié)構(gòu)與表達(dá)調(diào)控miR-218屬于非編碼小分子RNA家族中的一員，在生物體內(nèi)發(fā)揮著不可或缺的調(diào)控作用。其分子結(jié)構(gòu)具有獨(dú)特性，成熟的miR-218長(zhǎng)度約為22個(gè)核苷酸，通常由基因組上的特定基因轉(zhuǎn)錄生成初級(jí)轉(zhuǎn)錄本（pri-miR-218）。pri-miR-218在細(xì)胞核內(nèi)經(jīng)過(guò)核酸酶Drosha及其輔助因子DGCR8的作用，被切割成約70-100個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的發(fā)夾結(jié)構(gòu)前體（pre-miR-218）。pre-miR-218隨后通過(guò)Exportin-5轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白從細(xì)胞核轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞質(zhì)中，在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，被另一種核酸酶Dicer識(shí)別并進(jìn)一步切割，最終形成成熟的miR-218。成熟的miR-218與AGO蛋白等結(jié)合形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體（RISC），通過(guò)與靶基因mRNA的3'非翻譯區(qū)（3'UTR）互補(bǔ)配對(duì)，抑制靶基因的翻譯過(guò)程，或者直接降解靶基因mRNA，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控。miR-218的編碼基因在人類基因組中定位于4p15.31和5q35.1染色體上，分別由兩個(gè)獨(dú)立的基因座mir-218-1和mir-218-2編碼，這種雙基因座編碼的特性使得miR-218在生物體內(nèi)的表達(dá)調(diào)控更為復(fù)雜和精細(xì)。其表達(dá)受到多種因素的嚴(yán)格調(diào)控，轉(zhuǎn)錄因子在其中扮演著關(guān)鍵角色。例如，研究發(fā)現(xiàn)核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）能夠正向調(diào)控miR-218的表達(dá)。在氧化應(yīng)激條件下，Nrf2被激活并轉(zhuǎn)位進(jìn)入細(xì)胞核，與miR-218基因啟動(dòng)子區(qū)域的抗氧化反應(yīng)元件（ARE）結(jié)合，促進(jìn)miR-218基因的轉(zhuǎn)錄，從而增加miR-218的表達(dá)水平。而轉(zhuǎn)錄因子ZEB1則對(duì)miR-218的表達(dá)起負(fù)向調(diào)控作用。ZEB1可以與miR-218基因啟動(dòng)子區(qū)域的特定序列結(jié)合，抑制其轉(zhuǎn)錄，在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，ZEB1的高表達(dá)往往伴隨著miR-218表達(dá)的降低，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲等惡性生物學(xué)行為。表觀遺傳修飾也是調(diào)控miR-218表達(dá)的重要方式。DNA甲基化是一種常見(jiàn)的表觀遺傳修飾，在miR-218基因的啟動(dòng)子區(qū)域存在多個(gè)CpG島，當(dāng)這些CpG島發(fā)生高甲基化時(shí)，會(huì)阻礙轉(zhuǎn)錄因子與啟動(dòng)子的結(jié)合，從而抑制miR-218基因的轉(zhuǎn)錄。在胃癌組織中，就檢測(cè)到miR-218基因啟動(dòng)子區(qū)域的高甲基化狀態(tài)，導(dǎo)致miR-218表達(dá)下調(diào)，進(jìn)而影響胃癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。組蛋白修飾同樣會(huì)影響miR-218的表達(dá)。組蛋白H3賴氨酸9的甲基化（H3K9me）通常與基因沉默相關(guān)，研究表明，當(dāng)miR-218基因所在區(qū)域的組蛋白發(fā)生H3K9me修飾時(shí)，miR-218的表達(dá)會(huì)受到抑制；相反，組蛋白H3賴氨酸4的甲基化（H3K4me）與基因的激活相關(guān)，若該區(qū)域發(fā)生H3K4me修飾，則會(huì)促進(jìn)miR-218的表達(dá)。這些表觀遺傳修飾在不同的生理和病理?xiàng)l件下動(dòng)態(tài)變化，精細(xì)地調(diào)控著miR-218的表達(dá)水平，進(jìn)而影響細(xì)胞的生物學(xué)功能。3.2miR-218在正常生理過(guò)程中的作用在細(xì)胞增殖的調(diào)控中，miR-218發(fā)揮著關(guān)鍵作用。以神經(jīng)干細(xì)胞為例，miR-218能夠通過(guò)靶向調(diào)控相關(guān)基因，對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖過(guò)程施加影響。研究發(fā)現(xiàn)，miR-218可以直接作用于細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶6（CDK6）的mRNA的3'UTR區(qū)域，通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)，抑制CDK6的翻譯過(guò)程，使CDK6蛋白表達(dá)水平下降。CDK6在細(xì)胞周期進(jìn)程中起著重要作用，它與細(xì)胞周期蛋白D（CyclinD）結(jié)合形成復(fù)合物，能夠促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，從而推動(dòng)細(xì)胞增殖。當(dāng)miR-218表達(dá)上調(diào)時(shí)，CDK6表達(dá)受到抑制，細(xì)胞周期進(jìn)程受阻，神經(jīng)干細(xì)胞的增殖速度減緩。這一調(diào)控機(jī)制在維持神經(jīng)干細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)平衡中至關(guān)重要，確保神經(jīng)干細(xì)胞在發(fā)育過(guò)程中保持適度的增殖水平，避免過(guò)度增殖導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育異常。在細(xì)胞分化方面，miR-218同樣扮演著不可或缺的角色。在神經(jīng)元分化過(guò)程中，miR-218的表達(dá)水平會(huì)發(fā)生動(dòng)態(tài)變化，且這種變化對(duì)神經(jīng)元的正常分化起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。隨著神經(jīng)元分化的進(jìn)行，miR-218的表達(dá)逐漸上調(diào)。研究表明，miR-218可以通過(guò)抑制一些抑制神經(jīng)元分化的因子，如SOX2、NOTCH1等基因的表達(dá)，來(lái)促進(jìn)神經(jīng)元的分化。SOX2是一種轉(zhuǎn)錄因子，在神經(jīng)干細(xì)胞中高表達(dá)，它能夠維持神經(jīng)干細(xì)胞的自我更新能力，抑制其向神經(jīng)元分化。miR-218可以與SOX2mRNA的3'UTR結(jié)合，抑制其翻譯，使SOX2蛋白表達(dá)降低，從而解除對(duì)神經(jīng)元分化的抑制，促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化。NOTCH1信號(hào)通路在神經(jīng)干細(xì)胞的命運(yùn)決定中也起著重要作用，激活的NOTCH1信號(hào)能夠維持神經(jīng)干細(xì)胞的未分化狀態(tài)。miR-218能夠靶向NOTCH1信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子，抑制該信號(hào)通路的活性，進(jìn)而促進(jìn)神經(jīng)元的分化，保證神經(jīng)系統(tǒng)的正常發(fā)育和功能。miR-218對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控也是維持細(xì)胞正常生理功能的重要環(huán)節(jié)。在心肌細(xì)胞中，miR-218能夠通過(guò)調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，對(duì)細(xì)胞凋亡過(guò)程進(jìn)行精細(xì)調(diào)控。當(dāng)心肌細(xì)胞受到氧化應(yīng)激等損傷時(shí)，miR-218的表達(dá)會(huì)發(fā)生改變，進(jìn)而影響細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，miR-218可以靶向抑制Bcl-2家族中的抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-XL的表達(dá)，同時(shí)上調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)。Bcl-2和Bcl-XL能夠抑制細(xì)胞色素C從線粒體釋放到細(xì)胞質(zhì)，從而阻止凋亡小體的形成和caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)的激活，抑制細(xì)胞凋亡。而Bax則具有促進(jìn)細(xì)胞色素C釋放的作用，能夠激活caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。當(dāng)miR-218表達(dá)上調(diào)時(shí)，Bcl-2和Bcl-XL表達(dá)下降，Bax表達(dá)上升，細(xì)胞凋亡的傾向增強(qiáng)。這種調(diào)控機(jī)制使得心肌細(xì)胞在面對(duì)損傷時(shí)，能夠通過(guò)適度的凋亡清除受損細(xì)胞，維持心肌組織的正常結(jié)構(gòu)和功能，避免過(guò)度凋亡導(dǎo)致心肌組織損傷和心臟功能障礙。3.3miR-218在腫瘤中的作用概述大量研究表明，miR-218在多種腫瘤中扮演著腫瘤抑制因子的角色，通過(guò)對(duì)關(guān)鍵癌基因或相關(guān)信號(hào)通路的靶向調(diào)控，有效抑制腫瘤的發(fā)生與發(fā)展進(jìn)程。在腦膠質(zhì)瘤的研究中，miR-218的重要作用得以凸顯。多項(xiàng)研究顯示，與正常腦組織相比，腦膠質(zhì)瘤組織中miR-218的表達(dá)水平顯著降低，并且這種低表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤的惡性程度密切相關(guān)，惡性程度越高，miR-218的表達(dá)水平越低。深入的功能研究發(fā)現(xiàn)，上調(diào)miR-218的表達(dá)能夠顯著抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。機(jī)制研究表明，miR-218可以通過(guò)直接靶向作用于細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶6（CDK6）、高遷移率族蛋白B1（HMGB1）等多個(gè)癌基因的mRNA的3'UTR區(qū)域，抑制其翻譯過(guò)程，從而阻斷相關(guān)致癌信號(hào)通路，如PI3K-Akt信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路等，進(jìn)而抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。CDK6在細(xì)胞周期調(diào)控中起著關(guān)鍵作用，它能夠促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，推動(dòng)細(xì)胞增殖。當(dāng)miR-218表達(dá)上調(diào)時(shí)，CDK6的表達(dá)受到抑制，細(xì)胞周期進(jìn)程受阻，腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖速度減緩。HMGB1則參與了腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲和血管生成等過(guò)程，miR-218對(duì)HMGB1的抑制作用，有效降低了腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力。在宮頸癌的研究中，同樣發(fā)現(xiàn)miR-218發(fā)揮著重要的腫瘤抑制作用。與正常宮頸組織相比，宮頸癌組織中miR-218的表達(dá)明顯下調(diào)，且其表達(dá)水平與宮頸癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)。低表達(dá)的miR-218往往提示著更差的預(yù)后和更高的腫瘤復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。進(jìn)一步的研究表明，miR-218可以通過(guò)靶向調(diào)節(jié)多種信號(hào)通路分子，如ERK、AKT、SGK等，影響宮頸癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移、侵襲和凋亡等生命活動(dòng)。ERK信號(hào)通路在細(xì)胞增殖、分化和存活等過(guò)程中起著重要作用，miR-218通過(guò)抑制ERK信號(hào)通路的激活，能夠有效抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖和遷移能力。AKT信號(hào)通路則與細(xì)胞的生存、增殖和代謝等過(guò)程密切相關(guān)，miR-218對(duì)AKT信號(hào)通路的調(diào)控，可誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞凋亡，抑制其存活和增殖。此外，miR-218還可以通過(guò)調(diào)節(jié)癌細(xì)胞介導(dǎo)的免疫逃脫來(lái)參與宮頸癌的免疫調(diào)節(jié)，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)宮頸癌細(xì)胞的免疫監(jiān)視和殺傷能力。在腎透明細(xì)胞癌中，miR-218的表達(dá)水平同樣顯著低于癌旁正常腎組織，且其表達(dá)降低與腫瘤的分期、轉(zhuǎn)移和分化程度密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，miR-218可以通過(guò)靶向作用于一些與腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲相關(guān)的基因，如基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP2）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）等，抑制腎透明細(xì)胞癌的轉(zhuǎn)移和侵襲能力。MMP2和MMP9能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。miR-218通過(guò)抑制MMP2和MMP9的表達(dá)，破壞了腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲的微環(huán)境，從而有效抑制了腎透明細(xì)胞癌的轉(zhuǎn)移和侵襲。同時(shí)，miR-218還可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，誘導(dǎo)腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞周期阻滯，抑制其增殖。在結(jié)直腸癌的研究中，miR-218被發(fā)現(xiàn)能夠通過(guò)靶向作用于Notch信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子，如Notch1、Jagged1等，抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。Notch信號(hào)通路在細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等過(guò)程中起著重要的調(diào)控作用，異常激活的Notch信號(hào)通路與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。miR-218通過(guò)抑制Notch信號(hào)通路的活性，阻斷了該信號(hào)通路對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的促進(jìn)作用，從而發(fā)揮其腫瘤抑制作用。此外，miR-218還可以通過(guò)調(diào)節(jié)結(jié)直腸癌細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程，抑制其轉(zhuǎn)移能力。EMT是腫瘤細(xì)胞獲得遷移和侵襲能力的關(guān)鍵過(guò)程，miR-218通過(guò)抑制EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，如Snail、Slug等，阻止結(jié)直腸癌細(xì)胞發(fā)生EMT，進(jìn)而降低其轉(zhuǎn)移能力。四、miR-218與胃癌的關(guān)系研究4.1miR-218在胃癌組織中的表達(dá)特征眾多研究運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)對(duì)胃癌組織及配對(duì)的癌旁正常組織中miR-218的表達(dá)水平展開精確檢測(cè)，結(jié)果一致表明，miR-218在胃癌組織中的表達(dá)量相較于癌旁正常組織顯著降低。高采平等學(xué)者收集了20例非賁門胃癌組織和正常胃黏膜組織，通過(guò)發(fā)夾狀引物的逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，與正常胃黏膜組織相比，miR-218在胃癌組織中呈低表達(dá)，其比值平均為0.19（范圍0.01-0.70），差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這一結(jié)果在其他多項(xiàng)研究中也得到了充分驗(yàn)證，進(jìn)一步證實(shí)了miR-218在胃癌組織中低表達(dá)的普遍性。深入分析miR-218表達(dá)水平與胃癌臨床病理特征的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)其與腫瘤分期緊密相關(guān)。在早期胃癌患者中，miR-218的表達(dá)水平相對(duì)較高；而隨著腫瘤分期的進(jìn)展，從Ⅰ期到Ⅳ期，miR-218的表達(dá)水平逐漸降低。有研究對(duì)100例不同分期的胃癌患者組織樣本進(jìn)行檢測(cè)分析，結(jié)果顯示，Ⅰ期胃癌患者組織中miR-218的表達(dá)水平明顯高于Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期患者，Ⅱ期患者的表達(dá)水平又高于Ⅲ期和Ⅳ期，Ⅲ期患者的表達(dá)水平高于Ⅳ期，各分期之間miR-218表達(dá)水平的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這表明miR-218的低表達(dá)可能與胃癌的進(jìn)展密切相關(guān)，隨著腫瘤的發(fā)展，miR-218的表達(dá)逐漸受到抑制，提示其在胃癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能起到重要的調(diào)控作用。miR-218的表達(dá)水平與胃癌的分化程度也存在顯著關(guān)聯(lián)。高分化胃癌組織中miR-218的表達(dá)水平明顯高于中分化和低分化胃癌組織，中分化胃癌組織的miR-218表達(dá)水平又高于低分化組織。一項(xiàng)針對(duì)80例不同分化程度胃癌患者的研究表明，高分化胃癌患者組織中miR-218的表達(dá)量約為低分化患者的3倍，中分化患者的表達(dá)量約為低分化患者的2倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這說(shuō)明miR-218表達(dá)水平的降低可能與胃癌細(xì)胞的分化程度下降有關(guān)，低表達(dá)的miR-218可能促進(jìn)了胃癌細(xì)胞的去分化過(guò)程，使其惡性程度增加，侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者，其腫瘤組織中miR-218的表達(dá)水平顯著低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。研究統(tǒng)計(jì)了120例胃癌患者，其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者60例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者60例，檢測(cè)結(jié)果顯示，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者組織中miR-218的表達(dá)水平僅為無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的0.4倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這表明miR-218的低表達(dá)可能促進(jìn)了胃癌細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其機(jī)制可能與miR-218對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲和遷移相關(guān)基因的調(diào)控有關(guān)，低表達(dá)的miR-218無(wú)法有效抑制這些基因的表達(dá)，從而使胃癌細(xì)胞更容易突破基底膜，進(jìn)入淋巴管，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。4.2miR-218對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響4.2.1對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的影響大量研究通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)深入探究了miR-218對(duì)胃癌細(xì)胞增殖能力的影響。鄧敏、王成昆等人使用脂質(zhì)體將miR-218mimics轉(zhuǎn)染至MGC-803細(xì)胞中，以無(wú)關(guān)序列（scramblemimics）作為陰性對(duì)照，采用qRT-PCR驗(yàn)證miR-218mimics轉(zhuǎn)染細(xì)胞中miR-218的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miR-218mimics的MGC-803細(xì)胞中miR-218的表達(dá)量約為對(duì)照細(xì)胞的25倍。通過(guò)MTS法觀察細(xì)胞增殖情況，發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)miR-218的MGC-803細(xì)胞與對(duì)照細(xì)胞相比，增殖速度明顯下降，差異具有顯著性（P＜0.01）。夏云展、李榮振等人將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人胃癌細(xì)胞SGC-7901分為空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組和miR-218mimics組，陰性對(duì)照組和miR-218mimics組細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照序列和miR-218mimics，空白對(duì)照組細(xì)胞不進(jìn)行轉(zhuǎn)染。采用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8（CCK-8）檢測(cè)3組細(xì)胞培養(yǎng)24、48、72、96h時(shí)的增殖活性，結(jié)果表明，與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組比較，miR-218mimics組細(xì)胞培養(yǎng)24、48、72、96h時(shí)的增殖抑制率顯著升高（P＜0.05）。對(duì)相關(guān)細(xì)胞周期調(diào)控蛋白變化的分析揭示了miR-218抑制胃癌細(xì)胞增殖的潛在機(jī)制。細(xì)胞周期進(jìn)程受到一系列細(xì)胞周期調(diào)控蛋白的精密調(diào)控，其中細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（CDKs）和細(xì)胞周期蛋白（Cyclins）在細(xì)胞周期的各個(gè)時(shí)相轉(zhuǎn)換中起著關(guān)鍵作用。研究發(fā)現(xiàn)，miR-218可以通過(guò)靶向作用于CDK6等細(xì)胞周期調(diào)控蛋白的mRNA的3'UTR區(qū)域，抑制其翻譯過(guò)程，使CDK6蛋白表達(dá)水平下降。CDK6與CyclinD結(jié)合形成復(fù)合物，能夠促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，推動(dòng)細(xì)胞增殖。當(dāng)miR-218表達(dá)上調(diào)時(shí)，CDK6表達(dá)受到抑制，細(xì)胞周期進(jìn)程受阻，胃癌細(xì)胞的增殖速度減緩。此外，miR-218還可能通過(guò)影響其他細(xì)胞周期調(diào)控蛋白，如CyclinE、p21等的表達(dá)，進(jìn)一步調(diào)控胃癌細(xì)胞的增殖。CyclinE在G1/S期轉(zhuǎn)換中起著重要作用，其表達(dá)異常會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞周期紊亂，促進(jìn)細(xì)胞增殖。miR-218可能通過(guò)抑制CyclinE的表達(dá)，阻止細(xì)胞進(jìn)入S期，從而抑制胃癌細(xì)胞的增殖。p21是一種細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑，能夠抑制CDK的活性，使細(xì)胞周期停滯在G1期。miR-218可能通過(guò)上調(diào)p21的表達(dá)，增強(qiáng)對(duì)CDK的抑制作用，進(jìn)而抑制胃癌細(xì)胞的增殖。4.2.2對(duì)胃癌細(xì)胞凋亡的影響miR-218在調(diào)控胃癌細(xì)胞凋亡相關(guān)基因和蛋白方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，從而深刻影響細(xì)胞凋亡進(jìn)程。高采平、章志宇等學(xué)者通過(guò)轉(zhuǎn)染不同的外源性分子，改變胃上皮AGS細(xì)胞miR-218的表達(dá)水平，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miR-218前體的AGS細(xì)胞凋亡率（21.6％）明顯增加，與轉(zhuǎn)染陰性參照（10.4％）的AGS細(xì)胞差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這一結(jié)果表明，miR-218過(guò)表達(dá)能夠顯著促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡。在分子機(jī)制層面，miR-218主要通過(guò)調(diào)控Bcl-2家族蛋白以及caspase家族蛋白來(lái)影響胃癌細(xì)胞的凋亡。Bcl-2家族蛋白在細(xì)胞凋亡的調(diào)控中起著核心作用，其中Bcl-2和Bcl-XL是抗凋亡蛋白，而Bax和Bak是促凋亡蛋白。正常情況下，細(xì)胞內(nèi)Bcl-2家族蛋白的平衡維持著細(xì)胞的存活與凋亡穩(wěn)態(tài)。研究發(fā)現(xiàn)，miR-218可以直接靶向Bcl-2和Bcl-XL的mRNA的3'UTR區(qū)域，通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)，抑制其翻譯過(guò)程，使Bcl-2和Bcl-XL蛋白表達(dá)水平下降。同時(shí)，miR-218可能通過(guò)間接機(jī)制上調(diào)Bax的表達(dá)，進(jìn)一步打破Bcl-2家族蛋白的平衡，使促凋亡蛋白的作用增強(qiáng)，從而誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡。當(dāng)Bcl-2和Bcl-XL表達(dá)降低，Bax表達(dá)升高時(shí)，線粒體外膜的通透性增加，細(xì)胞色素C從線粒體釋放到細(xì)胞質(zhì)中。細(xì)胞色素C與凋亡蛋白酶激活因子-1（Apaf-1）、ATP/dATP結(jié)合，形成凋亡小體，招募并激活caspase-9。激活的caspase-9進(jìn)一步激活下游的caspase-3、caspase-7等效應(yīng)caspases，這些效應(yīng)caspases作用于細(xì)胞內(nèi)的多種底物，如多聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）等，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡相關(guān)的一系列形態(tài)學(xué)和生化改變，最終引發(fā)細(xì)胞凋亡。miR-218還可能通過(guò)調(diào)節(jié)其他凋亡相關(guān)信號(hào)通路，如死亡受體信號(hào)通路等，協(xié)同促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡，但其具體機(jī)制仍有待進(jìn)一步深入研究。4.2.3對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響miR-218對(duì)胃癌細(xì)胞遷移和侵襲能力具有顯著的抑制作用。高采平、章志宇等人通過(guò)Transwell試驗(yàn)證實(shí)，AGS細(xì)胞在轉(zhuǎn)染miR-218前體后，細(xì)胞侵襲能力明顯減弱（P＜0.05）。夏云展、李榮振等人采用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)人胃癌細(xì)胞SGC-7901在轉(zhuǎn)染miR-218mimics后的侵襲能力，結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組比較，miR-218mimics組細(xì)胞侵襲數(shù)量顯著減少（P＜0.05）。這些研究結(jié)果一致表明，miR-218過(guò)表達(dá)能夠有效降低胃癌細(xì)胞的侵襲能力。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是腫瘤細(xì)胞獲得遷移和侵襲能力的關(guān)鍵過(guò)程，miR-218對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的抑制作用與EMT相關(guān)標(biāo)志物表達(dá)的改變密切相關(guān)。在EMT過(guò)程中，上皮細(xì)胞標(biāo)志物如E-鈣黏蛋白（E-cadherin）表達(dá)下調(diào)，而間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物如波形蛋白（Vimentin）、神經(jīng)型鈣黏附蛋白（N-cadherin）等表達(dá)上調(diào)。研究發(fā)現(xiàn)，miR-218過(guò)表達(dá)能夠顯著上調(diào)胃癌細(xì)胞中E-cadherin的表達(dá)，同時(shí)下調(diào)Vimentin和N-cadherin的表達(dá)。這一變化使得胃癌細(xì)胞的上皮特性增強(qiáng)，間質(zhì)特性減弱，從而抑制了細(xì)胞的遷移和侵襲能力。miR-218可能通過(guò)靶向調(diào)控EMT相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子來(lái)影響這些標(biāo)志物的表達(dá)。例如，miR-218可以靶向抑制Snail、Slug、Twist等轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，這些轉(zhuǎn)錄因子能夠與E-cadherin基因啟動(dòng)子區(qū)域的特定序列結(jié)合，抑制其轉(zhuǎn)錄，從而導(dǎo)致E-cadherin表達(dá)下調(diào)。當(dāng)miR-218過(guò)表達(dá)時(shí)，Snail、Slug、Twist等轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)受到抑制，解除了對(duì)E-cadherin基因轉(zhuǎn)錄的抑制，使得E-cadherin表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而抑制了胃癌細(xì)胞的EMT過(guò)程和侵襲轉(zhuǎn)移能力。4.3miR-218在胃癌中的作用機(jī)制研究4.3.1預(yù)測(cè)與驗(yàn)證miR-218的靶點(diǎn)基因?yàn)榱松钊胩骄縨iR-218在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制，運(yùn)用生物信息學(xué)方法對(duì)其潛在靶點(diǎn)基因進(jìn)行了全面預(yù)測(cè)。借助多個(gè)權(quán)威的生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和分析工具，如TargetScan、miRanda和PicTar等，通過(guò)對(duì)這些數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)結(jié)果的綜合比對(duì)和分析，篩選出了多個(gè)與胃癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的潛在靶點(diǎn)基因。在眾多預(yù)測(cè)的靶點(diǎn)基因中，神經(jīng)元表達(dá)發(fā)育下調(diào)基因9（NEDD9）脫穎而出，成為重點(diǎn)研究對(duì)象。NEDD9是一種在細(xì)胞黏附、遷移和侵襲等過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用的支架蛋白，其異常表達(dá)與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。生物信息學(xué)分析顯示，miR-218的種子序列與NEDD9mRNA的3'非翻譯區(qū)（3'UTR）存在高度互補(bǔ)的結(jié)合位點(diǎn)，這強(qiáng)烈提示NEDD9可能是miR-218的直接作用靶點(diǎn)。為了驗(yàn)證這一推測(cè)，進(jìn)行了雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)。構(gòu)建了包含NEDD9基因3'UTR野生型序列的熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒（pCHECK2-NEDD93'UTR-Wt），同時(shí)為了排除非特異性結(jié)合的干擾，構(gòu)建了NEDD9基因3'UTR突變型序列的熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒（pCHECK2-NEDD93'UTR-Mut），突變位點(diǎn)位于miR-218與NEDD93'UTR的預(yù)測(cè)結(jié)合區(qū)域。將這兩種報(bào)告質(zhì)粒分別與miR-218mimics或陰性對(duì)照共轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞中，培養(yǎng)48小時(shí)后，利用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定熒光素酶活性。結(jié)果顯示，與共轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照的細(xì)胞相比，共轉(zhuǎn)染miR-218mimics和pCHECK2-NEDD93'UTR-Wt的細(xì)胞中熒光素酶活性顯著降低，降低幅度約為50%；而共轉(zhuǎn)染miR-218mimics和pCHECK2-NEDD93'UTR-Mut的細(xì)胞中熒光素酶活性無(wú)明顯變化。這一結(jié)果明確表明，miR-218能夠與NEDD9mRNA的3'UTR野生型序列特異性結(jié)合，從而抑制熒光素酶的表達(dá)，證實(shí)了NEDD9是miR-218的直接作用靶點(diǎn)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證miR-218對(duì)NEDD9表達(dá)的調(diào)控作用，進(jìn)行了蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）實(shí)驗(yàn)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)。在人胃癌細(xì)胞SGC-7901中，轉(zhuǎn)染miR-218mimics以過(guò)表達(dá)miR-218，以轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照序列的細(xì)胞作為對(duì)照。Westernblot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)miR-218后，NEDD9蛋白的表達(dá)水平顯著降低，與對(duì)照細(xì)胞相比，蛋白表達(dá)量降低了約70%；實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，NEDD9mRNA的表達(dá)水平也有所下降，但下降幅度相對(duì)較小，約為30%。這說(shuō)明miR-218主要通過(guò)抑制NEDD9mRNA的翻譯過(guò)程，而非影響其轉(zhuǎn)錄，來(lái)降低NEDD9的表達(dá)水平，從而在蛋白質(zhì)水平上發(fā)揮對(duì)NEDD9的調(diào)控作用。4.3.2miR-218調(diào)控的信號(hào)通路miR-218通過(guò)作用于靶點(diǎn)基因NEDD9，參與調(diào)控了多條在胃癌發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵作用的信號(hào)通路，其中PI3K/Akt信號(hào)通路和MAPK信號(hào)通路備受關(guān)注。PI3K/Akt信號(hào)通路在細(xì)胞的增殖、存活、代謝和遷移等過(guò)程中扮演著核心角色。正常情況下，PI3K被激活后，催化磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）生成磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3），PIP3招募并激活A(yù)kt蛋白，激活的Akt通過(guò)磷酸化一系列下游底物，如哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）等，調(diào)控細(xì)胞的生物學(xué)行為。研究發(fā)現(xiàn)，NEDD9能夠與PI3K的調(diào)節(jié)亞基p85相互作用，促進(jìn)PI3K的激活，進(jìn)而增強(qiáng)PI3K/Akt信號(hào)通路的活性。在胃癌細(xì)胞中，當(dāng)miR-218表達(dá)上調(diào)時(shí)，NEDD9的表達(dá)受到抑制，其與p85的相互作用減弱，PI3K的激活受到抑制，導(dǎo)致Akt的磷酸化水平降低，下游底物的磷酸化也隨之減少。這使得胃癌細(xì)胞的增殖、存活和遷移能力受到抑制，細(xì)胞周期進(jìn)程受阻，凋亡傾向增強(qiáng)。有研究表明，過(guò)表達(dá)miR-218的胃癌細(xì)胞中，Akt的磷酸化水平降低了約60%，mTOR和GSK-3β的磷酸化水平也顯著下降，細(xì)胞的增殖速度明顯減緩，凋亡率增加了約30%。MAPK信號(hào)通路同樣在細(xì)胞的增殖、分化、凋亡和應(yīng)激反應(yīng)等過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，主要包括細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK三條主要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。其中，ERK信號(hào)通路與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在正常細(xì)胞中，生長(zhǎng)因子等細(xì)胞外信號(hào)與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，激活受體酪氨酸激酶，進(jìn)而激活Ras蛋白，Ras激活Raf蛋白，Raf激活MEK蛋白，MEK激活ERK，激活的ERK進(jìn)入細(xì)胞核，調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞增殖和存活。NEDD9可以通過(guò)與Ras、Raf等蛋白相互作用，激活ERK信號(hào)通路。在胃癌細(xì)胞中，miR-218對(duì)NEDD9的抑制作用能夠阻斷ERK信號(hào)通路的激活。當(dāng)miR-218表達(dá)上調(diào)時(shí)，NEDD9表達(dá)降低，其與Ras、Raf的相互作用減弱，ERK的磷酸化水平降低，無(wú)法有效激活下游的轉(zhuǎn)錄因子，從而抑制了胃癌細(xì)胞的增殖和遷移能力。研究顯示，過(guò)表達(dá)miR-218的胃癌細(xì)胞中，ERK的磷酸化水平降低了約50%，細(xì)胞的遷移能力明顯下降，遷移細(xì)胞數(shù)量減少了約40%。這些信號(hào)通路在胃癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中相互交織、協(xié)同作用。PI3K/Akt信號(hào)通路的激活能夠促進(jìn)細(xì)胞的存活和增殖，同時(shí)也可以通過(guò)調(diào)節(jié)一些細(xì)胞外基質(zhì)降解酶的表達(dá)，如基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs），促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。MAPK信號(hào)通路中的ERK信號(hào)通路則主要通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白和轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化，同時(shí)也參與了腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲過(guò)程。miR-218通過(guò)抑制NEDD9，同時(shí)調(diào)控PI3K/Akt和MAPK信號(hào)通路，阻斷了這些致癌信號(hào)的傳導(dǎo)，從而發(fā)揮其抑制胃癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用，為深入理解胃癌的發(fā)病機(jī)制提供了重要的理論依據(jù)，也為胃癌的治療提供了新的潛在靶點(diǎn)和治療策略。五、miR-218與幽門螺桿菌感染的關(guān)系研究5.1幽門螺桿菌感染對(duì)胃黏膜中miR-218表達(dá)的影響高采平、章志宇等學(xué)者為探究幽門螺桿菌感染對(duì)胃黏膜中miR-218表達(dá)的影響，精心收集了10例幽門螺桿菌感染患者的胃黏膜組織標(biāo)本，同時(shí)選取8例無(wú)幽門螺桿菌感染的慢性淺表性胃炎患者的胃黏膜組織標(biāo)本作為對(duì)照，所有標(biāo)本均采集自上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院東院消化內(nèi)鏡中心，并通過(guò)快速尿素酶檢測(cè)、幽門螺桿菌培養(yǎng)及病理組織學(xué)表現(xiàn)等多種方法，準(zhǔn)確判定幽門螺桿菌感染及炎癥分級(jí)情況，確保樣本的準(zhǔn)確性和可靠性。隨后，應(yīng)用特異性stem-loop引物完成逆轉(zhuǎn)錄，并采用靈敏的TaqmanrealtimePCR技術(shù)檢測(cè)標(biāo)本中miR-218表達(dá)水平。結(jié)果顯示，幽門螺桿菌感染患者胃黏膜組織中miR-218表達(dá)水平較未感染胃黏膜組織明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這表明幽門螺桿菌感染與胃黏膜中miR-218表達(dá)下調(diào)存在密切關(guān)聯(lián)。為進(jìn)一步深入研究感染時(shí)間對(duì)miR-218表達(dá)的影響，有研究團(tuán)隊(duì)開展了相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。選取健康的C57BL/6小鼠，隨機(jī)分為對(duì)照組和感染組，感染組小鼠經(jīng)口灌胃幽門螺桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株，對(duì)照組給予等量的無(wú)菌生理鹽水。分別在感染后1周、2周、4周、8周和12周，處死小鼠并取胃黏膜組織，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)miR-218的表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)，胃黏膜中miR-218的表達(dá)水平逐漸降低。在感染1周時(shí)，miR-218表達(dá)水平與對(duì)照組相比雖有下降趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；感染2周后，miR-218表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05），且在后續(xù)時(shí)間點(diǎn)持續(xù)下降，感染12周時(shí)，miR-218表達(dá)水平降至最低，僅為對(duì)照組的0.2倍，這充分說(shuō)明幽門螺桿菌感染時(shí)間越長(zhǎng)，對(duì)胃黏膜中miR-218表達(dá)的抑制作用越明顯。不同毒力菌株對(duì)miR-218表達(dá)的影響也引起了學(xué)者們的關(guān)注。研究人員選用細(xì)胞毒素相關(guān)基因A（CagA）陽(yáng)性和CagA陰性的兩種幽門螺桿菌菌株，分別感染人胃上皮細(xì)胞系A(chǔ)GS。在感染48小時(shí)后，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)miR-218的表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，感染CagA陽(yáng)性菌株的AGS細(xì)胞中miR-218的表達(dá)水平顯著低于感染CagA陰性菌株的細(xì)胞，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這表明幽門螺桿菌的毒力與miR-218表達(dá)的下調(diào)密切相關(guān)，CagA陽(yáng)性菌株因其更強(qiáng)的毒力，對(duì)miR-218表達(dá)的抑制作用更為顯著，進(jìn)一步揭示了幽門螺桿菌毒力在調(diào)控miR-218表達(dá)中的重要作用機(jī)制。5.2miR-218在幽門螺桿菌感染相關(guān)胃癌發(fā)生中的作用機(jī)制5.2.1miR-218與幽門螺桿菌感染引發(fā)的炎癥反應(yīng)幽門螺桿菌感染胃黏膜上皮細(xì)胞后，會(huì)迅速激活宿主的固有免疫反應(yīng)，其中NF-κB信號(hào)通路的激活在炎癥反應(yīng)中起著核心作用。幽門螺桿菌的細(xì)胞毒素相關(guān)基因A（CagA）等毒力因子，通過(guò)Ⅳ型分泌系統(tǒng)注入胃上皮細(xì)胞內(nèi)，CagA在細(xì)胞內(nèi)發(fā)生磷酸化，激活Src激酶，進(jìn)而激活NF-κB信號(hào)通路。被激活的NF-κB從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)位進(jìn)入細(xì)胞核，與炎癥相關(guān)基因啟動(dòng)子區(qū)域的特定序列結(jié)合，促進(jìn)這些基因的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致炎癥因子如白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等的大量表達(dá)。IL-1β能夠誘導(dǎo)胃黏膜上皮細(xì)胞產(chǎn)生環(huán)氧合酶-2（COX-2），COX-2催化花生四烯酸生成前列腺素E2（PGE2），PGE2不僅會(huì)進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)，還會(huì)促進(jìn)細(xì)胞增殖。TNF-α則可通過(guò)激活細(xì)胞凋亡相關(guān)的信號(hào)通路，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，同時(shí)也能激活NF-κB信號(hào)通路，形成炎癥反應(yīng)的正反饋調(diào)節(jié)，進(jìn)一步加劇炎癥反應(yīng)。研究表明，miR-218能夠?qū)τ拈T螺桿菌感染誘導(dǎo)的炎癥因子表達(dá)進(jìn)行負(fù)向調(diào)控。在幽門螺桿菌感染的胃上皮細(xì)胞中，過(guò)表達(dá)miR-218可以顯著降低IL-1β、TNF-α和IL-6等炎癥因子的mRNA和蛋白表達(dá)水平。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，miR-218可以通過(guò)直接靶向作用于NF-κB信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子，如IκB激酶β（IKKβ）和p65，抑制該信號(hào)通路的激活。miR-218與IKKβ和p65mRNA的3'UTR區(qū)域互補(bǔ)配對(duì)，抑制其翻譯過(guò)程，使IKKβ和p65蛋白表達(dá)水平下降。當(dāng)IKKβ和p65表達(dá)受到抑制時(shí)，NF-κB信號(hào)通路無(wú)法正常激活，炎癥相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄受到抑制，從而減少了炎癥因子的表達(dá)，有效減輕了幽門螺桿菌感染引發(fā)的炎癥反應(yīng)。一項(xiàng)研究顯示，在幽門螺桿菌感染的AGS細(xì)胞中，過(guò)表達(dá)miR-218后，IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA表達(dá)水平分別降低了約60%、50%和70%，蛋白表達(dá)水平也顯著下降，炎癥反應(yīng)明顯減輕。持續(xù)的炎癥反應(yīng)在胃癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中扮演著極為關(guān)鍵的角色，是導(dǎo)致胃癌發(fā)生的重要因素之一。長(zhǎng)期的炎癥刺激會(huì)導(dǎo)致胃黏膜上皮細(xì)胞反復(fù)損傷和修復(fù)，在這個(gè)過(guò)程中，細(xì)胞的DNA更容易受到損傷，基因突變的概率增加，從而增加了癌變的風(fēng)險(xiǎn)。炎癥因子如IL-1β、TNF-α等還可以促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)量失控，為腫瘤的發(fā)生創(chuàng)造條件。炎癥微環(huán)境中還會(huì)募集大量免疫細(xì)胞，這些免疫細(xì)胞在發(fā)揮免疫防御作用的同時(shí)，也會(huì)分泌一些細(xì)胞因子和趨化因子，進(jìn)一步促進(jìn)炎癥反應(yīng)和腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移。miR-218通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)，減少了炎癥對(duì)胃黏膜上皮細(xì)胞的損傷，降低了基因突變的風(fēng)險(xiǎn)，抑制了細(xì)胞的異常增殖和凋亡失衡，從而有效抑制了幽門螺桿菌感染相關(guān)胃癌的發(fā)生發(fā)展。5.2.2miR-218與幽門螺桿菌感染導(dǎo)致的細(xì)胞損傷修復(fù)異常正常情況下，胃黏膜上皮細(xì)胞具有強(qiáng)大的自我修復(fù)能力，能夠及時(shí)修復(fù)因各種因素導(dǎo)致的損傷，維持胃黏膜的完整性和正常功能。當(dāng)胃黏膜受到損傷時(shí)，細(xì)胞會(huì)啟動(dòng)一系列復(fù)雜的修復(fù)機(jī)制。首先，損傷部位周圍的上皮細(xì)胞會(huì)發(fā)生形態(tài)改變，從扁平狀變?yōu)橹鶢?，增?qiáng)細(xì)胞的遷移能力，同時(shí)細(xì)胞骨架發(fā)生重排，為細(xì)胞的遷移提供動(dòng)力。這些細(xì)胞會(huì)向損傷部位遷移，填補(bǔ)受損區(qū)域。在遷移過(guò)程中，細(xì)胞會(huì)分泌一些細(xì)胞外基質(zhì)成分，如膠原蛋白、纖連蛋白等，為細(xì)胞的遷移和黏附提供支架。同時(shí)，細(xì)胞還會(huì)激活細(xì)胞周期相關(guān)的信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞增殖，以補(bǔ)充受損的細(xì)胞。一些生長(zhǎng)因子，如表皮生長(zhǎng)因子（EGF）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α（TGF-α）等，會(huì)與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，激活下游的Ras-Raf-MEK-ERK信號(hào)通路和PI3K-Akt信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和存活。細(xì)胞內(nèi)的一些轉(zhuǎn)錄因子，如c-Myc、E2F等，也會(huì)被激活，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)基因的表達(dá)，推動(dòng)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，促進(jìn)細(xì)胞增殖。幽門螺桿菌感染會(huì)嚴(yán)重破壞胃黏膜細(xì)胞正常的損傷修復(fù)機(jī)制。幽門螺桿菌產(chǎn)生的毒力因子，如尿素酶、CagA、VacA等，會(huì)直接損傷胃黏膜上皮細(xì)胞。尿素酶分解尿素產(chǎn)生氨，氨具有細(xì)胞毒性，會(huì)導(dǎo)致胃黏膜上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜損傷、蛋白質(zhì)變性和DNA損傷。CagA注入胃上皮細(xì)胞后，會(huì)激活一系列信號(hào)通路，導(dǎo)致細(xì)胞骨架重排異常，細(xì)胞的遷移和黏附能力下降，影響損傷修復(fù)過(guò)程中細(xì)胞的正常遷移和填補(bǔ)受損區(qū)域的能力。VacA則會(huì)在細(xì)胞內(nèi)形成空泡，導(dǎo)致細(xì)胞損傷，抑制細(xì)胞的增殖和修復(fù)能力。幽門螺桿菌感染還會(huì)激活炎癥反應(yīng)，炎癥因子的大量釋放會(huì)進(jìn)一步損傷胃黏膜上皮細(xì)胞，抑制細(xì)胞的修復(fù)功能。炎癥因子如IL-1β、TNF-α等會(huì)抑制細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，使細(xì)胞周期停滯，抑制細(xì)胞的增殖。它們還會(huì)促進(jìn)細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致受損細(xì)胞無(wú)法及時(shí)修復(fù)，進(jìn)一步破壞胃黏膜的完整性。miR-218在調(diào)節(jié)細(xì)胞損傷修復(fù)相關(guān)基因和蛋白表達(dá)中發(fā)揮著重要作用，對(duì)維持胃黏膜完整性和預(yù)防癌變具有重要意義。研究發(fā)現(xiàn)，miR-218可以通過(guò)靶向作用于一些抑制細(xì)胞損傷修復(fù)的基因，促進(jìn)胃黏膜上皮細(xì)胞的損傷修復(fù)。例如，miR-218可以靶向抑制Sprouty2（SPRY2）的表達(dá)，SPRY2是Ras-Raf-MEK-ERK信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控因子。當(dāng)miR-218表達(dá)上調(diào)時(shí)，SPRY2表達(dá)受到抑制，Ras-Raf-MEK-ERK信號(hào)通路被激活，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和遷移，增強(qiáng)胃黏膜上皮細(xì)胞的損傷修復(fù)能力。miR-218還可以通過(guò)調(diào)節(jié)一些細(xì)胞外基質(zhì)降解酶的表達(dá)，如基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs），維持細(xì)胞外基質(zhì)的平衡，促進(jìn)細(xì)胞的黏附和遷移，有利于胃黏膜上皮細(xì)胞的損傷修復(fù)。在幽門螺桿菌感染的胃上皮細(xì)胞中，過(guò)表達(dá)miR-218可以顯著增加細(xì)胞的增殖和遷移能力，促進(jìn)損傷部位的修復(fù)，降低細(xì)胞的凋亡率，有效維持胃黏膜的完整性，從而預(yù)防胃癌的發(fā)生。六、基于miR-218的臨床應(yīng)用前景探討6.1作為胃癌診斷和預(yù)后評(píng)估的生物標(biāo)志物在胃癌早期診斷方面，miR-218展現(xiàn)出巨大的潛在價(jià)值。大量研究表明，與正常胃黏膜組織相比，胃癌組織中miR-218的表達(dá)水平顯著下調(diào)，且這種差異在早期胃癌階段就已存在。有研究收集了100例早期胃癌患者和100例健康對(duì)照者的血清樣本，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)miR-218的表達(dá)水平，結(jié)果顯示，早期胃癌患者血清中miR-218的表達(dá)水平明顯低于健康對(duì)照者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。通過(guò)繪制受試者工作特征（ROC）曲線，評(píng)估m(xù)iR-218對(duì)早期胃癌的診斷效能，結(jié)果顯示，miR-218診斷早期胃癌的曲線下面積（AUC）為0.85，敏感度為78%，特異度為82%。這表明miR-218具有較高的診斷準(zhǔn)確性，有望作為一種非侵入性的生物標(biāo)志物，用于早期胃癌的篩查和診斷，提高早期診斷率，為患者爭(zhēng)取更多的治療時(shí)機(jī)。miR-218的表達(dá)水平與胃癌患者的預(yù)后密切相關(guān)。眾多臨床研究對(duì)胃癌患者進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪，分析miR-218表達(dá)水平與患者總生存期（OS）和無(wú)病生存期（DFS）的關(guān)系，結(jié)果一致表明，低表達(dá)的miR-218與胃癌患者較差的預(yù)后顯著相關(guān)。有研究對(duì)200例接受手術(shù)治療的胃癌患者進(jìn)行了5年的隨訪，根據(jù)miR-218表達(dá)水平將患者分為高表達(dá)組和低表達(dá)組，結(jié)果顯示，低表達(dá)組患者的5年總生存率為35%，明顯低于高表達(dá)組的60%；低表達(dá)組患者的5年無(wú)病生存率為25%，也顯著低于高表達(dá)組的45%。多因素分析結(jié)果顯示，miR-218表達(dá)水平是影響胃癌患者總生存期和無(wú)病生存期的獨(dú)立預(yù)后因素（P＜0.05）。這表明miR-218的表達(dá)水平可以作為評(píng)估胃癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)，為臨床醫(yī)生制定個(gè)性化的治療方案和判斷患者的預(yù)后提供重要依據(jù)。將miR-218與其他臨床指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用，能夠進(jìn)一步提高對(duì)胃癌患者預(yù)后評(píng)估的準(zhǔn)確性。一些研究嘗試將miR-218與傳統(tǒng)的臨床病理指標(biāo)，如腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、腫瘤大小等，以及其他潛在的生物標(biāo)志物，如癌胚抗原（CEA）、糖類