安徽pcr考試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共20分）1.PCR技術(shù)的中文全稱是（）A.聚合酶鏈式反應(yīng)B.核酸雜交反應(yīng)C.基因測序反應(yīng)D.蛋白質(zhì)電泳反應(yīng)2.下列哪種酶是PCR反應(yīng)中必需的（）A.限制性內(nèi)切酶B.DNA連接酶C.TaqDNA聚合酶D.反轉(zhuǎn)錄酶3.PCR反應(yīng)的基本步驟不包括（）A.變性B.退火C.延伸D.轉(zhuǎn)錄4.PCR反應(yīng)體系中，提供反應(yīng)緩沖環(huán)境的是（）A.dNTPB.引物C.Mg2?D.Taq酶5.引物設(shè)計時，其長度一般為（）A.5-10bpB.15-30bpC.35-50bpD.50-100bp6.以下哪種物質(zhì)不是PCR反應(yīng)體系的成分（）A.模板DNAB.抗生素C.引物D.dNTP7.PCR反應(yīng)中，變性溫度一般為（）A.55℃B.72℃C.94-98℃D.4℃8.退火溫度一般比引物的Tm值低（）A.1-2℃B.3-5℃C.5-10℃D.10-15℃9.若要擴增一個特定基因片段，選擇引物的依據(jù)是（）A.基因兩端的序列B.基因中間的序列C.隨機序列D.載體序列10.PCR技術(shù)主要用于（）A.蛋白質(zhì)分析B.核酸擴增C.細胞培養(yǎng)D.抗體檢測答案：1.A2.C3.D4.C5.B6.B7.C8.B9.A10.B二、多項選擇題（每題2分，共20分）1.PCR反應(yīng)體系包含以下哪些成分（）A.模板DNAB.引物C.TaqDNA聚合酶D.dNTPE.Mg2?2.影響PCR反應(yīng)的因素有（）A.模板質(zhì)量B.引物設(shè)計C.反應(yīng)溫度D.循環(huán)次數(shù)E.酶的活性3.引物設(shè)計的原則包括（）A.引物長度合適B.避免引物自身互補C.引物GC含量合理D.引物3'端避免錯配E.引物特異性高4.PCR技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域有（）A.疾病診斷B.基因克隆C.法醫(yī)鑒定D.遺傳育種E.藥物研發(fā)5.以下哪些屬于PCR反應(yīng)的常見問題（）A.非特異性擴增B.擴增效率低C.引物二聚體形成D.模板降解E.產(chǎn)物量過多6.在PCR實驗中，需要注意的事項有（）A.防止交叉污染B.準確配置反應(yīng)體系C.嚴格控制反應(yīng)條件D.妥善保存實驗材料E.做好個人防護7.以下哪些物質(zhì)可以作為PCR反應(yīng)的模板（）A.基因組DNAB.cDNAC.線粒體DNAD.病毒核酸E.葉綠體DNA8.優(yōu)化PCR反應(yīng)的措施包括（）A.調(diào)整引物濃度B.改變Mg2?濃度C.優(yōu)化退火溫度D.更換Taq酶E.增加模板量9.PCR產(chǎn)物的檢測方法有（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.聚丙烯酰胺凝膠電泳C.測序D.熒光定量檢測E.核酸雜交10.實時熒光定量PCR的優(yōu)點有（）A.定量準確B.靈敏度高C.快速D.可進行多重檢測E.無需后續(xù)電泳檢測答案：1.ABCDE2.ABCDE3.ABCDE4.ABCDE5.ABCD6.ABCDE7.ABCDE8.ABCD9.ABCDE10.ABCDE三、判斷題（每題2分，共20分）1.PCR反應(yīng)可以在普通的水浴鍋中進行。（）2.引物的特異性越高，PCR反應(yīng)的結(jié)果越準確。（）3.提高PCR反應(yīng)的退火溫度可以減少非特異性擴增。（）4.Mg2?濃度對PCR反應(yīng)沒有影響。（）5.模板DNA的量越多，PCR反應(yīng)效果越好。（）6.PCR技術(shù)只能擴增雙鏈DNA。（）7.實時熒光定量PCR可以對起始模板進行絕對定量和相對定量。（）8.引物二聚體的形成不會影響PCR反應(yīng)結(jié)果。（）9.不同的Taq酶對PCR反應(yīng)的效果可能不同。（）10.進行PCR實驗時，不需要考慮實驗環(huán)境的清潔。（）答案：1.×2.√3.√4.×5.×6.×7.√8.×9.√10.×四、簡答題（每題5分，共20分）1.簡述PCR反應(yīng)的基本原理。答案：PCR基于DNA半保留復(fù)制原理。通過高溫變性使模板DNA雙鏈解開，低溫退火讓引物與模板結(jié)合，適溫下Taq酶以dNTP為原料，沿模板延伸合成新的DNA鏈，經(jīng)多輪循環(huán)實現(xiàn)特定DNA片段的大量擴增。2.引物設(shè)計時為什么要避免引物自身互補？答案：引物自身互補會形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)或引物二聚體。發(fā)夾結(jié)構(gòu)影響引物與模板結(jié)合，引物二聚體消耗引物，導(dǎo)致引物無法與模板正常結(jié)合，進而影響PCR反應(yīng)的進行及擴增效果。3.簡述非特異性擴增產(chǎn)生的原因及解決方法。答案：原因有引物特異性差、退火溫度低、模板雜質(zhì)多等。解決方法包括重新設(shè)計引物、提高退火溫度、優(yōu)化反應(yīng)體系、純化模板等。4.簡述實時熒光定量PCR的原理。答案：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，隨著PCR擴增，熒光信號強度與擴增產(chǎn)物量成正比。通過檢測熒光信號，利用標準曲線對起始模板進行定量分析。五、討論題（每題5分，共20分）1.在進行PCR實驗時，出現(xiàn)擴增效率低的情況，從反應(yīng)體系和反應(yīng)條件方面討論可能的原因及解決方案。答案：反應(yīng)體系方面，可能模板質(zhì)量差、引物濃度不當、dNTP不足、酶活性低。應(yīng)優(yōu)化模板提取、調(diào)整引物和dNTP濃度、更換酶。反應(yīng)條件方面，溫度不合適、循環(huán)次數(shù)不足?？蓛?yōu)化溫度參數(shù)、適當增加循環(huán)次數(shù)。2.討論PCR技術(shù)在疾病診斷中的優(yōu)勢與局限性。答案：優(yōu)勢在于靈敏度高、特異性強、快速，能檢測微量病原體核酸。局限性是對實驗條件和技術(shù)要求高，易出現(xiàn)假陽性或假陰性結(jié)果，樣本易受污染，且對病毒變異檢測有難度。3.請討論引物設(shè)計在PCR實驗中的重要性，并舉例說明引物設(shè)計不當可能導(dǎo)致的問題。答案：引物設(shè)計重要性在于決定擴增特異性和效率。設(shè)計不當如引物特異性差，會導(dǎo)致非特異性擴增；引物長度不合適或GC含量不合理，影響引物與模板結(jié)合及擴增效果，可能出現(xiàn)擴增不出目標片段等問題。4.