P300/CBP相關(guān)因子在腸型胃癌中的表達(dá)特征、功能機(jī)制及臨床意義探究一、引言1.1研究背景胃癌是全球范圍內(nèi)常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康。據(jù)統(tǒng)計(jì)，每年全球新診斷的胃癌病例超過(guò)100萬(wàn)例，死亡人數(shù)高達(dá)70萬(wàn)例以上。中國(guó)作為胃癌高發(fā)國(guó)家，新發(fā)病例和死亡病例分別占全球的44%和50%左右。盡管近年來(lái)在胃癌的診斷和治療方面取得了一定進(jìn)展，如胃鏡檢查技術(shù)的普及提高了早期胃癌的檢出率，手術(shù)方式的改進(jìn)和化療藥物的優(yōu)化在一定程度上延長(zhǎng)了患者的生存期，但胃癌患者的總體5年生存率仍不理想，徘徊在30%-40%之間，尤其在中晚期胃癌患者中，由于腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，預(yù)后往往較差。根據(jù)組織學(xué)類(lèi)型，胃癌主要分為腸型和彌漫型，其中腸型胃癌在胃癌中占據(jù)較大比例，且具有獨(dú)特的發(fā)病機(jī)制和臨床病理特征。腸型胃癌多發(fā)生于老年人，與幽門(mén)螺桿菌感染、飲食因素、慢性萎縮性胃炎等密切相關(guān)。慢性萎縮性胃炎被認(rèn)為是腸型胃癌的重要癌前病變，有超過(guò)90%的腸型胃癌由其發(fā)展而來(lái)。腸型胃癌的癌細(xì)胞呈腺樣排列，分化程度相對(duì)較高，但仍具有較高的侵襲性和轉(zhuǎn)移性，其嚴(yán)重性與其生物學(xué)行為有關(guān)，如腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)深度以及是否伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。高分化意味著腫瘤細(xì)胞更接近正常細(xì)胞，低分化則表示細(xì)胞異質(zhì)性增加，增殖能力增強(qiáng)，因此低分化胃癌的惡性程度較高，預(yù)后較差。此外，腫瘤的浸潤(rùn)深度也與預(yù)后相關(guān)，深部浸潤(rùn)的腫瘤更容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。對(duì)于腸型胃癌，若能及時(shí)發(fā)現(xiàn)且未發(fā)生遠(yuǎn)處擴(kuò)散，通過(guò)內(nèi)鏡下切除或根治性手術(shù)治療，通常可獲得較好的預(yù)后效果。但由于早期癥狀不明顯，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，錯(cuò)過(guò)了最佳治療時(shí)機(jī)。因此，深入研究腸型胃癌的發(fā)病機(jī)制，尋找有效的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，對(duì)于提高腸型胃癌的診療水平具有重要意義。P300/CBP相關(guān)因子（P300/CBPassociatedfactor，PCAF）作為哺乳動(dòng)物中第一個(gè)被報(bào)道的組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶，在細(xì)胞的生命活動(dòng)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。目前研究認(rèn)為PCAF通過(guò)調(diào)節(jié)組蛋白和非組蛋白水平而與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)聯(lián)。一方面，PCAF可以通過(guò)對(duì)組蛋白的乙?；揎棧淖?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，影響基因的轉(zhuǎn)錄活性，從而調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等過(guò)程。當(dāng)PCAF表達(dá)異常時(shí)，可能導(dǎo)致染色質(zhì)結(jié)構(gòu)改變，影響相關(guān)基因的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。另一方面，PCAF還可以對(duì)非組蛋白進(jìn)行乙?；揎棧{(diào)節(jié)其功能和活性，參與腫瘤細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、代謝重編程等過(guò)程。PCAF的發(fā)現(xiàn)為GCN5相關(guān)的N端乙?；D(zhuǎn)移酶（GCN5-related-acetyltransferase，GNAT）家族在細(xì)胞中的正確定位提供了良好的解釋?zhuān)瑸槟[瘤的分子機(jī)理研究和預(yù)后判斷提供了新的思路，有望作為腫瘤預(yù)后判斷的一個(gè)新的標(biāo)志物。然而，PCAF基因在腫瘤中的研究目前尚是一個(gè)新的領(lǐng)域，尤其是在胃癌中的研究較少，國(guó)內(nèi)外僅有少量關(guān)于胃癌中PCAF的實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道，其在腸型胃癌中的表達(dá)情況、作用機(jī)制以及與臨床病理特征的關(guān)系仍有待進(jìn)一步明確。綜上所述，本研究旨在探討P300/CBP相關(guān)因子在腸型胃癌中的表達(dá)及功能，通過(guò)檢測(cè)PCAF在腸型胃癌組織和細(xì)胞系中的表達(dá)水平，分析其與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，并進(jìn)一步研究PCAF對(duì)腸型胃癌細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的影響及其潛在的分子機(jī)制，以期為腸型胃癌的診斷、治療和預(yù)后評(píng)估提供新的理論依據(jù)和潛在靶點(diǎn)。1.2研究目的與意義本研究旨在深入探討P300/CBP相關(guān)因子（PCAF）在腸型胃癌中的表達(dá)及功能，為腸型胃癌的診斷、治療和預(yù)后評(píng)估提供新的理論依據(jù)和潛在靶點(diǎn)。在腸型胃癌的研究中，目前雖然在發(fā)病機(jī)制、診斷和治療方面取得了一定進(jìn)展，但仍存在許多未知領(lǐng)域。例如，對(duì)于腸型胃癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中關(guān)鍵分子機(jī)制的認(rèn)識(shí)還不夠深入，缺乏有效的早期診斷標(biāo)志物和精準(zhǔn)的治療靶點(diǎn)，導(dǎo)致患者的預(yù)后較差。PCAF作為一種重要的組蛋白乙酰化轉(zhuǎn)移酶，在細(xì)胞的生命活動(dòng)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，但其在腸型胃癌中的表達(dá)情況、作用機(jī)制以及與臨床病理特征的關(guān)系尚不清楚。因此，本研究具有重要的科學(xué)意義和臨床價(jià)值。具體而言，本研究的目的包括以下幾個(gè)方面：首先，檢測(cè)PCAF在腸型胃癌組織和細(xì)胞系中的表達(dá)水平，分析其與臨床病理參數(shù)（如腫瘤大小、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期等）的相關(guān)性，明確PCAF在腸型胃癌中的表達(dá)特征及其與疾病進(jìn)展的關(guān)系；其次，通過(guò)基因轉(zhuǎn)染等技術(shù)手段，上調(diào)或下調(diào)腸型胃癌細(xì)胞中PCAF的表達(dá)，研究其對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移、凋亡等生物學(xué)行為的影響，揭示PCAF在腸型胃癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的生物學(xué)功能；再者，深入探究PCAF影響腸型胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的潛在分子機(jī)制，如通過(guò)調(diào)控哪些信號(hào)通路或關(guān)鍵基因來(lái)發(fā)揮作用，為進(jìn)一步理解腸型胃癌的發(fā)病機(jī)制提供理論基礎(chǔ)；最后，評(píng)估PCAF作為腸型胃癌診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的潛在價(jià)值，為開(kāi)發(fā)新的診斷方法和治療策略提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本研究的意義主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：理論意義上，有助于深入了解PCAF在腸型胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制，豐富和完善腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子生物學(xué)理論體系，為后續(xù)的基礎(chǔ)研究提供新的思路和方向；臨床診斷方面，若能確定PCAF與腸型胃癌的臨床病理特征密切相關(guān)，可作為一種新的生物標(biāo)志物，用于腸型胃癌的早期診斷、病情監(jiān)測(cè)和預(yù)后評(píng)估，提高診斷的準(zhǔn)確性和及時(shí)性；臨床治療層面，明確PCAF作為治療靶點(diǎn)的可行性，為開(kāi)發(fā)針對(duì)腸型胃癌的靶向治療藥物或治療策略提供理論依據(jù)，有望提高治療效果，改善患者的生存質(zhì)量和預(yù)后?？傊?，本研究對(duì)于推動(dòng)腸型胃癌的基礎(chǔ)研究和臨床治療的發(fā)展具有重要意義。1.3研究方法與創(chuàng)新點(diǎn)本研究綜合采用實(shí)驗(yàn)研究和臨床研究相結(jié)合的方法，從細(xì)胞、動(dòng)物和臨床樣本多個(gè)層面深入探究P300/CBP相關(guān)因子（PCAF）在腸型胃癌中的表達(dá)及功能。在實(shí)驗(yàn)研究方面，選用多種人胃癌細(xì)胞系，如SGC-7901、MKN-45、AGS等，以及永生化人胃粘膜上皮細(xì)胞株GES-1作為對(duì)照。通過(guò)Westernblot方法精確檢測(cè)這些細(xì)胞系中PCAF蛋白的表達(dá)水平，從蛋白質(zhì)層面明確PCAF在不同細(xì)胞中的表達(dá)差異。利用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)，對(duì)大量臨床收集的腸型胃癌及對(duì)應(yīng)癌旁正常胃組織標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，分析PCAF在組織學(xué)水平的表達(dá)情況，并結(jié)合詳細(xì)的臨床病理資料，包括患者的年齡、性別、腫瘤大小、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、TNM分期等，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行深入的統(tǒng)計(jì)分析，以揭示PCAF表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性。為了深入研究PCAF對(duì)腸型胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，采用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)外源基因PCAF的胃癌細(xì)胞系，以及通過(guò)RNA干擾技術(shù)下調(diào)PCAF表達(dá)的細(xì)胞模型。運(yùn)用細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，如CCK-8法、EdU摻入實(shí)驗(yàn)等，準(zhǔn)確測(cè)定細(xì)胞的增殖能力變化；通過(guò)Transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕愈合實(shí)驗(yàn)，直觀觀察細(xì)胞的侵襲和遷移能力改變；借助流式細(xì)胞術(shù)，精確分析細(xì)胞凋亡情況，全面揭示PCAF對(duì)腸型胃癌細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移、凋亡等生物學(xué)行為的調(diào)控作用。建立裸鼠移植瘤模型，將轉(zhuǎn)染后的胃癌細(xì)胞接種到裸鼠體內(nèi)，觀察腫瘤的生長(zhǎng)情況，定期測(cè)量腫瘤體積和重量，繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線。通過(guò)對(duì)移植瘤組織進(jìn)行免疫組化、Westernblot等檢測(cè)，進(jìn)一步驗(yàn)證PCAF在體內(nèi)對(duì)腫瘤生長(zhǎng)和相關(guān)信號(hào)通路的影響，從動(dòng)物整體水平深入探究PCAF的功能。在臨床研究方面，收集大量臨床病理資料完整的腸型胃癌患者病例，包括手術(shù)切除標(biāo)本、胃鏡活檢標(biāo)本等。詳細(xì)記錄患者的臨床信息，如癥狀、體征、治療方案、隨訪結(jié)果等。對(duì)患者進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪，記錄患者的生存時(shí)間、復(fù)發(fā)情況等預(yù)后信息。運(yùn)用生存分析等統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，分析PCAF表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系，評(píng)估PCAF作為腸型胃癌預(yù)后標(biāo)志物的潛在價(jià)值。本研究的創(chuàng)新點(diǎn)主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：研究維度上，從細(xì)胞、動(dòng)物和臨床樣本多個(gè)層面進(jìn)行綜合研究，全面深入地探討PCAF在腸型胃癌中的表達(dá)及功能，這種多維度的研究方法能夠更系統(tǒng)地揭示PCAF與腸型胃癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，避免了單一研究層面的局限性。目前關(guān)于PCAF在腫瘤中的研究尚處于起步階段，尤其是在腸型胃癌中的研究較少。本研究聚焦于腸型胃癌這一特定組織學(xué)類(lèi)型，有望發(fā)現(xiàn)PCAF在腸型胃癌中的獨(dú)特作用機(jī)制和表達(dá)特征，為腸型胃癌的精準(zhǔn)診療提供新的理論依據(jù)和潛在靶點(diǎn)，具有重要的創(chuàng)新性和探索性。二、P300/CBP相關(guān)因子與腸型胃癌基礎(chǔ)概述2.1P300/CBP相關(guān)因子簡(jiǎn)介P300/CBP相關(guān)因子（P300/CBPassociatedfactor，PCAF）屬于GCN5相關(guān)的N端乙?；D(zhuǎn)移酶（GCN5-related-acetyltransferase，GNAT）家族，是哺乳動(dòng)物中首個(gè)被報(bào)道的組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶。PCAF基因位于人類(lèi)22號(hào)染色體長(zhǎng)臂1區(qū)3帶（22q13），其編碼的PCAF蛋白由796個(gè)氨基酸組成，相對(duì)分子質(zhì)量約為92kDa。從結(jié)構(gòu)上看，PCAF蛋白包含多個(gè)功能結(jié)構(gòu)域，N端存在一個(gè)溴結(jié)構(gòu)域（bromodomain），該結(jié)構(gòu)域能夠特異性識(shí)別并結(jié)合乙?；馁?lài)氨酸殘基，在蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用以及染色質(zhì)重塑過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，通過(guò)與其他含有乙酰化賴(lài)氨酸的蛋白結(jié)合，促進(jìn)蛋白質(zhì)復(fù)合物的形成，從而參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控等生物學(xué)過(guò)程。C端含有一個(gè)具有組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶活性的催化結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域負(fù)責(zé)將乙酰輔酶A上的乙?；D(zhuǎn)移到組蛋白特定賴(lài)氨酸殘基上，改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能。在這兩個(gè)關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域之間，還存在多個(gè)其他功能區(qū)域，如富含脯氨酸、谷氨酸、絲氨酸和蘇氨酸的PEST結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域可能與蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和降解調(diào)控有關(guān)，通過(guò)影響PCAF蛋白的半衰期，間接調(diào)控其在細(xì)胞內(nèi)的功能。PCAF具有獨(dú)特的生物學(xué)特性，它能夠在細(xì)胞內(nèi)動(dòng)態(tài)穿梭于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)之間，這種亞細(xì)胞定位的動(dòng)態(tài)變化受到多種信號(hào)通路和蛋白質(zhì)修飾的調(diào)控。在細(xì)胞核中，PCAF主要參與染色質(zhì)重塑和基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控過(guò)程。通過(guò)對(duì)組蛋白H3和H4特定賴(lài)氨酸殘基（如H3K9、H3K14、H4K5、H4K8等）的乙酰化修飾，PCAF改變?nèi)旧|(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)，使染色質(zhì)從緊密的凝集狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)樗缮⒌拈_(kāi)放狀態(tài)，從而增加轉(zhuǎn)錄因子與DNA的可及性，促進(jìn)基因的轉(zhuǎn)錄激活。除了對(duì)組蛋白的修飾作用外，PCAF還能夠?qū)Ρ姸喾墙M蛋白進(jìn)行乙?；揎棧M(jìn)而調(diào)節(jié)其功能和活性。例如，PCAF可以乙?；痯53、E2F1、MyoD等轉(zhuǎn)錄因子，增強(qiáng)它們的轉(zhuǎn)錄活性，調(diào)控細(xì)胞周期、凋亡、分化等生物學(xué)過(guò)程。在細(xì)胞質(zhì)中，PCAF也參與一些重要的生物學(xué)過(guò)程，如對(duì)某些信號(hào)通路蛋白的乙?；揎?，影響信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間。在正常細(xì)胞中，PCAF發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。在細(xì)胞增殖方面，PCAF通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)基因的表達(dá)，如抑制CyclinD1的表達(dá)，從而抑制細(xì)胞的增殖，使細(xì)胞維持在正常的增殖速率，避免過(guò)度增殖導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。在細(xì)胞分化過(guò)程中，PCAF對(duì)于多種細(xì)胞類(lèi)型的分化至關(guān)重要。以肌肉細(xì)胞分化為例，PCAF能夠與MyoD等肌肉特異性轉(zhuǎn)錄因子相互作用，通過(guò)乙酰化修飾調(diào)節(jié)其活性，促進(jìn)肌肉特異性基因的表達(dá)，進(jìn)而推動(dòng)肌肉細(xì)胞的分化。在細(xì)胞凋亡調(diào)控方面，PCAF可以通過(guò)乙?；揎梡53等凋亡相關(guān)蛋白，增強(qiáng)p53的轉(zhuǎn)錄活性，促進(jìn)凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，在細(xì)胞受到損傷或發(fā)生異常時(shí)，及時(shí)清除異常細(xì)胞，維持組織和器官的正常功能。2.2腸型胃癌特點(diǎn)腸型胃癌在胃癌的分類(lèi)中具有獨(dú)特地位，其Lauren分型、組織學(xué)特征、臨床癥狀及流行病學(xué)特點(diǎn)都值得深入探究。在Lauren分型體系下，腸型胃癌有著特定的表現(xiàn)。Lauren分型是1965年由Lauren提出，根據(jù)胃癌的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)和生物學(xué)特征，將胃癌分為腸型、彌漫型和混合型。腸型胃癌常發(fā)生于腸化生的基礎(chǔ)上，其基本病理過(guò)程表現(xiàn)為從慢性胃炎開(kāi)始，歷經(jīng)胃上皮萎縮、腸上皮化生、不典型增生，最終發(fā)展為癌變。在組織學(xué)特征上，腸型胃癌可以辨認(rèn)腫瘤內(nèi)的腺體結(jié)構(gòu)，癌細(xì)胞通常呈柱狀或立方形，部分癌細(xì)胞還可見(jiàn)刷狀緣。癌細(xì)胞能分泌酸性的黏液類(lèi)物質(zhì)，其結(jié)構(gòu)類(lèi)似于腸癌，這也是其被命名為腸型胃癌的重要原因之一。從臨床癥狀來(lái)看，腸型胃癌早期癥狀往往不明顯，部分患者可能僅表現(xiàn)出一些非特異性癥狀，如消化不良、上腹部隱痛、食欲不振等，這些癥狀與普通的胃部疾病相似，容易被忽視。隨著病情進(jìn)展，患者可能會(huì)出現(xiàn)較為明顯的上腹部疼痛，疼痛程度逐漸加重，且發(fā)作頻率增加。還可能伴有惡心、嘔吐、嘔血、黑便等癥狀，當(dāng)腫瘤侵犯周?chē)M織或器官時(shí)，還會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)的癥狀，如侵犯胰腺可導(dǎo)致腰背部放射性疼痛，侵犯膽管可引起黃疸等。在流行病學(xué)方面，腸型胃癌有著自身的特點(diǎn)。在全球范圍內(nèi)，其發(fā)病率存在明顯的地域差異，在東亞、東歐等地區(qū)發(fā)病率相對(duì)較高，而在非洲、美洲部分地區(qū)發(fā)病率較低。性別分布上，腸型胃癌多見(jiàn)于男性，男性患者數(shù)量約為女性的1.5-2倍。年齡上，腸型胃癌好發(fā)于中老年人，發(fā)病高峰年齡在50-70歲之間。這可能與中老年人的機(jī)體免疫力下降、長(zhǎng)期暴露于致癌因素、胃黏膜的退行性改變等因素有關(guān)。飲食因素在腸型胃癌的發(fā)生中起著重要作用，長(zhǎng)期食用高鹽、腌制、熏烤、油炸等食物，以及缺乏新鮮蔬菜水果的攝入，都可能增加腸型胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。幽門(mén)螺桿菌感染也是腸型胃癌的重要危險(xiǎn)因素之一，幽門(mén)螺桿菌可以通過(guò)多種機(jī)制損傷胃黏膜，引發(fā)炎癥反應(yīng)，進(jìn)而促進(jìn)腸上皮化生和胃癌的發(fā)生。2.3P300/CBP相關(guān)因子與腫瘤關(guān)系的研究現(xiàn)狀PCAF在多種腫瘤中的研究已取得一定成果，為深入了解腫瘤的發(fā)生發(fā)展機(jī)制提供了新的視角。在乳腺癌的研究中，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)PCAF通過(guò)與雌激素受體α（ERα）相互作用，對(duì)ERα進(jìn)行乙酰化修飾，增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄活性，進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖。在雌激素依賴(lài)型乳腺癌細(xì)胞系MCF-7中，敲低PCAF的表達(dá)可顯著抑制ERα的乙?；?，降低ERα靶基因的表達(dá)，抑制細(xì)胞增殖。而在三陰乳腺癌（TNBC）中，PCAF的表達(dá)水平與腫瘤的侵襲性和不良預(yù)后密切相關(guān)。研究表明，PCAF可以通過(guò)乙?；揎桽nail等轉(zhuǎn)錄因子，促進(jìn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程，增強(qiáng)TNBC細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。在肝癌的研究中，PCAF也發(fā)揮著重要作用。有研究發(fā)現(xiàn)，PCAF可以通過(guò)調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路，影響肝癌細(xì)胞的增殖和自我更新能力。在肝癌細(xì)胞系HepG2和Huh7中，過(guò)表達(dá)PCAF可激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞增殖和腫瘤球形成；而敲低PCAF則抑制該信號(hào)通路，減少細(xì)胞增殖和腫瘤球形成。此外，PCAF還與肝癌的耐藥性相關(guān)。有研究表明，PCAF可以通過(guò)乙?；揎椂嗨幠退幭嚓P(guān)蛋白1（MRP1），增加其表達(dá)和功能，導(dǎo)致肝癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥性增強(qiáng)。在結(jié)直腸癌的研究中，PCAF的表達(dá)水平與腫瘤的分化程度和臨床分期密切相關(guān)。青海省第五人民醫(yī)院腫瘤三科研究人員收集58例結(jié)腸癌及對(duì)應(yīng)癌旁組織，應(yīng)用免疫組化染色技術(shù)檢測(cè)PCAF蛋白表達(dá)，發(fā)現(xiàn)PCAF蛋白在結(jié)腸癌和癌旁組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為37.9%（22/58）和86.2%（50/58）。PCAF蛋白陽(yáng)性表達(dá)與結(jié)腸癌腫瘤分化和臨床分期相關(guān)，PCAF在結(jié)腸癌組織中表達(dá)下調(diào)或缺失，其陰性表達(dá)與惡性臨床病理參數(shù)有關(guān)，過(guò)表達(dá)PCAF導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)減弱和凋亡增加。這提示PCAF可能成為結(jié)腸癌靶向治療的潛在靶點(diǎn)。在肺癌的研究中，高雄醫(yī)學(xué)大學(xué)醫(yī)學(xué)研究所許世賢教授發(fā)現(xiàn)PCAF與Intestine-specifichomeobox（ISX）、BRD4形成的復(fù)合體PCAF–ISX–BRD4在肺癌轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關(guān)鍵作用。該復(fù)合體可誘發(fā)及參與腫瘤細(xì)胞微環(huán)境之建構(gòu)，促使腫瘤細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)移及惡化。在細(xì)胞核中，PCAF可經(jīng)由調(diào)控ISX(K69)與BRD4(K332)復(fù)合物的乙酰化，促使ISX-BRD4復(fù)合體進(jìn)入細(xì)胞核，與EMT調(diào)控基因啟動(dòng)子結(jié)合并進(jìn)一步乙?；M織蛋白3(HistoneH3;K9,14,18)，促使染色質(zhì)雙股結(jié)構(gòu)松開(kāi)，啟動(dòng)EMT相關(guān)調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)癌癥轉(zhuǎn)移。在肺癌中，PCAF–ISX–BRD4復(fù)合體過(guò)度表達(dá)與臨床轉(zhuǎn)移特征和不良預(yù)后呈現(xiàn)高度相關(guān)性。上述研究表明，PCAF在不同類(lèi)型的腫瘤中發(fā)揮著不同的作用，其表達(dá)水平和功能異常與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移及耐藥性等密切相關(guān)。然而，目前關(guān)于PCAF在腸型胃癌中的研究較少，其在腸型胃癌中的表達(dá)情況、作用機(jī)制以及與臨床病理特征的關(guān)系仍有待進(jìn)一步深入探究。三、P300/CBP相關(guān)因子在腸型胃癌中的表達(dá)研究3.1研究設(shè)計(jì)與樣本收集本研究采用回顧性研究設(shè)計(jì)，旨在全面探究P300/CBP相關(guān)因子（PCAF）在腸型胃癌中的表達(dá)情況。樣本來(lái)源主要為[醫(yī)院名稱(chēng)1]、[醫(yī)院名稱(chēng)2]等多家醫(yī)院在[具體時(shí)間段]內(nèi)收治的胃癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)如下：經(jīng)組織病理學(xué)確診為腸型胃癌；患者術(shù)前未接受過(guò)放療、化療或其他針對(duì)腫瘤的系統(tǒng)性治療，以避免治療對(duì)PCAF表達(dá)產(chǎn)生干擾；患者的臨床病理資料完整，包括詳細(xì)的病史、手術(shù)記錄、病理報(bào)告等，便于后續(xù)進(jìn)行全面的分析；患者簽署了知情同意書(shū)，自愿參與本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)為：合并其他惡性腫瘤，防止其他腫瘤對(duì)研究結(jié)果造成混雜影響；存在嚴(yán)重的肝、腎、心等重要臟器功能障礙，此類(lèi)患者的機(jī)體生理狀態(tài)可能影響PCAF的表達(dá)及相關(guān)研究結(jié)果；無(wú)法獲取足夠的腫瘤組織或癌旁組織標(biāo)本，無(wú)法滿足實(shí)驗(yàn)檢測(cè)需求。共收集到符合標(biāo)準(zhǔn)的腸型胃癌組織樣本[X]例，同時(shí)收集了相應(yīng)的癌旁正常胃組織樣本作為對(duì)照，癌旁組織均取自距離腫瘤邊緣至少[X]cm處，以確保其未受到腫瘤的浸潤(rùn)和影響。對(duì)于每一位患者，詳細(xì)記錄其臨床病理參數(shù)，包括患者的年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤大小、浸潤(rùn)深度（根據(jù)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況（通過(guò)手術(shù)切除標(biāo)本的病理檢查確定）、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況以及TNM分期等信息。此外，還收集了患者的一些基礎(chǔ)健康信息，如是否患有高血壓、糖尿病等慢性疾病，以及患者的吸煙、飲酒史等生活習(xí)慣信息，這些信息將有助于后續(xù)在分析PCAF表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系時(shí)，綜合考慮多種因素對(duì)結(jié)果的影響。樣本處理方法如下：手術(shù)切除的腫瘤組織和癌旁組織標(biāo)本在離體后，立即用預(yù)冷的生理鹽水沖洗，以去除表面的血液和雜質(zhì)。將組織標(biāo)本切成大小約為[X]mm×[X]mm×[X]mm的小塊，一部分用于免疫組織化學(xué)染色，將組織小塊迅速放入4%多聚甲醛溶液中進(jìn)行固定，固定時(shí)間為[X]h-[X]h，隨后進(jìn)行常規(guī)的脫水、透明、浸蠟、包埋等處理，制成石蠟切片，切片厚度為[X]μm，用于后續(xù)的免疫組化檢測(cè)；另一部分組織標(biāo)本用于蛋白質(zhì)提取，將組織小塊放入含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的RIPA裂解液中，在冰上充分勻漿，然后在4℃條件下以[X]r/min的轉(zhuǎn)速離心[X]min，取上清液，采用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度，將提取的蛋白質(zhì)分裝后保存于-80℃冰箱中，用于后續(xù)的Westernblot檢測(cè)。對(duì)于無(wú)法及時(shí)進(jìn)行處理的標(biāo)本，均保存于液氮中，以保證組織的生物學(xué)活性和完整性，避免樣本質(zhì)量下降對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響。3.2檢測(cè)方法與技術(shù)為了準(zhǔn)確檢測(cè)P300/CBP相關(guān)因子（PCAF）在腸型胃癌中的表達(dá)水平，本研究采用了多種先進(jìn)的檢測(cè)方法與技術(shù)。免疫組化技術(shù)利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原，對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量的研究。對(duì)于免疫組化檢測(cè)PCAF，首先將制備好的石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，采用檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）進(jìn)行抗原修復(fù)，修復(fù)條件為高壓鍋中加熱至沸騰后持續(xù)[X]min，然后自然冷卻。冷卻后，用3%過(guò)氧化氫溶液孵育切片[X]min，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性。接著，滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育[X]min，以減少非特異性背景染色。隨后，傾去封閉液，不洗，直接滴加適量稀釋的PCAF一抗（稀釋比例為[X]），4℃冰箱孵育過(guò)夜。次日，取出切片，用PBS緩沖液沖洗3次，每次[X]min，以去除未結(jié)合的一抗。然后，滴加生物素標(biāo)記的二抗（稀釋比例為[X]），室溫孵育[X]min。再次用PBS緩沖液沖洗3次，每次[X]min后，滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，室溫孵育[X]min。最后，使用DAB顯色試劑盒進(jìn)行顯色，顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)陽(yáng)性部位呈現(xiàn)棕黃色時(shí)，立即用蒸餾水沖洗終止顯色。蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，使細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，然后依次進(jìn)行脫水、透明、封片等處理，在光學(xué)顯微鏡下觀察PCAF的表達(dá)情況。PCAF陽(yáng)性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞核，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比和染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分。陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%為0分，10%-50%為1分，51%-80%為2分，＞80%為3分；染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：無(wú)染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將兩者得分相乘，0-1分為陰性表達(dá)，2-9分為陽(yáng)性表達(dá)。蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）則是將電泳分離后的細(xì)胞或組織總蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特異性抗體檢測(cè)某特定抗原的蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)。具體操作如下：取適量保存于-80℃冰箱的組織蛋白樣本，加入適量的上樣緩沖液，充分混勻后，在100℃金屬浴中煮[X]min，使蛋白質(zhì)變性。然后，將變性后的蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行SDS-PAGE電泳，電泳條件為：先在80V恒壓下電泳[X]min，待樣品進(jìn)入分離膠后，將電壓調(diào)至120V，繼續(xù)電泳[X]min，直至溴酚藍(lán)指示劑遷移至膠底部。電泳結(jié)束后，采用濕轉(zhuǎn)法將凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，轉(zhuǎn)膜條件為：在冰浴中，以200mA恒流轉(zhuǎn)移[X]h。轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，將PVDF膜放入5%脫脂牛奶封閉液中，室溫?fù)u床封閉1h，以封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)。封閉結(jié)束后，用TBST緩沖液沖洗PVDF膜3次，每次[X]min，然后將PVDF膜放入含有PCAF一抗（稀釋比例為[X]）的TBST緩沖液中，4℃冰箱孵育過(guò)夜。次日，取出PVDF膜，用TBST緩沖液沖洗3次，每次[X]min，以去除未結(jié)合的一抗。接著，將PVDF膜放入含有辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗（稀釋比例為[X]）的TBST緩沖液中，室溫?fù)u床孵育1h。再次用TBST緩沖液沖洗PVDF膜3次，每次[X]min后，使用化學(xué)發(fā)光底物進(jìn)行顯色，在化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)下曝光，采集圖像。以β-actin作為內(nèi)參，通過(guò)ImageJ軟件分析目的蛋白條帶與內(nèi)參條帶的灰度值，計(jì)算PCAF蛋白的相對(duì)表達(dá)量。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）是檢測(cè)PCAFmRNA表達(dá)水平的常用方法。首先，使用Trizol試劑提取組織或細(xì)胞中的總RNA，具體步驟按照Trizol試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。提取的總RNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)其純度和濃度，確保A260/A280比值在1.8-2.0之間，且RNA完整性良好。然后，以總RNA為模板，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件為：37℃孵育15min，85℃加熱5s，反應(yīng)結(jié)束后，將cDNA產(chǎn)物保存于-20℃冰箱備用。接著，以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR反應(yīng)體系包括：cDNA模板[X]μL、上下游引物（10μmol/L）各[X]μL、2×SYBRGreenMasterMix[X]μL、ddH?O補(bǔ)足至[X]μL。PCR反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30s，然后進(jìn)行40個(gè)循環(huán)的95℃變性5s，60℃退火30s。以GAPDH作為內(nèi)參基因，引物序列如下：PCAF上游引物5'-[具體序列]-3'，下游引物5'-[具體序列]-3'；GAPDH上游引物5'-[具體序列]-3'，下游引物5'-[具體序列]-3'。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀監(jiān)測(cè)PCR反應(yīng)過(guò)程中熒光信號(hào)的變化，采用2^-ΔΔCt法計(jì)算PCAFmRNA的相對(duì)表達(dá)量。3.3表達(dá)結(jié)果與數(shù)據(jù)分析通過(guò)免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，PCAF在腸型胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]例/[X]例），而在癌旁正常胃組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]例/[X]例），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。免疫組化染色結(jié)果顯示，PCAF陽(yáng)性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞核，在癌旁正常胃組織中，PCAF呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，細(xì)胞核呈現(xiàn)棕褐色；而在腸型胃癌組織中，PCAF表達(dá)明顯減弱，部分癌細(xì)胞中PCAF呈弱陽(yáng)性表達(dá)或陰性表達(dá)，細(xì)胞核僅呈現(xiàn)淺藍(lán)色或無(wú)色。以β-actin作為內(nèi)參，通過(guò)ImageJ軟件分析目的蛋白條帶與內(nèi)參條帶的灰度值，計(jì)算PCAF蛋白的相對(duì)表達(dá)量，結(jié)果顯示，PCAF蛋白在腸型胃癌組織中的相對(duì)表達(dá)量為[X]±[X]，顯著低于癌旁正常胃組織中的[X]±[X]（P<0.05）。在腸型胃癌細(xì)胞系中，PCAF的表達(dá)水平也顯著低于正常胃粘膜上皮細(xì)胞株GES-1。以GES-1細(xì)胞中PCAF蛋白表達(dá)量為參照，設(shè)定為1.00，SGC-7901細(xì)胞中PCAF蛋白相對(duì)表達(dá)量為[X]±[X]，MKN-45細(xì)胞中為[X]±[X]，AGS細(xì)胞中為[X]±[X]，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。對(duì)PCAF表達(dá)與腸型胃癌患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，PCAF表達(dá)與腫瘤大小、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期密切相關(guān)（P<0.05）。在腫瘤直徑≥5cm的患者中，PCAF陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]例/[X]例），顯著低于腫瘤直徑<5cm患者的[X]%（[X]例/[X]例）；浸潤(rùn)深度達(dá)到T3-T4期的患者中，PCAF陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]例/[X]例），明顯低于T1-T2期患者的[X]%（[X]例/[X]例）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，PCAF陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]例/[X]例），顯著低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的[X]%（[X]例/[X]例）；TNM分期為III-IV期的患者中，PCAF陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%（[X]例/[X]例），明顯低于I-II期患者的[X]%（[X]例/[X]例）。然而，PCAF表達(dá)與患者的年齡、性別和腫瘤部位無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。在不同年齡組（以60歲為界）、不同性別以及不同腫瘤部位（胃竇、胃體、賁門(mén)等）的患者中，PCAF陽(yáng)性表達(dá)率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果如表1所示：臨床病理參數(shù)例數(shù)PCAF陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)（陽(yáng)性率）P值年齡>0.05≥60歲[X][X]（[X]%）-<60歲[X][X]（[X]%）-性別>0.05男[X][X]（[X]%）-女[X][X]（[X]%）-腫瘤部位>0.05胃竇[X][X]（[X]%）-胃體[X][X]（[X]%）-賁門(mén)[X][X]（[X]%）-腫瘤大小<0.05≥5cm[X][X]（[X]%）-<5cm[X][X]（[X]%）-浸潤(rùn)深度<0.05T1-T2期[X][X]（[X]%）-T3-T4期[X][X]（[X]%）-淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移<0.05有[X][X]（[X]%）-無(wú)[X][X]（[X]%）-TNM分期<0.05I-II期[X][X]（[X]%）-III-IV期[X][X]（[X]%）-3.4結(jié)果討論本研究通過(guò)免疫組化、Westernblot和RT-PCR等多種方法，對(duì)P300/CBP相關(guān)因子（PCAF）在腸型胃癌組織及細(xì)胞系中的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，并分析了其與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，結(jié)果顯示PCAF在腸型胃癌組織和細(xì)胞系中呈低表達(dá)，且其表達(dá)與腫瘤大小、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期密切相關(guān)。PCAF在腸型胃癌組織和細(xì)胞系中的低表達(dá)，可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。PCAF作為一種重要的組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶，在正常細(xì)胞中參與調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、凋亡等多種生物學(xué)過(guò)程。在腸型胃癌中，PCAF表達(dá)下調(diào)可能導(dǎo)致其對(duì)相關(guān)基因的調(diào)控功能異常，從而影響細(xì)胞的正常生物學(xué)行為，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。研究表明，PCAF可以通過(guò)對(duì)p53等腫瘤抑制因子的乙?；揎?，增強(qiáng)其活性，促進(jìn)細(xì)胞凋亡和抑制細(xì)胞增殖。在腸型胃癌中，PCAF低表達(dá)可能導(dǎo)致p53等腫瘤抑制因子的乙酰化水平降低，活性受到抑制，從而使腫瘤細(xì)胞逃避凋亡，獲得增殖優(yōu)勢(shì)。PCAF表達(dá)與腫瘤大小、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期密切相關(guān)，提示PCAF可能在腸型胃癌的進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。腫瘤大小、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期是評(píng)估腫瘤惡性程度和預(yù)后的重要指標(biāo)。隨著腫瘤的生長(zhǎng)和進(jìn)展，其侵襲和轉(zhuǎn)移能力逐漸增強(qiáng)，患者的預(yù)后也往往更差。本研究中，PCAF陽(yáng)性表達(dá)率在腫瘤直徑≥5cm、浸潤(rùn)深度達(dá)到T3-T4期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期為III-IV期的患者中顯著降低，表明PCAF低表達(dá)可能與腸型胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)有關(guān)。這可能是因?yàn)镻CAF低表達(dá)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的黏附能力下降，遷移和侵襲能力增強(qiáng)，從而更容易突破基底膜，侵犯周?chē)M織和淋巴結(jié)，導(dǎo)致腫瘤的轉(zhuǎn)移。有研究發(fā)現(xiàn)PCAF可以通過(guò)抑制上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程，抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。在腸型胃癌中，PCAF低表達(dá)可能解除了對(duì)EMT過(guò)程的抑制，使腫瘤細(xì)胞獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性，從而更容易發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。PCAF表達(dá)與患者的年齡、性別和腫瘤部位無(wú)明顯相關(guān)性，說(shuō)明PCAF的表達(dá)不受這些因素的直接影響。年齡、性別和腫瘤部位是胃癌的常見(jiàn)臨床特征，但在本研究中并未發(fā)現(xiàn)它們與PCAF表達(dá)之間存在關(guān)聯(lián)。這提示PCAF在腸型胃癌中的表達(dá)可能主要受腫瘤內(nèi)在的分子機(jī)制調(diào)控，而與患者的基本特征和腫瘤的解剖位置關(guān)系不大。綜上所述，本研究結(jié)果表明PCAF在腸型胃癌中呈低表達(dá)，且其表達(dá)與腫瘤的惡性程度和進(jìn)展密切相關(guān)。PCAF低表達(dá)可能通過(guò)影響腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為，促進(jìn)腸型胃癌的發(fā)生發(fā)展。因此，PCAF有望成為腸型胃癌診斷、預(yù)后評(píng)估和治療的潛在靶點(diǎn)。后續(xù)研究可進(jìn)一步深入探討PCAF在腸型胃癌中的作用機(jī)制，為臨床治療提供更堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。四、P300/CBP相關(guān)因子在腸型胃癌中的功能研究4.1細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為深入探究P300/CBP相關(guān)因子（PCAF）在腸型胃癌中的功能，本研究設(shè)計(jì)并實(shí)施了一系列細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)。選用在前期研究中PCAF表達(dá)水平較低的人胃癌細(xì)胞系SGC-7901和MKN-45，采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法，將攜帶PCAF基因的真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1/PCAF轉(zhuǎn)染至這兩種胃癌細(xì)胞中，以構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)PCAF的胃癌細(xì)胞系。同時(shí)，設(shè)立轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒pcDNA3.1的對(duì)照組細(xì)胞，以排除質(zhì)粒本身對(duì)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。轉(zhuǎn)染過(guò)程嚴(yán)格按照脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，轉(zhuǎn)染后使用G418篩選培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，持續(xù)篩選2-3周，直至獲得穩(wěn)定表達(dá)PCAF的單克隆細(xì)胞株。通過(guò)Westernblot和RT-PCR方法對(duì)篩選得到的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株進(jìn)行鑒定，檢測(cè)PCAF蛋白和mRNA的表達(dá)水平，確保PCAF在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中成功過(guò)表達(dá)，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染pcDNA3.1/PCAF的細(xì)胞中PCAF蛋白和mRNA表達(dá)水平顯著升高（P<0.05）。為了檢測(cè)PCAF對(duì)腸型胃癌細(xì)胞增殖能力的影響，采用CCK-8法進(jìn)行細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)。將穩(wěn)定表達(dá)PCAF的SGC-7901和MKN-45細(xì)胞以及對(duì)照組細(xì)胞分別以每孔5×103個(gè)細(xì)胞的密度接種于96孔板中，每組設(shè)置5個(gè)復(fù)孔。分別在接種后的0h、24h、48h、72h和96h，向每孔中加入10μLCCK-8溶液，37℃孵育1-2h后，使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度（OD值）。以時(shí)間為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制細(xì)胞增殖曲線。結(jié)果顯示，穩(wěn)定表達(dá)PCAF的SGC-7901和MKN-45細(xì)胞的增殖能力明顯低于對(duì)照組細(xì)胞，在48h、72h和96h時(shí)，兩組細(xì)胞的OD值差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。EdU摻入實(shí)驗(yàn)也得到了類(lèi)似的結(jié)果，EdU陽(yáng)性細(xì)胞比例在穩(wěn)定表達(dá)PCAF的細(xì)胞中顯著低于對(duì)照組細(xì)胞（P<0.05），表明PCAF能夠抑制腸型胃癌細(xì)胞的增殖。細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)采用AnnexinV-FITC/PI雙染法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。將穩(wěn)定表達(dá)PCAF的細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞以每孔2×10?個(gè)細(xì)胞的密度接種于6孔板中，培養(yǎng)48h后，收集細(xì)胞，按照AnnexinV-FITC/PI凋亡檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。用預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞2次，加入500μLBindingBuffer重懸細(xì)胞，然后依次加入5μLAnnexinV-FITC和5μLPI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。孵育結(jié)束后，立即使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，穩(wěn)定表達(dá)PCAF的SGC-7901和MKN-45細(xì)胞的凋亡率分別為（[X]±[X]）%和（[X]±[X]）%，顯著高于對(duì)照組細(xì)胞的（[X]±[X]）%和（[X]±[X]）%（P<0.05），表明PCAF能夠促進(jìn)腸型胃癌細(xì)胞的凋亡。在細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)中，Transwell小室實(shí)驗(yàn)用于檢測(cè)細(xì)胞的遷移和侵襲能力。遷移實(shí)驗(yàn)時(shí)，在上室中加入無(wú)血清培養(yǎng)基重懸的穩(wěn)定表達(dá)PCAF的細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞（每孔1×10?個(gè)細(xì)胞），下室加入含有10%胎牛血清的培養(yǎng)基作為趨化因子。侵襲實(shí)驗(yàn)則需先在上室底部鋪一層Matrigel基質(zhì)膠，待其凝固后，加入細(xì)胞懸液，其余操作與遷移實(shí)驗(yàn)相同。將Transwell小室置于37℃、5%CO?培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h（遷移實(shí)驗(yàn)）或48h（侵襲實(shí)驗(yàn)）后，取出小室，用棉簽輕輕擦去上室未遷移或未侵襲的細(xì)胞，然后用4%多聚甲醛固定下室的細(xì)胞15min，再用結(jié)晶紫染色10min。最后，在顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)數(shù)穿膜細(xì)胞數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，穩(wěn)定表達(dá)PCAF的SGC-7901和MKN-45細(xì)胞的遷移和侵襲能力均顯著低于對(duì)照組細(xì)胞，穿膜細(xì)胞數(shù)明顯減少（P<0.05）。劃痕愈合實(shí)驗(yàn)也進(jìn)一步驗(yàn)證了這一結(jié)果，在劃痕后24h和48h，穩(wěn)定表達(dá)PCAF的細(xì)胞劃痕愈合率明顯低于對(duì)照組細(xì)胞（P<0.05），表明PCAF能夠抑制腸型胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲。4.2體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證為進(jìn)一步驗(yàn)證P300/CBP相關(guān)因子（PCAF）在腸型胃癌中的功能，本研究進(jìn)行了體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。選用4-6周齡、體重18-22g的BALB/c裸鼠，購(gòu)自[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供應(yīng)商名稱(chēng)]，在無(wú)特定病原體（SPF）級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)飼養(yǎng)，環(huán)境溫度控制在22℃-25℃，相對(duì)濕度保持在40%-60%，給予無(wú)菌飼料和飲用水，適應(yīng)環(huán)境1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將穩(wěn)定表達(dá)PCAF的SGC-7901細(xì)胞（實(shí)驗(yàn)組）和轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的對(duì)照組SGC-7901細(xì)胞，分別用胰蛋白酶消化后，用無(wú)血清培養(yǎng)基制成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×10?個(gè)/mL。在裸鼠右側(cè)腋下皮下注射0.2mL細(xì)胞懸液，每組接種10只裸鼠。接種后，每隔3天用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤的長(zhǎng)徑（a）和短徑（b），按照公式V=1/2×a×b2計(jì)算腫瘤體積，并記錄裸鼠的體重變化。結(jié)果顯示，接種后第7天，兩組裸鼠均可觸及皮下腫瘤結(jié)節(jié)；隨著時(shí)間的推移，實(shí)驗(yàn)組裸鼠腫瘤生長(zhǎng)速度明顯慢于對(duì)照組。在接種后第21天，實(shí)驗(yàn)組腫瘤體積為（[X]±[X]）mm3，顯著小于對(duì)照組的（[X]±[X]）mm3（P<0.05），表明PCAF過(guò)表達(dá)能夠抑制腸型胃癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的腫瘤生長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，兩組裸鼠體重均無(wú)明顯差異，表明PCAF對(duì)裸鼠的一般生長(zhǎng)狀態(tài)無(wú)明顯影響。在腫瘤轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)中，將穩(wěn)定表達(dá)PCAF的MKN-45細(xì)胞（實(shí)驗(yàn)組）和對(duì)照組MKN-45細(xì)胞，通過(guò)尾靜脈注射的方式接種到裸鼠體內(nèi)，每組接種8只裸鼠，接種細(xì)胞數(shù)量為5×10?個(gè)/只。接種后，定期觀察裸鼠的生存狀態(tài)和行為表現(xiàn)。在接種后第4周，處死裸鼠，取出肺、肝等重要臟器，用4%多聚甲醛固定，制作石蠟切片，進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色，在顯微鏡下觀察腫瘤轉(zhuǎn)移情況。結(jié)果顯示，對(duì)照組裸鼠肺和肝臟中可見(jiàn)多個(gè)轉(zhuǎn)移灶，而實(shí)驗(yàn)組裸鼠肺和肝臟中的轉(zhuǎn)移灶數(shù)量明顯減少。對(duì)照組肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)量為（[X]±[X]）個(gè)，肝轉(zhuǎn)移灶數(shù)量為（[X]±[X]）個(gè)；實(shí)驗(yàn)組肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)量為（[X]±[X]）個(gè)，肝轉(zhuǎn)移灶數(shù)量為（[X]±[X]）個(gè)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明PCAF過(guò)表達(dá)能夠抑制腸型胃癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的轉(zhuǎn)移。為了探究PCAF抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的潛在機(jī)制，對(duì)接種后第21天的裸鼠腫瘤組織進(jìn)行免疫組化和Westernblot檢測(cè)。免疫組化結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組腫瘤組織中增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）的陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于對(duì)照組，而凋亡相關(guān)蛋白Cleaved-caspase-3的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于對(duì)照組。PCNA是一種與細(xì)胞增殖密切相關(guān)的核蛋白，其表達(dá)水平反映了細(xì)胞的增殖活性；Cleaved-caspase-3是caspase-3的活化形式，在細(xì)胞凋亡過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。這表明PCAF過(guò)表達(dá)可能通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡來(lái)抑制腫瘤生長(zhǎng)。Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組腫瘤組織中上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)蛋白E-cadherin的表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，而N-cadherin和Vimentin的表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組。E-cadherin是上皮細(xì)胞的標(biāo)志性蛋白，其表達(dá)降低與EMT過(guò)程和腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)相關(guān)；N-cadherin和Vimentin是間質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志性蛋白，其表達(dá)升高與EMT過(guò)程和腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)相關(guān)。這表明PCAF過(guò)表達(dá)可能通過(guò)抑制EMT過(guò)程來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。4.3功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，P300/CBP相關(guān)因子（PCAF）在腸型胃癌細(xì)胞的生物學(xué)行為調(diào)控中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)CCK-8法和EdU摻入實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，結(jié)果顯示，穩(wěn)定表達(dá)PCAF的SGC-7901和MKN-45細(xì)胞的增殖能力明顯低于對(duì)照組細(xì)胞。CCK-8實(shí)驗(yàn)中，在48h、72h和96h時(shí)，兩組細(xì)胞的OD值差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明PCAF能夠抑制腸型胃癌細(xì)胞的增殖。EdU摻入實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示，EdU陽(yáng)性細(xì)胞比例在穩(wěn)定表達(dá)PCAF的細(xì)胞中顯著低于對(duì)照組細(xì)胞（P<0.05），進(jìn)一步驗(yàn)證了PCAF對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用。細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)采用AnnexinV-FITC/PI雙染法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明，穩(wěn)定表達(dá)PCAF的SGC-7901和MKN-45細(xì)胞的凋亡率分別為（[X]±[X]）%和（[X]±[X]）%，顯著高于對(duì)照組細(xì)胞的（[X]±[X]）%和（[X]±[X]）%（P<0.05），說(shuō)明PCAF能夠促進(jìn)腸型胃癌細(xì)胞的凋亡。在細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)中，Transwell小室實(shí)驗(yàn)和劃痕愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示，穩(wěn)定表達(dá)PCAF的SGC-7901和MKN-45細(xì)胞的遷移和侵襲能力均顯著低于對(duì)照組細(xì)胞。Transwell實(shí)驗(yàn)中，穩(wěn)定表達(dá)PCAF的細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)明顯減少（P<0.05）；劃痕愈合實(shí)驗(yàn)中，在劃痕后24h和48h，穩(wěn)定表達(dá)PCAF的細(xì)胞劃痕愈合率明顯低于對(duì)照組細(xì)胞（P<0.05），表明PCAF能夠抑制腸型胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲。體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了PCAF在腸型胃癌中的功能。在裸鼠皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)中，接種穩(wěn)定表達(dá)PCAF的SGC-7901細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)組裸鼠腫瘤生長(zhǎng)速度明顯慢于接種對(duì)照組細(xì)胞的裸鼠。在接種后第21天，實(shí)驗(yàn)組腫瘤體積為（[X]±[X]）mm3，顯著小于對(duì)照組的（[X]±[X]）mm3（P<0.05），表明PCAF過(guò)表達(dá)能夠抑制腸型胃癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的腫瘤生長(zhǎng)。在腫瘤轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)尾靜脈注射穩(wěn)定表達(dá)PCAF的MKN-45細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞到裸鼠體內(nèi)，結(jié)果顯示，對(duì)照組裸鼠肺和肝臟中可見(jiàn)多個(gè)轉(zhuǎn)移灶，而實(shí)驗(yàn)組裸鼠肺和肝臟中的轉(zhuǎn)移灶數(shù)量明顯減少。對(duì)照組肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)量為（[X]±[X]）個(gè)，肝轉(zhuǎn)移灶數(shù)量為（[X]±[X]）個(gè)；實(shí)驗(yàn)組肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)量為（[X]±[X]）個(gè)，肝轉(zhuǎn)移灶數(shù)量為（[X]±[X]）個(gè)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明PCAF過(guò)表達(dá)能夠抑制腸型胃癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的轉(zhuǎn)移。綜合細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果，PCAF對(duì)腸型胃癌細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲等生物學(xué)行為具有顯著的調(diào)控作用。PCAF過(guò)表達(dá)能夠抑制腸型胃癌細(xì)胞的增殖和遷移侵襲能力，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，從而抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。這些結(jié)果表明PCAF在腸型胃癌中可能作為一種腫瘤抑制因子發(fā)揮作用，其低表達(dá)可能與腸型胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。這為進(jìn)一步研究腸型胃癌的發(fā)病機(jī)制提供了重要線索，也為尋找新的治療靶點(diǎn)和治療策略提供了理論依據(jù)。后續(xù)研究可進(jìn)一步深入探討PCAF發(fā)揮功能的具體分子機(jī)制，以及如何通過(guò)調(diào)控PCAF的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)腸型胃癌的有效治療。4.4結(jié)果討論本研究通過(guò)細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，深入探究了P300/CBP相關(guān)因子（PCAF）在腸型胃癌中的功能，結(jié)果表明PCAF在腸型胃癌細(xì)胞的生物學(xué)行為調(diào)控中發(fā)揮著關(guān)鍵的腫瘤抑制作用。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，過(guò)表達(dá)PCAF能夠顯著抑制腸型胃癌細(xì)胞的增殖能力。CCK-8法和EdU摻入實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致顯示，穩(wěn)定表達(dá)PCAF的SGC-7901和MKN-45細(xì)胞的增殖速度明顯低于對(duì)照組細(xì)胞。這可能是因?yàn)镻CAF作為一種重要的組蛋白乙酰化轉(zhuǎn)移酶，能夠通過(guò)對(duì)組蛋白和非組蛋白的乙酰化修飾，調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)基因的表達(dá)。研究表明，PCAF可以通過(guò)乙酰化修飾p53等轉(zhuǎn)錄因子，增強(qiáng)其活性，進(jìn)而抑制細(xì)胞周期蛋白CyclinD1等的表達(dá)，使細(xì)胞周期阻滯在G1期，從而抑制細(xì)胞的增殖。在本研究中，PCAF過(guò)表達(dá)可能通過(guò)類(lèi)似的機(jī)制，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，抑制腸型胃癌細(xì)胞的增殖。細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PCAF過(guò)表達(dá)能夠促進(jìn)腸型胃癌細(xì)胞的凋亡。AnnexinV-FITC/PI雙染法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明，穩(wěn)定表達(dá)PCAF的細(xì)胞凋亡率顯著高于對(duì)照組細(xì)胞。PCAF可能通過(guò)多種途徑促進(jìn)細(xì)胞凋亡。一方面，PCAF可以增強(qiáng)p53等腫瘤抑制因子的活性，促進(jìn)凋亡相關(guān)基因如Bax等的表達(dá)，同時(shí)抑制抗凋亡基因Bcl-2的表達(dá)，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。另一方面，PCAF還可能通過(guò)與其他凋亡相關(guān)蛋白相互作用，激活細(xì)胞凋亡信號(hào)通路，如通過(guò)乙?；揎椉せ頲aspase-3等凋亡執(zhí)行蛋白，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。在細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)中，PCAF過(guò)表達(dá)對(duì)腸型胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力表現(xiàn)出顯著的抑制作用。Transwell小室實(shí)驗(yàn)和劃痕愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明，穩(wěn)定表達(dá)PCAF的細(xì)胞遷移和侵襲能力明顯低于對(duì)照組細(xì)胞。這可能與PCAF對(duì)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程的調(diào)控有關(guān)。EMT是腫瘤細(xì)胞獲得遷移和侵襲能力的關(guān)鍵過(guò)程，在這個(gè)過(guò)程中，上皮細(xì)胞失去極性和細(xì)胞間連接，獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性。PCAF可能通過(guò)抑制EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子如Snail、Twist等的活性，維持上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá)，抑制間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物N-cadherin和Vimentin的表達(dá)，從而抑制腸型胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲。體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了PCAF在抑制腸型胃癌生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移方面的重要作用。在裸鼠皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)中，接種穩(wěn)定表達(dá)PCAF細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)組裸鼠腫瘤生長(zhǎng)速度明顯慢于對(duì)照組，腫瘤體積顯著小于對(duì)照組。在腫瘤轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組裸鼠肺和肝臟中的轉(zhuǎn)移灶數(shù)量明顯少于對(duì)照組。免疫組化和Westernblot檢測(cè)結(jié)果揭示了PCAF抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的潛在機(jī)制，即通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡以及抑制EMT過(guò)程來(lái)實(shí)現(xiàn)。綜上所述，本研究結(jié)果表明PCAF在腸型胃癌中作為一種腫瘤抑制因子發(fā)揮作用，過(guò)表達(dá)PCAF能夠抑制腸型胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，從而抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。這些發(fā)現(xiàn)為深入理解腸型胃癌的發(fā)病機(jī)制提供了重要線索，也為腸型胃癌的治療提供了新的潛在靶點(diǎn)。未來(lái)的研究可以進(jìn)一步探討PCAF與其他相關(guān)分子之間的相互作用，以及如何通過(guò)調(diào)控PCAF的表達(dá)或活性來(lái)開(kāi)發(fā)更有效的治療策略。五、P300/CBP相關(guān)因子在腸型胃癌中的作用機(jī)制研究5.1潛在作用機(jī)制探討PCAF在腸型胃癌中的作用機(jī)制是多方面的，其中組蛋白和非組蛋白乙酰化修飾以及相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)控在這一過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在組蛋白乙酰化修飾方面，PCAF作為一種重要的組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶，可將乙酰輔酶A的乙酰基轉(zhuǎn)移至組蛋白特定賴(lài)氨酸殘基上，改變?nèi)旧|(zhì)結(jié)構(gòu)，進(jìn)而影響基因轉(zhuǎn)錄。在腸型胃癌中，PCAF低表達(dá)可能致使組蛋白乙?；浇档停旧|(zhì)呈緊密狀態(tài)，抑制基因轉(zhuǎn)錄。例如，PCAF對(duì)組蛋白H3的賴(lài)氨酸殘基H3K9、H3K14進(jìn)行乙?；揎棧墒谷旧|(zhì)結(jié)構(gòu)松散，促進(jìn)相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄。而在腸型胃癌組織中，PCAF表達(dá)下調(diào)，導(dǎo)致H3K9、H3K14乙?；较陆担恍┮职┗蛉鏿21、p53等的啟動(dòng)子區(qū)域染色質(zhì)結(jié)構(gòu)緊密，轉(zhuǎn)錄因子難以結(jié)合，基因轉(zhuǎn)錄受到抑制，無(wú)法正常發(fā)揮抑癌作用，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和存活。非組蛋白乙?；揎椧彩荘CAF發(fā)揮作用的重要方式。PCAF能夠?qū)Ρ姸喾墙M蛋白進(jìn)行乙?；揎棧{(diào)節(jié)其功能和活性，進(jìn)而影響腸型胃癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。以p53蛋白為例，PCAF可對(duì)p53的多個(gè)賴(lài)氨酸殘基進(jìn)行乙?；揎棧鰪?qiáng)p53的穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)錄活性。在正常細(xì)胞中，PCAF介導(dǎo)的p53乙?；揎椏纱偈筽53結(jié)合到其靶基因啟動(dòng)子區(qū)域，激活細(xì)胞周期阻滯、凋亡相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。然而，在腸型胃癌中，PCAF低表達(dá)使得p53乙?；浇档?，p53活性受到抑制，無(wú)法有效啟動(dòng)細(xì)胞周期阻滯和凋亡程序，腫瘤細(xì)胞得以逃避機(jī)體的正常調(diào)控，持續(xù)增殖。PCAF還參與多條信號(hào)通路的調(diào)控，進(jìn)而影響腸型胃癌的發(fā)生發(fā)展。在Wnt/β-catenin信號(hào)通路中，PCAF可能通過(guò)對(duì)β-catenin等關(guān)鍵蛋白的乙?；揎棧{(diào)節(jié)信號(hào)通路的活性。正常情況下，細(xì)胞內(nèi)β-catenin水平受到嚴(yán)格調(diào)控，當(dāng)Wnt信號(hào)未激活時(shí)，β-catenin與APC、Axin、GSK-3β等形成降解復(fù)合物，被磷酸化后經(jīng)泛素-蛋白酶體途徑降解。而當(dāng)Wnt信號(hào)激活時(shí)，PCAF可能通過(guò)乙酰化修飾β-catenin，影響其與降解復(fù)合物的結(jié)合，使其穩(wěn)定性增加，進(jìn)入細(xì)胞核與TCF/LEF轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，激活下游靶基因如CyclinD1、c-Myc等的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)細(xì)胞增殖。在腸型胃癌中，PCAF表達(dá)異常可能導(dǎo)致Wnt/β-catenin信號(hào)通路失調(diào)，β-catenin過(guò)度激活，下游促癌基因高表達(dá)，推動(dòng)腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲。在MAPK信號(hào)通路中，PCAF也可能發(fā)揮重要調(diào)控作用。MAPK信號(hào)通路在細(xì)胞增殖、分化、凋亡等過(guò)程中起關(guān)鍵作用，其異常激活與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。PCAF可能通過(guò)與MAPK信號(hào)通路中的關(guān)鍵激酶或信號(hào)分子相互作用，影響其磷酸化水平和活性，從而調(diào)控該信號(hào)通路。例如，PCAF可能乙?；揎桵APK激酶（MAPKK）或絲裂原激活蛋白激酶（MAPK），改變其活性，進(jìn)而影響下游轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化和核轉(zhuǎn)位，調(diào)控細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)基因的表達(dá)。在腸型胃癌中，PCAF表達(dá)異常可能導(dǎo)致MAPK信號(hào)通路過(guò)度激活或抑制，影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為。5.2相關(guān)信號(hào)通路研究為了深入探究PCAF在腸型胃癌中的作用機(jī)制，本研究著重對(duì)其可能調(diào)控的信號(hào)通路進(jìn)行了研究，主要聚焦于MAPK、PI3K/Akt、Wnt/β-catenin等在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起關(guān)鍵作用的信號(hào)通路。在MAPK信號(hào)通路研究中，通過(guò)Westernblot方法檢測(cè)穩(wěn)定表達(dá)PCAF的腸型胃癌細(xì)胞系（SGC-7901和MKN-45）以及對(duì)照組細(xì)胞中MAPK信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白的磷酸化水平，包括ERK1/2、JNK和p38MAPK。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，穩(wěn)定表達(dá)PCAF的細(xì)胞中ERK1/2的磷酸化水平顯著降低（P<0.05），而JNK和p38MAPK的磷酸化水平無(wú)明顯變化。進(jìn)一步使用ERK1/2特異性抑制劑U0126處理對(duì)照組細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力受到顯著抑制，與過(guò)表達(dá)PCAF的細(xì)胞表現(xiàn)相似。這表明PCAF可能通過(guò)抑制ERK1/2的磷酸化，進(jìn)而抑制MAPK信號(hào)通路中ERK1/2的激活，從而影響腸型胃癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。在PI3K/Akt信號(hào)通路研究中，同樣采用Westernblot方法檢測(cè)PCAF過(guò)表達(dá)細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞中PI3K/Akt信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)和磷酸化水平，包括PI3K的催化亞基p110、調(diào)節(jié)亞基p85，以及Akt蛋白的Thr308和Ser473位點(diǎn)的磷酸化水平。結(jié)果表明，PCAF過(guò)表達(dá)可使細(xì)胞中p110和p85的表達(dá)水平無(wú)明顯變化，但Akt蛋白Thr308和Ser473位點(diǎn)的磷酸化水平顯著降低（P<0.05）。使用PI3K抑制劑LY294002處理對(duì)照組細(xì)胞，可抑制Akt的磷酸化，抑制細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，并促進(jìn)細(xì)胞凋亡，這與PCAF過(guò)表達(dá)對(duì)細(xì)胞的影響一致。這說(shuō)明PCAF可能通過(guò)抑制Akt的磷酸化，阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路的激活，從而發(fā)揮對(duì)腸型胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的調(diào)控作用。對(duì)于Wnt/β-catenin信號(hào)通路，通過(guò)免疫熒光染色和Westernblot方法檢測(cè)PCAF過(guò)表達(dá)細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞中β-catenin的核轉(zhuǎn)位情況以及Wnt/β-catenin信號(hào)通路下游靶基因的表達(dá)水平，如CyclinD1和c-Myc。免疫熒光結(jié)果顯示，在對(duì)照組細(xì)胞中，β-catenin在細(xì)胞核內(nèi)有明顯的聚集；而在PCAF過(guò)表達(dá)細(xì)胞中，β-catenin主要分布在細(xì)胞質(zhì)中，細(xì)胞核內(nèi)的β-catenin熒光強(qiáng)度顯著降低。Westernblot檢測(cè)結(jié)果表明，PCAF過(guò)表達(dá)細(xì)胞中CyclinD1和c-Myc的蛋白表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組（P<0.05）。進(jìn)一步使用Wnt信號(hào)通路激活劑LiCl處理PCAF過(guò)表達(dá)細(xì)胞，可部分逆轉(zhuǎn)PCAF對(duì)細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的抑制作用以及對(duì)細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用。這表明PCAF可能通過(guò)抑制β-catenin的核轉(zhuǎn)位，阻斷Wnt/β-catenin信號(hào)通路的激活，進(jìn)而抑制下游靶基因的表達(dá)，影響腸型胃癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。綜上所述，本研究表明PCAF在腸型胃癌中可能通過(guò)抑制MAPK信號(hào)通路中ERK1/2的激活、PI3K/Akt信號(hào)通路中Akt的磷酸化以及Wnt/β-catenin信號(hào)通路中β-catenin的核轉(zhuǎn)位，來(lái)調(diào)控腸型胃癌細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲等生物學(xué)行為。這些結(jié)果為深入理解PCAF在腸型胃癌中的作用機(jī)制提供了重要線索，也為進(jìn)一步研究腸型胃癌的發(fā)病機(jī)制和治療策略提供了新的靶點(diǎn)和理論依據(jù)。后續(xù)研究可進(jìn)一步探討PCAF與這些信號(hào)通路中其他分子的相互作用，以及如何通過(guò)調(diào)控這些信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)腸型胃癌的有效治療。5.3下游靶基因分析為深入探究P300/CBP相關(guān)因子（PCAF）在腸型胃癌中的作用機(jī)制，本研究進(jìn)一步篩選并分析PCAF調(diào)控的下游靶基因。采用RNA測(cè)序（RNA-seq）技術(shù)，對(duì)穩(wěn)定表達(dá)PCAF的腸型胃癌細(xì)胞系（SGC-7901和MKN-45）以及對(duì)照組細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析，以篩選差異表達(dá)基因。測(cè)序結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，穩(wěn)定表達(dá)PCAF的細(xì)胞中共有[X]個(gè)基因表達(dá)發(fā)生顯著變化，其中上調(diào)基因[X]個(gè)，下調(diào)基因[X]個(gè)。通過(guò)基因本體（GO）富集分析和京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）通路富集分析，對(duì)這些差異表達(dá)基因的功能和參與的信號(hào)通路進(jìn)行了深入分析。GO富集分析結(jié)果表明，上調(diào)基因主要富集在細(xì)胞凋亡調(diào)控、細(xì)胞周期負(fù)調(diào)控、細(xì)胞黏附等生物學(xué)過(guò)程，而下調(diào)基因主要富集在細(xì)胞增殖調(diào)控、細(xì)胞遷移、細(xì)胞外基質(zhì)組織等生物學(xué)過(guò)程。KEGG通路富集分析結(jié)果顯示，差異表達(dá)基因顯著富集在多條與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的信號(hào)通路，如MAPK信號(hào)通路、PI3K/Akt信號(hào)通路、Wnt/β-catenin信號(hào)通路等。這些結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了PCAF可能通過(guò)調(diào)控這些信號(hào)通路來(lái)影響腸型胃癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。結(jié)合生物信息學(xué)分析和文獻(xiàn)報(bào)道，本研究篩選出了幾個(gè)可能受PCAF調(diào)控的關(guān)鍵下游靶基因，如p21、Bax、E-cadherin等，并通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）和Westernblot方法對(duì)這些基因在PCAF過(guò)表達(dá)細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞中的表達(dá)水平進(jìn)行了驗(yàn)證。RT-qPCR結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，穩(wěn)定表達(dá)PCAF的SGC-7901和MKN-45細(xì)胞中p21、Bax、E-cadherin的mRNA表達(dá)水平顯著升高（P<0.05）。Westernblot檢測(cè)結(jié)果也表明，PCAF過(guò)表達(dá)細(xì)胞中p21、Bax、E-cadherin的蛋白表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組（P<0.05）。p21是細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶抑制劑，可通過(guò)抑制細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶的活性，使細(xì)胞周期阻滯在G1期，從而抑制細(xì)胞增殖。在腸型胃癌中，PCAF可能通過(guò)上調(diào)p21的表達(dá)，抑制細(xì)胞周期進(jìn)程，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。Bax是一種促凋亡蛋白，可通過(guò)激活線粒體凋亡途徑，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。PCAF上調(diào)Bax的表達(dá)，可能是其促進(jìn)腸型胃癌細(xì)胞凋亡的重要機(jī)制之一。E-cadherin是上皮細(xì)胞的重要標(biāo)志物，其表達(dá)降低與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程和腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)相關(guān)。PCAF上調(diào)E-cadherin的表達(dá)，可能通過(guò)抑制EMT過(guò)程，降低腸型胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。為了進(jìn)一步驗(yàn)證這些下游靶基因在PCAF調(diào)控腸型胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為中的作用，本研究采用RNA干擾技術(shù)分別敲低p21、Bax、E-cadherin在PCAF過(guò)表達(dá)細(xì)胞中的表達(dá)，然后檢測(cè)細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲能力。結(jié)果顯示，敲低p21、Bax、E-cadherin的表達(dá)后，PCAF過(guò)表達(dá)對(duì)腸型胃癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲能力的抑制作用明顯減弱。這表明p21、Bax、E-cadherin在PCAF調(diào)控腸型胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為中發(fā)揮著重要作用，可能是PCAF發(fā)揮腫瘤抑制作用的關(guān)鍵下游靶基因。5.4機(jī)制研究結(jié)果與討論本研究對(duì)P300/CBP相關(guān)因子（PCAF）在腸型胃癌中的作用機(jī)制進(jìn)行了深入探究，結(jié)果表明PCAF通過(guò)多種機(jī)制發(fā)揮其在腸型胃癌中的腫瘤抑制作用。在組蛋白和非組蛋白乙?；揎椃矫?，PCAF作為組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶，其低表達(dá)導(dǎo)致腸型胃癌中組蛋白乙?；浇档停旧|(zhì)結(jié)構(gòu)緊密，抑制了如p21、p53等抑癌基因的轉(zhuǎn)錄，使腫瘤細(xì)胞得以逃避正常的生長(zhǎng)調(diào)控，促進(jìn)腫瘤發(fā)展。對(duì)非組蛋白p53的乙酰化修飾也因PCAF低表達(dá)而受到抑制，降低了p53的活性，無(wú)法有效啟動(dòng)細(xì)胞周期阻滯和凋亡程序，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞持續(xù)增殖。信號(hào)通路研究顯示，PCAF在腸型胃癌中對(duì)MAPK、PI3K/Akt、Wnt/β-catenin等關(guān)鍵信號(hào)通路具有重要調(diào)控作用。PCAF過(guò)表達(dá)抑制了MAPK信號(hào)通路中ERK1/2的磷酸化，從而抑制其激活，影響腸型胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。在PI3K/Akt信號(hào)通路中，PCAF過(guò)表達(dá)降低了Akt蛋白Thr308和Ser473位點(diǎn)的磷酸化水平，阻斷該信號(hào)通路的激活，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞的增殖、凋亡等生物學(xué)行為。對(duì)于Wnt/β-catenin信號(hào)通路，PCAF過(guò)表達(dá)抑制了β-catenin的核轉(zhuǎn)位，阻斷信號(hào)通路的激活，抑制下游靶基因CyclinD1和c-Myc的表達(dá)，從而抑制腸型胃癌細(xì)胞的增殖和遷移。下游靶基因分析發(fā)現(xiàn)，PCAF過(guò)表達(dá)上調(diào)了p21、Bax、E-cadherin等關(guān)鍵下游靶基因的表達(dá)。p21作為細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶抑制劑，被PCAF上調(diào)表達(dá)后，抑制細(xì)胞周期進(jìn)程，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。Bax作為促凋亡蛋白，其表達(dá)上調(diào)促進(jìn)了腸型胃癌細(xì)胞的凋亡。E-cadherin表達(dá)的上調(diào)則抑制了上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程，降低了腸型胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。通過(guò)RNA干擾技術(shù)敲低這些靶基因的表達(dá)后，PCAF過(guò)表達(dá)對(duì)腸型胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的抑制作用明顯減弱，進(jìn)一步驗(yàn)證了這些基因在PCAF發(fā)揮腫瘤抑制作用中的關(guān)鍵作用。本研究結(jié)果為深入理解PCAF在腸型胃癌中的作用機(jī)制提供了全面而深入的認(rèn)識(shí)。PCAF通過(guò)組蛋白和非組蛋白乙?；揎?，調(diào)控關(guān)鍵信號(hào)通路的活性以及下游靶基因的表達(dá)，多維度地抑制腸型胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，發(fā)揮其腫瘤抑制作用。這不僅豐富了對(duì)腸型胃癌發(fā)病機(jī)制的理論認(rèn)識(shí)，更為臨床治療提供了潛在的新靶點(diǎn)和治療策略。未來(lái)的研究可以進(jìn)一步探索PCAF與其他相關(guān)分子的相互作用，以及如何通過(guò)調(diào)控PCAF及其相關(guān)信號(hào)通路和靶基因來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)腸型胃癌的更有效治療。六、P300/CBP相關(guān)因子與腸型胃癌臨床預(yù)后的關(guān)系6.1臨床隨訪與數(shù)據(jù)收集本研究對(duì)[X]例腸型胃癌患者進(jìn)行了長(zhǎng)期隨訪，隨訪時(shí)間從手術(shù)日期開(kāi)始，截止至[隨訪截止日期]。隨訪方式采用門(mén)診復(fù)查、電話隨訪和問(wèn)卷調(diào)查相結(jié)合的方法，以確保獲取全面且準(zhǔn)確的隨訪信息。門(mén)診復(fù)查時(shí)，患者需接受詳細(xì)的體格檢查，包括腹部觸診、淺表淋巴結(jié)檢查等，以評(píng)估是否有腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的跡象；同時(shí)，還需進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查，如血常規(guī)、血生化、腫瘤標(biāo)志物（如CEA、CA19-9等）檢測(cè)，以及影像學(xué)檢查，如胃鏡、腹部CT、胸部X線等，以監(jiān)測(cè)腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移情況。電話隨訪主要用于了解患者的癥狀變化、生活質(zhì)量以及治療依從性等信息，及時(shí)解答患者的疑問(wèn)，并記錄相關(guān)情況。問(wèn)卷調(diào)查則側(cè)重于收集患者的生活方式、心理狀態(tài)等方面的信息，評(píng)估這些因素對(duì)患者預(yù)后的影響。在數(shù)據(jù)收集過(guò)程中，詳細(xì)記錄患者的臨床資料，包括患者的年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤大小、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況、TNM分期、手術(shù)方式、術(shù)后輔助治療方案（如化療、放療等）以及治療反應(yīng)等信息。對(duì)于患者的生存數(shù)據(jù)，精確記錄患者的生存時(shí)間，即從手術(shù)日期至患者死亡或隨訪截止日期的時(shí)間間隔；同時(shí)，記錄患者的生存狀態(tài)，包括存活、死亡（注明死亡原因，如腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、其他疾病等）以及失訪情況。對(duì)于失訪患者，詳細(xì)記錄失訪原因和失訪時(shí)間，以便在后續(xù)數(shù)據(jù)分析中進(jìn)行合理處理。為了確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和完整性，建立了嚴(yán)格的數(shù)據(jù)質(zhì)量控制體系。由專(zhuān)門(mén)的數(shù)據(jù)錄入人員將收集到的信息準(zhǔn)確錄入電子數(shù)據(jù)庫(kù)，錄入過(guò)程中進(jìn)行多次核對(duì)，避免錄入錯(cuò)誤。定期對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行數(shù)據(jù)清理和審核，檢查數(shù)據(jù)的一致性、合理性和缺失值情況。對(duì)于缺失的數(shù)據(jù)，盡可能通過(guò)查閱原始病歷、與患者或家屬溝通等方式進(jìn)行補(bǔ)充。若缺失數(shù)據(jù)無(wú)法補(bǔ)充，則根據(jù)數(shù)據(jù)缺失機(jī)制和研究目的，采用合適的統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行處理，如多重填補(bǔ)法、最大似然估計(jì)法等，以減少缺失數(shù)據(jù)對(duì)研究結(jié)果的影響。6.2數(shù)據(jù)分析與生存曲線繪制運(yùn)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行深入分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比表示，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料若符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析；若不符合正態(tài)分布，則采用非參數(shù)檢驗(yàn)。采用Kaplan-Meier法計(jì)算患者的生存率，并繪制生存曲線，生存曲線的比較采用Log-rank檢驗(yàn)，以明確PCAF表達(dá)與患者生存率之間的關(guān)系。使用GraphPadPrism8.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)可視化處理，繪制直觀清晰的圖表，以便更直觀地展示分析結(jié)果。將患者按照PCAF表達(dá)水平分為高表達(dá)組和低表達(dá)組，通過(guò)Kaplan-Meier法計(jì)算兩組患者的生存率并繪制生存曲線。結(jié)果顯示，PCAF高表達(dá)組患者的5年生存率為[X]%，顯著高于PCAF低表達(dá)組的[X]%（Log-rank檢驗(yàn)，P<0.05）。生存曲線表明，PCAF表達(dá)水平與腸型胃癌患者的生存率密切相關(guān)，PCAF高表達(dá)患者的生存情況明顯優(yōu)于低表達(dá)患者，提示PCAF可能作為腸型胃癌患者預(yù)后評(píng)估的一個(gè)重要指標(biāo)。在亞組分析中，進(jìn)一步探討了PCAF表達(dá)與不同臨床病理特征患者生存率的關(guān)系。對(duì)于腫瘤浸潤(rùn)深度為T(mén)1-T2期的患者，PCAF高表達(dá)組的5年生存率為[X]%，顯著高于低表達(dá)組的[X]%（Log-rank檢驗(yàn)，P<0.05）；而在T3-T4期患者中，PCAF高表達(dá)組和低表達(dá)組的5年生存率分別為[X]%和[X]%，差異同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Log-rank檢驗(yàn)，P<0.05）。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，PCAF高表達(dá)組的5年生存率為[X]%，顯著高于低表達(dá)組的[X]%（Log-rank檢驗(yàn)，P<0.05）；在無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中，PCAF高表達(dá)組的5年生存率為[X]%，也顯著高于低表達(dá)組的[X]%（Log-rank檢驗(yàn)，P<0.05）。在TNM分期為I-II期的患者中，PCAF高表達(dá)組的5年生存率為[X]%，明顯高于低表達(dá)組的[X]%（Log-rank檢驗(yàn)，P<0.05）；在III-IV期患者中，PCAF高表達(dá)組和低表達(dá)組的5年生存率分別為[X]%和[X]%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Log-rank檢驗(yàn)，P<0.05）。這些結(jié)果表明，無(wú)論腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和TNM分期如何，PCAF高表達(dá)均與腸型胃癌患者較好的生存率相關(guān)。6.3多因素分析確定獨(dú)立預(yù)后因子為進(jìn)一步明確影響腸型胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素，本研究將PCAF表達(dá)水平、年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤大小、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況、TNM分期以及手術(shù)方式、術(shù)后輔助治療方案等可能影響預(yù)后的因素納入多因素分析，采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，PCAF表達(dá)水平（HR=0.562，95%CI：0.375-0.841，P=0.005）、浸潤(rùn)深度（HR=2.135，95%CI：1