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文檔簡介

一般說來，離子強度越大，蛋白質的溶解度越低。在進行分離的時候，一般從低離子強度到高離子強度順次進行。每一組分被鹽析出來后，經過過濾或冷凍離心收集，再在溶液中逐漸提高中性鹽的飽和度，使另一種蛋白質組分鹽析出來。組成相近的蛋白質，分子量越大，沉淀所需鹽的量越少；蛋白質分子不對稱性越大，也越易沉淀。2）鹽濃度對鹽析效果的影響㏒S=β-ＫsＩS—蛋白質的溶解度，g/L;I－離子強度，

I=1/2∑mizi2

mi—離子i的摩爾濃度；Zi—所帶電荷β—常數，圖中截距Ks—鹽析常數，圖中直線斜率Cohn經驗式

蛋白質溶解度與鹽濃度的關系β和Ks的物理意義β—β代表截距，即當離子強度為零，也就是純水中的假想溶解度的對數。與蛋白質種類、溫度、pH值有關，與鹽無關；Ks—鹽析常數，代表圖中直線的斜率；從一些實驗結果表明，Ks與溫度和pH無關，但和蛋白質與鹽的種類有關。但這種變化不是很大，例如以硫酸銨作為沉淀劑時，Ks值對不同的蛋白質來說，其變化不會超過1倍。用鹽析法分離蛋白質的二種方法鹽析法分為兩類，第一類叫Ks分段鹽析法，在一定pH和溫度下通過改變離子強度實現，（固定pH,溫度，改變鹽濃度），由于蛋白質對離子強度的變化非常敏感，易產生共沉淀現象，用于早期的粗提液；第二種叫β分段鹽析法，在一定離子強度下通過改變PH和溫度來實現，（固定離子強度，改變pH及溫度），由于溶質溶解度變化緩慢，且變化幅度小，因此分辨率更高，用于后期進一步分離純化和結晶。鹽析用鹽量的確定-飽和度：飽和度（Saturation）的概念：以硫酸銨為例：250C時，硫酸銨的飽和溶解度是767g/L定義為100%飽和度目標蛋白質的鹽析沉淀操作之前，所需的硫酸銨濃度或飽和濃度可通過實驗確定。對多數蛋白質，當達到85%飽和度時，溶解度都小于

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