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文檔簡介

4.6.3凱氏定氮法凱氏定氮法是由丹麥化學(xué)家凱道爾于1833年建立的，現(xiàn)已發(fā)展為常量、微量、平微量凱氏定氮法以及自動(dòng)定氮儀法等，是分析有機(jī)化合物含氮量的常用方法。實(shí)驗(yàn)原理1.消化：2NH3+H2SO4+2H+

(NH4)2SO42.蒸餾：(NH4)2SO4+2NaOH2NH3+2H2O+Na2SO4

2NH3+4H3BO3(NH4)2B4O7+5H2O3.滴定：(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3

實(shí)驗(yàn)試劑濃硫酸混合催化劑CuSO4/K2SO4=0.4/6混合指示劑0.1%甲基紅乙醇溶液200ml與0.1%甲烯藍(lán)乙醇溶液50ml混合NaOH40%硼酸溶液2%鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.01

N實(shí)驗(yàn)步驟——消化稱取樣品,移入消化管,加入混合催化劑,硫酸和兩顆玻璃珠消化初期，電壓150V，消化管內(nèi)泡沫消失后，增加電壓至220

V繼續(xù)消化，至液體呈藍(lán)綠色澄清透明后，再繼續(xù)加熱0.5h。取下消化管放冷，小心加蒸餾水至50ml，混勻備用。參照蒸餾裝置圖，裝好蒸餾裝置向接收瓶內(nèi)加入20ml2%硼酸溶液及混合指示液2滴，并使冷凝管的下端插入液面下吸取l樣品消化稀釋液由小漏斗流入反應(yīng)室，并以5ml水洗滌小燒杯使流入反應(yīng)室內(nèi)。將10ml40%氫氧化鈉溶液經(jīng)小漏斗緩緩流入反應(yīng)室，立即加半漏斗水水封以防漏氣，開始蒸餾。蒸氣通入反應(yīng)室使氨通過冷凝管而進(jìn)入接收瓶內(nèi)，從指示劑開始變色時(shí)計(jì)時(shí)，蒸餾5min。移動(dòng)接受瓶，使冷凝管下端離開液面，再蒸餾1min。實(shí)驗(yàn)步驟——蒸餾蛋白質(zhì)測定蒸餾過程裝置實(shí)驗(yàn)步驟——滴定用少量水沖洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.01N鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡紫紅色為滴定終點(diǎn)。

式中：ω——蛋白質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)；

c——HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度；

V1——滴定樣品吸收液時(shí)消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積；V2——滴定空白吸收液時(shí)消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積；

m——樣品質(zhì)量，g；

M——

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