小麥麩皮中α-淀粉酶抑制劑的分離與純化分離純化第13組

α-淀粉酶抑制劑的簡介α-淀粉酶抑制劑屬于糖水解酶抑制劑的一種，是一類能抑制消化道中糖類吸收的物質(zhì)的統(tǒng)稱，它是通過抑制和降低腸道內(nèi)唾液淀粉酶及胰淀粉酶的活性，阻礙食物中碳水化合物的水解和消化，從而達到減少人體對糖分的攝取，降低人體血液中糖、脂含量的目的。同時它可作為抗蟲的基因，在醫(yī)學和農(nóng)業(yè)上的應用前景廣闊。具有α-淀粉酶抑制活性的蛋白質(zhì)可以從小麥、大麥、小米、高粱、谷物、花生、大豆、芋頭根和一些其它植物中分離。淀粉含量越高的植物果實中，其所含有的α-淀粉酶抑制劑也越高。梯度洗脫α-淀粉酶抑制劑分離純化工藝流程小麥麩皮浸泡提取2h清夜30min濾液沉淀蛋白過濾70℃水浴離心冷凍干燥4℃靜置CM纖維素層析收集蛋白峰、活性峰凝膠層析透析溶解沉淀2h離心洗脫α-AI濃縮冷凍干燥得蛋白主峰收集活性峰透析實驗原理小麥麩皮中α-淀粉酶抑制劑的分離、純化工藝以及性質(zhì)的研究結(jié)果表明，小麥麩皮粗提取物經(jīng)纖維素離子交換柱和凝膠層析分離純化得到精制α-淀粉酶抑制劑，經(jīng)SDS凝膠電泳得到3條蛋白質(zhì)帶，分子質(zhì)量分別為33ku、30ku和26ku。該提取物在80℃以下，pH3～10的條件下，抑制活力相對穩(wěn)定。實驗器材原料：小麥麩皮儀器：水浴鍋、玻璃棒、紗布、離心管、離心機、冰箱試劑：0.25mol/LNaCl溶液70%硫酸銨溶液0.025mol/L(pH4.5)HAC-NaCl緩沖液CM纖維素柱層析(2.6cm×40cm)SephedexG-75凝膠柱層析(1.0cm×80cm)實驗步驟1.麩皮α-AI粗品的制作：稱取100g麩皮按照1:8(g:ml)比例加入0.025mol/LNaCl溶液，室溫攪拌提取2h，紗布過濾，收集濾液。2.70℃水浴加熱30min，4000r/min離心15min，收集上清液。用70%硫酸銨沉淀，4℃放置2h，4500r/min離心10min，收集沉淀，即為麩皮α-AI粗品。2.麩皮α-AI粗品的精制：粗品溶于一定量的0.25mol/LHAC-NaAC緩沖溶液中經(jīng)CM纖維素層析(2.6cm×40cm)以0.025mol/L(pH4.5)HAC-NaAC緩沖溶液(含NaCl0～1mol/L)洗脫液梯度洗脫，收集蛋白峰并逐管檢測淀粉酶抑制活性，收集活性峰，透析，冷凍干燥后經(jīng)SephedexG-75凝膠層析柱(1.0cm×80cm)，以0.025

mol/L(pH4.5)HAC-NaAC緩沖溶液洗脫，得1個尖銳的蛋白主峰，逐管檢測淀粉酶抑制活性，收集活性峰，經(jīng)透析、濃縮后冷凍干燥，即為精制的α-AI。結(jié)論α-淀粉酶抑制劑在80℃以下，pH4～11的條件下抑制活力相對穩(wěn)定。經(jīng)SDS凝膠電泳得到3條蛋白質(zhì)帶，分子質(zhì)量分別為33ku，30ku，26ku。α-淀粉酶抑制劑的功能與應用減肥

α-淀粉酶抑制劑可經(jīng)胃腸道排出體外，不進入血液循環(huán)系統(tǒng)，不作用于大腦中樞，減肥的同時不抑制食欲，使用劑量很高時也無副作用，符合世界衛(wèi)生組織的減肥原則。作為抗蟲的