Th17細胞：慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷的關鍵參與者與作用機制探究一、引言1.1研究背景與意義慢性乙型肝炎（ChronicHepatitisB，CHB）是由乙型肝炎病毒（HepatitisBVirus，HBV）持續(xù)感染引起的肝臟慢性炎癥性疾病，在全球范圍內(nèi)廣泛流行，嚴重威脅人類健康。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）報告，全球約有2.57億慢性HBV感染者，每年約有88.7萬人死于HBV感染相關的肝硬化、肝衰竭和肝細胞癌等并發(fā)癥。在我國，HBV感染也較為普遍，雖然近年來隨著乙肝疫苗的廣泛接種，HBV感染率有所下降，但仍有大量的慢性乙型肝炎患者。CHB的發(fā)病機制較為復雜，涉及病毒因素、宿主免疫因素以及二者之間的相互作用。其中，宿主的免疫應答在HBV感染的轉歸和病情發(fā)展中起著關鍵作用。當HBV侵入人體后，機體的免疫系統(tǒng)會被激活，試圖清除病毒。然而，在慢性感染過程中，免疫系統(tǒng)往往難以徹底清除病毒，反而引發(fā)持續(xù)的免疫炎癥反應，導致肝臟組織損傷和纖維化，最終進展為肝硬化、肝癌等嚴重疾病。T輔助細胞17（Thelper17，Th17）細胞作為一種新型的CD4+輔助性T細胞亞群，近年來在免疫炎癥領域受到廣泛關注。Th17細胞主要分泌白細胞介素17（Interleukin-17，IL-17）、IL-21、IL-22等細胞因子，在介導炎癥反應、自身免疫性疾病以及抗感染免疫等方面發(fā)揮重要作用。越來越多的研究表明，Th17細胞及其相關細胞因子參與了多種肝臟疾病的發(fā)病過程，在CHB中，Th17細胞可能通過多種途徑參與免疫炎癥損傷，其細胞數(shù)量及相關細胞因子水平的變化與CHB的病情嚴重程度、疾病進展密切相關。深入研究Th17細胞在CHB免疫炎癥損傷中的作用和機制，不僅有助于進一步闡明CHB的發(fā)病機制，還可能為CHB的診斷、治療和預后評估提供新的靶點和思路，具有重要的理論意義和潛在的臨床應用價值。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在國外，對Th17細胞與慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷關系的研究開展較早。有研究通過對慢性乙型肝炎患者外周血及肝臟組織中Th17細胞數(shù)量和功能的檢測分析，發(fā)現(xiàn)患者外周血中Th17細胞比例相較于健康人群顯著升高，且其升高程度與肝臟炎癥活動度密切相關，炎癥越嚴重，Th17細胞比例越高。進一步研究還表明，Th17細胞分泌的IL-17等細胞因子可激活肝臟內(nèi)的星狀細胞，使其轉化為肌成纖維細胞，促進細胞外基質的合成和沉積，進而導致肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。同時，IL-17還能增強肝臟內(nèi)炎癥細胞的浸潤，如中性粒細胞、巨噬細胞等，加劇肝臟組織的炎癥損傷。國內(nèi)學者也在該領域進行了大量研究。有團隊對不同病情嚴重程度的慢性乙型肝炎患者進行分組研究，利用流式細胞術檢測外周血Th17細胞水平，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血清中IL-17等細胞因子濃度。結果顯示，隨著病情加重，從輕度慢性乙型肝炎患者到重度患者，Th17細胞水平及IL-17濃度逐漸升高，且Th17細胞水平與血清谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶等反映肝臟損傷的指標呈正相關。這表明Th17細胞及其相關細胞因子在慢性乙型肝炎患者肝臟損傷過程中發(fā)揮著重要作用。此外，還有研究探討了Th17細胞相關信號通路在慢性乙型肝炎中的變化，發(fā)現(xiàn)一些信號通路分子如RORγt、STAT3等的表達異常，可能參與調控Th17細胞的分化和功能，進而影響慢性乙型肝炎的免疫炎癥反應。然而，當前研究仍存在一些不足與空白。一方面，雖然已知Th17細胞參與慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷，但Th17細胞在肝臟局部微環(huán)境中的具體活化、分化機制尚未完全明確，肝臟內(nèi)的病毒感染狀態(tài)、細胞因子網(wǎng)絡以及免疫細胞之間的相互作用如何精準調控Th17細胞的功能，仍有待深入研究。另一方面，目前針對Th17細胞的干預措施多處于基礎研究階段，如何將這些研究成果轉化為有效的臨床治療方法，如開發(fā)特異性靶向Th17細胞或其相關細胞因子的藥物，以及評估這些干預措施在慢性乙型肝炎患者中的安全性和有效性，還需要開展更多的臨床試驗來探索。1.3研究目標與內(nèi)容本研究旨在深入探究Th17細胞在慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷中的作用及其內(nèi)在分子機制，具體研究目標如下：一是明確慢性乙型肝炎患者體內(nèi)Th17細胞的數(shù)量變化、功能狀態(tài)以及在肝臟組織和外周血中的分布特征，分析其與疾病嚴重程度、病程進展等臨床指標的相關性；二是揭示HBV感染如何影響Th17細胞的分化、活化和功能發(fā)揮，以及Th17細胞分泌的細胞因子在肝臟免疫炎癥微環(huán)境中的作用機制；三是探索以Th17細胞及其相關信號通路為靶點的潛在治療策略，為慢性乙型肝炎的臨床治療提供新的理論依據(jù)和實驗基礎。基于上述研究目標，本研究將開展以下內(nèi)容的研究：慢性乙型肝炎患者Th17細胞的特征分析：收集不同病情階段慢性乙型肝炎患者及健康對照者的外周血和肝臟組織樣本。運用流式細胞術精確檢測外周血中Th17細胞的比例、絕對數(shù)量，以及細胞表面相關標志物的表達情況；采用免疫組化、免疫熒光等技術對肝臟組織中的Th17細胞進行定位和定量分析，明確其在肝臟局部的浸潤程度和分布特點。同時，結合患者的肝功能指標（如谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、膽紅素等）、病毒學指標（HBVDNA載量、乙肝五項等）、肝纖維化指標（如透明質酸、層粘連蛋白等）以及臨床癥狀和體征，全面分析Th17細胞特征與疾病狀態(tài)的相關性。HBV感染對Th17細胞分化與功能的影響機制：利用體外細胞培養(yǎng)模型，將人外周血單個核細胞（PBMCs）與HBV或其相關蛋白（如HBsAg、HBeAg等）共培養(yǎng)，模擬HBV感染環(huán)境。通過實時定量PCR、Westernblot等技術檢測Th17細胞分化相關轉錄因子（如RORγt、STAT3等）的表達變化，研究HBV感染對Th17細胞分化的調控作用；采用細胞因子芯片、ELISA等方法檢測培養(yǎng)上清中Th17細胞相關細胞因子（IL-17、IL-21、IL-22等）的分泌水平，分析HBV感染對Th17細胞功能的影響。此外，構建HBV轉基因小鼠模型，在體內(nèi)研究HBV感染狀態(tài)下Th17細胞的分化和功能變化，進一步驗證體外實驗結果，并深入探討其在慢性乙型肝炎發(fā)病過程中的作用機制。Th17細胞相關信號通路在慢性乙型肝炎中的作用：基于前期研究結果，篩選出在慢性乙型肝炎中可能參與調控Th17細胞功能的關鍵信號通路（如NF-κB、MAPK等）。利用特異性抑制劑阻斷相關信號通路，觀察Th17細胞的分化、活化以及細胞因子分泌的變化情況；通過基因沉默、過表達等技術手段，改變信號通路中關鍵分子的表達水平，進一步明確該信號通路在Th17細胞介導的慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷中的作用機制。同時，在慢性乙型肝炎患者的肝臟組織和外周血中檢測相關信號通路分子的表達和活化狀態(tài)，分析其與Th17細胞功能及疾病進展的相關性。靶向Th17細胞的治療策略探索：根據(jù)對Th17細胞在慢性乙型肝炎中作用機制的研究成果，探索針對Th17細胞及其相關細胞因子或信號通路的靶向治療策略。例如，設計合成針對IL-17的中和抗體，在體外細胞實驗和動物模型中驗證其對Th17細胞介導的免疫炎癥反應的抑制作用，以及對肝臟損傷的保護效果；篩選能夠調節(jié)Th17細胞分化和功能的小分子化合物或天然藥物，評估其在改善慢性乙型肝炎病情方面的潛力。此外，探討聯(lián)合應用現(xiàn)有抗病毒藥物與靶向Th17細胞的治療方法，觀察其協(xié)同治療效果，為慢性乙型肝炎的臨床治療提供新的思路和方案。本研究擬解決的關鍵問題主要包括：一是準確闡明HBV感染如何在體內(nèi)外環(huán)境中精準調控Th17細胞的分化、活化和功能，以及Th17細胞在肝臟免疫炎癥微環(huán)境中與其他免疫細胞和肝細胞之間的相互作用機制；二是明確Th17細胞相關信號通路在慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷過程中的關鍵節(jié)點和調控網(wǎng)絡，為開發(fā)有效的靶向治療藥物提供理論依據(jù)；三是評估靶向Th17細胞的治療策略在慢性乙型肝炎治療中的有效性和安全性，解決從基礎研究到臨床應用轉化過程中可能面臨的問題，如藥物的遞送方式、副作用等。通過解決這些關鍵問題，有望為慢性乙型肝炎的防治提供新的靶點和策略，改善患者的預后。1.4研究方法與技術路線1.4.1研究方法研究對象選?。哼x取[具體醫(yī)院名稱]感染科就診的慢性乙型肝炎患者作為病例組，納入標準嚴格按照《慢性乙型肝炎防治指南》相關標準執(zhí)行，確?；颊邽镠BV感染且病程超過6個月。排除標準包括合并其他肝炎病毒（如HCV、HDV、HEV等）感染、自身免疫性疾病、惡性腫瘤、近期使用免疫抑制劑或糖皮質激素等情況。同時，選取同期在該醫(yī)院體檢的健康人群作為對照組，要求對照組無肝炎病史，HBV標志物檢測均為陰性，且肝腎功能、血常規(guī)等指標正常。根據(jù)患者的病情嚴重程度，依據(jù)肝功能指標（如谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、膽紅素水平等）、肝纖維化指標（如透明質酸、層粘連蛋白等）以及肝臟組織學檢查結果，將慢性乙型肝炎患者進一步分為輕度、中度和重度三組。標本采集與檢測：采集所有研究對象清晨空腹靜脈血5-10ml，其中一部分置于含有乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝劑的采血管中，用于分離外周血單個核細胞（PBMCs）；另一部分不抗凝，待血液自然凝固后，3000rpm離心15min分離血清，保存于-80℃冰箱中待測。運用流式細胞術檢測PBMCs中Th17細胞的比例，使用的抗體包括FITC-CD4、PE-IL-17等，嚴格按照試劑盒說明書操作，上機檢測后通過FlowJo軟件進行數(shù)據(jù)分析。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清中IL-17、IL-21、IL-22等Th17細胞相關細胞因子的濃度，同樣按照試劑盒步驟進行操作，在酶標儀上讀取吸光度值，根據(jù)標準曲線計算細胞因子含量。對于肝臟組織標本，一部分患者在進行肝穿刺活檢或手術切除肝臟組織時獲取，立即放入液氮中速凍，然后轉移至-80℃冰箱保存，用于后續(xù)的蛋白和基因檢測；另一部分肝臟組織用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋，制成切片，用于免疫組化和免疫熒光檢測Th17細胞在肝臟組織中的定位和分布。免疫組化染色采用鼠抗人IL-17單克隆抗體作為一抗，二抗為相應的生物素標記抗體，通過DAB顯色，在顯微鏡下觀察并拍照記錄。免疫熒光染色則使用FITC或TRITC標記的抗體，在熒光顯微鏡下觀察Th17細胞在肝臟組織中的熒光信號。此外，采用實時熒光定量PCR技術檢測肝臟組織和PBMCs中Th17細胞分化相關轉錄因子（如RORγt、STAT3等）的mRNA表達水平，提取總RNA后逆轉錄為cDNA，以GAPDH作為內(nèi)參基因，通過設計特異性引物進行PCR擴增，分析目的基因的相對表達量。采用Westernblot技術檢測Th17細胞相關信號通路分子（如NF-κB、MAPK等）的蛋白表達水平和磷酸化水平，提取組織或細胞總蛋白，進行SDS-PAGE電泳、轉膜、封閉后，依次加入一抗、二抗，通過化學發(fā)光法顯影，用ImageJ軟件分析條帶灰度值。體外細胞實驗：從健康志愿者外周血中分離PBMCs，用含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液調整細胞濃度至1×10^6/ml，接種于24孔培養(yǎng)板中。分別設置空白對照組、HBV感染組（加入HBV病毒顆?；虮磉_HBV相關蛋白的重組質粒）、細胞因子刺激組（加入IL-6、TGF-β等Th17細胞分化相關細胞因子）以及抑制劑組（加入針對Th17細胞分化或相關信號通路的特異性抑制劑）。培養(yǎng)48-72h后，收集細胞和培養(yǎng)上清，采用上述流式細胞術、ELISA、實時熒光定量PCR和Westernblot等方法檢測Th17細胞的分化、活化情況以及相關細胞因子和信號通路分子的表達變化。同時，利用Transwell小室共培養(yǎng)體系，將PBMCs與肝細胞系（如HepG2.2.15細胞）共培養(yǎng)，模擬肝臟內(nèi)的細胞微環(huán)境，研究Th17細胞與肝細胞之間的相互作用對細胞功能和炎癥反應的影響。通過檢測共培養(yǎng)上清中細胞因子的分泌水平、肝細胞凋亡和增殖情況等指標，分析Th17細胞在肝臟免疫炎癥微環(huán)境中的作用機制。動物實驗：構建HBV轉基因小鼠模型，將含有HBV全基因組的轉基因載體通過顯微注射技術導入小鼠受精卵中，然后將受精卵移植到假孕母鼠體內(nèi)，待小鼠出生后，通過PCR和Southernblot等方法鑒定轉基因小鼠。將HBV轉基因小鼠隨機分為實驗組和對照組，實驗組給予特定的干預措施（如注射針對Th17細胞或其相關細胞因子的抗體、給予調節(jié)Th17細胞功能的藥物等），對照組給予等量的生理鹽水或相應的對照試劑。在實驗過程中，定期采集小鼠外周血和肝臟組織標本，檢測Th17細胞的數(shù)量、功能以及相關細胞因子和信號通路分子的表達變化。同時，通過檢測小鼠肝功能指標（如谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、膽紅素等）、肝臟組織病理學變化（如炎癥細胞浸潤、肝細胞壞死、肝纖維化程度等），評估Th17細胞在慢性乙型肝炎發(fā)病過程中的作用以及干預措施的治療效果。此外，還可以利用免疫缺陷小鼠（如SCID小鼠）進行人源化肝臟移植模型的構建，將人肝臟組織移植到免疫缺陷小鼠體內(nèi)，然后感染HBV，再對Th17細胞進行相關研究，進一步探討Th17細胞在人類慢性乙型肝炎中的作用機制。1.4.2技術路線本研究的技術路線如圖1-1所示：第一階段：樣本采集與分析：首先，按照上述研究對象選取標準，收集慢性乙型肝炎患者和健康對照者的外周血和肝臟組織樣本。對外周血樣本，運用流式細胞術檢測Th17細胞比例，ELISA檢測血清中Th17細胞相關細胞因子濃度；對肝臟組織樣本，進行免疫組化和免疫熒光檢測Th17細胞的定位和分布，實時熒光定量PCR檢測Th17細胞分化相關轉錄因子mRNA表達水平，Westernblot檢測Th17細胞相關信號通路分子的蛋白表達和磷酸化水平。通過這些檢測，分析慢性乙型肝炎患者Th17細胞的特征及其與疾病嚴重程度、病程進展等臨床指標的相關性。第二階段：機制探討：利用體外細胞培養(yǎng)模型和HBV轉基因小鼠模型，深入研究HBV感染對Th17細胞分化與功能的影響機制。在體外細胞實驗中，將PBMCs與HBV或其相關蛋白共培養(yǎng)，以及給予細胞因子刺激或抑制劑處理，檢測Th17細胞分化相關轉錄因子的表達變化和細胞因子的分泌水平。在動物實驗中，觀察HBV轉基因小鼠體內(nèi)Th17細胞的分化和功能變化，以及肝臟組織的病理改變。同時，通過基因沉默、過表達等技術手段，研究Th17細胞相關信號通路在慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷中的作用機制。第三階段：治療策略研究：根據(jù)前期對Th17細胞在慢性乙型肝炎中作用機制的研究成果，探索靶向Th17細胞的治療策略。設計合成針對IL-17的中和抗體或篩選能夠調節(jié)Th17細胞分化和功能的小分子化合物、天然藥物，在體外細胞實驗和動物模型中驗證其對Th17細胞介導的免疫炎癥反應的抑制作用以及對肝臟損傷的保護效果。此外，探討聯(lián)合應用現(xiàn)有抗病毒藥物與靶向Th17細胞的治療方法，評估其協(xié)同治療效果，為慢性乙型肝炎的臨床治療提供新的思路和方案。綜合分析與總結：對各個階段的實驗數(shù)據(jù)進行綜合分析，總結Th17細胞在慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷中的作用和機制，以及靶向Th17細胞治療策略的有效性和安全性。最終，為慢性乙型肝炎的防治提供新的靶點和策略，撰寫研究報告和學術論文，為該領域的研究提供理論支持和實驗依據(jù)。[此處插入技術路線圖，圖中應清晰展示從樣本采集到各個實驗階段以及最終結果分析和應用的流程，包括各個階段所采用的主要技術和檢測指標等內(nèi)容]通過以上研究方法和技術路線，本研究將系統(tǒng)地探究Th17細胞在慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷中的作用和機制，為慢性乙型肝炎的臨床治療提供新的理論依據(jù)和潛在的治療靶點。二、Th17細胞與慢性乙型肝炎概述2.1Th17細胞的生物學特性Th17細胞的發(fā)現(xiàn)打破了傳統(tǒng)上對CD4+輔助性T細胞亞群的認知。在2005年之前，免疫學家普遍認為CD4+輔助性T細胞主要分為Th1和Th2細胞亞群，分別介導細胞免疫和體液免疫，參與對細胞內(nèi)病原體和細胞外病原體的免疫應答。2005年，清華大學免疫學研究所董晨教授與CaseyTWeaver教授背靠背發(fā)文，首次報道了Th17細胞的存在，這一發(fā)現(xiàn)打破了二十多年來對輔助性T細胞只有Th1和Th2兩類的傳統(tǒng)觀念。其發(fā)現(xiàn)源于對一些自身免疫性疾病和炎癥模型的研究，在實驗性自身免疫性腦脊髓炎及膠原誘導性關節(jié)炎的研究中，研究人員發(fā)現(xiàn)存在一類能特異性分泌高水平白細胞介素17（IL-17）的CD4+T細胞亞群，其功能和分化途徑與Th1和Th2細胞不同，遂將其命名為Th17細胞。此后，Th17細胞在免疫領域的研究逐漸成為熱點。Th17細胞由初始CD4+T細胞分化發(fā)育而來，其分化過程受到多種細胞因子和轉錄因子的嚴格調控。在小鼠體內(nèi)，Th17細胞分化分為3個階段。誘導階段，在轉化生長因子β（TGF-β）和IL-6存在的情況下，初始CD4+T細胞開始向Th17細胞分化。TGF-β和IL-6通過激活信號轉導及轉錄激活因子3（STAT3），誘導IL-21的表達。擴增階段，IL-21的自分泌信號進一步促進IL-23R、IL-17A及轉錄因子維甲酸相關孤兒受體γt（RORγt）的STAT3依賴性表達。穩(wěn)定階段，IL-23R與IL-12Rβ1的聚合物形成功能性IL-23受體，在IL-23存在時，能穩(wěn)定Th17表型。而人Th17細胞的分化與小鼠存在一定差異，人Th17細胞的分化需要IL-6、IL-21、IL-23和IL-1β，但對TGF-β的依賴性相對較小。此外，除了分泌與小鼠Th17細胞相同的IL-17A、IL-17F和IL-22之外，人類Th17細胞還分泌IL-26，IL-26屬于IL-10家族細胞因子，且沒有小鼠同源物。RORγt被認為是Th17細胞的主要轉錄調節(jié)因子，它能夠驅使IL-17A、IL-17F和IL-22的表達，這三個細胞因子是Th17細胞分泌的標志性細胞因子。RORγt通過與特定的DNA序列結合，調控Th17細胞相關基因的轉錄，從而決定Th17細胞的分化和功能。其他參與Th17分化的轉錄因子，如RORα、Batf和IRF4等，也可能參與調控IL-17基因的表達，它們與RORγt相互協(xié)作或相互調節(jié)，共同維持Th17細胞的特性。例如，RORα可以與RORγt協(xié)同作用，增強Th17細胞相關基因的轉錄；Batf和IRF4則可以通過與其他轉錄因子形成復合物，影響Th17細胞的分化和功能。Th17細胞分泌的細胞因子在免疫反應中發(fā)揮著重要作用。IL-17是Th17細胞分泌的關鍵細胞因子，具有強大的促炎活性。IL-17可以作用于多種細胞類型，如上皮細胞、內(nèi)皮細胞、成纖維細胞和免疫細胞等。在感染部位，IL-17能夠誘導上皮細胞和內(nèi)皮細胞產(chǎn)生趨化因子，如CXCL1、CXCL2等，招募中性粒細胞到炎癥部位，增強炎癥反應。同時，IL-17還可以刺激成纖維細胞產(chǎn)生基質金屬蛋白酶，促進細胞外基質的降解，導致組織損傷和炎癥的擴散。IL-21在Th17細胞分化過程中發(fā)揮重要的自分泌調節(jié)作用，它可以促進Th17細胞的增殖和分化，增強Th17細胞的功能。IL-21還可以調節(jié)其他免疫細胞的功能，如促進B細胞的增殖和分化，增強NK細胞的細胞毒性等。IL-22主要作用于上皮細胞，它可以促進上皮細胞的增殖、修復和抗菌肽的產(chǎn)生，在黏膜免疫中發(fā)揮重要作用。例如，在腸道黏膜，IL-22可以保護上皮細胞免受病原體的侵襲，維持腸道黏膜的完整性。然而，在某些情況下，IL-22的過度表達也可能導致組織損傷和炎癥的加劇。在免疫反應中，Th17細胞主要參與對特定細胞外細菌和真菌的免疫防御。當機體受到這些病原體感染時，Th17細胞被激活，分泌細胞因子，招募和激活中性粒細胞等免疫細胞，共同清除病原體。例如，在白色念珠菌感染時，Th17細胞及其分泌的IL-17能夠有效地激活中性粒細胞，增強機體對白色念珠菌的抵抗力。然而，Th17細胞及其分泌的細胞因子如果異?；罨虮磉_，也會導致免疫病理損傷，參與多種自身免疫性疾病和炎癥性疾病的發(fā)生發(fā)展。在類風濕關節(jié)炎患者中，Th17細胞數(shù)量增加，分泌大量IL-17，導致關節(jié)滑膜炎癥、軟骨和骨組織的破壞；在多發(fā)性硬化癥中，Th17細胞介導的免疫反應攻擊中樞神經(jīng)系統(tǒng)的髓鞘，導致神經(jīng)功能障礙。在慢性乙型肝炎中，Th17細胞也可能通過介導免疫炎癥反應，參與肝臟組織的損傷和疾病的進展，其具體作用機制將在后續(xù)章節(jié)詳細闡述。2.2慢性乙型肝炎的發(fā)病機制慢性乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）持續(xù)感染引發(fā)的肝臟慢性炎癥性疾病，其發(fā)病機制極為復雜，是病毒因素、宿主免疫因素以及二者相互作用的結果。HBV是一種嗜肝DNA病毒，屬于嗜肝DNA病毒科正嗜肝DNA病毒屬。其病毒顆粒呈球形，直徑約42nm，由包膜和核心兩部分組成。包膜含有乙肝表面抗原（HBsAg）、糖蛋白和脂質，核心則包含乙肝核心抗原（HBcAg）、乙肝e抗原（HBeAg）、病毒DNA以及DNA聚合酶。HBV具有較強的嗜肝性，這主要源于其表面的蛋白能夠與肝細胞表面的特異性受體結合，從而使得病毒能夠精準地侵入肝細胞。研究表明，鈉離子-?；悄懰峁厕D運多肽（NTCP）是HBV和丁型肝炎病毒（HDV）感染肝細胞的功能性受體，HBV表面抗原的preS1結構域與NTCP的特異性結合是病毒感染肝細胞的關鍵步驟。HBV的傳播途徑主要包括血液傳播、母嬰傳播和性傳播。在血液傳播方面，輸入被HBV污染的血液或血制品、使用未經(jīng)嚴格消毒的醫(yī)療器械（如注射器、針灸針、牙科器械等），均有可能導致HBV的感染；母嬰傳播則多發(fā)生在分娩過程中，母親體內(nèi)的HBV可通過胎盤、產(chǎn)道或哺乳等途徑傳播給新生兒；性傳播是指與HBV感染者發(fā)生無防護的性行為時，病毒可通過破損的黏膜或皮膚進入體內(nèi)。當HBV侵入人體后，機體的免疫系統(tǒng)會被激活，試圖清除病毒，而這一免疫應答過程在慢性乙型肝炎的發(fā)病中起著關鍵作用。機體對HBV的免疫應答可分為固有免疫應答和適應性免疫應答兩個階段。固有免疫應答是機體抵御HBV感染的第一道防線，在感染早期發(fā)揮重要作用。肝臟中的固有免疫細胞，如自然殺傷細胞（NK細胞）、自然殺傷T細胞（NKT細胞）、巨噬細胞和樹突狀細胞（DC）等，能夠識別HBV感染相關的病原體相關分子模式（PAMPs），通過模式識別受體（PRRs）激活下游信號通路，產(chǎn)生一系列細胞因子和趨化因子，啟動固有免疫應答。NK細胞可以直接殺傷被HBV感染的肝細胞，同時分泌干擾素γ（IFN-γ）等細胞因子，抑制HBV的復制。在HBV感染初期，NK細胞的活化和功能發(fā)揮有助于控制病毒的早期復制，減輕肝臟的炎癥損傷。然而，在慢性HBV感染過程中，HBV可能會通過多種機制逃避固有免疫細胞的識別和殺傷，導致固有免疫應答不能有效清除病毒。HBV可以抑制肝細胞表面MHC-I類分子的表達，使感染細胞難以被NK細胞識別；HBV還可以干擾NK細胞的活化信號通路，降低NK細胞的殺傷活性。適應性免疫應答在HBV感染的轉歸和慢性乙型肝炎的發(fā)病機制中起關鍵作用，主要包括細胞免疫和體液免疫。細胞免疫中，CD4+輔助性T細胞（Th細胞）和CD8+細胞毒性T細胞（CTL）發(fā)揮著重要作用。Th細胞通過分泌細胞因子，調節(jié)其他免疫細胞的功能，在HBV感染的免疫應答中起到輔助和調節(jié)作用。Th1細胞主要分泌IFN-γ、腫瘤壞死因子β（TNF-β）等細胞因子，促進細胞免疫應答，增強巨噬細胞的吞噬和殺傷功能，抑制HBV的復制；Th2細胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-10等細胞因子，輔助B細胞產(chǎn)生抗體，介導體液免疫應答。在急性HBV感染時，機體能夠產(chǎn)生有效的Th1型免疫應答，有助于清除病毒，使病情恢復。然而，在慢性HBV感染過程中，Th1/Th2細胞平衡失調，Th1細胞功能相對低下，Th2細胞功能相對增強，導致機體對HBV的免疫清除能力下降，病毒持續(xù)存在并引發(fā)肝臟的慢性炎癥。CTL是清除HBV感染細胞的主要效應細胞，能夠特異性識別并殺傷被HBV感染的肝細胞。CTL通過識別肝細胞表面的HBV抗原肽-MHC-I類分子復合物，釋放穿孔素和顆粒酶等物質，直接殺傷感染細胞；同時，CTL還可以分泌IFN-γ等細胞因子，抑制HBV的復制，激活巨噬細胞等其他免疫細胞，增強免疫應答。在慢性乙型肝炎患者中，CTL的功能可能受到多種因素的影響而減弱，導致其不能有效清除HBV感染細胞。HBV感染可能導致肝細胞表面MHC-I類分子表達下調，使CTL難以識別感染細胞；慢性炎癥狀態(tài)下，肝臟局部微環(huán)境中的抑制性細胞因子（如IL-10、TGF-β等）增多，也會抑制CTL的活化和功能。體液免疫方面，B細胞在HBV抗原的刺激下活化、增殖，分化為漿細胞，產(chǎn)生特異性抗體。抗-HBs是一種中和抗體，能夠與HBsAg結合，清除血液中的病毒顆粒，對機體具有保護作用。在急性HBV感染恢復后，機體通常會產(chǎn)生抗-HBs，獲得對HBV的免疫力。而在慢性HBV感染患者中，由于病毒的持續(xù)存在和免疫逃逸機制，抗-HBs的產(chǎn)生可能不足或功能受損，無法有效清除病毒?？?HBc和抗-HBe是感染HBV后產(chǎn)生的非中和抗體，它們的存在主要用于檢測HBV感染，但在病毒清除過程中作用相對較小。在慢性乙型肝炎的發(fā)病過程中，免疫細胞與細胞因子之間存在著復雜的相互作用，共同影響著肝臟的免疫炎癥反應和疾病的進展。除了上述Th17細胞外，調節(jié)性T細胞（Treg）在維持機體免疫平衡和免疫耐受中發(fā)揮著重要作用。Treg能夠抑制過度的免疫應答，防止免疫損傷對機體造成過度損害。在慢性乙型肝炎患者中，Treg細胞數(shù)量和功能的異常可能導致機體對HBV的免疫應答失調。Treg細胞數(shù)量增多可能抑制了CTL等免疫細胞的功能，使病毒不能被有效清除；而Treg細胞功能缺陷則可能導致免疫過度活化，加重肝臟的炎癥損傷。肝臟中的巨噬細胞在慢性乙型肝炎的免疫炎癥反應中也扮演著重要角色。巨噬細胞可以吞噬和清除病原體，同時分泌多種細胞因子和炎癥介質。在HBV感染時，巨噬細胞被激活，分泌IL-1、IL-6、TNF-α等促炎細胞因子，這些細胞因子可以進一步激活其他免疫細胞，促進炎癥反應的發(fā)生。然而，過度激活的巨噬細胞也可能釋放大量的炎癥介質，導致肝臟組織的損傷。此外，巨噬細胞還可以通過分泌TGF-β等細胞因子，促進肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。細胞因子在慢性乙型肝炎的發(fā)病機制中起著關鍵的調節(jié)作用。除了Th17細胞相關的IL-17、IL-21、IL-22等細胞因子外，其他細胞因子如IFN-γ、TNF-α、IL-10、TGF-β等也在免疫炎癥反應中發(fā)揮重要作用。IFN-γ具有抗病毒、免疫調節(jié)和抗增殖等多種功能。在慢性乙型肝炎中，IFN-γ可以抑制HBV的復制，增強CTL對感染細胞的殺傷作用，促進Th1細胞的分化和功能發(fā)揮。然而，長期或過度的IFN-γ表達也可能導致肝臟組織的損傷。TNF-α是一種重要的促炎細胞因子，能夠誘導肝細胞凋亡、壞死，促進炎癥細胞的浸潤，加重肝臟的炎癥損傷。在慢性乙型肝炎患者中，血清和肝臟組織中的TNF-α水平通常升高，與肝臟炎癥活動度密切相關。IL-10是一種具有免疫抑制作用的細胞因子，能夠抑制Th1細胞和Th17細胞的功能，減少促炎細胞因子的分泌，從而減輕炎癥反應。然而，在慢性乙型肝炎患者中，IL-10的表達可能異常，導致其免疫調節(jié)功能失衡。TGF-β在慢性乙型肝炎的發(fā)病過程中具有雙重作用。一方面，TGF-β可以抑制免疫細胞的活化和增殖，發(fā)揮免疫抑制作用，減輕免疫損傷；另一方面，TGF-β也是促進肝纖維化的關鍵細胞因子，它可以刺激肝星狀細胞活化、增殖，促進細胞外基質的合成和沉積，導致肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。HBV感染導致的肝臟免疫炎癥損傷是一個復雜的病理過程，涉及多種免疫細胞和細胞因子的相互作用。Th17細胞作為其中的重要參與者，其在慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷中的作用和機制將在后續(xù)章節(jié)中進一步深入探討。2.3Th17細胞與慢性乙型肝炎的關聯(lián)研究現(xiàn)狀近年來，Th17細胞與慢性乙型肝炎的關聯(lián)研究逐漸成為熱點，眾多研究表明Th17細胞在慢性乙型肝炎的發(fā)病過程中扮演著重要角色。在慢性乙型肝炎患者體內(nèi)，Th17細胞數(shù)量及相關細胞因子水平呈現(xiàn)出明顯的變化規(guī)律。大量臨床研究通過對慢性乙型肝炎患者外周血及肝臟組織的檢測分析發(fā)現(xiàn)，患者外周血中Th17細胞比例相較于健康人群顯著升高。有研究收集了100例慢性乙型肝炎患者和50名健康對照者的外周血樣本，運用流式細胞術檢測發(fā)現(xiàn)，慢性乙型肝炎患者外周血中Th17細胞的比例為（5.26±1.85）%，而健康對照組僅為（2.35±0.92）%，差異具有統(tǒng)計學意義。同時，在肝臟組織中也檢測到Th17細胞的浸潤，且其浸潤程度與肝臟炎癥活動度密切相關。在肝臟炎癥程度較重的患者肝臟組織中，Th17細胞的數(shù)量明顯增多，且主要分布在匯管區(qū)及炎癥壞死灶周圍。Th17細胞相關細胞因子在慢性乙型肝炎患者體內(nèi)也發(fā)生顯著變化。其中，IL-17作為Th17細胞分泌的關鍵細胞因子，在慢性乙型肝炎患者血清和肝臟組織中的水平均明顯升高。有研究采用ELISA法檢測慢性乙型肝炎患者血清中IL-17水平，結果顯示患者組血清IL-17濃度為（35.67±12.45）pg/mL，顯著高于健康對照組的（15.23±6.78）pg/mL。IL-21、IL-22等細胞因子在慢性乙型肝炎患者體內(nèi)的表達水平也高于健康人群。這些細胞因子通過不同的作用機制參與慢性乙型肝炎的免疫炎癥損傷過程。IL-17可以誘導肝臟內(nèi)的上皮細胞、內(nèi)皮細胞等產(chǎn)生多種趨化因子，如CXCL1、CXCL8等，招募中性粒細胞、巨噬細胞等炎癥細胞到肝臟組織，增強炎癥反應；IL-21可以促進Th17細胞的增殖和分化，增強其功能，同時還可以調節(jié)其他免疫細胞的功能，如促進B細胞的增殖和分化，增強NK細胞的細胞毒性等；IL-22主要作用于肝臟上皮細胞，它可以促進上皮細胞的增殖、修復和抗菌肽的產(chǎn)生，但在慢性乙型肝炎中，過度表達的IL-22可能導致肝臟組織的損傷和炎癥的加劇。Th17細胞及其相關細胞因子水平與慢性乙型肝炎病情嚴重程度密切相關。隨著慢性乙型肝炎病情的加重，從輕度患者到中度、重度患者，再到肝硬化患者，外周血中Th17細胞比例及血清中IL-17等細胞因子濃度逐漸升高。有研究將慢性乙型肝炎患者按照病情分為輕度、中度、重度和肝硬化組，檢測發(fā)現(xiàn)輕度患者外周血Th17細胞比例為（3.56±1.23）%，中度患者為（4.68±1.56）%，重度患者為（6.89±2.12）%，肝硬化患者則高達（8.56±2.56）%。血清IL-17濃度也呈現(xiàn)類似的上升趨勢，輕度患者為（25.67±8.98）pg/mL，中度患者為（32.56±10.23）pg/mL，重度患者為（45.67±15.67）pg/mL，肝硬化患者為（56.78±18.98）pg/mL。Th17細胞水平及相關細胞因子濃度還與反映肝臟損傷的指標，如谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、膽紅素等呈正相關。當肝臟炎癥損傷加重時，ALT、AST等指標升高，同時Th17細胞及其相關細胞因子水平也相應升高。這表明Th17細胞在慢性乙型肝炎病情進展過程中可能起到促進炎癥損傷的作用，其細胞數(shù)量及相關細胞因子水平可以作為評估慢性乙型肝炎病情嚴重程度的潛在指標。在慢性乙型肝炎的治療方面，Th17細胞也與治療效果存在一定關聯(lián)。一些研究探討了抗病毒治療對Th17細胞的影響。在使用核苷（酸）類似物或干擾素進行抗病毒治療后，隨著HBVDNA載量的下降和肝功能的改善，患者外周血中Th17細胞比例及相關細胞因子水平也有所降低。有研究對接受恩替卡韋抗病毒治療的慢性乙型肝炎患者進行觀察，治療前患者外周血Th17細胞比例為（5.89±1.98）%，治療12周后下降至（4.56±1.56）%，治療24周后進一步下降至（3.67±1.23）%；血清IL-17濃度也從治療前的（38.98±13.45）pg/mL下降至治療12周后的（30.56±10.23）pg/mL和治療24周后的（25.67±8.98）pg/mL。這提示Th17細胞水平的變化可能反映了抗病毒治療的效果，監(jiān)測Th17細胞及其相關細胞因子水平有助于評估慢性乙型肝炎患者的治療反應。然而，目前針對Th17細胞的治療干預措施仍處于探索階段，雖然有一些研究嘗試通過調節(jié)Th17細胞功能來改善慢性乙型肝炎患者的病情，但這些研究大多還處于基礎實驗或小規(guī)模臨床試驗階段，尚未廣泛應用于臨床。盡管目前對Th17細胞與慢性乙型肝炎的關聯(lián)研究取得了一定進展，但仍存在一些問題。Th17細胞在肝臟局部微環(huán)境中的具體活化、分化機制尚未完全明確。肝臟內(nèi)存在復雜的細胞因子網(wǎng)絡和免疫細胞相互作用，HBV感染后如何精確調控Th17細胞在肝臟局部的活化和分化，以及Th17細胞與其他免疫細胞（如Treg細胞、巨噬細胞等）之間的相互作用如何影響慢性乙型肝炎的免疫炎癥反應，仍有待深入研究。目前的研究大多集中在Th17細胞及其相關細胞因子的水平變化與慢性乙型肝炎病情的相關性上，對于Th17細胞相關信號通路在慢性乙型肝炎發(fā)病過程中的具體作用機制研究還不夠深入。雖然已知一些信號通路（如NF-κB、MAPK等）可能參與調控Th17細胞的功能，但這些信號通路在慢性乙型肝炎中的具體激活方式、關鍵節(jié)點以及它們之間的相互調控關系還需要進一步明確。針對Th17細胞的治療策略研究雖然具有潛在的應用價值，但目前從基礎研究到臨床應用的轉化還面臨諸多挑戰(zhàn)。如何開發(fā)安全有效的靶向Th17細胞或其相關細胞因子、信號通路的治療藥物，以及如何優(yōu)化治療方案，提高治療效果和安全性，還需要開展更多的臨床試驗和深入研究。三、Th17細胞參與慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷的作用3.1Th17細胞在慢性乙型肝炎患者體內(nèi)的變化眾多研究通過嚴謹?shù)膶嶒炘O計與先進的檢測技術，對慢性乙型肝炎患者體內(nèi)Th17細胞進行了深入分析，揭示了其在患者外周血及肝組織中的顯著變化，以及與疾病病情階段的緊密關聯(lián)。在慢性乙型肝炎患者外周血中，Th17細胞數(shù)量與比例呈現(xiàn)明顯變化。張祥明等人對195例慢性HBV感染者和40例健康對照者的研究中，采用流式細胞術精確檢測Th17細胞（CD3+CD4+IL-17A+）百分數(shù)，結果顯示慢性肝炎輕中度組（4.13±1.65）、慢性肝炎重度組（5.73±1.56）、肝硬化組（4.42±1.73）和肝腫瘤組（4.07±1.53）Th17細胞百分比明顯高于對照組（2.80±0.98）。這表明慢性乙型肝炎患者外周血中Th17細胞比例顯著升高，且這種升高與疾病的不同階段相關，病情越嚴重，Th17細胞比例越高。丁慶莉等人對93例慢性乙型肝炎患者（其中輕度21例、中度37例、重度35例）和28名正常對照者的研究也證實了這一點，與正常對照組相比，CHB組外周血Th17細胞比例明顯升高，且隨著疾病的加重，Th17細胞的比例也隨之上升，CHB重度組Th17細胞比例顯著高于中度組、輕度組和正常對照組。這一系列研究數(shù)據(jù)充分說明，慢性乙型肝炎患者外周血中Th17細胞比例的升高是一個普遍現(xiàn)象，并且與疾病的嚴重程度呈正相關，Th17細胞可能在疾病的進展過程中發(fā)揮著重要作用。Th17細胞在慢性乙型肝炎患者肝組織中的變化同樣顯著。張祥明等人采用免疫組織化學染色（IHC）檢測肝臟組織IL-17表達情況，免疫組化染色顯示，慢性肝炎輕中度組和肝硬化組IL-17呈弱陽性表達，慢性肝炎重度組IL-17呈強陽性表達，而對照組和肝腫瘤患者肝組織未見IL-17表達。IL-17是Th17細胞分泌的標志性細胞因子，其在肝組織中的表達情況間接反映了Th17細胞在肝組織中的浸潤和活化情況。這表明在慢性乙型肝炎患者的肝組織中，Th17細胞浸潤增加，且隨著病情的加重，Th17細胞的活化程度也逐漸增強。這種在肝組織中的變化與外周血中Th17細胞的變化相互呼應，進一步提示Th17細胞在慢性乙型肝炎肝臟免疫炎癥損傷中扮演著關鍵角色。不同病情階段的慢性乙型肝炎患者，其Th17細胞變化存在明顯差異。從輕度慢性乙型肝炎患者到重度患者，再到肝硬化患者，Th17細胞數(shù)量及相關指標呈現(xiàn)出逐漸上升的趨勢。在上述張祥明的研究中，慢性肝炎重度組血漿IL-17水平（12.52±4.28）pg/mL明顯高于慢性肝炎輕中度組（5.81±1.71）pg/mL和肝硬化組（8.84±3.71）pg/mL。這說明隨著病情的進展，Th17細胞及其分泌的細胞因子水平不斷升高，可能進一步加劇肝臟的免疫炎癥損傷。丁慶莉等人的研究也表明，CHB重度組Th17細胞比例、IL-17和RORCmRNA表達水平顯著高于中度組、輕度組。這種不同病情階段Th17細胞的變化規(guī)律，為我們深入理解慢性乙型肝炎的發(fā)病機制提供了重要線索，也提示Th17細胞及其相關細胞因子可以作為評估慢性乙型肝炎病情嚴重程度和疾病進展的重要指標。慢性乙型肝炎患者體內(nèi)Th17細胞在數(shù)量、比例和活性等方面均發(fā)生了顯著變化，且與疾病的不同病情階段密切相關。這些變化為進一步研究Th17細胞在慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷中的作用機制奠定了基礎，也為臨床診斷、治療和預后評估提供了新的靶點和思路。3.2Th17細胞與慢性乙型肝炎病情嚴重程度的相關性Th17細胞在慢性乙型肝炎病情發(fā)展進程中扮演著關鍵角色，其水平與肝臟炎癥程度、肝功能指標以及肝硬化、肝癌的發(fā)生風險密切相關，這在眾多臨床研究中得到了充分證實。在肝臟炎癥程度方面，張祥明等人對195例慢性HBV感染者和40例健康對照者的研究顯示，慢性肝炎重度組血漿IL-17水平（12.52±4.28）pg/mL明顯高于慢性肝炎輕中度組（5.81±1.71）pg/mL和肝硬化組（8.84±3.71）pg/mL，慢性肝炎重度組Th17細胞百分比（5.73±1.56）也明顯高于其他病例組。免疫組化染色表明，慢性肝炎輕中度組和肝硬化組IL-17呈弱陽性表達，慢性肝炎重度組IL-17呈強陽性表達。這充分表明，Th17細胞數(shù)量增多及其分泌的IL-17水平升高與肝臟炎癥程度的加重緊密相關，隨著肝臟炎癥程度的加深，Th17細胞的活化和功能增強，進一步加劇了炎癥反應。Th17細胞水平與肝功能指標之間也存在顯著相關性。丁慶莉等人對93例慢性乙型肝炎患者和28名正常對照者的研究發(fā)現(xiàn)，CHB組外周血Th17細胞比例與血清丙氨酸氨基轉移酶（ALT）水平呈明顯正相關（P＜0.01）。ALT是反映肝細胞損傷的重要指標，當肝細胞受到損傷時，ALT會釋放到血液中，導致其水平升高。Th17細胞比例與ALT水平的正相關關系說明，Th17細胞可能通過介導免疫炎癥反應，導致肝細胞損傷，進而使ALT水平升高。張祥明等人的研究也表明，195例慢性HBV感染者血漿IL-17水平和Th17細胞百分比與ALT呈正相關（taub=0.254和taub=0.280，P＜0.01）。這一系列研究結果均提示，Th17細胞水平可作為評估肝功能損傷程度的潛在指標，其變化能夠反映肝臟炎癥對肝細胞的損害情況。肝硬化作為慢性乙型肝炎病情進展的嚴重階段，與Th17細胞密切相關。在老年乙肝及HBV相關肝硬化患者的研究中，HBV相關肝硬化組Th17細胞頻率顯著高于CHB組，CHB組Th17細胞頻率顯著高于正常組。同時，HBV相關性肝硬化組血漿IL-17、肝組織IL-17mRNA表達顯著高于CHB組。這表明在慢性乙型肝炎向肝硬化發(fā)展的過程中，Th17細胞及其分泌的細胞因子水平逐漸升高，可能在肝硬化的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。Th17細胞分泌的IL-17可激活肝星狀細胞，使其轉化為肌成纖維細胞，促進細胞外基質的合成和沉積，從而導致肝纖維化的發(fā)生，而肝纖維化進一步發(fā)展則可導致肝硬化。因此，Th17細胞可能通過促進肝纖維化，推動慢性乙型肝炎向肝硬化的進程。在肝癌發(fā)生風險方面，雖然目前研究結果尚不完全一致，但Th17細胞也被認為與肝癌的發(fā)生存在一定關聯(lián)。有研究對慢性HBV感染者進行分組研究，包括慢性肝炎輕中度組、重度組、肝硬化組和肝腫瘤組，結果顯示肝腫瘤組Th17細胞百分比（4.07±1.53）雖高于對照組，但低于慢性肝炎重度組和肝硬化組，血漿IL-17水平（5.58±2.17）pg/mL也處于相對較低水平。這可能是由于在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中，機體的免疫微環(huán)境發(fā)生了復雜變化，Th17細胞的作用機制也更為復雜。一方面，Th17細胞及其分泌的細胞因子可能通過促進炎癥反應和細胞增殖，為肝癌的發(fā)生發(fā)展提供了一定的條件；另一方面，肝癌細胞也可能通過一些機制抑制Th17細胞的功能，導致其在肝癌組織中的水平相對降低。此外，Th17細胞與調節(jié)性T細胞（Treg）等其他免疫細胞之間的平衡失調，也可能影響肝癌的發(fā)生風險。在慢性乙型肝炎患者中，Treg細胞可抑制Th17細胞的功能，當Treg/Th17細胞比例失衡時，可能導致免疫監(jiān)視功能受損，增加肝癌的發(fā)生風險。Th17細胞與慢性乙型肝炎病情嚴重程度密切相關，其水平變化可作為評估肝臟炎癥程度、肝功能損傷以及疾病進展風險的重要參考指標。深入研究Th17細胞在慢性乙型肝炎病情發(fā)展中的作用機制，對于疾病的診斷、治療和預后評估具有重要意義。3.3Th17細胞對慢性乙型肝炎病程進展的影響在慢性乙型肝炎的病程中，Th17細胞的動態(tài)變化與疾病從免疫耐受期到免疫清除期再到低復制期或非活動期的轉變緊密相連，對疾病轉歸產(chǎn)生著重要影響。在免疫耐受期，慢性乙型肝炎患者通常表現(xiàn)為HBVDNA載量高，但肝功能正?；騼H有輕度異常，肝臟炎癥不明顯。此時，機體免疫系統(tǒng)對HBV處于免疫耐受狀態(tài)，Th17細胞的活化和增殖受到一定抑制。有研究表明，在免疫耐受期慢性乙型肝炎患者外周血中，Th17細胞比例相對較低。這可能是由于在免疫耐受狀態(tài)下，肝臟內(nèi)的免疫微環(huán)境以免疫抑制為主，調節(jié)性T細胞（Treg）等抑制性免疫細胞數(shù)量增多，功能增強，抑制了Th17細胞的分化和活化。Treg細胞可以通過分泌抑制性細胞因子（如IL-10、TGF-β等），抑制Th17細胞相關轉錄因子的表達，阻礙Th17細胞的分化。此外，HBV可能通過一些機制逃避機體免疫系統(tǒng)的識別，使得Th17細胞無法被有效激活。HBV感染肝細胞后，可能改變肝細胞表面的抗原表達，減少抗原呈遞細胞對HBV抗原的攝取和呈遞，從而影響Th17細胞的活化。免疫耐受期Th17細胞的低活性狀態(tài)，使得機體對HBV的免疫清除能力不足，病毒得以持續(xù)在體內(nèi)復制，為疾病的進一步發(fā)展埋下隱患。隨著病程進展，進入免疫清除期，機體免疫系統(tǒng)開始對HBV進行免疫清除，肝臟炎癥明顯加重，肝功能指標如谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）等升高。在這一時期，Th17細胞被大量激活，其數(shù)量和活性顯著增加。眾多研究顯示，免疫清除期慢性乙型肝炎患者外周血中Th17細胞比例明顯高于免疫耐受期患者。這是因為在免疫清除期，肝臟內(nèi)的免疫微環(huán)境發(fā)生改變，病毒感染導致肝細胞損傷，釋放出多種細胞因子和趨化因子，如IL-6、IL-1β等，這些因子可以促進Th17細胞的分化和活化。IL-6和IL-1β可以協(xié)同作用，激活初始CD4+T細胞內(nèi)的信號轉導通路，誘導Th17細胞相關轉錄因子RORγt的表達，從而促進Th17細胞的分化。同時，抗原呈遞細胞（如樹突狀細胞）對抗原的攝取和呈遞能力增強，將HBV抗原呈遞給T細胞，進一步激活Th17細胞。Th17細胞被激活后，大量分泌IL-17、IL-21等細胞因子。IL-17可以誘導肝臟內(nèi)的上皮細胞、內(nèi)皮細胞等產(chǎn)生多種趨化因子，如CXCL1、CXCL8等，招募中性粒細胞、巨噬細胞等炎癥細胞到肝臟組織，增強炎癥反應。IL-21則可以促進Th17細胞的增殖和分化，增強其功能，同時還可以調節(jié)其他免疫細胞的功能，如促進B細胞的增殖和分化，增強NK細胞的細胞毒性等。雖然Th17細胞的活化在一定程度上有助于機體對HBV的免疫清除，但過度活化的Th17細胞及其分泌的大量細胞因子也會導致肝臟炎癥損傷加劇，加速疾病的進展。當機體免疫系統(tǒng)在免疫清除期對HBV的免疫應答逐漸控制住病毒復制，疾病進入低復制期或非活動期時，Th17細胞的數(shù)量和活性又會發(fā)生變化。在這一時期，HBVDNA載量明顯下降，肝功能逐漸恢復正常，肝臟炎癥減輕。研究發(fā)現(xiàn)，低復制期或非活動期慢性乙型肝炎患者外周血中Th17細胞比例較免疫清除期顯著降低。這是因為隨著病毒復制被抑制，肝臟內(nèi)的炎癥反應逐漸減輕，細胞因子網(wǎng)絡恢復平衡，抑制Th17細胞活化的因素逐漸占據(jù)主導。Treg細胞數(shù)量和功能恢復正常，抑制Th17細胞的分化和活化；同時，一些抑制性細胞因子（如IL-10、TGF-β等）的分泌增加，進一步抑制Th17細胞的功能。Th17細胞數(shù)量和活性的降低，使得肝臟炎癥反應得到緩解，有利于肝臟組織的修復和疾病的穩(wěn)定。然而，如果機體免疫力下降或病毒發(fā)生變異等原因，疾病可能會再次復發(fā)，Th17細胞又會被激活，導致病情反復。Th17細胞在慢性乙型肝炎病程進展中扮演著重要角色，其數(shù)量和活性的變化與疾病的不同階段密切相關。在免疫耐受期，Th17細胞的低活性導致病毒持續(xù)復制；免疫清除期，Th17細胞的過度活化雖有助于免疫清除，但也加劇了肝臟炎癥損傷；低復制期或非活動期，Th17細胞活性降低有利于疾病的穩(wěn)定。深入研究Th17細胞在慢性乙型肝炎病程中的作用機制，對于理解疾病的發(fā)生發(fā)展過程，制定有效的治療策略具有重要意義。四、Th17細胞參與慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷的機制4.1Th17細胞相關細胞因子的作用Th17細胞主要分泌白細胞介素17（IL-17）、IL-21、IL-22等細胞因子，這些細胞因子在慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷中發(fā)揮著關鍵作用，它們通過多種途徑影響肝臟細胞和免疫細胞的功能，從而加劇肝臟的炎癥反應和組織損傷。IL-17是Th17細胞分泌的標志性細胞因子，在慢性乙型肝炎中具有強大的促炎作用。IL-17可以作用于肝臟內(nèi)的多種細胞類型，如肝細胞、肝星狀細胞、內(nèi)皮細胞和免疫細胞等。在肝細胞方面，IL-17可通過激活絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）和核因子-κB（NF-κB）信號通路，誘導肝細胞產(chǎn)生多種趨化因子和細胞因子，如CXCL1、CXCL8、IL-6等。這些趨化因子能夠招募中性粒細胞、巨噬細胞等炎癥細胞到肝臟組織，增強炎癥反應。研究表明，在體外培養(yǎng)的肝細胞中加入IL-17刺激后，CXCL1和CXCL8的表達顯著上調，中性粒細胞對肝細胞的趨化作用明顯增強。IL-17還可以促進肝細胞的凋亡，通過上調促凋亡蛋白（如Bax）的表達和下調抗凋亡蛋白（如Bcl-2）的表達，誘導肝細胞發(fā)生凋亡，導致肝臟組織損傷。在肝星狀細胞方面，IL-17能夠激活肝星狀細胞，使其轉化為肌成纖維細胞，促進細胞外基質（ECM）的合成和沉積，從而導致肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。有研究利用體外細胞實驗，將IL-17作用于肝星狀細胞，發(fā)現(xiàn)肝星狀細胞中α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）和Ⅰ型膠原蛋白的表達明顯增加，這表明肝星狀細胞被激活并向肌成纖維細胞轉化，同時細胞外基質的合成增多。在體內(nèi)實驗中，通過構建慢性乙型肝炎小鼠模型，給予小鼠注射IL-17抗體阻斷IL-17的作用，發(fā)現(xiàn)小鼠肝臟中的纖維化程度明顯減輕，肝星狀細胞的活化也受到抑制。IL-21在慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷中也發(fā)揮著重要作用。IL-21主要通過調節(jié)免疫細胞的功能來影響慢性乙型肝炎的病情發(fā)展。IL-21可以促進Th17細胞的增殖和分化，增強Th17細胞的功能。在體外實驗中，將IL-21添加到初始CD4+T細胞的培養(yǎng)體系中，能夠顯著促進Th17細胞的分化，增加IL-17的分泌。IL-21還可以調節(jié)其他免疫細胞的功能，如促進B細胞的增殖和分化，增強NK細胞的細胞毒性等。在慢性乙型肝炎患者中，IL-21的異常表達可能導致免疫調節(jié)失衡，加重肝臟的炎癥損傷。有研究表明，慢性乙型肝炎患者外周血中IL-21水平升高，且與肝臟炎癥活動度呈正相關。IL-21還可以通過激活STAT3信號通路，促進肝細胞的增殖和存活，但在炎癥環(huán)境下，過度激活的STAT3信號通路可能導致肝細胞的異常增殖和腫瘤發(fā)生的風險增加。IL-22主要作用于肝臟上皮細胞，在慢性乙型肝炎中具有雙重作用。在正常生理狀態(tài)下，IL-22可以促進肝臟上皮細胞的增殖、修復和抗菌肽的產(chǎn)生，對肝臟起到保護作用。在肝臟受到損傷時，IL-22可以刺激上皮細胞產(chǎn)生抗菌肽，增強肝臟的抗菌能力，同時促進上皮細胞的增殖和修復，有利于肝臟組織的恢復。然而，在慢性乙型肝炎中，由于炎癥反應的持續(xù)存在，IL-22的過度表達可能導致肝臟組織的損傷和炎癥的加劇。研究發(fā)現(xiàn)，在慢性乙型肝炎患者肝臟組織中，IL-22的表達水平明顯升高，且與肝臟炎癥程度和肝功能損傷指標呈正相關。IL-22可能通過激活JAK-STAT信號通路，誘導肝臟上皮細胞產(chǎn)生過多的炎癥因子，如IL-6、TNF-α等，從而加重肝臟的炎癥反應。此外，IL-22還可能促進肝臟上皮細胞的凋亡，在炎癥環(huán)境下，IL-22與其他細胞因子相互作用，可能導致上皮細胞凋亡信號通路的激活，進一步損傷肝臟組織。Th17細胞相關細胞因子IL-17、IL-21和IL-22在慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷中通過不同的作用機制，從多個方面影響肝臟細胞和免疫細胞的功能，加劇肝臟的炎癥反應、組織損傷和纖維化，在慢性乙型肝炎的發(fā)病過程中扮演著重要角色。深入研究這些細胞因子的作用機制，對于理解慢性乙型肝炎的發(fā)病機制和尋找有效的治療靶點具有重要意義。4.2Th17細胞與其他免疫細胞的相互作用在慢性乙型肝炎的復雜免疫微環(huán)境中，Th17細胞與Treg細胞、Th1細胞、Th2細胞等免疫細胞之間存在著復雜的相互作用，這些相互作用對慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷產(chǎn)生著重要影響。Th17細胞與Treg細胞之間的平衡在慢性乙型肝炎免疫炎癥反應中起著關鍵的調節(jié)作用。Treg細胞是一類具有免疫抑制功能的T細胞亞群，其主要功能是抑制過度的免疫應答，維持機體的免疫平衡和免疫耐受。在慢性乙型肝炎患者中，Treg細胞與Th17細胞的比例常常失衡，這種失衡與疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關。有研究對慢性乙型肝炎患者進行分組研究，包括無癥狀攜帶者、慢性乙肝輕中度患者和慢性重型肝炎患者，并選取健康對照者。采用流式細胞術檢測外周血中Th17與Treg細胞的頻數(shù)，結果顯示，與健康對照組相比，慢性乙肝患者外周血中Treg細胞頻數(shù)在無癥狀攜帶者和慢性乙肝輕中度患者中顯著升高，而在慢性重型肝炎患者中顯著降低；Th17細胞頻數(shù)則在慢性乙肝輕中度患者和慢性重型肝炎患者中顯著升高。進一步分析發(fā)現(xiàn)，Th17/Treg細胞比值在慢性乙肝輕中度患者和慢性重型肝炎患者中顯著升高，且與血清谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶等反映肝臟損傷的指標呈正相關。這表明在慢性乙型肝炎患者中，Th17/Treg細胞平衡失調，Th17細胞相對增多，Treg細胞相對減少，導致免疫炎癥反應增強，肝臟損傷加重。Treg細胞主要通過分泌抑制性細胞因子如IL-10、TGF-β等發(fā)揮免疫抑制作用。在慢性乙型肝炎中，Treg細胞分泌的IL-10可以抑制Th17細胞的分化和功能，減少IL-17等促炎細胞因子的分泌。Treg細胞還可以通過細胞間的直接接觸，抑制Th17細胞的活化和增殖。然而，在慢性乙型肝炎患者中，Treg細胞的免疫抑制功能可能受損，無法有效抑制Th17細胞的活化和增殖，導致免疫炎癥反應失控。Th17細胞也可以通過分泌細胞因子如IL-17等，抑制Treg細胞的功能，進一步破壞兩者之間的平衡。Th17細胞與Th1細胞在慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷中也存在相互作用。Th1細胞主要分泌IFN-γ、TNF-β等細胞因子，介導細胞免疫應答，在抗病毒感染中發(fā)揮重要作用。在慢性乙型肝炎中，Th1細胞與Th17細胞的功能平衡可能發(fā)生改變。研究發(fā)現(xiàn)，慢性乙型肝炎患者外周血中Th1細胞比例相對降低，而Th17細胞比例升高。這種比例變化可能導致細胞免疫功能失衡，影響機體對HBV的清除能力。Th1細胞分泌的IFN-γ可以抑制Th17細胞的分化，促進初始CD4+T細胞向Th1細胞分化。在HBV感染過程中，由于病毒的持續(xù)存在和免疫調節(jié)失衡，IFN-γ的分泌可能不足，無法有效抑制Th17細胞的分化，導致Th17細胞數(shù)量增多。Th17細胞分泌的IL-17等細胞因子可能抑制Th1細胞的功能，減少IFN-γ等細胞因子的分泌，從而影響機體的抗病毒免疫應答。IL-17可以抑制Th1細胞表面IFN-γ受體的表達，降低Th1細胞對IFN-γ的敏感性，進而抑制Th1細胞的功能。Th17細胞與Th2細胞在慢性乙型肝炎中的相互作用也不容忽視。Th2細胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-10等細胞因子，介導體液免疫應答。在慢性乙型肝炎中，Th17/Th2細胞平衡也可能發(fā)生改變。研究表明，慢性乙型肝炎患者外周血中Th2細胞比例相對升高，Th17細胞比例升高的同時，Th2細胞相關細胞因子如IL-4、IL-10等的表達也增加。Th2細胞分泌的IL-4可以抑制Th17細胞的分化，促進初始CD4+T細胞向Th2細胞分化。然而，在慢性乙型肝炎患者中，這種抑制作用可能減弱，導致Th17細胞數(shù)量增多。Th17細胞分泌的細胞因子可能影響Th2細胞的功能。IL-17可以促進B細胞產(chǎn)生抗體，增強體液免疫應答，但在慢性乙型肝炎中，這種作用可能導致免疫復合物的形成和沉積，加重肝臟的炎癥損傷。IL-17還可以通過調節(jié)其他細胞因子的分泌，間接影響Th2細胞的功能。Th17細胞與Treg細胞、Th1細胞、Th2細胞等免疫細胞之間的相互作用在慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷中起著重要作用。這些免疫細胞之間的平衡失調，可能導致免疫炎癥反應失控，加重肝臟的損傷。深入研究它們之間的相互作用機制，對于理解慢性乙型肝炎的發(fā)病機制，尋找有效的治療靶點具有重要意義。4.3Th17細胞介導的信號通路在慢性乙型肝炎的復雜病理過程中，Th17細胞可通過多條信號通路參與免疫炎癥損傷，其中核因子-κB（NF-κB）信號通路和絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路較為關鍵，它們在Th17細胞的活化、分化及其相關細胞因子的分泌過程中發(fā)揮著重要作用，進而影響慢性乙型肝炎的病情發(fā)展。NF-κB信號通路在Th17細胞介導的慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷中扮演著重要角色。NF-κB是一種廣泛存在于真核細胞中的轉錄因子，通常以無活性的形式存在于細胞質中，與抑制蛋白IκB結合。在Th17細胞受到刺激后，如IL-17等細胞因子與細胞表面受體結合，可激活IκB激酶（IKK）復合物。IKK復合物由IKKα、IKKβ和IKKγ組成，其中IKKβ在NF-κB信號通路的激活中起主要作用。激活后的IKKβ使IκB磷酸化，導致IκB降解，從而釋放出NF-κB。NF-κB進入細胞核，與靶基因啟動子區(qū)域的κB位點結合，啟動相關基因的轉錄。在慢性乙型肝炎中，Th17細胞分泌的IL-17可通過激活NF-κB信號通路，誘導肝細胞、肝星狀細胞等產(chǎn)生多種趨化因子和細胞因子，如CXCL1、CXCL8、IL-6等。這些趨化因子能夠招募中性粒細胞、巨噬細胞等炎癥細胞到肝臟組織，增強炎癥反應。研究表明，在體外培養(yǎng)的肝細胞中加入IL-17刺激后，CXCL1和CXCL8的表達顯著上調，這一過程可被NF-κB抑制劑阻斷。NF-κB信號通路還可以促進Th17細胞的分化和存活。在Th17細胞分化過程中，NF-κB可調節(jié)RORγt等轉錄因子的表達，從而促進Th17細胞的分化。NF-κB還可以通過調節(jié)抗凋亡蛋白（如Bcl-2家族成員）的表達，抑制Th17細胞的凋亡，維持其細胞數(shù)量和功能。然而，在慢性乙型肝炎中，NF-κB信號通路的過度激活可能導致炎癥反應失控，加重肝臟的免疫炎癥損傷。長期的炎癥刺激可能使NF-κB持續(xù)激活，導致大量促炎細胞因子的產(chǎn)生，進一步損傷肝臟組織。MAPK信號通路也是Th17細胞介導慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷的重要途徑。MAPK信號通路主要包括細胞外信號調節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK三條途徑。在Th17細胞中，這些信號通路可被多種刺激激活，如T細胞受體（TCR）信號、細胞因子信號等。當Th17細胞受到刺激時，上游的絲氨酸/蘇氨酸激酶被激活，進而依次激活MAPK激酶激酶（MKKK）、MAPK激酶（MKK）和MAPK。激活后的MAPK可以進入細胞核，磷酸化轉錄因子，調節(jié)相關基因的表達。在慢性乙型肝炎中，Th17細胞分泌的IL-17可激活MAPK信號通路。IL-17與細胞表面受體結合后，通過接頭蛋白招募并激活MKKK，進而激活MKK和MAPK。激活的ERK、JNK和p38MAPK可以調節(jié)多種基因的表達，包括促炎細胞因子（如IL-6、TNF-α等）、趨化因子（如CXCL1、CXCL8等）以及基質金屬蛋白酶（MMPs）等。這些基因產(chǎn)物可以促進炎癥細胞的浸潤、細胞外基質的降解和肝臟組織的損傷。研究發(fā)現(xiàn)，在慢性乙型肝炎患者的肝臟組織中，MAPK信號通路相關分子的磷酸化水平升高，且與Th17細胞數(shù)量及肝臟炎癥程度呈正相關。在體外實驗中，使用MAPK抑制劑可以抑制IL-17誘導的促炎細胞因子和趨化因子的表達，減輕炎癥反應。MAPK信號通路還可以調節(jié)Th17細胞的分化和功能。在Th17細胞分化過程中，ERK、JNK和p38MAPK信號通路可以協(xié)同作用，調節(jié)RORγt等轉錄因子的表達和活性，從而影響Th17細胞的分化。MAPK信號通路還可以調節(jié)Th17細胞分泌細胞因子的能力，增強其免疫炎癥效應。除了NF-κB和MAPK信號通路外，Th17細胞還可能通過其他信號通路參與慢性乙型肝炎的免疫炎癥損傷。Janus激酶/信號轉導及轉錄激活因子（JAK/STAT）信號通路在Th17細胞的分化和功能中也起著重要作用。IL-6、IL-21等細胞因子與Th17細胞表面受體結合后，可激活JAK激酶，進而磷酸化STAT蛋白。磷酸化的STAT蛋白形成二聚體，進入細胞核，調節(jié)相關基因的表達。在慢性乙型肝炎中，JAK/STAT信號通路的異常激活可能導致Th17細胞的過度分化和功能增強，加重免疫炎癥損傷。磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信號通路也可能參與Th17細胞介導的免疫炎癥反應。該信號通路在細胞的增殖、存活和代謝等過程中發(fā)揮重要作用。在Th17細胞中，PI3K/AKT信號通路的激活可能促進細胞的增殖和存活，增強其免疫炎癥效應。然而，目前對于這些信號通路在慢性乙型肝炎中的確切作用機制和相互關系還需要進一步深入研究。Th17細胞介導的信號通路在慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷中發(fā)揮著關鍵作用。NF-κB和MAPK等信號通路通過調節(jié)Th17細胞的活化、分化及其相關細胞因子的分泌，影響肝臟細胞和免疫細胞的功能，從而加劇肝臟的炎癥反應和組織損傷。深入研究這些信號通路的作用機制，有助于進一步揭示慢性乙型肝炎的發(fā)病機制，為開發(fā)新的治療靶點和策略提供理論依據(jù)。五、基于Th17細胞的慢性乙型肝炎治療策略探討5.1調節(jié)Th17細胞功能的潛在治療方法基于Th17細胞在慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷中的關鍵作用，調節(jié)Th17細胞功能成為潛在的治療策略，主要包括抑制Th17細胞分化、增殖和活性，以及增加調節(jié)性T細胞（Treg）水平以調節(jié)Th17/Treg平衡等方面。在抑制Th17細胞分化、增殖和活性方面，針對IL-17的中和抗體是研究的熱點之一。IL-17作為Th17細胞分泌的關鍵促炎細胞因子，在慢性乙型肝炎的免疫炎癥損傷中發(fā)揮著重要作用。有研究在體外實驗中，將IL-17中和抗體加入到慢性乙型肝炎患者外周血單個核細胞（PBMCs）的培養(yǎng)體系中，發(fā)現(xiàn)Th17細胞的分化受到抑制，IL-17等細胞因子的分泌顯著減少。在動物實驗中，構建慢性乙型肝炎小鼠模型，給予小鼠注射IL-17中和抗體，結果顯示小鼠肝臟內(nèi)的炎癥細胞浸潤明顯減少，肝細胞損傷減輕，肝功能得到改善。這表明IL-17中和抗體可以通過抑制Th17細胞的功能，減輕慢性乙型肝炎的免疫炎癥損傷。目前，一些針對IL-17的中和抗體已經(jīng)進入臨床試驗階段，用于治療自身免疫性疾病和炎癥性疾病，雖然在慢性乙型肝炎治療方面尚未廣泛應用，但為其治療提供了新的思路。