1T/XXXXXXX—XXXX八角茴香中黃曲霉毒素B:的快速測(cè)定本文件描述了八角茴香中黃曲霉毒素B1的快速檢測(cè)方法。本文件適用于八角茴香中黃曲霉毒素B1的快速定性測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB5009.22-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中黃曲霉毒素B族和G族的測(cè)定GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。八角staranise中國(guó)藥典2020年版名稱為八角茴香（AnisiStellatiFructus為木蘭科植物八角茴香（IlliciumverumHook.f.）的干燥成熟果實(shí)，亦稱八角茴香、大茴香等，原產(chǎn)于我國(guó)，主要分布于廣西、云南、廣東等省區(qū)，越南、泰國(guó)等東盟國(guó)家也有種植。4原理本方法采用競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析原理,樣品中的黃曲霉毒素B1經(jīng)提取與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合,抑制了抗體和試紙條中檢測(cè)線(T線)上抗原的結(jié)合,從而導(dǎo)致檢測(cè)線(T線)顏色深淺的變化。通過檢測(cè)線(T線)與控制線(C線)顏色深淺比較,對(duì)樣品中黃曲霉毒素B1進(jìn)行定性判定。5試劑和材料5.1試劑5.1.1除另有說明外，本方法所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水符合GB/T6682中三級(jí)水的要求。5.1.2乙腈5.2標(biāo)準(zhǔn)品表1黃曲霉毒素B1中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量AflatoxinBCHO5.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制5.3.1黃曲霉毒素B1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100μg/mL）：稱取5mg（精確至0.0001g）黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)參考（5.2），置于50mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度；或采用經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)溶液。T/XXXXXXX—XXXX25.3.2黃曲霉毒素B1的標(biāo)準(zhǔn)工作液（2μg/mL）：精密量取黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100μg/mL）1mL于50mL容量瓶，用乙腈定容至刻度。5.4材料可選用黃曲霉毒素B1快速檢測(cè)試劑盒（含試紙條、微孔試劑、樣品稀釋液、說明書），需在室溫、密封、干燥、避光保存。6儀器設(shè)備6.1電子天平：感量為0.0001g6.2移液器：量程1mL、10mL7分析步驟7.1試樣制備7.1.1將待檢的八角樣品均勻粉碎，過20目篩網(wǎng)，稱取5.0g±0.05g樣本于50mL離心管中，加入10mL乙腈，振蕩3min，于離心機(jī)中4000r/min離心5min，制成待測(cè)液備用。7.1.2取500μL上清液在60℃下氮?dú)獯蹈?，?mL樣本稀釋液復(fù)溶后，于離心機(jī)中4000r/min離心3min，制成待測(cè)液備有。7.2測(cè)定步驟7.2.1取200μL待測(cè)液到微孔試劑中，緩慢抽吸至檢測(cè)樣本與微孔試劑混勻大約5~6次，孵育3min。7.2.2將標(biāo)記好的試紙條使印有LOGO手柄端向上，另一端向下浸入溶液中，反應(yīng)5min，判讀結(jié)果。7.2.3每批樣品應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)，將待測(cè)液用水代替，按照7.2.1和7.2.2與樣品同時(shí)操作。8結(jié)果判定8.1通則采用目視法，以黃曲霉毒素B1快速檢測(cè)試紙條說明書中結(jié)果判讀圖示進(jìn)行判讀，目視判讀示意圖如圖1所示，結(jié)果有以下幾種：a)陰性(-):T線顯色比C線顯色深或一樣深，表示樣品中待檢物質(zhì)濃度低于檢測(cè)限，或不含待檢物質(zhì)。b)陽(yáng)性(+):T線顯色比C線顯色淺，或T線未顯色，則表示樣品中待檢物質(zhì)濃度高于檢測(cè)限。c)質(zhì)控C線未顯色，表明操作過程不正確或試紙條已失效。圖1目視判定示意圖8.2質(zhì)控實(shí)驗(yàn)要求空白試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陰性，加標(biāo)質(zhì)控樣試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性。9性能指標(biāo)9.1檢出限3本方法的檢出限為5μg/kg。9.2靈敏度靈敏度≥98.3%9.3交叉反應(yīng)率玉米赤霉烯酮為1.1%、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇為1%、黃曲霉毒素M1為133.3%、赭曲霉毒素A為1.7%9.4假陰性率假陰性率＜1.7%。9.5假陽(yáng)性率假陽(yáng)性率＜2%。10.1本方法所述試劑、試劑盒信息及操作步驟是