四、生殖營(yíng)養(yǎng)學(xué)1．卵巢成熟和產(chǎn)卵后干物質(zhì)和脂類含量1〕南美白對(duì)蝦卵巢成熟過程中，成熟系數(shù)增加了8倍，干物質(zhì)含量由19.4%增至31.0%。無節(jié)幼體的干物質(zhì)含量為18.8±0.2%。在到達(dá)完全成熟之前，日本對(duì)蝦和斑節(jié)對(duì)蝦等養(yǎng)殖蝦類卵巢中的總脂類和干物質(zhì)含量持續(xù)增長(zhǎng)，而南美白對(duì)蝦卵巢中的干物質(zhì)和成熟系數(shù)在3天之內(nèi)就迅速增加，甚至每天每個(gè)卵巢增加干重0.5克之多。2〕隨著性腺發(fā)育，中腸腺中的總脂類含量下降，但其下降卻不始于性腺成熟初期。在中腸腺的脂類耗盡之前，卵巢既積累了脂類，這與以前認(rèn)為中腸腺是脂類貯藏和加工的主要器官有所不同，說明卵巢中的某些脂類可能還來自蝦體的其它部位。3〕產(chǎn)后親蝦卵巢中總脂類含量明顯減少，說明脂類轉(zhuǎn)移到了后代。無節(jié)幼體的總脂量高于發(fā)育成熟的卵巢。2.卵巢成熟期間和產(chǎn)后的脂肪酸組成1〕中腸腺中的主要脂肪酸為16：0，16：1n-7,18:0,18:1n-7,18:1n-9,20:4n-6(ARA),20:5n-3(EPA)和22:6n-3(DHA),其中n-3HUFA約占20%，n-3FA為n-6FA的2倍,且在卵巢成熟過程中變化很小。從1期至4期，中腸腺中15：0和17：0的含量降低，飽和脂肪酸〔SFA〕的比例和PUFA及n-3HUFA的總量比較恒定。只有單不飽和脂肪酸〔MUFA〕的總量在4期時(shí)高于0期；DHA/EPA之比由1期到2期下降；產(chǎn)后n-3系列FA及其與DHA的比例減少。2〕卵巢和無節(jié)幼體中脂肪酸的組成與中腸腺相似，即n-3HUFA的含量和n-3/n-6比例較高。但卵巢中n-3/n-6比中腸腺高，且性成熟期間卵巢中許多脂肪酸的含量變化顯著：14：0和16：0中度增加，15：00有多有少；SFA的總比例不變；16：1n-7增加，18：1n-7波動(dòng)，18:1n-9減少；MUFA和22：n-6增加，而ARA減少，22：5n-6波動(dòng)；隨著性成熟n-6FA減少，導(dǎo)致PUFA總比例下降；n-3FA和n-3HUFA總量不變。產(chǎn)后親蝦脂肪酸組成沒有顯著變化，無節(jié)幼體的脂肪酸組成與成熟卵相同。3.卵巢成熟期間和產(chǎn)后維生素的含量卵巢成熟期間脂類和蛋白質(zhì)代謝動(dòng)力學(xué)飼料中的三酰甘油酯和磷酸甘油酯在肝胰臟分泌的非膽固醇乳化劑和脂酶的作用下，于前腸內(nèi)水解，分解成小分子肽和游離氨基酸，立即為中腸細(xì)胞所吸收。吸收的游離脂肪酸和甘油酯轉(zhuǎn)化成磷酸甘油酯，作為高密度脂蛋白的成分輸入血淋巴〔餐后1~6小時(shí)〕。大局部單酰甘油酯、溶血磷酸甘油酯、游離脂肪酸、類胡蘿卜素和糖等隨消化液進(jìn)入肝胰臟腔，為R-細(xì)胞吸收。某些飼料蛋白和氨基酸也可被R-細(xì)胞吸收，大局部為F-細(xì)胞所吸收。肝胰臟中的脂肪酸也可以高密度脂蛋白中主要脂類---磷酸甘油酯的形式輸入到血淋巴中〔餐后12~24小時(shí)〕。通常輸出的脂肪酸和蛋白質(zhì)主要有兩種來源。性成熟期間，肝胰臟中的某些R-細(xì)胞特化成卵黃發(fā)生細(xì)胞〔R-細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和作用見本章第四節(jié)〕，主要合成卵黃蛋白——卵黃磷蛋白。卵黃磷蛋白與多不飽和磷酸甘油酯結(jié)合。脂發(fā)動(dòng)成高密度脂蛋白后由肝胰臟輸出，使肝胰臟中總脂、蛋白和糖原含量減少，血淋巴中磷酸甘油酯增加。卵巢成熟期間脂類和蛋白質(zhì)代謝動(dòng)力學(xué)五、對(duì)蝦的免疫系統(tǒng)

進(jìn)化：?jiǎn)渭?xì)胞原生動(dòng)物的吞噬、銷毀和排斥異物作用，環(huán)節(jié)動(dòng)物、軟體動(dòng)物和節(jié)肢動(dòng)物，其體腔液或淋巴液內(nèi)生成血凝素、溶血素和殺菌物質(zhì)等，皆可非特異性地殺滅病原，去除有害物質(zhì)，但無特異性抗體反響。原索動(dòng)物產(chǎn)生了特有的脊索、咽鰓裂、背管狀神經(jīng)索、淋巴小結(jié)及分化的白細(xì)胞〔初級(jí)淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞等〕。七鰓鰻和八目鰻只具有原始的不完全的胸腺、不完善的淋巴結(jié)和由T細(xì)胞引起的異體移植排斥反響和B細(xì)胞產(chǎn)生少量IgM類抗體。軟骨魚類和硬骨魚類，胸腺和脾發(fā)育較完全，生成初級(jí)分化的T細(xì)胞和B細(xì)胞，具有一定的免疫記憶。兩棲類和爬行類胸腺分化出皮質(zhì)與髓質(zhì)，生成典型的淋巴結(jié)，T細(xì)胞和B細(xì)胞完全分化，具有特異性細(xì)胞免疫和體液免疫，可產(chǎn)生IgM和IgG兩類抗體，T細(xì)胞還有了亞群的分化。鳥類有腔上囊淋巴組織，抗體增至IgM、IgG和IgA三類。到哺乳動(dòng)物抗體已達(dá)IgM、IgD、IgG、IgA和IgE五種，由T細(xì)胞、B細(xì)胞產(chǎn)生，分化成各亞群和免疫活性因子，并與單核巨噬細(xì)胞系、正常體液的防護(hù)因子聯(lián)合作用形成完整、協(xié)調(diào)的免疫防御系統(tǒng)。蝦蟹：組成：免疫功能的器官〔甲殼、鰓、血竇、淋巴等〕、組織、細(xì)胞、免疫效應(yīng)分子及相關(guān)。由血細(xì)胞及存在于或從血細(xì)胞釋放到血漿中的多種因子的活性產(chǎn)生.體液免疫分類：為原始的非特異性的半免疫性防御系統(tǒng)細(xì)胞免疫體液免疫由起防御作用的分子組成，而不涉及細(xì)胞，盡管有些分子源于并儲(chǔ)存于血細(xì)胞中。細(xì)胞免疫那么由血細(xì)胞直接參與。特點(diǎn)：體液和血液混在一起的開放式循環(huán)系統(tǒng)，沒有血紅細(xì)胞，但有白細(xì)胞的類似物〔通常稱為血細(xì)胞hemocyte〕。顆粒細(xì)胞〔granularcell,GC〕白細(xì)胞的類似物半顆粒細(xì)胞〔semi-granularcell,SGC〕透明細(xì)胞〔hyalinecell〕顆粒中含有許多種具有免疫活性的蛋白分子.非特異性免疫細(xì)胞免疫:由血細(xì)胞及存在于或從血細(xì)胞釋放到血漿中的多種因子的活性產(chǎn)生。細(xì)胞為防御外來微生物侵襲的主要屏障。體腔免疫：主要指酚氧化酶原系統(tǒng)的激活、凝集素的凝集作用和產(chǎn)生抗菌肽、溶菌酶以及溶血素等免疫因子。特點(diǎn)：血細(xì)胞既是細(xì)胞免疫的承擔(dān)者，又是體液免疫因子的提供者；體腔免疫因子可以在血細(xì)胞中合成并釋放，細(xì)胞免疫又受體液因子的介導(dǎo)和影響。新發(fā)現(xiàn)的免疫因子：1.對(duì)蝦抗菌肽〔penaeidins〕：血細(xì)胞內(nèi)合成2.血藍(lán)蛋白：廣譜抗真菌，補(bǔ)充penaeidins3.抗微生物肽：1類抗微生物肽(astacidin1);對(duì)蝦的陰離子抗微生物肽〔可能是血藍(lán)蛋白的裂解片段〕4.免疫相關(guān)因子：抗脂多糖因子〔anti-lipopolysacharidefactor〕、絲蛋白酶抑制因子(serineproteaseinhibitor)、penaeidins、11.5kD抗菌蛋白〔antimicrobialprotein〕、抗酚氧化酶(prophenoloxidasete)、熱休克蛋白70〔Hsp-70〕和熱休克蛋白90〔Hsp-90〕。

熱休克蛋白(heatshockprotein)：保守的蛋白分子家族——管家蛋白(house-keepingprotein)、媒人蛋白(matchmarkerprotein)、分子伴侶(molecularchaperone)。環(huán)境與病害嚴(yán)重加劇了對(duì)熱休克蛋白的研究。半免疫反響：活下來的病蝦能產(chǎn)生抗病毒力——黃海1號(hào)等的選育。中國(guó)對(duì)蝦甲殼結(jié)構(gòu)和鰓的結(jié)構(gòu)

(a)頭胸甲甲殼〔橫切〕；(b)頭胸甲甲殼層〔橫切〕；(c)枝鰓橫切；(d)鰓絲縱切；(e)鰓過濾碳素顆粒；(f)鰓血竇。中國(guó)對(duì)蝦的淋巴器官1.腸；2.肝胰贓；3.淋巴器；4.胃后腔；5.胃前腔。

中國(guó)對(duì)蝦淋巴器官的組織和細(xì)胞

(a)淋巴器官的輸入淋巴管，示周細(xì)胞和膜下血竇；(b)淋巴器官的實(shí)質(zhì)局部及連接肝胰臟的輸出淋巴管；(c)充填小管間的血竇；(d)淋巴器官的實(shí)質(zhì)及深入實(shí)質(zhì)中的小梁；(e)淋巴器官的被膜和實(shí)質(zhì)中的小管；(f)正在分裂中的淋巴細(xì)胞。中國(guó)對(duì)蝦淋巴器官的組織和細(xì)胞

(a)在毛細(xì)小管中循環(huán)的血細(xì)胞；(b)血竇中的血細(xì)胞；(c)心臟中的血細(xì)胞〔常規(guī)染色〕；(d)心臟組織經(jīng)H.E.染色示血細(xì)胞；(e)吉薩姆染色的血細(xì)胞；(f)吞噬碳素顆粒的心臟血細(xì)胞。對(duì)蝦防御和免疫機(jī)理一、甲殼的機(jī)械屏障作用二、濾過作用濾集在鰓、血竇和淋巴器官中，防止其擴(kuò)散。攜帶異物的血淋巴經(jīng)鰓管入鰓軸，再經(jīng)二級(jí)血管進(jìn)入二叉分枝的鰓絲中，異物被濾在鰓血竇和鰓絲末端膨大的囊狀結(jié)構(gòu)中。在正常情況下，這些囊狀結(jié)構(gòu)是空的，沒有血細(xì)胞游走；有異物存在時(shí)，鰓腔中的血細(xì)胞游走到頂端結(jié)構(gòu)中進(jìn)行吞噬作用，去除異物，或到蛻皮時(shí)一同蛻掉。定期檢查鰓腔中血細(xì)胞數(shù)量可監(jiān)測(cè)病害的發(fā)生。三、甲殼動(dòng)物對(duì)異物的識(shí)別四、細(xì)胞調(diào)節(jié)的防御反響對(duì)蝦血細(xì)胞吞噬過程示意圖

與病原接觸初期經(jīng)氧化殺死的主要反響與病原接觸凝集素激活NAD〔P〕H-氧化酶

耗氧增加

超氧化物酶、羥基自由基、單線態(tài)氧和過氧化氫

直接過氧化物酶+Halides與幾種溶酶體酶協(xié)同作用

hypohalides和halidamine

殺死細(xì)胞調(diào)節(jié)的防御反響

1．防御準(zhǔn)備細(xì)胞防御作用包括吞噬、包囊和結(jié)節(jié)形成等過程。吞噬又包括附著、吞入和摧毀三個(gè)過程；包囊是細(xì)胞層包圍外來物的過程，通常出現(xiàn)在寄生物過大，吞噬過程難以吞入的情況下；結(jié)節(jié)形成類似于膠囊生成〔capsuleformation〕，發(fā)生在侵入的細(xì)菌數(shù)量太多的時(shí)候。節(jié)肢動(dòng)物的包囊和結(jié)節(jié)總是黑色的。對(duì)蝦沒有針對(duì)特殊表位的免疫反響即免疫球蛋白，但有識(shí)別外來微生物的球蛋白，如脂多糖和β-1，3葡聚糖結(jié)合蛋白〔βGBP〕等，能識(shí)別進(jìn)入體內(nèi)的真菌糖。βGBP結(jié)合了葡聚糖〔如海帶多糖〕后能增強(qiáng)酚氧化酶原〔proPO〕系統(tǒng)的作用，放大吞噬等作用。2．殺滅和消除外來物吞噬細(xì)胞、血細(xì)胞和淋巴細(xì)胞在病原體等異物刺激下，伸出偽足形成吞噬體，再與含有大量水解酶類的溶酶體融合形成吞噬溶酶體。溶酶體內(nèi)的酶和活性氧可殺死并分解病原體。與病原接觸激活了寄主的NAD〔P〕H-氧化酶，增加了耗氧，產(chǎn)生了超氧化物酶、羥基自由基、單線態(tài)氧和過氧化氫。這些短周期化合物直接毒害病原，與過氧化物酶產(chǎn)生的hypohalides和halidamine協(xié)力，即與幾種溶酶體酶發(fā)揮協(xié)同作用。3．血細(xì)胞和肝胰臟RNA的免疫基因文庫影響對(duì)蝦免疫反響的因子蝦病的發(fā)生世界不同地區(qū)對(duì)蝦的主要疾病

印度、太平洋和東亞美洲病毒病細(xì)、霉菌病其它病病毒病細(xì)、霉菌病其它病白點(diǎn)病類黃頭病類桿狀病毒中腸腺壞死?。˙MN）斑節(jié)對(duì)蝦型桿狀病毒?。∕BV）皮下及造血組織壞死病毒?。↖HHNV）肝胰臟細(xì)小病毒?。℉PV）呼腸病毒?。≧EO）弧菌?。骸獢⊙我扰K壞死—育苗期弧菌病—發(fā)光弧菌病立克次氏體幼體真菌病鐮孢菌病外共棲生物：—Leucothrixmucor—有緣毛的原生動(dòng)物（含擬阿腦蟲病）**簇毛蟲微孢子蟲營(yíng)養(yǎng)失衡毒物中毒癥環(huán)境綜合癥拖拉癥(TaurasyndromeTS皮下及造血組織壞死病毒病(IHHNV)桿狀對(duì)蝦病毒病(BP)白點(diǎn)病類?黃頭病類?肝胰臟細(xì)小病毒?。℉PV）呼腸病毒病REO-Ⅲ淋巴器官液泡化?。↙OVV）對(duì)蝦彈狀病毒（RPS）弧菌?。骸猄indromeGaviota—育苗期弧菌病—發(fā)光弧菌病—?dú)げHP細(xì)菌病幼體真菌病鐮孢菌病外共棲生物：—Leucothrixmucor—有緣毛的原生動(dòng)物簇毛蟲微孢子蟲營(yíng)養(yǎng)失衡毒物中毒癥環(huán)境綜合癥Ⅱ期蚤狀幼體綜合癥蝦病的診斷1．血液學(xué)和臨床化學(xué)包括；血細(xì)胞數(shù)、凝血時(shí)間、血液中葡萄糖、氮、氨、血清谷-草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶和血液總量等血液指標(biāo)也是對(duì)蝦和龍蝦傳染性疾病的重要指標(biāo)，但只有血淋巴凝固時(shí)間和血球數(shù)量變化可用于蝦病診斷。2．組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)法是鑒定有鰭魚類大多數(shù)病毒的主要方法，目前至少有5種病毒活細(xì)胞。許多甲殼動(dòng)物〔對(duì)蝦、蟹、龍蝦〕研究者試圖研制細(xì)胞株，通過組織培養(yǎng)來鑒別對(duì)蝦病毒，雖然有些報(bào)道聲稱獲得了成功[8]，但目前尚未應(yīng)用到對(duì)蝦病毒的診斷中。3．毒力學(xué)分析方法對(duì)蝦的非傳染性疾病可用毒理學(xué)分析方法來診斷。例如，中毒性病癥可根據(jù)特殊病理的組織斑塊來確疹：藍(lán)藻中毒引起血細(xì)胞性腸炎〔中腸出現(xiàn)炎癥斑〕；農(nóng)用殺霉菌劑〔benomyl〕中毒時(shí)肝胰臟中出現(xiàn)特殊的瘀點(diǎn)；黃曲霉毒素病和某些黑鰓和黑殼病也具有特殊的組織病癥；殘餌和排泄物污染使酚氧化酶、SOD和溶菌酶活力下降[9]；肌肉痙攣、軟殼、胡蘿卜素缺乏、維生素C缺乏癥等都具有特殊的組織學(xué)病癥，要依病史和檢查結(jié)果來確診。4．血清學(xué)方法血清學(xué)診斷已用于對(duì)蝦病原的診斷。目前已研制出幾種弧菌和病毒的單克隆〔MAB〕和多克隆抗體〔PAB〕來診斷對(duì)蝦病原。如創(chuàng)傷弧菌〔Vibriovulnificus〕和哈氏弧菌〔V.harveyi〕的酶標(biāo)記免疫吸附測(cè)定法〔ELISA〕；解藻朊酸弧菌〔V.alginolyticus〕、副溶血弧菌〔V.parahaemolyticus〕、創(chuàng)傷弧菌和哈氏弧菌的單克隆抗體；日本對(duì)蝦中腸腺壞死狀病毒〔BMN〕的熒光對(duì)氨基苯甲酸檢測(cè)〔PAB〕；對(duì)蝦桿狀病毒〔BP〕的ELISA法。目前正在完善IHHNV、HPV、YHA、BP和WSSV的單克隆抗體，解決ELISA中免疫球蛋白〔IGM〕Mab與正常組織成分的非特異性反響問題，以提高診斷準(zhǔn)確性。蝦病的診斷5．分子方法第一代IHHNV基因探針是從患病的南美白對(duì)蝦IHHNV中提純ssDNA，將其“正〞和“負(fù)〞鏈分配成dsDNA，再把dsDNA的“純端〞拉長(zhǎng)成載體PUC18，最后在大腸埃希氏桿菌〔E.coli〕-DH-5細(xì)胞中克隆而成。從已克隆的IHHNVDNA片段文庫中選出了5個(gè)2.0Kbp或更大一些的DNA克隆進(jìn)一步研究。它們分別稱為BS4.5、BG45、BA401、BA402和DR22，這其中的4個(gè)分別含有2.3,2.0,3.2和2.2kbp插入片段。按照其限制酶譜組裝在一起，這5個(gè)克隆約相當(dāng)于95%4.1kbIHHNV的ssDNA基因組。設(shè)備先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)室曾用放射標(biāo)記的基因探針來診斷對(duì)蝦病原，后來用非放射性的GeniusTMI試劑盒基因探針診斷對(duì)蝦病毒病。這種探針含有異羥洋地黃酶苷元-11dUTP〔DIG〕作DNA標(biāo)記物，最終用ELISA系統(tǒng)檢測(cè)，制造出了IHHNV的非放射性DIG基因探針診斷盒，商品名為ShrimpProbesbyDiagX-otics(Wilton,C.T.USA)。6．形態(tài)與生態(tài)結(jié)合法IHHNV是目前最小的對(duì)蝦病毒，而且東、西半球的差異較大。對(duì)蝦桿狀病毒〔BP〕的大小介于IHHNV和WSSV之間，且在南美洲自北向南、在美國(guó)自西向東減小，很可能有2或3個(gè)品系。幾種主要對(duì)蝦病毒的形態(tài)比較病毒病毒粒子規(guī)格核酸說明IHHNVTSVBPWSSV20-22nm,正二十面體150×450nm;250×70nm31-32nm,正二十面體55-57nm有囊膜，桿狀78×338nm75×316nm68×35456×286nm83×275nm8