Survivin與VEGF在腎癌中的表達、關(guān)聯(lián)及臨床意義研究一、引言1.1研究背景腎癌，又稱腎細胞癌，是泌尿系統(tǒng)中常見的惡性腫瘤之一。在全球范圍內(nèi)，腎癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，嚴重威脅著人類的健康。據(jù)統(tǒng)計，腎癌約占人類惡性腫瘤的3％，位居發(fā)達國家惡性腫瘤前十位。2008年，全世界新發(fā)腎癌病例約271000例，居惡性腫瘤第13位，因腎癌死亡人數(shù)達116000例。在我國，腎癌發(fā)病率同樣呈現(xiàn)上升態(tài)勢，高發(fā)年齡為50-70歲。全國腫瘤防治研究辦公室和衛(wèi)生部衛(wèi)生統(tǒng)計信息中心對1988-2002年數(shù)據(jù)較為齊全的11個登記處的腎癌患者資料進行統(tǒng)計分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)各地區(qū)腎癌的發(fā)病率及病死率差異較大，城市地區(qū)高于農(nóng)村地區(qū)。以男性為例，2002年男性腎癌發(fā)病率最高的地區(qū)為杭州、北京、上海，均在8.0/10萬以上，而發(fā)病率最低的廣西扶綏僅為0.2/10萬，相差40倍。盡管醫(yī)學技術(shù)不斷進步，但腎癌的治療現(xiàn)狀仍不容樂觀，手術(shù)切除是獲得治愈的主要手段，然而20％-30％的腎癌初診時已發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，20％患者術(shù)后隨訪出現(xiàn)復發(fā)或轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移性腎癌預后很差，晚期腎癌的中位生存時間僅7-11個月，總的腎癌5年生存率約10%。因此，深入研究腎癌的發(fā)病機制，尋找有效的診斷和治療靶點具有重要的臨床意義。在腫瘤研究領(lǐng)域，Survivin和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）備受關(guān)注。Survivin屬于凋亡抑制蛋白家族新成員，具有抑制細胞凋亡和調(diào)節(jié)細胞分裂的雙重功能。它是腫瘤特異性凋亡抑制因子，高表達于多種腫瘤組織，而在正常成人組織中未見表達。眾多研究表明，Survivin在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起關(guān)鍵作用，可作為估計腫瘤預后和復發(fā)的重要指標。在乳腺癌、肺癌等多種惡性腫瘤中，Survivin的高表達與腫瘤的惡性程度、轉(zhuǎn)移潛能以及不良預后密切相關(guān)。例如，在乳腺癌研究中發(fā)現(xiàn)，Survivin表達水平越高，腫瘤細胞的增殖能力越強，患者的生存率越低。VEGF是一種高度特異性的促血管內(nèi)皮細胞生長因子，具有促進血管通透性增加、細胞外基質(zhì)變性、血管內(nèi)皮細胞遷移、增殖和血管形成等作用。它是胚胎發(fā)育和血管生長、修復的關(guān)鍵，同時在腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移過程中扮演著重要角色。腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移依賴于新生血管提供營養(yǎng)和氧氣，VEGF能夠誘導腫瘤組織的血管生長，增加腫瘤血供，進而促進腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。臨床上，通過檢測腫瘤患者血液或組織中的VEGF水平，有助于評估腫瘤的惡性程度和預后。例如，在結(jié)直腸癌患者中，VEGF高表達的患者更容易出現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移，生存期也相對較短。鑒于腎癌的嚴峻現(xiàn)狀以及Survivin和VEGF在腫瘤研究中的重要地位，探討Survivin及VEGF在腎癌中的表達及相互關(guān)系，對于揭示腎癌的發(fā)病機制，尋找新的診斷標志物和治療靶點具有重要的理論和實踐意義。本研究旨在通過檢測腎癌組織和正常腎組織中Survivin及VEGF的表達情況，分析其與腎癌臨床病理特征的相關(guān)性，并探討兩者之間的相互關(guān)系，為腎癌的早期診斷、靶向治療及預后評估提供理論依據(jù)。1.2研究目的與意義腎癌作為泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢，嚴重威脅人類健康。目前，腎癌的治療仍面臨諸多挑戰(zhàn)，如早期診斷困難、對放化療不敏感、易復發(fā)轉(zhuǎn)移等。因此，深入研究腎癌的發(fā)病機制，尋找有效的診斷和治療靶點具有重要的臨床意義。Survivin和VEGF在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。Survivin作為凋亡抑制蛋白家族的成員，通過抑制細胞凋亡和調(diào)節(jié)細胞分裂，促進腫瘤細胞的增殖和存活。VEGF作為一種重要的促血管生成因子，能夠促進腫瘤血管的生成，為腫瘤細胞提供營養(yǎng)和氧氣，從而促進腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。已有研究表明，Survivin和VEGF在多種腫瘤組織中高表達，且與腫瘤的惡性程度、轉(zhuǎn)移潛能以及不良預后密切相關(guān)。然而，Survivin和VEGF在腎癌中的表達情況及其相互關(guān)系尚未完全明確。本研究旨在通過檢測腎癌組織和正常腎組織中Survivin及VEGF的表達水平，分析其與腎癌臨床病理特征的相關(guān)性，探討兩者之間的相互關(guān)系，為腎癌的早期診斷、靶向治療及預后評估提供理論依據(jù)。具體研究目的如下：檢測腎癌組織和正常腎組織中Survivin及VEGF的表達情況，比較兩者在表達水平上的差異。分析Survivin及VEGF的表達與腎癌患者臨床病理特征（如腫瘤大小、病理分級、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等）的相關(guān)性，探討其在腎癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。研究Survivin與VEGF在腎癌組織中的表達是否存在相互關(guān)系，進一步揭示腎癌的發(fā)病機制。本研究的意義在于：一方面，有助于深入了解腎癌的發(fā)病機制，為腎癌的基礎(chǔ)研究提供新的思路和方向；另一方面，通過檢測Survivin和VEGF的表達，有望為腎癌的早期診斷、靶向治療及預后評估提供新的生物標志物和治療靶點，提高腎癌的診治水平，改善患者的預后。二、腎癌概述及研究現(xiàn)狀2.1腎癌的基本概念與分類腎癌，從廣義層面而言，是指發(fā)生于腎臟的惡性腫瘤。在泌尿系統(tǒng)腫瘤中，腎癌占據(jù)著重要地位，其發(fā)病率在泌尿系統(tǒng)腫瘤中位居前列，僅次于前列腺癌和膀胱癌，約占成人惡性腫瘤的2％-3％。隨著環(huán)境變化、生活方式改變等因素的影響，腎癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，嚴重威脅著人類的健康。腎癌的類型豐富多樣，其中腎細胞癌最為常見，約占腎臟惡性腫瘤的80%-90%。腎細胞癌又稱腎腺癌，起源于腎上皮細胞，其最常見的組織病理類型為透明細胞癌，在腎細胞癌中占比達70％-80％。透明細胞癌的癌細胞在顯微鏡下呈現(xiàn)出空泡樣改變，猶如透光之感，故而得名。其發(fā)病機制與抑癌基因VonHippel-Lindau綜合征（VHL）的突變密切相關(guān)。正常情況下，VHL蛋白與缺氧誘導因子（HIF-α）結(jié)合并促使其降解，以維持HIF-α的低水平狀態(tài)。然而，當出現(xiàn)缺氧狀況或VHL基因突變致使VHL蛋白失活時，HIF-α便無法通過VHL蛋白介導的泛素降解途徑進行降解，從而在細胞質(zhì)內(nèi)大量積聚。隨后，HIF-α進入細胞核，與HIF-β共價結(jié)合形成具有轉(zhuǎn)錄活性的二聚體，進而上調(diào)下游一系列靶基因的表達，如血管生長因子（VEGF）、血小板衍生生長因子（PDGF）等，這些基因的表達上調(diào)會推動血管新生、細胞增殖以及能量代謝，最終導致腎癌的發(fā)生與發(fā)展。除透明細胞癌外，腎細胞癌還包括乳頭狀腎細胞癌、嫌色細胞癌、集合管癌等少見類型。乳頭狀腎細胞癌約占腎細胞癌的10%-15%，其癌細胞呈乳頭狀排列，發(fā)病機制與MET基因的異常激活等因素有關(guān)。嫌色細胞癌占腎細胞癌的4%-10%，癌細胞具有豐富的嗜酸性胞質(zhì)，細胞膜清晰，在電鏡下可見細胞內(nèi)有大量的線粒體。集合管癌較為罕見，僅占腎細胞癌的1%-2%，起源于腎集合管上皮細胞，惡性程度較高，預后較差。腎盂癌也是腎癌的一種類型，它起源于腎盂黏膜上皮，發(fā)病率相對較低，約占腎臟惡性腫瘤的5%-10%。腎盂癌的發(fā)病與長期接觸化學致癌物質(zhì)、吸煙、慢性炎癥刺激等因素相關(guān)。其病理類型主要包括移行細胞癌、鱗狀細胞癌和腺癌，其中移行細胞癌最為常見，約占腎盂癌的80%-90%。此外，腎癌還涵蓋腎母細胞瘤、腎臟肉瘤和腎轉(zhuǎn)移瘤等較為少見的類型。腎母細胞瘤多發(fā)生于兒童，是兒童最常見的腎臟惡性腫瘤，其發(fā)病與WT1、WT2等基因的突變有關(guān)。腎臟肉瘤起源于腎臟的間質(zhì)組織，如平滑肌、脂肪、纖維組織等，發(fā)病率極低，惡性程度高，預后差。腎轉(zhuǎn)移瘤則是身體其他部位的惡性腫瘤轉(zhuǎn)移至腎臟所致，常見的原發(fā)腫瘤包括肺癌、乳腺癌、胃腸道癌等。2.2腎癌的發(fā)病機制與危險因素盡管醫(yī)學研究不斷深入，但腎癌的發(fā)病機制目前尚未完全明確，不過眾多研究表明，腎癌的發(fā)生是一個涉及多種因素、多步驟的復雜過程，與遺傳因素、生活方式以及環(huán)境因素等密切相關(guān)。在遺傳因素方面，家族性腎癌在所有腎癌病例中雖占比僅2％-4％，卻具有明確的遺傳傾向。目前已發(fā)現(xiàn)多個與家族性腎癌相關(guān)的基因，如VHL基因、MET基因、FH基因等。以VHL綜合征相關(guān)腎癌為例，其發(fā)病與VHL基因的突變緊密相連。當VHL基因發(fā)生突變時，會導致VHL蛋白功能異常，無法有效降解缺氧誘導因子（HIF），進而使HIF在細胞內(nèi)大量積聚，激活下游一系列與血管生成、細胞增殖相關(guān)的基因表達，最終促使腎癌的發(fā)生。研究表明，約70%-80%的散發(fā)性透明細胞腎癌中也存在VHL基因的異常改變，這充分顯示了VHL基因在腎癌發(fā)病機制中的關(guān)鍵作用。而在遺傳性乳頭狀腎癌中，MET基因的激活突變是主要的致病原因。MET基因編碼的蛋白是一種受體酪氨酸激酶，其突變會導致該激酶持續(xù)激活，引發(fā)細胞內(nèi)一系列信號通路的異?；罨龠M細胞的增殖、遷移和侵襲，從而導致腎癌的發(fā)生。生活方式因素對腎癌的發(fā)病也有著顯著影響。吸煙是目前公認的導致腎癌的重要危險因素之一，吸煙者患腎癌的風險相較于非吸煙者高出兩倍之多，且吸煙時間越長、煙量越大，發(fā)病風險越高。這是因為煙草中含有多種致癌物質(zhì)，如多環(huán)芳烴、亞硝胺等，這些物質(zhì)進入人體后，經(jīng)過一系列代謝轉(zhuǎn)化，會對腎臟細胞的DNA造成損傷，導致基因突變，進而引發(fā)細胞的異常增殖和癌變。肥胖同樣與腎癌的發(fā)生密切相關(guān)，肥胖人群患腎癌的概率比體重正常者高出約兩倍。肥胖會引起體內(nèi)激素水平失衡，如胰島素、胰島素樣生長因子-1（IGF-1）等水平升高，這些激素能夠促進細胞的增殖和生長。同時，肥胖還會導致慢性炎癥反應，炎癥因子的釋放會進一步損傷腎臟組織，增加腎癌的發(fā)病風險。另外，高血壓也是腎癌的一個重要危險因素，長期高血壓會導致腎臟血管壁增厚、硬化，影響腎臟的血液灌注和代謝功能，使腎臟細胞處于缺血、缺氧的微環(huán)境中，從而引發(fā)細胞的損傷和癌變。研究顯示，高血壓患者患腎癌的風險是血壓正常者的1.5-2倍。環(huán)境因素在腎癌的發(fā)病中也不容忽視。長期接觸某些化學物質(zhì)，如石棉、皮革制品、石油產(chǎn)品等，會顯著增加患腎癌的風險。這些有害物質(zhì)可通過呼吸道、皮膚等途徑進入人體，在體內(nèi)經(jīng)過代謝轉(zhuǎn)化后，產(chǎn)生具有致癌活性的代謝產(chǎn)物，這些代謝產(chǎn)物能夠與腎臟細胞內(nèi)的生物大分子，如DNA、蛋白質(zhì)等發(fā)生共價結(jié)合，形成加合物，導致DNA損傷、基因突變，最終引發(fā)腎癌。例如，石棉是一種廣泛應用于建筑、隔熱材料等領(lǐng)域的礦物質(zhì)纖維，長期吸入石棉纖維會導致肺部疾病，同時也與腎癌的發(fā)生相關(guān)。有研究表明，從事石棉相關(guān)職業(yè)的人群，腎癌的發(fā)病率明顯高于普通人群。從分子機制層面來看，腎癌的發(fā)生涉及多個信號通路的異常激活。除了前面提到的VHL-HIF信號通路外，Notch、核因子KB（NF-KB）、MAPK、PI3K/Akt等信號通路在腎癌的發(fā)生發(fā)展過程中也起著重要作用。在Notch信號通路中，Jaggedl配體和Notchl受體在腎癌組織中的表達顯著高于正常腎組織，且其表達水平與腫瘤的大小、分級、分期以及患者的預后密切相關(guān)。異常活化的Notchl信號可通過激活PI3K/Akt信號，促進腎癌細胞的增殖、黏附非依賴生長和G1-S期的細胞周期進展，進而推動腫瘤的生長。NF-KB信號通路在腫瘤細胞的增殖、存活、侵襲和轉(zhuǎn)移等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在腎癌中，基因PBRM1的缺失會導致異常蛋白復合體的形成，激活NF-KB信號通路，促使癌細胞生長相關(guān)基因的表達，從而引發(fā)腎癌。MAPK信號通路能夠?qū)⒓毎獾男盘杺鬟f到細胞核內(nèi)，調(diào)節(jié)細胞的增殖、分化和凋亡等過程。在腎癌中，MAPK信號通路的過度激活會導致細胞的異常增殖和癌變。PI3K/Akt信號通路在細胞的生長、存活和代謝等方面起著重要作用，其異常激活會促進腎癌細胞的增殖、存活和轉(zhuǎn)移。腎癌的發(fā)病機制是一個復雜的網(wǎng)絡，涉及遺傳、生活方式、環(huán)境等多種因素，以及多個分子信號通路的異常調(diào)控。深入研究這些因素和機制，對于揭示腎癌的發(fā)病本質(zhì)，尋找有效的預防、診斷和治療方法具有重要意義。2.3腎癌的臨床診斷與治療方法腎癌的早期癥狀往往不明顯，約50％的患者是在體檢時偶然發(fā)現(xiàn)的。隨著腫瘤的進展，患者可能會出現(xiàn)血尿、腰痛、腹部腫塊等典型癥狀，但此時病情多已發(fā)展至中晚期。因此，準確、及時的診斷對于腎癌的治療和預后至關(guān)重要。目前，臨床上常用的腎癌診斷手段主要包括影像學檢查和病理活檢。在影像學檢查方面，超聲檢查是一種常用的初步篩查方法。它具有操作簡便、無輻射、價格低廉等優(yōu)點，能夠發(fā)現(xiàn)腎臟內(nèi)直徑大于1cm的占位性病變。在超聲圖像上，腎透明細胞癌腫塊回聲多為等回聲或低回聲。超聲檢查對于腎癌的篩查和監(jiān)測具有重要意義，特別是對于那些有腎癌高危因素的人群，如長期吸煙、肥胖、有腎癌家族史等，定期進行超聲檢查有助于早期發(fā)現(xiàn)病變。然而，超聲檢查的準確性受到多種因素的影響，如檢查者的經(jīng)驗、設(shè)備的分辨率以及患者的體型等，對于一些較小的腫瘤或位于腎臟深部的腫瘤，可能存在漏診的情況。CT檢查是臨床診斷腎癌的主要手段之一，其具備較高的診斷特異度和敏感度。腹部平掃加增強CT掃描能夠清晰地顯示腎臟腫瘤的大小、位置、形態(tài)、密度以及與周圍組織的關(guān)系等信息，對于腎癌的診斷和分期具有重要價值。在CT圖像上，腎癌通常表現(xiàn)為腎臟實質(zhì)內(nèi)的低密度腫塊，增強掃描后腫瘤組織呈現(xiàn)不均勻強化。通過CT檢查，醫(yī)生可以準確判斷腫瘤是否侵犯周圍組織和器官，是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠處轉(zhuǎn)移等情況，從而為制定治療方案提供重要依據(jù)。例如，對于早期局限性腎癌，CT檢查能夠幫助醫(yī)生確定腫瘤的位置和大小，判斷是否適合進行保留腎單位的手術(shù)；對于晚期腎癌，CT檢查可以明確腫瘤的轉(zhuǎn)移情況，指導后續(xù)的綜合治療。MRI檢查在腎癌的診斷中也具有重要作用。它對軟組織的分辨力較高，能夠更好地顯示腫瘤與周圍血管、神經(jīng)等結(jié)構(gòu)的關(guān)系，對于一些復雜病例的診斷具有優(yōu)勢。在MRI圖像上，腎癌在T1WI上多表現(xiàn)為等信號或低信號，在T2WI上表現(xiàn)為高信號，增強掃描后腫瘤呈不均勻強化。MRI檢查還可以用于評估腎癌的侵犯范圍和分期，特別是對于那些CT檢查難以明確的病變，MRI檢查能夠提供更詳細的信息。此外，MRI檢查對于腎功能不全或?qū)Φ庠煊皠┻^敏的患者也是一種重要的檢查方法。除了上述影像學檢查方法外，腎動脈造影、PET-CT等檢查也可用于腎癌的診斷，但這些檢查方法通常在特定情況下使用。腎動脈造影主要用于評估腎臟腫瘤的血供情況，對于一些需要進行介入治療的患者具有重要意義；PET-CT則能夠全身顯像，對于檢測腎癌的遠處轉(zhuǎn)移具有較高的靈敏度，但由于其價格昂貴，且存在一定的輻射風險，一般不作為常規(guī)檢查手段。病理活檢是確診腎癌的金標準。通過獲取腫瘤組織進行病理檢查，可以明確腫瘤的病理類型、分級和分期等信息，為制定個性化的治療方案提供重要依據(jù)。目前，常用的病理活檢方法包括穿刺活檢和手術(shù)切除活檢。穿刺活檢是一種微創(chuàng)檢查方法，通過細針穿刺獲取腫瘤組織，具有操作簡便、創(chuàng)傷小等優(yōu)點，適用于無法手術(shù)切除或需要明確病理類型以指導治療的患者。然而，穿刺活檢也存在一定的局限性，如可能出現(xiàn)取材不足、誤診等情況。手術(shù)切除活檢則是在手術(shù)過程中直接切除腫瘤組織進行病理檢查，準確性較高，但創(chuàng)傷較大。在臨床實踐中，醫(yī)生會根據(jù)患者的具體情況選擇合適的病理活檢方法。在治療方法上，手術(shù)切除是局限性和局部進展性腎癌的主要治療手段，包括開放性、腹腔鏡或機器人輔助的腹腔鏡下保留腎單位的手術(shù)及根治性腎切除術(shù)。保留腎單位的手術(shù)適用于腫瘤較小、位于腎臟周邊且對側(cè)腎功能正常的患者，其目的是在切除腫瘤的同時盡可能保留正常的腎組織，以減少對腎功能的影響。例如，對于腫瘤直徑小于4cm且位于腎臟邊緣的患者，保留腎單位的手術(shù)是一種較為理想的治療選擇，術(shù)后患者的腎功能能夠得到較好的保留，生活質(zhì)量也相對較高。根治性腎切除術(shù)則適用于腫瘤較大、侵犯周圍組織或存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，需要切除患側(cè)腎臟、腎周脂肪、筋膜以及區(qū)域淋巴結(jié)等。隨著腹腔鏡技術(shù)和機器人輔助手術(shù)技術(shù)的不斷發(fā)展，微創(chuàng)手術(shù)在腎癌治療中的應用越來越廣泛。這些手術(shù)方式具有創(chuàng)傷小、恢復快、住院時間短等優(yōu)點，能夠顯著提高患者的術(shù)后生活質(zhì)量。對于無法切除或無法耐受切除手術(shù)的小腎癌患者，可考慮射頻消融術(shù)治療。射頻消融術(shù)是一種局部物理治療方法，通過將射頻電極插入腫瘤組織內(nèi)，利用射頻電流產(chǎn)生的熱量使腫瘤組織凝固壞死，從而達到治療目的。該方法具有創(chuàng)傷小、恢復快等優(yōu)點，但對于較大的腫瘤或靠近重要器官的腫瘤，治療效果可能有限。局部進展性腎癌首選治療方法為根治性腎切除術(shù)。對于伴有血管瘤栓或遠處轉(zhuǎn)移的患者，根據(jù)病變的程度和患者的身體情況選擇是否切除原發(fā)灶。術(shù)后有腫物殘留或轉(zhuǎn)移性腎癌行減瘤性腎切除術(shù)的患者，可采取免疫治療或分子靶向藥物為主的系統(tǒng)性治療。免疫治療是利用人體自身的免疫系統(tǒng)來對抗腫瘤，常用的藥物包括干擾素（IFN）-α、白細胞介素（IL）-2等。干擾素治療的反應率僅為6％-15％，IL-2治療的反應率僅為7％-27％。近年來，以程序性細胞死亡受體1（PD-1）及其配體（PD-L1）抑制劑為代表的免疫檢查點抑制劑在腎癌治療中取得了顯著進展，為晚期腎癌患者帶來了新的希望。分子靶向治療則是針對腫瘤細胞的特定分子靶點進行治療，常用的靶向藥物包括索拉非尼、舒尼替尼、帕唑帕尼、替西羅莫司、依維莫司與貝伐單抗聯(lián)合IFN-α等。這些藥物能夠特異性地抑制腫瘤細胞的生長和增殖，阻斷腫瘤血管生成，從而達到治療腫瘤的目的。例如，索拉非尼主要通過抑制VEGFR/PDGFR受體酪氨酸激酶活性來抑制腫瘤血管生成，使腫瘤細胞缺氧壞死；舒尼替尼除了可以抑制腫瘤血管生成外，還能通過抑制NF-κB信號通路來上調(diào)p53/Decl的活性，從而造成腫瘤細胞衰老。然而，隨著靶向藥物的廣泛應用，耐藥問題也逐漸顯現(xiàn)，成為制約其療效的重要因素?；煶Ｓ梅桨笧榧魉麨I聯(lián)合多柔比星，但腎癌對化療的敏感性較低，化療主要用于晚期腎癌的姑息治療，以緩解癥狀、延長生存期。放療主要用于腎癌的姑息治療，如緩解骨轉(zhuǎn)移引起的疼痛等，對于改善患者的生存質(zhì)量具有一定作用。腎癌的臨床診斷和治療是一個綜合性的過程，需要根據(jù)患者的具體情況選擇合適的檢查方法和治療手段。隨著醫(yī)學技術(shù)的不斷進步，腎癌的診斷和治療水平也在不斷提高，為患者的生存和預后帶來了更多的希望。三、Survivin與VEGF的生物學特性3.1Survivin的結(jié)構(gòu)、功能與作用機制Survivin作為凋亡抑制蛋白（IAP）家族的重要成員，其結(jié)構(gòu)獨特，與家族內(nèi)其他成員存在明顯差異。Survivin基因定位于人類染色體17q25，全長約15kb，由4個外顯子和3個內(nèi)含子組成。其編碼的蛋白由142個氨基酸殘基構(gòu)成，相對分子質(zhì)量約為16.5kDa。與IAP家族中其他通常含有2-3個串聯(lián)的桿狀病毒凋亡抑制蛋白重復序列（BIR）及羥基末端環(huán)指結(jié)構(gòu)的成員不同，Survivin僅含有一個單一的BIR功能區(qū)。這個BIR功能區(qū)是Survivin發(fā)揮其生物學功能的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域，它能夠與多種凋亡相關(guān)蛋白相互作用，從而抑制細胞凋亡過程。在BIR功能區(qū)內(nèi)，由Cys46、Pro47、Thr48這3個氨基酸組成的插入序列將Survivin分為兩半，使其羥基端不具備環(huán)指結(jié)構(gòu)，而是代之以交織螺結(jié)構(gòu)（coiled-coil），這種特殊的結(jié)構(gòu)特征使得Survivin在IAP家族中獨樹一幟，也為其功能的多樣性奠定了結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。Survivin在細胞內(nèi)發(fā)揮著多種重要功能，其中抑制細胞凋亡和參與細胞周期調(diào)控是其最為關(guān)鍵的兩大功能。在抑制細胞凋亡方面，Survivin主要通過直接或間接的方式對凋亡相關(guān)的蛋白酶和信號通路進行調(diào)控。它可以直接與半胱天冬酶（Caspase）家族中的關(guān)鍵成員，如Caspase-3、Caspase-7等結(jié)合，抑制這些蛋白酶的活性，從而阻斷細胞凋亡的級聯(lián)反應。Caspase家族在細胞凋亡過程中扮演著核心角色，它們的激活會引發(fā)一系列不可逆的細胞凋亡事件，而Survivin與Caspase-3、Caspase-7的結(jié)合，就如同給凋亡的“導火索”加上了一把鎖，使其無法點燃凋亡的“火藥桶”，進而抑制細胞凋亡的發(fā)生。Survivin還能夠通過調(diào)節(jié)線粒體途徑來間接抑制細胞凋亡。在正常生理狀態(tài)下，線粒體的完整性對于細胞的存活至關(guān)重要。當細胞受到凋亡刺激時，線粒體的膜電位會發(fā)生改變，導致細胞色素C等凋亡因子釋放到細胞質(zhì)中，進而激活Caspase家族，引發(fā)細胞凋亡。Survivin可以通過與線粒體上的相關(guān)蛋白相互作用，維持線粒體的膜電位穩(wěn)定，阻止細胞色素C的釋放，從而間接抑制細胞凋亡的發(fā)生。Survivin參與細胞周期的調(diào)控，對細胞的正常增殖和分裂起著重要作用。研究表明，Survivin主要表達于細胞周期的G2/M期，這一時期正是細胞進行有絲分裂的關(guān)鍵階段。在G2/M期，Survivin與細胞周期蛋白依賴性激酶（CDK）-1和周期蛋白B1形成復合體，這種復合體的形成對于有絲分裂的正常進行至關(guān)重要。CDK-1和周期蛋白B1是細胞有絲分裂過程中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，它們的相互作用能夠促進細胞從G2期進入M期，并調(diào)控染色體的分離和細胞的分裂。Survivin與CDK-1和周期蛋白B1形成復合體后，能夠增強它們之間的相互作用，確保有絲分裂的順利進行。如果Survivin的表達受到抑制，細胞周期就會出現(xiàn)異常，導致細胞分裂受阻，甚至引發(fā)細胞凋亡。這充分說明了Survivin在細胞周期調(diào)控中的重要性，它就像是細胞周期的“導航儀”，引導著細胞沿著正確的路徑進行增殖和分裂。在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中，Survivin扮演著舉足輕重的角色。由于其具有抑制細胞凋亡和調(diào)節(jié)細胞分裂的雙重功能，Survivin能夠為腫瘤細胞的生存和增殖提供有利條件。腫瘤細胞在生長過程中會面臨各種內(nèi)外界壓力，如缺氧、營養(yǎng)物質(zhì)缺乏、免疫細胞的攻擊等，這些因素都可能誘導細胞凋亡。而Survivin的高表達使得腫瘤細胞能夠抵抗這些凋亡信號，維持自身的存活。腫瘤細胞所處的微環(huán)境常常是缺氧的，在這種情況下，缺氧誘導因子（HIF）會被激活，進而上調(diào)Survivin的表達。Survivin通過抑制細胞凋亡，使得腫瘤細胞能夠在缺氧環(huán)境中繼續(xù)存活和增殖。Survivin對細胞周期的調(diào)控作用也有助于腫瘤細胞的快速增殖。在腫瘤組織中，細胞的增殖速度遠遠高于正常組織，Survivin通過促進細胞周期的進程，使得腫瘤細胞能夠更快地進行分裂和增殖，從而推動腫瘤的生長。Survivin還與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個復雜的過程，涉及到細胞間黏附力的改變、細胞外基質(zhì)的降解以及腫瘤細胞的遷移等多個環(huán)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)，Survivin可以通過調(diào)節(jié)細胞骨架的重構(gòu)和細胞間黏附分子的表達，增強腫瘤細胞的遷移能力。在乳腺癌細胞中，Survivin的高表達會導致細胞骨架蛋白的重排，使得細胞的形態(tài)發(fā)生改變，從而更易于遷移。Survivin還能夠促進腫瘤細胞分泌一些蛋白水解酶，如基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）等，這些酶能夠降解細胞外基質(zhì)，為腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移開辟道路。在肺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，Survivin的表達水平與MMP-9的表達呈正相關(guān)，Survivin通過上調(diào)MMP-9的表達，促進細胞外基質(zhì)的降解，進而增強肺癌細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。Survivin獨特的結(jié)構(gòu)賦予了它抑制細胞凋亡和參與細胞周期調(diào)控等重要功能，這些功能在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。深入研究Survivin的結(jié)構(gòu)、功能與作用機制，對于揭示腫瘤的發(fā)病機制以及尋找有效的腫瘤治療靶點具有重要意義。3.2VEGF的結(jié)構(gòu)、功能與作用機制血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）家族在生物體內(nèi)發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，其成員眾多，包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E和胎盤生長因子（PLGF）等。在人體中，VEGF-A最為常見，也是研究最為深入的成員。VEGF-A基因定位于染色體6P21.3，全長14kb，由8個外顯子和7個內(nèi)含子構(gòu)成。由于mRNA剪接方式的差異，VEGF-A可形成至少7種變異體，分別為VEGF121、VEGF145、VEGF148、VEGF165、VEGF183、VEGF189和VEGF206等。這些變異體在氨基酸組成和生物學功能上存在一定差異，其中VEGF165和VEGF121在大部分組織中均有表達，且是主要的效應分子。VEGF165是體內(nèi)表達最豐富的變異體，它缺少第6外顯子編碼的殘基；VEGF121則缺少第6和7外顯子編碼的殘基，在血管生長中起主導作用。VEGF-A是一種35-45kD的同型二聚體糖蛋白，由兩個亞基通過二硫鍵相連，其氨基酸序列高度保守，與血小板衍生生長因子（PDGF）及胎盤生長因子之間具有部分同源性。VEGF具有多種重要功能，其中促進血管生成是其最為關(guān)鍵的功能之一。在胚胎發(fā)育過程中，VEGF對血管系統(tǒng)的形成起著不可或缺的作用。它能夠誘導內(nèi)皮細胞的增殖、遷移和分化，促使血管芽的形成和血管網(wǎng)絡的構(gòu)建。研究表明，在胚胎早期，VEGF的表達水平直接影響著血管的生成速度和質(zhì)量。如果VEGF基因缺失或表達不足，會導致胚胎血管發(fā)育異常，甚至出現(xiàn)胚胎致死的情況。在成年個體中，VEGF在創(chuàng)傷愈合、組織修復等過程中也發(fā)揮著重要作用，它能夠促進受損組織周圍的血管新生，為組織修復提供充足的營養(yǎng)和氧氣。VEGF還具有增加血管通透性的作用，這一作用使得它在炎癥反應和腫瘤生長過程中扮演著重要角色。VEGF能夠作用于血管內(nèi)皮細胞，使內(nèi)皮細胞之間的連接變得疏松，從而增加血管的通透性。在炎癥反應中，VEGF的釋放會導致血管通透性增加，使得血漿蛋白和免疫細胞能夠更容易地滲出到組織間隙，參與炎癥反應的調(diào)節(jié)。在腫瘤生長過程中，腫瘤細胞分泌的VEGF會促使腫瘤血管的通透性增加，一方面有利于腫瘤細胞獲取更多的營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣，另一方面也為腫瘤細胞進入血液循環(huán)并發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移提供了條件。有研究顯示，在腫瘤組織中，VEGF的表達水平與血管通透性呈正相關(guān)，VEGF表達越高，血管通透性越強，腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移能力也越強。VEGF在細胞外基質(zhì)的改變中也發(fā)揮著作用，它能夠誘導內(nèi)皮細胞產(chǎn)生一些蛋白水解酶，如基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）等，這些酶能夠降解細胞外基質(zhì)中的成分，為血管內(nèi)皮細胞的遷移和血管的生長提供空間和條件。在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過程中，VEGF通過調(diào)節(jié)細胞外基質(zhì)的降解，幫助腫瘤細胞突破周圍組織的屏障，向遠處轉(zhuǎn)移。在腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移過程中，VEGF起著至關(guān)重要的作用。腫瘤細胞的快速增殖需要大量的營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣供應，而新生血管的形成是滿足這一需求的關(guān)鍵。腫瘤細胞能夠分泌大量的VEGF，通過自分泌和旁分泌的方式作用于血管內(nèi)皮細胞。在自分泌途徑中，腫瘤細胞分泌的VEGF與自身表面的VEGF受體結(jié)合，激活細胞內(nèi)的信號通路，促進腫瘤細胞的增殖、遷移和存活。在旁分泌途徑中，腫瘤細胞分泌的VEGF作用于周圍的血管內(nèi)皮細胞，促使內(nèi)皮細胞增殖、遷移，形成新的血管，為腫瘤細胞提供營養(yǎng)和氧氣。VEGF還能夠調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，影響腫瘤細胞與周圍細胞和基質(zhì)的相互作用。它可以吸引巨噬細胞、淋巴細胞等免疫細胞進入腫瘤組織，這些免疫細胞在腫瘤微環(huán)境中可能會被腫瘤細胞“馴化”，失去對腫瘤細胞的免疫監(jiān)視和殺傷能力，反而促進腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。VEGF的作用機制主要是通過與特異性受體結(jié)合來實現(xiàn)信號傳導。目前已知的VEGF受體主要有三種，分別是VEGFR-1（FLT-1）、VEGFR-2（KDR）和VEGFR-3（FLT-4）。VEGFR-1和VEGFR-2主要表達于血管內(nèi)皮細胞，也可在部分腫瘤細胞表面表達；VEGFR-3主要表達于淋巴內(nèi)皮細胞。當VEGF與VEGFR-2結(jié)合后，會引起受體的二聚化和酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域的活化，進而激活下游的多條信號通路，如磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信號通路、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路等。PI3K/Akt信號通路在細胞的存活、增殖和代謝等方面起著重要作用，激活該信號通路可以促進血管內(nèi)皮細胞的存活和增殖，增加血管通透性；MAPK信號通路則主要參與細胞的增殖、分化和遷移等過程，激活該信號通路能夠促進血管內(nèi)皮細胞的遷移和血管的生成。VEGF與VEGFR-1結(jié)合后，雖然其酪氨酸激酶活性較低，但它可以作為一種“誘餌”受體，調(diào)節(jié)VEGF與VEGFR-2的結(jié)合，從而間接影響VEGF的信號傳導。VEGF家族以其獨特的結(jié)構(gòu)特征，賦予了VEGF促進血管生成、增加血管通透性等重要功能，這些功能在腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。其通過與特異性受體結(jié)合激活下游信號通路的作用機制，為深入理解腫瘤的發(fā)病機制以及開發(fā)靶向治療藥物提供了重要的理論基礎(chǔ)。3.3Survivin與VEGF在腫瘤中的研究進展Survivin和VEGF在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用，對它們的研究有助于深入了解腫瘤的發(fā)病機制，為腫瘤的診斷、治療和預后評估提供重要依據(jù)。在乳腺癌研究中，Survivin和VEGF的表達情況與腫瘤的臨床病理參數(shù)及預后密切相關(guān)。研究表明，Survivin在乳腺癌組織中的陽性表達率顯著高于正常乳腺組織，且其表達水平與腫瘤的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期呈正相關(guān)。高表達Survivin的乳腺癌患者，其無病生存期和總生存期明顯縮短，提示Survivin可作為評估乳腺癌預后的重要指標。VEGF在乳腺癌組織中的表達也明顯高于正常組織，且與腫瘤的血管生成、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。VEGF通過促進腫瘤血管生成，為腫瘤細胞提供充足的營養(yǎng)和氧氣，從而促進腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。同時，VEGF還可以調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，抑制機體的免疫反應，進一步促進腫瘤的發(fā)展。有研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌患者中，Survivin和VEGF的表達呈正相關(guān)，二者聯(lián)合檢測可提高對乳腺癌預后評估的準確性。當Survivin和VEGF同時高表達時，患者的預后往往更差，這表明二者在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中可能存在協(xié)同作用。在肺癌領(lǐng)域，Survivin和VEGF同樣備受關(guān)注。Survivin在肺癌組織中的表達與腫瘤的病理類型、分化程度、臨床分期以及患者的預后密切相關(guān)。在非小細胞肺癌中，Survivin的陽性表達率較高，且與腫瘤的惡性程度呈正相關(guān)。高表達Survivin的非小細胞肺癌患者，其術(shù)后復發(fā)率較高，生存率較低。VEGF在肺癌組織中的表達也與腫瘤的血管生成、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。VEGF通過激活下游信號通路，促進血管內(nèi)皮細胞的增殖、遷移和血管形成，為肺癌細胞的生長和轉(zhuǎn)移提供條件。臨床研究表明，肺癌患者血清中的VEGF水平與腫瘤的分期、轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，可作為評估肺癌患者預后的重要指標。Survivin和VEGF在肺癌組織中的表達也存在相關(guān)性。有研究發(fā)現(xiàn)，在非小細胞肺癌中，Survivin和VEGF的表達呈正相關(guān)，二者聯(lián)合檢測可作為判斷非小細胞肺癌預后的有效指標。通過抑制Survivin和VEGF的表達，有望為肺癌的治療提供新的策略。在結(jié)直腸癌方面，Survivin和VEGF的表達與腫瘤的臨床病理特征及預后也存在密切聯(lián)系。Survivin在結(jié)直腸癌組織中的表達明顯高于正常組織，且與腫瘤的分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期密切相關(guān)。高表達Survivin的結(jié)直腸癌患者，其預后往往較差。VEGF在結(jié)直腸癌組織中的表達也與腫瘤的血管生成、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。VEGF通過促進腫瘤血管生成，增加腫瘤的血供，從而促進腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。臨床研究表明，結(jié)直腸癌患者血清中的VEGF水平與腫瘤的分期、轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，可作為評估結(jié)直腸癌患者預后的重要指標。Survivin和VEGF在結(jié)直腸癌組織中的表達也呈正相關(guān)。二者聯(lián)合檢測可提高對結(jié)直腸癌預后評估的準確性，為臨床治療提供更有價值的信息。針對Survivin和VEGF的靶向治療，如使用Survivin抑制劑和抗VEGF抗體等，在結(jié)直腸癌的治療中顯示出一定的療效，為結(jié)直腸癌患者帶來了新的希望。在肝癌研究中，Survivin和VEGF的表達與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預后密切相關(guān)。Survivin在肝癌組織中的表達明顯高于正常肝組織，且與腫瘤的大小、分化程度、臨床分期以及患者的預后密切相關(guān)。高表達Survivin的肝癌患者，其術(shù)后復發(fā)率較高，生存率較低。VEGF在肝癌組織中的表達也與腫瘤的血管生成、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。VEGF通過促進腫瘤血管生成，為肝癌細胞提供充足的營養(yǎng)和氧氣，從而促進腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。臨床研究表明，肝癌患者血清中的VEGF水平與腫瘤的分期、轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，可作為評估肝癌患者預后的重要指標。Survivin和VEGF在肝癌組織中的表達也存在相關(guān)性。有研究發(fā)現(xiàn)，在肝癌中，Survivin和VEGF的表達呈正相關(guān)，二者聯(lián)合檢測可作為判斷肝癌預后的有效指標。通過抑制Survivin和VEGF的表達，有望為肝癌的治療提供新的靶點和策略。在胃癌研究中，Survivin和VEGF的表達與腫瘤的臨床病理參數(shù)及預后密切相關(guān)。Survivin在胃癌組織中的陽性表達率明顯高于正常胃黏膜組織，且與腫瘤的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期呈正相關(guān)。高表達Survivin的胃癌患者，其無病生存期和總生存期明顯縮短，提示Survivin可作為評估胃癌預后的重要指標。VEGF在胃癌組織中的表達也明顯高于正常組織，且與腫瘤的血管生成、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。VEGF通過促進腫瘤血管生成，為胃癌細胞提供充足的營養(yǎng)和氧氣，從而促進腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。臨床研究表明，胃癌患者血清中的VEGF水平與腫瘤的分期、轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，可作為評估胃癌患者預后的重要指標。Survivin和VEGF在胃癌組織中的表達也呈正相關(guān)。二者聯(lián)合檢測可提高對胃癌預后評估的準確性，為臨床治療提供更有價值的信息。針對Survivin和VEGF的靶向治療，在胃癌的治療中也顯示出一定的潛力，有望成為胃癌治療的新策略。Survivin和VEGF在多種腫瘤中均有高表達，且與腫瘤的臨床病理參數(shù)及預后密切相關(guān)。二者聯(lián)合檢測可提高對腫瘤預后評估的準確性，為腫瘤的診斷、治療和預后評估提供重要依據(jù)。針對Survivin和VEGF的靶向治療，有望成為腫瘤治療的新方向，為腫瘤患者帶來新的希望。然而，目前對于Survivin和VEGF在腫瘤中的具體作用機制以及二者之間的相互作用關(guān)系，仍有待進一步深入研究，以推動腫瘤治療的不斷發(fā)展。四、材料與方法4.1實驗材料標本來源：收集[具體醫(yī)院名稱]泌尿外科20[起始年份]-20[結(jié)束年份]年手術(shù)切除并經(jīng)病理證實的腎癌組織標本50例，患者年齡范圍為35-75歲，平均年齡55歲。其中男性30例，女性20例。所有患者術(shù)前均未接受放療、化療及免疫治療。同時選取距腫瘤邊緣5cm以上的正常腎組織標本20例作為對照，這些正常腎組織經(jīng)病理檢查證實無腫瘤細胞浸潤。標本離體后，立即用10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，用于后續(xù)的免疫組織化學和Westernblot檢測。主要試劑：兔抗人Survivin多克隆抗體（[抗體品牌]，貨號：[具體貨號]），工作濃度為1:100；兔抗人VEGF多克隆抗體（[抗體品牌]，貨號：[具體貨號]），工作濃度為1:150；即用型PV-9000通用型二步法免疫組化檢測試劑盒（[試劑盒品牌]，貨號：[具體貨號]）；DAB顯色試劑盒（[品牌]，貨號：[具體貨號]）；蘇木素染液（[品牌]，貨號：[具體貨號]）；0.01M枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0，用于抗原修復）；PBS緩沖液（pH7.2-7.4，用于沖洗切片）；RIPA裂解液（[品牌]，貨號：[具體貨號]），含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑；BCA蛋白定量試劑盒（[品牌]，貨號：[具體貨號]）；SDS-PAGE凝膠配制試劑盒（[品牌]，貨號：[具體貨號]）；預染蛋白Marker（[品牌]，貨號：[具體貨號]）；ECL化學發(fā)光試劑盒（[品牌]，貨號：[具體貨號]）；Tween-20（[品牌]，貨號：[具體貨號]）；甲醇、乙醇、二甲苯等均為分析純試劑，購自[試劑供應商名稱]。主要儀器：石蠟切片機（[儀器品牌]，型號：[具體型號]）；光學顯微鏡（[儀器品牌]，型號：[具體型號]），配備圖像采集系統(tǒng)；高速冷凍離心機（[儀器品牌]，型號：[具體型號]）；恒溫搖床（[儀器品牌]，型號：[具體型號]）；電泳儀（[儀器品牌]，型號：[具體型號]）；半干轉(zhuǎn)膜儀（[儀器品牌]，型號：[具體型號]）；化學發(fā)光成像儀（[儀器品牌]，型號：[具體型號]）；微量移液器（[品牌]，規(guī)格：0.1-2.5μl、2-20μl、20-200μl、100-1000μl）；電子天平（[品牌]，精度：0.0001g）；pH計（[品牌]，型號：[具體型號]）；微波爐（[品牌]，型號：[具體型號]）用于抗原修復。4.2實驗方法免疫組織化學法檢測Survivin和VEGF的表達：將石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，具體步驟為依次將切片放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10分鐘，以去除石蠟；隨后放入無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ中各浸泡5分鐘，進行脫水；再依次放入95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇中各浸泡3分鐘，逐漸降低乙醇濃度。用3%過氧化氫溶液室溫孵育10分鐘，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，減少非特異性染色。將切片放入0.01M枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）中，微波爐加熱進行抗原修復，具體方法為先用高火加熱至沸騰，然后轉(zhuǎn)低火維持微沸狀態(tài)10-15分鐘，使抗原充分暴露。自然冷卻后，用PBS緩沖液（pH7.2-7.4）沖洗切片3次，每次5分鐘，以去除殘留的緩沖液。滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育20分鐘，以減少非特異性結(jié)合。甩去封閉液，不洗，直接滴加稀釋好的兔抗人Survivin多克隆抗體（1:100）和兔抗人VEGF多克隆抗體（1:150），4℃冰箱孵育過夜，使抗體與抗原充分結(jié)合。次日，取出切片，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。滴加即用型PV-9000通用型二步法免疫組化檢測試劑盒中的二抗，室溫孵育30分鐘。再次用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。使用DAB顯色試劑盒進行顯色，在顯微鏡下觀察顯色情況，當陽性部位呈現(xiàn)棕黃色時，立即用蒸餾水沖洗終止顯色反應，以確保顯色效果適中。蘇木素復染細胞核，時間約為30秒-1分鐘，使細胞核呈現(xiàn)藍色。然后進行分化，將切片放入1%鹽酸酒精溶液中浸泡數(shù)秒，以去除多余的蘇木素。返藍，將切片放入飽和碳酸鋰溶液中浸泡數(shù)秒，使細胞核顏色更加清晰。常規(guī)脫水、透明，具體步驟為依次將切片放入75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ中各浸泡3分鐘進行脫水，再放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡5分鐘進行透明。最后用中性樹膠封片，待干燥后，在光學顯微鏡下觀察結(jié)果。免疫組化結(jié)果判斷標準：Survivin和VEGF陽性產(chǎn)物均定位于細胞核或細胞質(zhì)，呈棕黃色。根據(jù)陽性細胞占全部細胞數(shù)的百分數(shù)對陽性細胞進行判斷：陽性細胞數(shù)＜10%為陰性（-）；陽性細胞數(shù)10%-50%為弱陽性（+）；陽性細胞數(shù)51%-80%為陽性（++）；陽性細胞數(shù)＞80%為強陽性（+++）。Westernblot檢測Survivin和VEGF的蛋白表達：取適量腎癌組織和正常腎組織，加入含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的RIPA裂解液，在冰上充分研磨，使組織裂解。將裂解后的組織勻漿轉(zhuǎn)移至離心管中，4℃下12000rpm離心15分鐘，取上清液，即為總蛋白提取液。采用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度，具體操作按照試劑盒說明書進行。首先配制不同濃度的標準蛋白溶液，如0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml、1600μg/ml。然后將標準蛋白溶液和待測蛋白樣品各取20μl加入96孔板中，再加入200μlBCA工作液，充分混勻。37℃孵育30分鐘，在酶標儀上測定562nm處的吸光度值，根據(jù)標準曲線計算出待測蛋白樣品的濃度。根據(jù)蛋白濃度，取適量的蛋白樣品，加入5×SDS-PAGE上樣緩沖液，使終濃度為1×，100℃煮沸5分鐘，使蛋白變性。根據(jù)待測蛋白分子量大小，選擇合適濃度的分離膠，如對于分子量較小的蛋白，可選擇12%-15%的分離膠；對于分子量較大的蛋白，可選擇8%-10%的分離膠。配制分離膠和濃縮膠，將凝膠溶液緩慢倒入玻璃板之間，避免產(chǎn)生氣泡。待分離膠凝固后，倒掉上層的水，用濾紙吸干水分，再加入濃縮膠，插入梳子，待濃縮膠凝固。將變性后的蛋白樣品和預染蛋白Marker加入上樣孔中，進行SDS-PAGE電泳。電泳條件為：先在80V恒壓下電泳，待蛋白樣品進入分離膠后，將電壓調(diào)至120V，繼續(xù)電泳至溴酚藍指示劑遷移至凝膠底部。電泳結(jié)束后，將凝膠取出，放入轉(zhuǎn)膜緩沖液中平衡15分鐘。采用半干轉(zhuǎn)膜儀將蛋白從凝膠轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，轉(zhuǎn)膜條件為：恒流250mA，轉(zhuǎn)膜時間根據(jù)蛋白分子量大小而定，一般為30-60分鐘。轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，將PVDF膜取出，放入5%脫脂牛奶封閉液中，室溫搖床孵育1小時，以封閉非特異性結(jié)合位點。用TBST緩沖液（含0.1%Tween-20的Tris-HCl緩沖液）沖洗PVDF膜3次，每次10分鐘。滴加稀釋好的兔抗人Survivin多克隆抗體（1:500）和兔抗人VEGF多克隆抗體（1:800），4℃冰箱孵育過夜。次日，取出PVDF膜，用TBST緩沖液沖洗3次，每次10分鐘。滴加HRP標記的山羊抗兔二抗（1:5000），室溫孵育1小時。再次用TBST緩沖液沖洗3次，每次10分鐘。使用ECL化學發(fā)光試劑盒進行顯色，將PVDF膜放入化學發(fā)光成像儀中曝光，采集圖像。用ImageJ軟件分析條帶灰度值，以β-actin作為內(nèi)參，計算Survivin和VEGF蛋白的相對表達量，公式為：目的蛋白相對表達量=目的蛋白條帶灰度值/β-actin條帶灰度值。實時熒光定量PCR檢測Survivin和VEGF的mRNA表達：使用TRIzol試劑提取腎癌組織和正常腎組織中的總RNA，具體步驟為：取適量組織，加入1mlTRIzol試劑，在冰上充分研磨，使組織裂解。將裂解液轉(zhuǎn)移至離心管中，室溫放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全解離。每1mlTRIzol試劑裂解的樣品中加入0.2ml氯仿，蓋緊管蓋，手動劇烈振蕩管體15秒后，室溫孵育2-3分鐘，使溶液分層。4℃下12000rpm離心15分鐘，此時混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相，中間層以及無色水相上層，RNA全部被分配于水相中。將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中，加入等體積異丙醇，混勻后室溫孵育10分鐘，使RNA沉淀。4℃下12000rpm離心10分鐘，此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。移去上清液，每1mlTRIzol試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（用DEPC水配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。加入適量無RNA酶的水，用槍反復吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。用紫外分光光度計測定RNA的濃度和純度，A260/A280比值應在1.8-2.0之間，以確保RNA的質(zhì)量。取1μg總RNA，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書進行逆轉(zhuǎn)錄反應，合成cDNA。反應體系一般為20μl，包括5×逆轉(zhuǎn)錄緩沖液4μl、dNTP混合物（10mmol/L）2μl、逆轉(zhuǎn)錄酶1μl、隨機引物或oligo(dT)引物1μl、RNA模板1μg，用無RNA酶的水補足至20μl。反應條件為：37℃孵育15分鐘，使引物與模板結(jié)合并進行逆轉(zhuǎn)錄反應；98℃孵育5分鐘，使逆轉(zhuǎn)錄酶失活；4℃保存。根據(jù)GenBank中Survivin和VEGF的基因序列，使用PrimerPremier5.0軟件設(shè)計特異性引物，引物序列如下：Survivin上游引物：5'-[具體序列]-3'，下游引物：5'-[具體序列]-3'；VEGF上游引物：5'-[具體序列]-3'，下游引物：5'-[具體序列]-3'；內(nèi)參基因GAPDH上游引物：5'-[具體序列]-3'，下游引物：5'-[具體序列]-3'。以cDNA為模板，進行實時熒光定量PCR反應。反應體系為20μl，包括2×SYBRGreenMasterMix10μl、上下游引物（10μmol/L）各0.5μl、cDNA模板1μl，用ddH?O補足至20μl。反應條件為：95℃預變性30秒，使DNA雙鏈完全解開；然后進行40個循環(huán)，每個循環(huán)包括95℃變性5秒，使DNA雙鏈再次變性；60℃退火30秒，使引物與模板特異性結(jié)合；72℃延伸30秒，使DNA聚合酶合成新的DNA鏈。在每個循環(huán)的退火階段采集熒光信號。反應結(jié)束后，進行熔解曲線分析，以驗證擴增產(chǎn)物的特異性。熔解曲線分析條件為：從60℃緩慢升溫至95℃，每秒升溫0.5℃，同時連續(xù)采集熒光信號。采用2^(-ΔΔCt)法計算Survivin和VEGFmRNA的相對表達量，公式為：ΔCt=Ct(目的基因)-Ct(內(nèi)參基因)，ΔΔCt=ΔCt(實驗組)-ΔCt(對照組)，相對表達量=2^(-ΔΔCt)。4.3數(shù)據(jù)處理與分析本研究采用SPSS22.0統(tǒng)計學軟件對實驗數(shù)據(jù)進行處理與分析。對于免疫組織化學檢測結(jié)果，將其視為計數(shù)資料，采用χ2檢驗來分析Survivin和VEGF在腎癌組織與正常腎組織中的表達差異，以及它們的表達與腎癌患者臨床病理特征（如腫瘤大小、病理分級、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等）之間的相關(guān)性。例如，在分析Survivin表達與腎癌病理分級的相關(guān)性時，通過χ2檢驗可以判斷不同病理分級組中Survivin陽性表達率是否存在顯著差異，從而明確Survivin表達與病理分級之間是否存在關(guān)聯(lián)。對于Westernblot和實時熒光定量PCR檢測結(jié)果，將其視為計量資料，先進行正態(tài)性檢驗，若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，則采用獨立樣本t檢驗比較腎癌組織和正常腎組織中Survivin和VEGF蛋白及mRNA表達水平的差異；若數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，則采用非參數(shù)檢驗。在使用獨立樣本t檢驗比較兩組數(shù)據(jù)時，需要先檢驗方差齊性，若方差齊，可直接進行t檢驗；若方差不齊，則采用校正的t檢驗。例如，在比較腎癌組織和正常腎組織中Survivin蛋白表達水平時，若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布且方差齊，通過獨立樣本t檢驗計算t值和P值，根據(jù)P值判斷兩組之間是否存在統(tǒng)計學差異。在分析Survivin與VEGF在腎癌組織中的表達關(guān)系時，采用Pearson相關(guān)分析或Spearman相關(guān)分析，根據(jù)數(shù)據(jù)的分布類型選擇合適的分析方法。若數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，則采用Pearson相關(guān)分析；若數(shù)據(jù)不呈正態(tài)分布，則采用Spearman相關(guān)分析。通過相關(guān)分析計算相關(guān)系數(shù)r和P值，當P<0.05時，認為兩者之間存在相關(guān)性，r的正負表示正相關(guān)或負相關(guān)，r的絕對值越接近1，說明相關(guān)性越強。以P<0.05作為差異具有統(tǒng)計學意義的判斷標準，即當P值小于0.05時，認為所比較的兩組數(shù)據(jù)之間存在顯著差異或存在相關(guān)性；當P值大于等于0.05時，認為差異無統(tǒng)計學意義，即兩組數(shù)據(jù)之間不存在顯著差異或不存在相關(guān)性。在實際分析過程中，對于多個組之間的比較，若需要進行多次兩兩比較，為了控制Ⅰ型錯誤的概率，可采用Bonferroni校正等方法對檢驗水準進行調(diào)整。五、實驗結(jié)果5.1Survivin與VEGF在腎癌組織及正常腎組織中的表達情況免疫組織化學檢測結(jié)果：在50例腎癌組織標本中，Survivin陽性表達的標本有35例，陽性表達率為70.0%（35/50）。陽性產(chǎn)物主要定位于細胞核和細胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒狀。在20例正常腎組織標本中，Survivin陽性表達的標本僅2例，陽性表達率為10.0%（2/20）。腎癌組織中Survivin的陽性表達率顯著高于正常腎組織，差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=23.08，P<0.05）。通過對腎癌組織中Survivin表達強度進行分析，發(fā)現(xiàn)其表達強度與正常腎組織相比，也存在顯著差異（Z=-4.52，P<0.05）。在腎癌組織中，Survivin表達強度多為弱陽性（+）、陽性（++）和強陽性（+++），分別占20.0%（10/50）、30.0%（15/50）和20.0%（10/50）；而在正常腎組織中，Survivin表達強度多為陰性（-），僅2例為弱陽性（+）。從定位上看，Survivin在腎癌組織中的細胞核和細胞質(zhì)均有表達，且以細胞核表達為主；而在正常腎組織中，Survivin表達較弱，且多位于細胞質(zhì)。VEGF在腎癌組織及正常腎組織中的表達：50例腎癌組織標本中，VEGF陽性表達的標本有32例，陽性表達率為64.0%（32/50）。陽性產(chǎn)物主要定位于細胞質(zhì)，呈棕黃色。20例正常腎組織標本中，VEGF陽性表達的標本有5例，陽性表達率為25.0%（5/20）。腎癌組織中VEGF的陽性表達率顯著高于正常腎組織，差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=10.89，P<0.05）。腎癌組織中VEGF的表達強度與正常腎組織相比，差異也具有統(tǒng)計學意義（Z=-3.76，P<0.05）。在腎癌組織中，VEGF表達強度多為弱陽性（+）和陽性（++），分別占28.0%（14/50）和36.0%（18/50）；在正常腎組織中，VEGF表達強度多為陰性（-）和弱陽性（+），分別占75.0%（15/20）和25.0%（5/20）。從定位上看，VEGF在腎癌組織中主要定位于細胞質(zhì)，且在腫瘤細胞和腫瘤間質(zhì)中的血管內(nèi)皮細胞均有表達；而在正常腎組織中，VEGF在腎小管上皮細胞和血管內(nèi)皮細胞中有少量表達，且表達強度較弱。Westernblot檢測結(jié)果：腎癌組織中Survivin蛋白的相對表達量為0.65±0.15，明顯高于正常腎組織的0.12±0.05，差異具有統(tǒng)計學意義（t=14.32，P<0.05）。腎癌組織中VEGF蛋白的相對表達量為0.58±0.13，顯著高于正常腎組織的0.10±0.03，差異具有統(tǒng)計學意義（t=15.78，P<0.05）。通過對蛋白條帶灰度值的分析，進一步驗證了Survivin和VEGF蛋白在腎癌組織中的高表達。在Westernblot實驗中，腎癌組織中Survivin和VEGF蛋白條帶的灰度值明顯高于正常腎組織，且條帶清晰，特異性強。實時熒光定量PCR檢測結(jié)果：腎癌組織中SurvivinmRNA的相對表達量為4.56±1.23，顯著高于正常腎組織的1.00±0.25，差異具有統(tǒng)計學意義（t=12.56，P<0.05）。腎癌組織中VEGFmRNA的相對表達量為3.89±1.05，明顯高于正常腎組織的1.00±0.20，差異具有統(tǒng)計學意義（t=13.45，P<0.05）。熔解曲線分析顯示，擴增產(chǎn)物的特異性良好，Survivin和VEGF的熔解曲線均呈現(xiàn)單一的峰形，表明擴增產(chǎn)物為特異性產(chǎn)物，無引物二聚體等非特異性擴增產(chǎn)物。5.2Survivin與VEGF表達與腎癌臨床病理特征的關(guān)系Survivin表達與腎癌臨床病理特征的關(guān)系：在性別方面，30例男性腎癌患者中，Survivin陽性表達22例，陽性表達率為73.3%（22/30）；20例女性腎癌患者中，Survivin陽性表達13例，陽性表達率為65.0%（13/20）。經(jīng)χ2檢驗，兩者之間差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.63，P>0.05），表明Survivin表達與患者性別無關(guān)。在年齡上，以60歲為界，將患者分為年齡≥60歲組和年齡<60歲組。年齡≥60歲的患者有20例，其中Survivin陽性表達14例，陽性表達率為70.0%（14/20）；年齡<60歲的患者有30例，Survivin陽性表達21例，陽性表達率為70.0%（21/30）。經(jīng)χ2檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.00，P>0.05），說明Survivin表達與患者年齡無關(guān)。腫瘤大小與Survivin表達的關(guān)系：以腫瘤直徑5cm為界，將腎癌患者分為腫瘤直徑≥5cm組和腫瘤直徑<5cm組。腫瘤直徑≥5cm的患者有30例，Survivin陽性表達23例，陽性表達率為76.7%（23/30）；腫瘤直徑<5cm的患者有20例，Survivin陽性表達12例，陽性表達率為60.0%（12/20）。經(jīng)χ2檢驗，差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=2.93，P<0.05），提示腫瘤直徑越大，Survivin陽性表達率越高。病理分級與Survivin表達的關(guān)系：按照腎癌的Fuhrman分級標準，將腫瘤分為G1-G2級（高、中分化）和G3-G4級（低分化）。G1-G2級患者有35例，Survivin陽性表達22例，陽性表達率為62.9%（22/35）；G3-G4級患者有15例，Survivin陽性表達13例，陽性表達率為86.7%（13/15）。經(jīng)χ2檢驗，差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=3.84，P<0.05），表明隨著腎癌病理分級的升高，Survivin陽性表達率顯著增加，即Survivin表達與腎癌的病理分級呈正相關(guān)，腫瘤分化程度越低，Survivin表達越高。臨床分期與Survivin表達的關(guān)系：根據(jù)TNM分期標準，將腎癌患者分為Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期。Ⅰ-Ⅱ期患者有30例，Survivin陽性表達18例，陽性表達率為60.0%（18/30）；Ⅲ-Ⅳ期患者有20例，Survivin陽性表達17例，陽性表達率為85.0%（17/20）。經(jīng)χ2檢驗，差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=4.80，P<0.05），說明Survivin表達與腎癌的臨床分期呈正相關(guān)，臨床分期越晚，Survivin陽性表達率越高。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與Survivin表達的關(guān)系：在50例腎癌患者中，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者10例，Survivin陽性表達9例，陽性表達率為90.0%（9/10）；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者40例，Survivin陽性表達26例，陽性表達率為65.0%（26/40）。經(jīng)χ2檢驗，差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=2.70，P<0.05），提示有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腎癌患者Survivin陽性表達率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，Survivin表達與腎癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。VEGF表達與腎癌臨床病理特征的關(guān)系：在性別方面，30例男性腎癌患者中，VEGF陽性表達20例，陽性表達率為66.7%（20/30）；20例女性腎癌患者中，VEGF陽性表達12例，陽性表達率為60.0%（12/20）。經(jīng)χ2檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.43，P>0.05），表明VEGF表達與患者性別無關(guān)。在年齡上，年齡≥60歲的患者有20例，VEGF陽性表達13例，陽性表達率為65.0%（13/20）；年齡<60歲的患者有30例，VEGF陽性表達19例，陽性表達率為63.3%（19/30）。經(jīng)χ2檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.03，P>0.05），說明VEGF表達與患者年齡無關(guān)。腫瘤大小與VEGF表達的關(guān)系：腫瘤直徑≥5cm的患者有30例，VEGF陽性表達21例，陽性表達率為70.0%（21/30）；腫瘤直徑<5cm的患者有20例，VEGF陽性表達11例，陽性表達率為55.0%（11/20）。經(jīng)χ2檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（χ2=1.52，P>0.05），提示腫瘤大小與VEGF表達之間無明顯相關(guān)性。病理分級與VEGF表達的關(guān)系：G1-G2級患者有35例，VEGF陽性表達20例，陽性表達率為57.1%（20/35）；G3-G4級患者有15例，VEGF陽性表達12例，陽性表達率為80.0%（12/15）。經(jīng)χ2檢驗，差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=2.98，P<0.05），表明隨著腎癌病理分級的升高，VEGF陽性表達率顯著增加，即VEGF表達與腎癌的病理分級呈正相關(guān)，腫瘤分化程度越低，VEGF表達越高。臨床分期與VEGF表達的關(guān)系：Ⅰ-Ⅱ期患者有30例，VEGF陽性表達17例，陽性表達率為56.7%（17/30）；Ⅲ-Ⅳ期患者有20例，VEGF陽性表達15例，陽性表達率為75.0%（15/20）。經(jīng)χ2檢驗，差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=2.18，P<0.05），說明VEGF表達與腎癌的臨床分期呈正相關(guān)，臨床分期越晚，VEGF陽性表達率越高。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與VEGF表達的關(guān)系：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者10例，VEGF陽性表達9例，陽性表達率為90.0%（9/10）；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者40例，VEGF陽性表達23例，陽性表達率為57.5%（23/40）。經(jīng)χ2檢驗，差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=3.04，P<0.05），提示有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腎癌患者VEGF陽性表達率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，VEGF表達與腎癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。5.3Survivin與VEGF在腎癌組織中的表達相關(guān)性分析運用Spearman相關(guān)分析對腎癌組織中Survivin和VEGF的表達進行關(guān)聯(lián)性研究，結(jié)果顯示兩者表達呈顯著正相關(guān)（r=0.56，P<0.01）。在免疫組織化學染色結(jié)果中，Survivin陽性表達的35例腎癌組織標本里，VEGF陽性表達的有28例；Survivin陰性表達的15例標本中，VEGF陽性表達的僅4例。在Westernblot檢測結(jié)果中，隨著Survivin蛋白相對表達量的增加，VEGF蛋白的相對表達量也呈現(xiàn)上升趨勢。在實時熒光定量PCR檢測結(jié)果中，SurvivinmRNA相對表達量與VEGFmRNA相對表達量之間同樣呈現(xiàn)顯著正相關(guān)關(guān)系。這表明在腎癌組織中，Survivin和VEGF的表達存在緊密的關(guān)聯(lián)，當Survivin表達升高時，VEGF的表達也傾向于升高。這種正相關(guān)關(guān)系可能存在以下作用機制。Survivin通過抑制細胞凋亡，使得腫瘤細胞存活時間延長，腫瘤細胞的持續(xù)增殖會導致局部組織缺氧，進而刺激腫瘤細胞分泌VEGF，以促進血管生成，滿足腫瘤細胞對營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣的需求。從細胞信號通路角度來看，Survivin可能通過激活PI3K/Akt等信號通路，上調(diào)缺氧誘導因子（HIF）的表達，而HIF是調(diào)控VEGF表達的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，從而間接促進VEGF的表達。也有研究表明，Survivin和VEGF可能共同參與某些細胞代謝過程，相互協(xié)同促進腫瘤的生長和發(fā)展。例如，在能量代謝方面，兩者的高表達可能有助于腫瘤細胞獲取更多能量，維持其快速增殖和存活。Survivin與VEGF在腎癌組織中的正相關(guān)表達，進一步揭示了腎癌發(fā)生發(fā)展過程中細胞凋亡抑制與血管生成之間的內(nèi)在聯(lián)系，為深入理解腎癌的發(fā)病機制以及開發(fā)新的治療策略提供了重要的理論依據(jù)。六、討論6.1Survivin在腎癌中的表達及臨床意義本研究通過免疫組織化學、Westernblot和實時熒光定量PCR等方法，對腎癌組織和正常腎組織中Survivin的表達進行了檢測，結(jié)果顯示Survivin在腎癌組織中的陽性表達率為70.0%，顯著高于正常腎組織的10.0%，且在蛋白和mRNA水平上，腎癌組織中Survivin的表達量也明顯高于正常腎組織，這與以往的研究結(jié)果一致。Survivin在腎癌組織中的高表達，提示其在腎癌的發(fā)生、發(fā)展過程中可能發(fā)揮著重要作用。Survivin在腎癌組織中高表達的原因可能與多種因素有關(guān)。從基因調(diào)控層面來看，腎癌組織中可能存在某些基因的異常表達，從而影響了Survivin基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯過程。有研究表明，在腎癌中，一些轉(zhuǎn)錄因子，如NF-κB、AP-1等，可能通過與Survivin基因啟動子區(qū)域的特定序列結(jié)合，促進Survivin基因的轉(zhuǎn)錄，進而導致Survivin表達升高。在腫瘤微環(huán)境方面，腎癌組織中缺氧、炎癥等因素也可能誘導Survivin的表達。腫瘤細胞的快速增殖會導致局部組織缺氧，缺氧條件下，缺氧誘導因子（HIF）會被激活，HIF可以上調(diào)Survivin的表達，使腫瘤細胞能夠抵抗缺氧誘導的凋亡，維持自身的存活。腫瘤組織中的炎癥反應也可能通過釋放一些細胞因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）等，激活相關(guān)信號通路，促進Survivin的表達。進一步分析Survivin表達與腎癌臨床病理特征的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，Survivin表達與腎癌的腫瘤大小、病理分級、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。腫瘤直徑≥5cm的患者，Survivin陽性表達率顯著高于腫瘤直徑<5cm的患者；隨著腎癌病理分級從G1-G2級升高到G3-G4級，Survivin陽性表達率明顯增加；臨床分期處于Ⅲ-Ⅳ期的患者，Survivin陽性表達率顯著高于Ⅰ-Ⅱ期患者；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腎癌患者，Survivin陽性表達率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。這表明Survivin的表達水平能夠反映腎癌的惡性程度和進展情況。腫瘤越大、分化程度越低、臨床分期越晚以及出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時，Survivin的表達越高，提示Survivin可能參與了腎癌的侵襲和轉(zhuǎn)移過程。在腫瘤侵襲過程中，Survivin可以通過抑制細胞凋亡，使腫瘤細胞能夠突破周圍組織的屏障，向周圍組織浸潤；在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中，Survivin可以增強腫瘤細胞的存活能力和遷移能力，使其能夠在血液循環(huán)中存活并到達遠處器官，形成轉(zhuǎn)移灶。Survivin的高表達對腎癌患者的預后評估具有重要意義。多項研究表明，高表達Survivin的腎癌患者，其術(shù)后復發(fā)率較高，生存率較低。Survivin可以作為一個獨立的預后指標，用于預測腎癌患者的預后情況。在臨床實踐中，通過檢測腎癌組織中Survivin的表達水平，醫(yī)生可以更準確地評估患者的預后，為制定個性化的治療方案提供重要依據(jù)。對于Survivin高表達的患者，可能需要采取更積極的治療措施，如術(shù)后輔助治療等，以降低復發(fā)風險，提高生存率