備案號(hào)：36659-2013小麥粒線蟲檢疫鑒定方法IdentificationofAnguinatriticiChitwood2013-01-20發(fā)布2013-03-20實(shí)施內(nèi)蒙古自治區(qū)質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、B為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由內(nèi)蒙古出入境檢驗(yàn)檢疫局提出并解釋。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：內(nèi)蒙古出入境檢驗(yàn)檢疫局、滿洲里出入境檢驗(yàn)檢疫局本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：楊永生、郭鐵箏、趙治國、董奇彪、劉瑋琦、張永宏、潘國卿、李剛。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了對(duì)小麥粒線蟲的檢疫鑒定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于小麥種子、植株上小麥粒線蟲的檢疫和鑒定。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB15569農(nóng)業(yè)植物調(diào)運(yùn)檢疫規(guī)程墊刃目TylenchidaThornc,墊刃總科TyclnchoideaOrley?？艫nguinidaeNicoll粒線蟲屬Anguina異名：Anguillalinascandens(Schneider,1866)Goodey,1932;3.2鑒定依據(jù)該線蟲在小麥種子、植株上的癥狀，線蟲的形態(tài)特征。雌性線蟲生殖系統(tǒng)末端在蟲體腹面的開口。生殖系統(tǒng)末端的一對(duì)骨化的刺狀結(jié)構(gòu)。2交合刺囊中引導(dǎo)交合刺運(yùn)動(dòng)的骨化的槽狀結(jié)構(gòu)。4.5交合傘bursac在雄性線蟲尾部側(cè)面，在交合刺的附近(有的在尾端)表皮的延伸的薄膜狀的抱片。5儀器用具及試劑酒精燈、燒杯、培養(yǎng)皿、干燥器、吸管。TAF固定液(按體積比40%甲醛：三羥基乙酰胺：蒸餾水=7:2:91)6現(xiàn)場檢驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)6.1抽樣受粒線蟲侵害的小麥植株接近地而的莖基部增粗，分蘗增多、矮化；片卷曲，皺縮，生長皇畸形。整個(gè)植株粗矮扭曲。苗期癥狀隨著植株的生長癥狀可能逐漸減輕。病株葉片偶爾生有很小的圓形突起，即蟲癭。受害穗子比正常的小、短粗，穎片不正常開裂。穎片上的芒很小或者無芒。病穗的轉(zhuǎn)黃通常比健穗需要更長時(shí)間，其部分或全部籽粒成為蟲癭，初期蟲癭為墨綠色，比同期灌漿的麥粒要肥大而圓，后期蟲癭變成深棕色或黑色，而黑麥上的變成淡黃色，成熟的蟲癭略縮小，比麥粒短而圓，堅(jiān)硬，不易掐碎。剖開后，內(nèi)部充滿白色絮狀物，即線蟲幼蟲。(形態(tài)特征參見附6.3.1樣品制備從受檢小麥種子中挑選蟲癭、癟小粒，放入小培養(yǎng)皿中，加入少量清水，在解剖鏡下，用鑷子和挑針挑破蟲癭表皮，釋放出其中的線蟲，川挑針挑取或用吸管收集線蟲。6.3.2制片在載玻片上滴一滴清水。在解剖鏡下，用挑針挑取線蟲，放入載玻片上的水滴中，用酒精燈加熱3殺死線蟲，在解剖鏡下整理好，95%乙醇數(shù)滴沖洗，將種皮和內(nèi)果皮分別放在載玻片上，加蓋玻片。6.3.3鏡檢將制成的玻片放在生物顯微鏡100～400倍下觀察。7.1粒線蟲屬描述與中食道球交接處縊縮。食道腺球略成梨形，但形狀有變化，有時(shí)為不規(guī)則的葉狀，不覆蓋腸。食道一腸瓣門小，尾呈錐形，漸漸變細(xì)，形成一個(gè)鈍圓的末端。7.2小麥粒線蟲鑒別特征雄蟲：L=1.9～2.5mm;a=21～30、b=6.3～13.0、c=17～交合刺長(spiculelength)=35～40μm;引帶長(gubcrnaculumlength)=10μm。卵：平均為85μm×38μm(有的可達(dá)130μm×c=體長尾長。雌蟲：蟲體粗大，熱殺死后向腹面呈螺旋狀卷曲。體環(huán)紋細(xì)。頭部低平，略縊縮。食道前體部膨大，其與中食道球交接處縊縮。峽部有時(shí)膨大，與后食道腺連接處縊縮。后食道腺梨形。前生殖管發(fā)端通過一括約肌與輸卵管連接，其窄端陷入子宮。后生殖管為一個(gè)簡單的后陰子宮囊。陰門唇突出。并終止于一個(gè)杯狀細(xì)胞。輸精管長約200μm,與精巢交接處縊縮。交合刺一對(duì)，較大，皇碼形，每個(gè)合刺的前方而終于尾尖的稍前方。(形態(tài)特征參見附錄B)8結(jié)果評(píng)定經(jīng)鑒定為小麥粒線蟲的樣晶，將剩余線蟲制作永久玻片，置于含有固定液的指形管中，種子樣品封存于塑料袋中，并做好標(biāo)記和基礎(chǔ)信息計(jì)錄，0℃~5℃保存。4(資料性附錄)小麥粒線蟲資料新西蘭、埃及、巴西、美國、馬來群島、埃塞俄比亞。國內(nèi)分布中國原在長江下游及華北冬春麥區(qū)普遍發(fā)生，目前僅在山東、浙江、陜西、四川、臺(tái)灣部分地區(qū)局部發(fā)生。A.2寄主范圍vulgareL)等部分禾本科植物。A.3生物學(xué)特性小麥粒線蟲主要以混雜在麥種中和收獲時(shí)落入土壤中的蟲癭傳播、侵染。每個(gè)蟲癭內(nèi)有8000-25000條休眠幼蟲，在土壤中吸水膨脹，體眠的線蟲復(fù)蘇活動(dòng)出癭，其在士壤中活動(dòng)半徑為20-30cm。侵染小麥實(shí)生苗后，隨小麥的生長上移到分生組織或聚集在葉腋中，它們刺穿植物組織而使葉片卷曲；穗分化后它們侵染花序，在取代子粒的蟲中發(fā)育成雎雄成蟲，經(jīng)交配、產(chǎn)卵，再孵化出幼蟲，以后在蟲癭中休眠。在蟲癭里每個(gè)雌蟲可產(chǎn)幾百粒到上干粒卵，產(chǎn)卵后不久成蟲便死亡；卵很快孵化成1齡幼蟲，1齡幼蟲離開蟲癭而侵染新的小麥實(shí)生苗，重復(fù)其生活史。干燥種子中的體眠小麥粒線蟲可存活28年，小麥播種后，雨水較多有利于線蟲侵染而發(fā)病較重。土溫12～16℃,適于線蟲活動(dòng)為害。(資料性附錄)小麥粒線蟲形態(tài)特征圖及危害狀BBDFC0EGAG浙第CAngtfraritie轉(zhuǎn)和引帶《瘍C.1.H,Dscaiyinsfpla-puraslticeecinstelesie:,5o,13)圖B1小麥粒線蟲形態(tài)特征圖6圖B2穗部癥狀及蟲