腫瘤生物治療進展課件演示文稿第一頁，共一百三十五頁。（優(yōu)選）腫瘤生物治療進展課件第二頁，共一百三十五頁。1894,WilliamB.Coley,紐約外科醫(yī)生一位廣泛擴散的肉瘤患者，其腫瘤部位發(fā)生鏈球菌感染腫瘤完全消退是否是由于鏈球菌感染而導(dǎo)致腫瘤消退呢？January12,1862–April16,1936Astory第三頁，共一百三十五頁。Coley采取了大膽的行動!注射活的鏈球菌治療沒有治愈希望的、不能手術(shù)的肉瘤患者腫瘤完全消退!第四頁，共一百三十五頁。滅活的鏈球菌和變形桿菌的混合物（Coley毒素）對

1000患者治療，約40%的到明顯的治療效果Coley與他的女兒Dr.HelenColeyNauts利用細菌成分活化免疫系統(tǒng)，可以誘導(dǎo)部分晚期腫瘤患者的持續(xù)緩解!!!Coley是腫瘤生物治療的鼻祖第五頁，共一百三十五頁?，F(xiàn)代腫瘤生物治療起始于1986年美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)干擾素

上市?？共《究鼓[瘤第六頁，共一百三十五頁。腫瘤的發(fā)生癌基因突變/抑癌基因缺失或基因表達調(diào)控失常，腫瘤細胞的信號通路與正常細胞的信號通路存在一定的差異。第七頁，共一百三十五頁。

生物治療借助腫瘤細胞與正常細胞之間的差異，以核酸、蛋白、細胞和小分子化合物為治療介質(zhì)，以腫瘤特異性信號通路為主要作用靶點，發(fā)展腫瘤選擇性強、毒副反應(yīng)低、高治療指數(shù)的治療技術(shù)和藥物。第八頁，共一百三十五頁。有足夠的臨床證據(jù)表明，生物治療不僅能治療臨床可見的腫瘤，而且能延長腫瘤患者的生存期，改善預(yù)后。這種治療水平保障了生物治療成為繼手術(shù)、放療、化療之后的第四種腫瘤治療策略。第九頁，共一百三十五頁。二、生物治療技術(shù)和藥物分類目前已用于臨床的生物治療技術(shù)和藥物主要包括：

細胞因子單克隆抗體免疫效應(yīng)細胞免疫刺激劑基因藥物和免疫毒素作用于特定分子靶點的非細胞毒性小分子藥物第十頁，共一百三十五頁。三、免疫系統(tǒng)在抗腫瘤中的作用細菌：結(jié)核菌葡萄球菌真菌病毒：流感脊髓灰質(zhì)炎寄生蟲：絳蟲瘧原蟲蠕蟲攻擊防御第十一頁，共一百三十五頁。免疫系統(tǒng)---人體的防御體系清除細菌、病毒、外來異物；消除體內(nèi)衰老細胞以及發(fā)生突變的細胞(有的突變細胞會變成癌細胞)。對于健康的人來說，其免疫系統(tǒng)的強大足以及時清除突變的癌細胞。第十二頁，共一百三十五頁。機體免疫系統(tǒng)和癌細胞相互作用的結(jié)果決定了癌癥的最終演變。清除期平衡期逃逸期第十三頁，共一百三十五頁。對于癌癥病人來說，普遍存在免疫系統(tǒng)低下，不能有效地識別、殺滅癌癥細胞;另一方面，癌癥細胞的大量增殖會進一步抑患者的免疫功能，而且癌癥細胞有多種機制來逃脫免疫細胞的識別與殺傷。第十四頁，共一百三十五頁。1.什么是免疫？我們生存在一個充滿復(fù)雜感染源的、敵對的世界里，我們的機體可以利用許多機制來防御外來微生物的侵襲，保護機體健康，這種防御能力被稱為免疫。

第十五頁，共一百三十五頁。免疫的類型天然免疫反應(yīng)：先天就具備的對某種病原體的免疫力,具有遺傳性，是機體抵御病原體侵襲的第一道防線；

獲得性免疫反應(yīng)：后天獲得、具有針對性、具有免疫記憶性。

第十六頁，共一百三十五頁。2.免疫系統(tǒng)的組成免疫器官：骨髓、胸腺、脾臟、淋巴結(jié)、扁桃體、小腸集合淋巴結(jié)、闌尾等；免疫組織：消化道、

呼吸道粘膜內(nèi)存在的許多無被膜的淋巴組織；免疫細胞：淋巴細胞、單核吞噬細胞等免疫分子：補體、免疫球蛋白、細胞因子等第十七頁，共一百三十五頁。3.免疫系統(tǒng)分布第十八頁，共一百三十五頁。免疫系統(tǒng)功能功能生理性(有利)病理性(不利)免疫防御防御病原微生物侵害超敏反應(yīng)/免疫缺陷免疫自穩(wěn)清除損傷或衰老的細胞自身免疫病免疫監(jiān)視清除復(fù)制錯誤/突變細胞細胞癌變/持續(xù)感染第十九頁，共一百三十五頁。4.發(fā)揮免疫應(yīng)答的成員？免疫細胞免疫分子第二十頁，共一百三十五頁。天然免疫系統(tǒng)：肥大細胞、單核/巨噬細胞、中性/嗜堿性粒細胞、樹突狀細胞、自然殺傷細胞；特異性免疫細胞：T細胞、B細胞第二十一頁，共一百三十五頁。對細胞殘片及病原體進行噬菌（即吞噬以及消化），并激活淋巴細胞或其它免疫細胞，令其對病原體作出反應(yīng)。在抗腫瘤免疫中，巨噬細胞具有抗原遞呈功能，參與調(diào)節(jié)T細胞的特異性免疫應(yīng)答。作為清道夫細胞清除機體死亡細胞和細胞碎片。巨噬細胞（M

）第二十二頁，共一百三十五頁。在不同組織中其名稱不同細胞名稱位置肺泡巨噬細胞肺泡組織細胞結(jié)締組織庫佛氏細胞肝神經(jīng)膠質(zhì)細胞神經(jīng)組織上皮樣細胞肉芽腫蝕骨細胞骨竇內(nèi)皮細胞脾系膜細胞腎第二十三頁，共一百三十五頁。粒細胞:

中性粒細胞-吞噬并殺滅病原微生物；嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞-抵抗寄生蟲，與過敏反應(yīng)有關(guān)。顆粒中含有多種酶和毒性蛋白，在細胞活化時釋放并殺滅病原體。第二十四頁，共一百三十五頁。DC細胞攝取病原體后變?yōu)槌墒斓腄C細胞初始T細胞活化的T細胞DC是天然免疫和獲得性免疫應(yīng)答之間的橋梁

樹突狀細胞(DC)第二十五頁，共一百三十五頁。天然免疫獲得性免疫DCDC是天然免疫和獲得性免疫應(yīng)答之間的橋梁

第二十六頁，共一百三十五頁。淋巴細胞:

TBNK獲得性免疫天然免疫第二十七頁，共一百三十五頁。紅細胞淋巴細胞:小,無特征HE染色電鏡觀察無功能活性---初始淋巴細胞

遇到抗原后,成為活化的淋巴細胞,并進一步分化為全功能的淋巴細胞,即效應(yīng)淋巴細胞。

第二十八頁，共一百三十五頁。B淋巴細胞(B細胞)T淋巴細胞(T細胞)B-細胞受體(BCR)抗體-免疫球蛋白膜型免疫球蛋白T-細胞受體(TCR)殺傷活化調(diào)節(jié)獲得性免疫細胞記憶性T細胞記憶性B細胞第二十九頁，共一百三十五頁。活化殺傷病毒或胞內(nèi)病原體感染的細胞---CD8+T細胞輔助性T細胞為其它細胞的活化和功能提供必須的信號---CD4+T細胞調(diào)節(jié)性T細胞抑制其它淋巴細胞的活性并協(xié)助控制免疫應(yīng)答效應(yīng)性T細胞調(diào)節(jié)殺傷第三十頁，共一百三十五頁。自然殺傷細胞

（Naturalkillercells，NK）形態(tài)比T、B細胞大，胞質(zhì)中有特殊的顆粒，含有毒性蛋白,不需要特異性免疫刺激，即能夠在體外殺傷某些腫瘤細胞系。是天然免疫的重要成員,在獲得性免疫應(yīng)答之前對控制病毒感染非常重要；在外周血單個核細胞中占10%-15%，淋巴結(jié)和組織中較少。第三十一頁，共一百三十五頁。不表達抗原特異性受體，也不形成免疫記憶。第三十二頁，共一百三十五頁。NK細胞是機體早期抗病毒的重要成員第三十三頁，共一百三十五頁。四、抗腫瘤免疫機制免疫細胞如何發(fā)揮抗腫瘤作用？第三十四頁，共一百三十五頁。免疫系統(tǒng)識別“自我”與“非我”腫瘤細胞表達腫瘤抗原第三十五頁，共一百三十五頁。1.什么是腫瘤抗原？腫瘤特異性抗原(TSA):僅在腫瘤細胞上表達;腫瘤相關(guān)性抗原(TAA):在某些腫瘤細胞上表達，也在某些正常細胞上表達。泛指在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中新出現(xiàn)或過度表達的抗原物質(zhì)。第三十六頁，共一百三十五頁。機體產(chǎn)生腫瘤抗原的可能機制為：①基因突變；②細胞癌變過程中使原本不表達的基因被激活；③抗原合成過程的某些環(huán)節(jié)發(fā)生異常（如糖基化異常導(dǎo)致蛋白質(zhì)特殊降解產(chǎn)物的產(chǎn)生）；④胚胎時期抗原或分化抗原的異常、異位表達；⑤某些基因產(chǎn)物尤其是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的過度表達；⑥外源性基因（如病毒基因）的表達。

第三十七頁，共一百三十五頁。1．感應(yīng)階段：

1）抗原遞呈細胞（APC）對外源性抗原的加工、處理、遞呈2）T細胞對抗原的識別2.反應(yīng)階段3.效應(yīng)階段2.獲得性細胞免疫應(yīng)答的基本過程第三十八頁，共一百三十五頁。APC感應(yīng)階段反應(yīng)階段效應(yīng)階段抗原遞呈細胞CD8+T第三十九頁，共一百三十五頁?？乖f呈功能MHC限制性APCAPC第四十頁，共一百三十五頁。B細胞漿細胞（產(chǎn)生抗體）T細胞細胞毒性T細胞（CTL）輔助性T細胞(Th)感染部位滯留在淋巴組織中活化B細胞骨髓產(chǎn)生抗體釋放到血液中效應(yīng)細胞第四十一頁，共一百三十五頁。CTL細胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答可直接殺傷腫瘤細胞;Th細胞可以活化免疫系統(tǒng)的其它成分，在控制具有免疫原性腫瘤細胞的生長中起重要的作用。第四十二頁，共一百三十五頁。（1）CTL殺傷靶細胞的機制靶細胞CTL循環(huán)凋亡解離CTL胞外分泌顆粒CTL與靶細胞結(jié)合CTL細胞質(zhì)重排第四十三頁，共一百三十五頁。(2)體液免疫體液免疫為B細胞介導(dǎo)的免疫，B細胞受抗原刺激后活化、增殖、分化，形成漿細胞并分泌抗體，由于主要是血清或血漿中的抗體發(fā)揮免疫效應(yīng)，故稱為體液免疫。第四十四頁，共一百三十五頁。抗體的抗腫瘤機制?第四十五頁，共一百三十五頁。A.激活補體系統(tǒng)溶解腫瘤細胞第四十六頁，共一百三十五頁?？缒た椎赖谒氖唔?，共一百三十五頁。B.抗體依賴性細胞介導(dǎo)的細胞毒作用(ADCC)第四十八頁，共一百三十五頁。C.抗體的調(diào)理作用腫瘤細胞巨噬細胞抗體與腫瘤細胞表面的相應(yīng)抗原結(jié)合溶酶體被調(diào)理的腫瘤細胞結(jié)合到M

的FcR上，并被M吞噬形成吞噬體吞噬溶酶體形成，殺傷腫瘤細胞抗體第四十九頁，共一百三十五頁。D.抗體的封閉作用細胞惡變后其表面可過表達某些受體，這些受體與其相應(yīng)的配體結(jié)合后可刺激腫瘤細胞生長。針對這些受體的抗體可通過封閉腫瘤細胞表面的受體阻礙其功能，從而抑制腫瘤細胞的增殖。第五十頁，共一百三十五頁。E.抗體改變腫瘤細胞的粘附特性

抗體與腫瘤細胞膜表面的抗原結(jié)合后，可干擾腫瘤細胞的粘附特性，阻止其克隆形成及與血管內(nèi)皮的粘附，從而有助于控制腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移。第五十一頁，共一百三十五頁?？鼓[瘤抗體雖然能夠通過上述幾種方式發(fā)揮作用，但一般認為，體液免疫在抗腫瘤免疫中只處于從屬地位。細胞免疫在抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用第五十二頁，共一百三十五頁。3.天然免疫應(yīng)答（1）自然殺傷細胞（NK）NK是機體重要的免疫細胞，對于抗腫瘤、抗病毒感染非常重要。第五十三頁，共一百三十五頁。NK細胞抗腫瘤機制A.釋放毒性顆粒:NK細胞含有毒性酶，穿孔蛋白-穿孔素，穿透細胞膜并誘導(dǎo)細胞凋亡。NK靶細胞第五十四頁，共一百三十五頁。B.細胞因子介導(dǎo)的腫瘤抑制作用:活化的NK細胞釋放大量細胞因子,如IFN-,TNF-/,GM-CSF,IL-12。干擾素

(IFN-

)抑制細胞增生，引起多種腫瘤細胞凋亡,抗腫瘤新生血管形成，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，是巨噬細胞主要的活化因子。第五十五頁，共一百三十五頁。C.抗體依賴的細胞介導(dǎo)的細胞毒作用(ADCC)第五十六頁，共一百三十五頁。（2）巨噬細胞（M

)活化的M

與腫瘤細胞結(jié)合后通過溶酶體酶等直接殺傷腫瘤細胞；第五十七頁，共一百三十五頁?；罨腗

還可分泌TNF、NO等細胞毒性因子而間接殺傷腫瘤細胞；抗原遞呈作用殺傷腫瘤分泌細胞因子IL-1IL-6TNF-

IL-8GM-CSF酶溶菌酶酸性水解酶賴氨酸酶酯酶膠原蛋白酶彈性纖維蛋白酶前列腺素補體成分纖維蛋白結(jié)合蛋白凝血因子其它因子第五十八頁，共一百三十五頁。M

還可通過ADCC殺傷腫瘤細胞巨噬細胞活化的巨噬細胞第五十九頁，共一百三十五頁。作為遞呈抗原的APC，活化T細胞；抗原T細胞受體T淋巴細胞抗原遞呈細胞（M

）抗原肽T淋巴細胞T細胞受體MHC-抗原肽復(fù)合物第六十頁，共一百三十五頁。五、過繼性免疫效應(yīng)細胞治療過繼性免疫效應(yīng)細胞治療（Adoptivecellularimmunotherapy，ACI）是轉(zhuǎn)輸體外培養(yǎng)、修飾的效應(yīng)細胞，如淋巴細胞和其它免疫細胞，治療疾病。細胞治療可以被認為是利用自體或異體細胞，替換、修復(fù)或增強受損傷組織的或系統(tǒng)的生物功能的一種策略。第六十一頁，共一百三十五頁。第六十二頁，共一百三十五頁。ACI治療腫瘤：具有抗腫瘤活性的免疫細胞轉(zhuǎn)輸給腫瘤患者，清除術(shù)后和化療后的殘留腫瘤細胞；

預(yù)防復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，根治腫瘤；毒副作用低，特異性高；是聯(lián)合治療腫瘤的重要部分。第六十三頁，共一百三十五頁。I.非特異性免疫細胞NK細胞巨噬細胞DCsLAKsCIKsTLR激動劑刺激免疫細胞II.抗原特異性T細胞CTLTILACI的類型：第六十四頁，共一百三十五頁。I.非特異性免疫細胞第六十五頁，共一百三十五頁。1.NK細胞用于過繼轉(zhuǎn)輸?shù)诹?，共一百三十五頁。Science.2011,7;331(6013):44–49.NK細胞被認為是抗腫瘤免疫的關(guān)鍵效應(yīng)細胞

第六十七頁，共一百三十五頁。腫瘤可以發(fā)展多種機制逃逸NK細胞的攻擊或者誘導(dǎo)NK細胞功能缺陷

NK細胞在腫瘤患者中功能低下JBiomedicineandBiotechnology,2011免疫監(jiān)視功能缺陷免疫抑制第六十八頁，共一百三十五頁。Systemadministration細胞因子自體NK細胞(IL-2,IL-12,IL-15,IL-18,IL-21,typeIIFNs，免疫調(diào)節(jié)藥物

)體內(nèi)活化NK細胞治療腫瘤的策略

抗體(anti-HER-2MAb;anti-CD20MAb;anti-EGFRMab)InfusionADCC第六十九頁，共一百三十五頁。NATUREIMMUNOLOGY2008,9(5):486In1980第七十頁，共一百三十五頁。Table2ClinicaltrialsusingstrategiestomodulateNKcellfunctions(continued)第七十一頁，共一百三十五頁。Table2ClinicaltrialsusingstrategiestomodulateNKcellfunctions(continued)Rituximab:anti-CD20;Trastuzumab:anti-HER2;Daclizumab:anti-IL-2Ra第七十二頁，共一百三十五頁。Exvivo自體NK細胞單倍體相合的NK細胞細胞因子(IL-2,IL-12,IL-15,IL-18,IL-21,type-1IFNs，免疫調(diào)節(jié)藥物

)通過細胞因子刺激,腫瘤患者的本身的NK細胞難于有效回復(fù)抗腫瘤功能

自身免疫細胞在體外活化第七十三頁，共一百三十五頁。NK細胞的臨床應(yīng)用(1)原代NK細胞通過免疫磁珠的方法純健康供體NK細胞,這些NK細胞具有正常的細胞表面標(biāo)志、胞內(nèi)細胞因子、穿孔素和顆粒酶B。第七十四頁，共一百三十五頁。供者患者第七十五頁，共一百三十五頁。過繼轉(zhuǎn)輸原代NK細胞原代NK細胞在體外擴增和活化13-21天,大大提高轉(zhuǎn)移的腎細胞癌患者的臨床反應(yīng)。第七十六頁，共一百三十五頁。NK細胞在外周血中的比例低(10–15%)，不能持續(xù)增殖；產(chǎn)生高純度的、大量的自體或異基因活化NK細胞非常難，并費時、費力；每個患者或者供者的NK的差異性對臨床常規(guī)治療帶來困難。

障礙/困難第七十七頁，共一百三十五頁。YT,

NK-YS,HANK-1,NK-92,NKL,KHYG-1，NKG(2)NK細胞系JapanEBV-positiveWesterncountriesChina第七十八頁，共一百三十五頁。NK-92cellsNK-92cell:CD56brightCD16-高效廣譜抗腫瘤作用，表達大量活化型受體；高水平表達與細胞凋亡途徑有關(guān)的分子及細胞毒效應(yīng)分子；對惡性黑色素瘤、前列腺癌、乳腺癌、白血病淋巴瘤等都具有高效的殺傷活性。第七十九頁，共一百三十五頁。NK-92細胞容易大量擴增，適合標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)，已經(jīng)用于臨床試驗，是目前最強的、適于臨床應(yīng)用的NK細胞系。第八十頁，共一百三十五頁。NKcelllineInstrumentCulturemediumCytokineinmediumStartingcellnumberCultureTime(days)HarvestedcellnumberViabilityNK-921-LVuelifeculturebag

EX-Vivo10serum-freemedia+aminoacidsand2.5%humanABplasmaIL-2(500IU/ml)(2.5×105/ml)×25ml/bag15-17>1×109/bag≥80%ControlledstirredbioreactorOptimizedclinicl-grademediaIL-2(100~500IU/ml)1×107/bioreactor11-16>1010/bioreactor>95%NKG*WAVEBioreactorα-MEMmedium10%fetalbovineserum+10%horseserumIL-2(100IU/ml)(1×105/ml)×200ml/bag12-14>1010/bag>90%NKLPlatesorFlasksRPMI1640medium10%heat-inactivatedhumanABserumIL-2(100pM)----KHYG-1PlatesorFlasksRPMI1640medium2%humanlow-toxicityABserumIL-2(450IU/ml)----大規(guī)模培養(yǎng)臨床應(yīng)用NK細胞系第八十一頁，共一百三十五頁。2.淋巴因子活化的殺傷細胞（LAK）1980年,Rosenberg及其同事建立了一種IL-2刺激產(chǎn)生大量的淋巴細胞的新方法,這些淋巴細胞可以殺傷新鮮的、沒有培養(yǎng)的、原代轉(zhuǎn)移的腫瘤細胞。LAK細胞是細胞毒性效應(yīng)淋巴細胞，其細胞毒活性不受MHC限制，能夠殺傷原代腫瘤細胞和NK抵抗的腫瘤細胞系,在功能上與NK細胞不同。第八十二頁，共一百三十五頁。LAK細胞表現(xiàn)出較好的耐受性，以一定的間隔時間重復(fù)輸注，以保持一定數(shù)量的新鮮的LAK細胞。1984年,Rosenberg及其同事被FDA批準(zhǔn)，IL-2和LAK用于治療25例腫瘤患者，包括腎細胞癌、黑色素瘤、肺癌或結(jié)腸癌。第八十三頁，共一百三十五頁。LAK細胞的制備：腫瘤患者的外周血單個核細胞（PBMCs）在體外擴增，IL-2刺激，培養(yǎng)約5天。培養(yǎng)后的LAK是異質(zhì)性的，含有CD3-CD56+,CD3+CD56+和CD3+CD56-細胞；其中CD3+CD56+T和CD3?CD56+NK細胞發(fā)揮細胞殺傷作用。第八十四頁，共一百三十五頁。臨床研究證明,LAK細胞對轉(zhuǎn)移性腫瘤如腎細胞癌和黑色素瘤有一定療效。第八十五頁，共一百三十五頁。LAK/IL-2的主要限制是其毒性：

全身應(yīng)用IL-2通常是造成副作用的主要原因，包括煩躁,發(fā)熱,寒冷,頭痛,惡心,嘔吐,皮疹,水腫，25%患者可以發(fā)生副反應(yīng)。男性呼吸道窘迫綜合征、肝臟毒性和脈管炎有報道。第八十六頁，共一百三十五頁。3.細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞（CIK）CIK是通過培養(yǎng)外周血淋巴細胞(PBL)，培養(yǎng)第一天在培養(yǎng)基中加入IFN-

1000u/ml,24小時后加入抗CD3抗體50ng/ml和IL-2300IU/ml。定期加入IL-2,培養(yǎng)基常規(guī)性換液，培養(yǎng)21–28天。第八十七頁，共一百三十五頁?；颊吡馨图毎w外患者自體CIK第八十八頁，共一百三十五頁。CIK細胞中CD3+CD4+(37.4%)、CD3+CD8+(64.2%);CD3?CD56+NK細胞含量小(～2%)，培養(yǎng)14天時，37.7%為CD3+CD8+CD56+的

自然殺傷T(NKT)細胞，是CIK中最強的細胞毒性細胞。與LAK細胞相比，CIK細胞的增殖能力和細胞毒活性更強；CIK細胞在識別和殺傷靶細胞時是非MHC限制性的。第八十九頁，共一百三十五頁。CIK的第一例臨床試驗是在1999年，由Schmidt-Wolf等在德國進行，自體CIK細胞轉(zhuǎn)入IL-2基因，轉(zhuǎn)述給10例腫瘤患者，包括轉(zhuǎn)移性腎癌、結(jié)腸癌和淋巴瘤。其中，1例患濾泡性淋巴瘤者完全緩解。除了3例患者有發(fā)熱的癥狀外，沒有嚴(yán)重的副反應(yīng)。第九十頁，共一百三十五頁。一項來自中國的報道，用CIK輔助治療急性白血病,19例接受1–4個療程自體CIK細胞輸注聯(lián)合化療的患者中,73.4%在隨后的4年中維持持續(xù)緩解,只作化療的患者僅為27.3%。作為免疫治療方式,CIK治療腫瘤量較小的患者有效或者作為輔助治療,不適合用于治療腫瘤量較大的患者。第九十一頁，共一百三十五頁。CIK的機制:釋放炎癥因子,如IFN

,TNF

,穿孔素,顆粒酶B殺傷腫瘤細胞;通過Fas-FasL途徑誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡。CIK已經(jīng)成功用于臨床治療胃癌、結(jié)腸癌、淋巴瘤、白血病等。

第九十二頁，共一百三十五頁。第九十三頁，共一百三十五頁。II.抗原特異性T細胞第九十四頁，共一百三十五頁。T細胞在抗腫瘤的免疫應(yīng)答中細胞免疫起著主要作用，特別是CTL，它是抗腫瘤免疫的主要效應(yīng)細胞，故也應(yīng)是用于過繼免疫治療的最佳細胞。第九十五頁，共一百三十五頁。T細胞活化抗原遞呈細胞腫瘤細胞腫瘤抗原腫瘤抗原表達識別與殺傷腫瘤細胞抗原的識別與遞呈淋巴結(jié)CD8+T細胞CD8+T細胞血液循環(huán)腫瘤血管遷移第九十六頁，共一百三十五頁。Flood發(fā)現(xiàn)CTL在體內(nèi)聚集到腫瘤部位的能力強于LAK和NK，且能特異性地殺傷腫瘤細胞。第九十七頁，共一百三十五頁。實驗顯示，腫瘤疫苗在體內(nèi)應(yīng)用可增加體內(nèi)的腫瘤特異性CTL的數(shù)量，但到一定水平時候，體內(nèi)的CTL到達平穩(wěn)期而不再增加，這主要是由于體內(nèi)存在的特異性及非特異性免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)限制了CTL的擴增。所以，利用細胞因子或免疫刺激劑直接活化腫瘤患者體內(nèi)CTL受到限制。第九十八頁，共一百三十五頁。在體外培養(yǎng)可突破此調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，大量擴增免疫效應(yīng)細胞。第九十九頁，共一百三十五頁。轉(zhuǎn)輸抗原特異性T細胞因為腫瘤相關(guān)抗原TAA是“自身”抗原，免疫系統(tǒng)難于識別；腫瘤患者體內(nèi)難于產(chǎn)生對腫瘤應(yīng)答的T細胞,甚至在體外最佳條件下也難于大規(guī)模培養(yǎng)。第一百頁，共一百三十五頁。4.腫瘤浸潤的淋巴細胞(TIL)1986年,Rosenberg及其同事應(yīng)用TIL在小鼠模型中證明,聯(lián)合自體TIL和環(huán)磷酰胺可以緩解腫瘤轉(zhuǎn)移。之后很快在1988年首次報道了利用TIL治療轉(zhuǎn)移性黑色素瘤能夠誘導(dǎo)腫瘤緩解。第一百零一頁，共一百三十五頁。如何制備TIL?大約需要5–6周第一百零二頁，共一百三十五頁。TIL增殖:粘附的腫瘤細胞死亡或被淋巴細胞殺死而消失生長2–4周鑒定TIL殺傷腫瘤的活性直徑大于2cm的活檢腫瘤組織，剪碎，培養(yǎng)基中快速擴增:

抗CD3抗體,IL-2和滅活的同種異體PBMCs飼養(yǎng)細胞，2周轉(zhuǎn)輸患者挑選應(yīng)答最強的細胞克隆第一百零三頁，共一百三十五頁。維持TIL的存活，誘導(dǎo)腫瘤消失清除淋巴細胞，減少與

TIL競爭細胞因子,如IL-7和IL-15;清除內(nèi)源性Treg.第一百零四頁，共一百三十五頁。

六、TLR配體激活的免疫效應(yīng)細

什么是TLR？Toll-likereceptor，Toll樣受體。是一類模式識別受體，能夠識別微生物的特異性成分和某些宿主分子，構(gòu)成防御很多病原體的第一道防線，在天然免疫系統(tǒng)中起著決定性的作用。此外，TLR連接天然免疫與獲得性免疫。第一百零五頁，共一百三十五頁。已經(jīng)鑒定的人TLRs有11種細胞膜內(nèi)體第一百零六頁，共一百三十五頁。TLR1廣泛表達于單核細胞、T和B淋巴細胞、DC細胞、多形核白細胞、NK細胞；TLR2/4/5主要分布于除T、B、NK細胞以外的免疫細胞；TLR3主要表達于未成熟的DC等；TLR7-TLR9主要表達于單核細胞、DC細胞核巨噬細胞。第一百零七頁，共一百三十五頁。第一百零八頁，共一百三十五頁。TLRs與腫瘤免疫治療第一百零九頁，共一百三十五頁。

腫瘤免疫逃逸的策略12345免疫抑制分子招募Treg共刺激分子缺失促凋亡分子第一百一十頁，共一百三十五頁。通過活化TLRs激活免疫系統(tǒng)，打破腫瘤介導(dǎo)的免疫抑制狀態(tài)，發(fā)揮抗腫瘤作用。作為腫瘤生物治療的關(guān)鍵問題是打破腫瘤導(dǎo)致的免疫耐受狀態(tài)！第一百一十一頁，共一百三十五頁。TLR配體已經(jīng)通過多種途徑應(yīng)用外用乳膏

靜脈注射

口服

瘤內(nèi)注射

皮下注射

第一百一十二頁，共一百三十五頁。TLR3,4,7/8和TLR9激動劑被列入美國國立癌癥研究所（NCI）免疫治療腫瘤藥物，具有強大的抗腫瘤潛力。第一百一十三頁，共一百三十五頁。1.TLR-7激動劑(1)天然ssRNA及其衍生物:

通過內(nèi)吞進入細胞，然后與TLR-7相互作用。TLR7ssRNA：單鏈RNA第一百一十四頁，共一百三十五頁。DC產(chǎn)生IL-12和I型IFN活化NK細胞，產(chǎn)生IFN-

并增強細胞毒作用殺傷腫瘤細胞，抑制腫瘤生長TLR-7激動劑ssRNA機制:第一百一十五頁，共一百三十五頁。(2)合成的TLR7激動劑Imiquimod(咪喹莫特):HPV-相關(guān)的皮膚惡性腫瘤

(淺表性基底細胞癌

sBCC),III期臨床研究表明組織學(xué)清除率為79–82%；癌變前的光線性角化病治療。外用乳膏

第一百一十六頁，共一百三十五頁。機制:誘導(dǎo)細胞因子如IFN-γ和IL-12產(chǎn)生;增強腫瘤特異性CTLs的活化；活化具有殺傷活性的mDC亞群的活化。第一百一十七頁，共一百三十五頁。

有20項臨床試驗在進行,Imiquimod有做疫苗佐劑的臨床試驗有10項。第一百一十八頁，共一百三十五頁。PolyI:C(多聚肌苷酸-胞苷酸),合成的病毒dsRNA類似物誘導(dǎo)I型IFNs的產(chǎn)生分子式:(C10H13N4O8P)x.(C9H14N3O8P)x2.TLR3激動劑dsRNA：雙鏈RNA第一百一十九頁，共一百三十五頁。成熟DC,其活化抗原特異性T細胞的能力增強,CD4+T細胞向Th1方向分化，