ICSCCSZ T/CSES22—pollutioninaquaticenvironment 中國環(huán)境科學(xué)學(xué) 發(fā)T/CSES22—目前 引 附錄A（資料性）原位被動采樣–生物暴露聯(lián)用評估方 附錄B（資料性）沉積物毒性鑒別評估方 附錄C（資料性）效應(yīng)導(dǎo)向分析方 附錄D（資料性）證據(jù)權(quán)重法評估復(fù)合污染生態(tài)風(fēng)險案 T/CSES22— 本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定T/CSES22— T/CSES22—GB/T29763化學(xué)品稀有鮈鯽急性毒性實驗HJ536水質(zhì)氨氮的測定水楊酸分光光度法HJ831淡水水生生物水質(zhì)基準制定技術(shù)指南 沉積物毒性鑒別評估：IIIIII（SedimentToxicityIdentificationEvaluation(TIE):PhasesI,II,andIIIGuidanceDocument） 使用淡水無脊椎動物測量沉積物中污染物的毒性和生物累積的方法–（MethodsforMeasuringtheToxicityandBioaccumulationofSediment–AssociatedContaminantsWithFreshwaterInvertebrates–SecondEdition）EUR20418EN/2 風(fēng)險評估技術(shù)指導(dǎo)文件第二部分（TechnicalGuidanceDocumentonRiskAssessmentPartII）OECDENV/JM/MONO(2012)37 用于暴露評估的現(xiàn)有模型和工具的說明（DescriptionsofExistingModelsandToolsUsedforExposureAssessment）復(fù)合污染combined水生態(tài)風(fēng)險評估aquaticecologicalrisk注：T/CSES22—生物累積生物有效性原位生物暴露insitu毒性終點toxicological毒性鑒別評估toxicityidentification效應(yīng)導(dǎo)向分析effectdirected毒性單位toxic環(huán)境暴露濃度environmentalexposure毒性閾值thresholdoftoxicological生物有效毒性單位bioavailabletoxicT/CSES22—圖1T/CSES22—T/CSES22—對于已有預(yù)測環(huán)境濃度（Predictedenvironmentalconcentration,PEC）或預(yù)測無效應(yīng)濃度（Predictednoeffectconcentration,PNEC）等數(shù)據(jù)的化學(xué)物質(zhì)，可直接獲取其預(yù)測毒性單位；PECPNEC的化學(xué)物質(zhì)，可基于環(huán)境中的實測數(shù)據(jù)和模型計算進行推導(dǎo)，具體可參EUR20418EN/2；獲取環(huán)境實測濃度數(shù)據(jù)，可結(jié)合生物富集因子（Bioconcentrationfactor,BCF）或生物–沉積物累積因子（Biota–sedimentaccumulationfactor,BSAF）等參數(shù)，推算環(huán)境介質(zhì)其他相中污染物其他已有的暴露評估中的模型工具可參考OECDENV/JM/MONO(2012)37T/CSES22—生物毒性表征首先根據(jù)研究區(qū)域水環(huán)境的生物分布特征以及前期調(diào)研目標污染物在不同環(huán)境介質(zhì)（–––––效應(yīng)關(guān)系的測試數(shù)據(jù)應(yīng)符合HJ831規(guī)定的數(shù)據(jù)要求。T/CSES22— EEC——環(huán)境暴露濃度；TTC——毒性閾值。toxicunit,TUb），見公式（2）。（3T/CSES22—D。–質(zhì)譜或/和液相色譜–（見附錄BT/CSES22—不確定性的定量分析可通過蒙特卡羅法（MonteCarlo）等方法進行。T/CSES22—附錄T/CSES22—A.110cm體長范圍的生物。同時，對水質(zhì)要求過高的生物不適合野外實驗。基于以上原則，同時參考GB/T29763選擇稀有鮈鯽（Gobiocyprisrarus）作為棲息在上層水體的受T/CSES22—開展暴露前，三種生物在實驗室中馴養(yǎng)至少一周，馴養(yǎng)條件為：恒溫231℃，光照比為16h8h黑暗，每天使用曝氣24h以上的脫氯自來水換水，稀有鮈鯽、日本沼蝦和河蜆分別喂食未污率<5%。本裝置適用于我國地表水。所選研究位點盡量滿足如下條件：水深2m左右，水溫范圍為15℃～30℃。此外，原位生物暴露需有參照位點，以排除受試生物受到運輸、投放過程和其他野外環(huán)境因素點現(xiàn)場測量水質(zhì)參數(shù)，包括溫度、流速、pHBBC和E（）C.1（）統(tǒng)計每個暴露室中生物存活率。將存活的生物轉(zhuǎn)移至曝氣自來水中，清洗受試生物，河蜆需清腸8h，確保攝食沉積物顆粒排出體外。生物樣品置于液氮中保存，運輸回實驗室后于﹣80℃保存。T/CSES22—50%～150%之間。20%以內(nèi)。T/CSES22—附錄B.1T/CSES22—PA600–9906Chronmusduu13h400mL60g濕沉積250mL中度硬水（80L4.92g七水合硫酸鎂，5.06g二水合硫酸鈣，7.68g碳酸氫鈉，4.0g氯化鈣，0.32g24h以上；建議試劑純度為分析純及以上），靜置過夜，次日換水103齡搖蚊幼蟲。23±116h光照：8h黑暗，2次（150mL），1次（1mL6g/L魚食），監(jiān)測溶解氧、溫度、電導(dǎo)率、pH值等水質(zhì)參數(shù)，在實驗開始和結(jié)束時各測試一次氨氮含量。參照EPA/600/R–07/080，利用不同處理方式改變沉積物中某類污染物的毒性，由此推斷沉積物中1L60%10min將10min后密封（0.7個大氣壓）4℃避光靜置24h410min，去除純水后使陽離子交換樹脂為D40145%～55%，官能團為T/CSES22—4310min1mol/L的鹽酸溶pH7～8；410min，去除24h即可。43103h400mL60g10%的添加103齡搖蚊幼蟲。對于每處理組，還應(yīng)設(shè)置一個過程空白組（向?qū)φ战M沉積物中加入潔凈細10天毒性測試，測試過程中每天換水兩次（每次150mL），喂食一次（1mL6g/L魚食），監(jiān)測上層水溶解氧、溫度、電導(dǎo)率、pH值等水質(zhì)參數(shù)，4pH23±116h光照：8h黑對沉積物中常規(guī)檢測的有機污染物進行定量，如多環(huán)芳烴（Polycyclicaromatichydrocarbons,PAHs）、多氯聯(lián)苯（Polychlorinatedbiphenyls,PCBs）、多溴二苯醚（Polybrominateddiphenylethers,萃取。向250mL萃取瓶中加入5g沉積物、2g活化銅粉、一定量回收率指示物和100mL萃取溶劑（正己烷和丙酮混合溶劑，1:1，V:V），超聲微波萃取6min，其中超聲功率和微波功率分別設(shè)為50W和100W。萃取完成后，過濾萃取液，再次加入50mL萃取溶劑，重復(fù)上述萃取步驟。合并萃取液，氮吹濃縮并置換溶劑為1mL正己烷；凈化。有機氯、有機磷和擬除蟲菊酯農(nóng)藥使用石墨化碳黑伯仲胺（Graphitizedcarbonblack/primary–secondaryamine,GCB/PSA）固相萃取柱凈化。小柱從下往上依次裝入600mgPSA、300mgGCB和500mg無水硫酸鈉，并用6mL正己烷活化。將樣品溶液（約1mL）轉(zhuǎn)移至小柱，用正己烷清洗濃縮管3次，并將清洗液轉(zhuǎn)移至小柱。用10mL正己烷和二氯甲烷混合T/CSES22—溶劑（1:1，V:V）洗脫，收集洗脫液，氮吹濃縮并置換溶劑為0.5mL正己烷，加入內(nèi)標后測定轉(zhuǎn)移至層析柱，用正己烷清洗濃縮管3次，并將清洗液轉(zhuǎn)移至層析柱；用70mL正己烷和二氯甲烷的混合溶劑（7:3，V:V）洗脫，收集洗脫液，氮吹濃縮并置換溶劑為1mL正己烷，加入的濃度。具體操作為加入1mL濃硫酸至樣品中，振蕩5min，離心后取上清液，并用正己烷清洗試管3次，氮吹濃縮并置換溶劑為100μL正己烷,加入內(nèi)標后測定多氯聯(lián)苯和多溴二苯醚的儀器分析。利用氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀（GaschromatographymassspectrometryGC/MS）定量目230℃、150260DB–5MS（30m×0.25mm內(nèi)徑×0.25μm膜厚1.2mL/min280℃，250kPa1μL。多環(huán)芳烴測定的柱溫升溫程序如下：初始6010℃/min2002℃/min2145℃/min801min20℃/min2406min10℃/min2805min多溴二苯醚使用負化學(xué)電離和選擇性離子監(jiān)測模式。離子源和接口溫度分別設(shè)置為250℃和280DB–5HT（15m×0.25mm×0.1μm膜厚），載氣為高純氦氣（流601min10℃/min2001min3min2min10℃/min2501min20℃/min3001μL。沉積物經(jīng)微波消解后，利用電感耦合等離子體質(zhì)譜（Inductivelycoupledplasmamassspectrometry,ICP–MS）分析測定其中重金屬（如Cd、Cr、Cu、Ni、Pb和Zn）濃度。稱取0.2g干沉積物樣品，置于聚四氟乙烯消解罐中，加入9mL濃硝酸和3mL氫氟酸進行微波消解。壓力控制的微波消解程序如下：5壓力保持900s。消解液在110℃下蒸干，加入2mL濃硝酸，轉(zhuǎn)移并用純水定容至40mL，離心后取上清液2.5mL，稀釋至10mL待測定。ICP–MS以氬氣為載氣，流速設(shè)為1L/min；RF功率、S/C溫度和四級桿T/CSES22—勻后，取300g于離心管中，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心30min得到孔隙水，過濾并稀釋至合適濃度后，按HJ536測定氨氮濃度。于50mL的螺口試管中，加入0.1g活化銅粉、5mg疊氮化鈉、0.5gTenax樹脂和45mL中度硬水，在20rpm下萃取24h后，回收Tenax樹脂，并用5mL丙酮萃取1次，5mL正己烷和丙酮混合溶劑（1:1，V/V）萃取2次，合并萃取液，氮吹濃縮并置換溶劑為1mL正己烷，加入內(nèi)標后進行儀器分析，具體凈化與儀沉積物中重金屬的生物有效濃度采用分步萃取方法（CommunityBureauofReference，BCR）進行1g50mL40mL0.11mol/L2316h，3000g20min，收集上清液，4℃避光儲存；40mL0.5mol/L2316h3000g20min，收集上清液，485±21h3mL10mL49mL3mL氫氟酸進行消解，消解方法同各步收集的上清液及經(jīng)消解的殘渣態(tài)樣品中重金屬的儀器分析方法同B.4.1.2T/CSES22—50%～150%之間。20%以內(nèi)。T/CSES22—附錄C.1T/CSES22—5g2g活化銅粉加入濾紙筒，置于索氏抽提器內(nèi)，利220mL的正己烷和丙酮的混合溶劑（1:1，V:V）5748h后，氮吹濃縮并置換4mL3mL用于進一步分離，1mL置換溶劑為二甲基亞砜（DMSO）40g50W100W6min100mL正己烷和丙酮混合溶劑（1:1，V:V）14mL2g1g22mL的萃取池中，1500psi10090s5min的靜態(tài)萃取循環(huán)兩次，沖洗仿生萃取推薦使用大體積吸附劑萃取法，以D樹脂作為吸附劑，有效萃取沉積物中快速解吸部500g50020gDA–D–（1V31041800p2450丙酮萃取10（V萃取431D活體生物毒性測試方法?？蛇x擇搖蚊幼蟲為受試生物、1248h毒性測±116h光照：8h黑暗。用于毒性測試的組分溶于二甲基亞砜（DMSO），最0.25。暴露結(jié)束后，記錄搖蚊幼蟲存活率。在未觀測到致死性的情況下，可使用亞致死毒性終點，如綜合生物標志物響應(yīng)指數(shù)（Integratedbiomarkerresponse,IBR）。IBR綜合考慮多種酶活性指標，包括乙酰膽堿酯酶（Acetylcholinesterase,AChE）、過氧化氫T/CSES22—CarE）、細胞色素（CytochromeP450,P450）和谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶（GlutathioneCCK–8WST–81–MethoxyPMS結(jié)合，產(chǎn)生與活細胞數(shù)量成正比的甲臜量， 移出培養(yǎng)液，使用4℃的磷酸緩沖鹽溶液（Phosphatebuffersaline,PBS）清洗1～2遍，使用trypsin–EDTA消化細胞5min后，加入新鮮培養(yǎng)液中止消化并混勻。細胞數(shù)量處于2.5×105個/孔～106個/孔之間。種板時，將細胞懸液稀釋后轉(zhuǎn)移到滅菌離心管中，以每孔100μL的體積加至96孔板中，確保每孔細胞數(shù)量盡量均勻。種板后，使用100μL的移液槍對每孔吹掃混勻，放置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h以上；10.112或24； 細胞染色：吸出染毒后的培養(yǎng)液，使用4℃的PBS緩沖液沖洗2次，每孔加入100μL不含胎牛血清的細胞培養(yǎng)液及10μL的CCK–8試劑。之后，將孔板放入培養(yǎng)箱中孵育1h～4h，在450nm處測量吸光度，計算細胞活性。h加入1mL～2mL純水，至少6次。48h后取出PDMS膜，用純水淋洗3次除去甲醇，完成加載。將加載污染物的PDMS膜放入暴露體系，磁力攪拌48h，完成被動加標。0.5mL10.5min～18.0min；4mL/min100%正己烷（30min）→40%正己烷（5