PCR原理及步驟課件單擊此處添加副標(biāo)題匯報(bào)人：XX目錄壹PCR技術(shù)概述貳PCR反應(yīng)的組成叁PCR反應(yīng)的步驟肆PCR實(shí)驗(yàn)設(shè)備與材料伍PCR實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)陸PCR技術(shù)的優(yōu)化與改進(jìn)PCR技術(shù)概述第一章定義與原理PCR技術(shù)原理變性退火延伸循環(huán)PCR技術(shù)定義體外快速擴(kuò)增DNA技術(shù)0102PCR技術(shù)的發(fā)明1985年，KaryMullis等發(fā)明發(fā)明時(shí)間與人物推動分子生物學(xué)發(fā)展，獲諾貝爾獎發(fā)明意義PCR技術(shù)的應(yīng)用醫(yī)學(xué)診斷用于檢測細(xì)菌、病毒，診斷遺傳疾病、腫瘤?？茖W(xué)研究在基因克隆、序列分析、基因突變等領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。PCR反應(yīng)的組成第二章DNA模板基因組DNA、cDNA等模板來源提供待擴(kuò)增的核酸序列模板作用引物短單鏈DNA片段，與模板鏈互補(bǔ)配對引物定義作為DNA合成起點(diǎn)，指示聚合酶復(fù)制引物作用DNA聚合酶催化DNA鏈合成關(guān)鍵作用Taq酶承受高溫變性耐高溫特性PCR反應(yīng)的步驟第三章變性階段加熱至94-98°C，使DNA雙鏈分離。高溫解鏈DNA采用Taq酶等，防止高溫失活。選用耐高溫酶退火階段引物與DNA模板互補(bǔ)序列配對引物結(jié)合退火溫度50-65℃，保持30-60秒溫度設(shè)置延伸階段在DNA聚合酶作用下，以引物為起點(diǎn)合成互補(bǔ)鏈。合成新DNA鏈實(shí)現(xiàn)DNA復(fù)制，擴(kuò)增目標(biāo)DNA片段。延伸目的PCR實(shí)驗(yàn)設(shè)備與材料第四章PCR儀溫度控制裝置核心部件加熱冷卻及檢測功能系統(tǒng)PCR反應(yīng)管常見類型單管、八聯(lián)管、板式管材質(zhì)特性醫(yī)用級聚丙烯，導(dǎo)熱佳PCR反應(yīng)試劑用于PCR，無DNase、RNase和蛋白酶活性。分子生物學(xué)級水滅活RNase酶，降低RNA降解風(fēng)險(xiǎn)。DEPC處理水PCR實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)第五章溫度控制90～95℃，確保DNA完全解鏈變性溫度40～60℃，引物與模板結(jié)合退火溫度延伸溫度70～75℃，DNA鏈合成反應(yīng)體系的配制按說明書準(zhǔn)確配制緩沖液、MgCl?等，確保反應(yīng)環(huán)境適宜。成分準(zhǔn)確配比在清潔無菌環(huán)境下操作，使用專用器材，避免交叉污染。無菌操作環(huán)境實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析分析PCR擴(kuò)增產(chǎn)物特異性，確保無非特異性條帶干擾。結(jié)果準(zhǔn)確性01陰性對照無擴(kuò)增，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)無污染，結(jié)果可靠。陰性對照意義02PCR技術(shù)的優(yōu)化與改進(jìn)第六章熱啟動PCR增強(qiáng)特異性，減少非特異性擴(kuò)增熱啟動優(yōu)勢常溫酶無活性，加熱后激活熱啟動原理高保真PCR采用高保真DNA聚合酶，提高PCR擴(kuò)增的準(zhǔn)確性和效率。高保真酶應(yīng)用適用于高GC含量和長片段模板，確保擴(kuò)增的完整性和特異性。長片段擴(kuò)增實(shí)時(shí)定量PCR調(diào)整Mg2?、引物濃度，縮短