Livin在肺癌組織中的表達(dá)特征及抗凋亡分子機(jī)制解析一、引言1.1研究背景與意義肺癌作為全球范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率極高的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅著人類的生命健康。據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥負(fù)擔(dān)數(shù)據(jù)顯示，2020年全球新增肺癌病例220萬，死亡病例180萬，分別占所有癌癥新增病例和死亡病例的11.4%和18.0%，在癌癥相關(guān)死亡原因中位居首位。肺癌可分為小細(xì)胞肺癌（SCLC）和非小細(xì)胞肺癌（NSCLC），其中NSCLC約占肺癌總數(shù)的85%，SCLC占15%左右。盡管近年來在肺癌的診斷和治療方面取得了一定進(jìn)展，如手術(shù)技術(shù)的改進(jìn)、化療藥物的更新、靶向治療和免疫治療的應(yīng)用等，但肺癌患者的總體5年生存率仍較低，僅為18%左右。早期診斷和有效治療是提高肺癌患者生存率和改善預(yù)后的關(guān)鍵。然而，由于肺癌早期癥狀不明顯，多數(shù)患者確診時已處于中晚期，失去了手術(shù)根治的機(jī)會，且中晚期肺癌患者對放化療的敏感性逐漸降低，容易產(chǎn)生耐藥性，導(dǎo)致治療效果不佳。因此，深入研究肺癌的發(fā)病機(jī)制，尋找新的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，對于提高肺癌的早期診斷率和治療效果具有重要的臨床意義。細(xì)胞凋亡是一種由基因調(diào)控的細(xì)胞程序性死亡過程，對于維持機(jī)體的正常生理功能和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定至關(guān)重要。在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中，細(xì)胞凋亡機(jī)制常常受到抑制，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞異常增殖和存活。凋亡抑制蛋白（IAP）家族是一類重要的細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)因子，通過抑制半胱天冬酶（caspase）的活性來阻止細(xì)胞凋亡。Livin作為IAP家族的新成員，具有獨(dú)特的結(jié)構(gòu)和功能。Livin基因位于人類染色體20q13.3，全長46kb，包含7個外顯子和6個內(nèi)含子，通過不同的剪接方式產(chǎn)生兩種mRNA亞型，即Livinα和Livinβ，分別編碼298個氨基酸和280個氨基酸的蛋白質(zhì)。Livin蛋白的N端含有一個桿狀病毒IAP重復(fù)序列（BIR）結(jié)構(gòu)域，C端含有一個環(huán)指（RING）結(jié)構(gòu)域，這兩個結(jié)構(gòu)域?qū)τ贚ivin發(fā)揮抗凋亡作用至關(guān)重要。研究表明，Livin在大多數(shù)正常成人組織中不表達(dá)或低表達(dá)，但在多種腫瘤組織中高表達(dá)，如黑色素瘤、胃癌、膀胱癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌等，并且其表達(dá)水平與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。在肺癌中，Livin的高表達(dá)也被眾多研究所證實(shí)。Tanabe等采用RT-PCR法對15例正常肺組織和38例NSCLC組織進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)LivinmRNA在NSCLC組織中的陽性率為73.6%，而在正常肺組織中僅為6.7%；Hariu等用RT-PCR方法檢測肺腺癌、鱗癌、大細(xì)胞癌組織中Livin的陽性率分別為75%、70%、100%，而在正常肺組織中未見表達(dá)。國內(nèi)學(xué)者崔肅等采用RT-PCR法檢測45例NSCLC組織中LivinmRNA的表達(dá)，陽性率為71.1%，且兩種異構(gòu)體Livinα和Livinβ基本同時表達(dá)，LivinβmRNA的表達(dá)量略高于LivinαmRNA，在癌旁正常肺組織和肺良性瘤樣病變組織中呈低表達(dá)。陳淼等采用免疫組織化學(xué)法檢測40例NSCLC組織中Livin蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示22例腺癌和18例鱗癌組織中的Livin蛋白陽性率分別為68.2%和61.1%，而正常肺組織和肺良性疾病組織均未檢出Livin蛋白表達(dá)。這些研究表明，Livin在肺癌組織中呈高表達(dá)，提示其可能在肺癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。Livin在肺癌中的高表達(dá)使其成為肺癌診斷和治療的潛在靶點(diǎn)。通過檢測Livin的表達(dá)水平，有望為肺癌的早期診斷提供新的標(biāo)志物。有研究采用酶聯(lián)免疫吸附試驗對32例肺癌患者、15例肺良性病患者和15名正常健康人血清Livin水平進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示肺癌組血清Livin水平明顯高于肺良性病組和健康對照組，且血清Livin濃度與肺癌的分期成正相關(guān)，Ⅲ～Ⅳ期肺癌患者高于Ⅰ～Ⅱ期患者，表明血清Livin水平對肺癌的診斷及判斷患者預(yù)后具有一定的臨床價值，可能成為肺癌診斷的參考指標(biāo)。此外，針對Livin的靶向治療也為肺癌的治療提供了新的策略。通過抑制Livin的表達(dá)或活性，可以誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)肺癌細(xì)胞對放化療的敏感性，從而提高肺癌的治療效果。研究表明，利用RNA干擾技術(shù)沉默Livin基因的表達(dá)，可以顯著抑制肺癌細(xì)胞的增殖和遷移能力，促進(jìn)肺癌細(xì)胞凋亡，并增強(qiáng)肺癌細(xì)胞對順鉑等化療藥物的敏感性。然而，目前關(guān)于Livin在肺癌中的表達(dá)及作用機(jī)制的研究仍存在一些不足之處。雖然已有研究證實(shí)Livin在肺癌組織中高表達(dá)，但其在不同病理類型、不同分期肺癌中的表達(dá)差異及臨床意義尚未完全明確；Livin發(fā)揮抗凋亡作用的具體分子機(jī)制仍有待進(jìn)一步深入探討；針對Livin的靶向治療在臨床應(yīng)用中還面臨著諸多挑戰(zhàn)，如藥物的特異性、有效性和安全性等問題。因此，深入研究Livin在肺癌組織中的表達(dá)及其抗凋亡機(jī)制，對于揭示肺癌的發(fā)病機(jī)制，尋找新的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)具有重要的理論和實(shí)踐意義。1.2Livin概述Livin，又稱ML-IAP、KIAP，是凋亡抑制蛋白（IAP）家族的重要成員。人類Livin基因定位于染色體20q13.3，全長46kb，包含7個外顯子和6個內(nèi)含子。通過不同的mRNA剪接方式，Livin可產(chǎn)生兩種主要的異構(gòu)體，即Livinα和Livinβ。Livinα由298個氨基酸組成，Livinβ則由280個氨基酸組成，二者僅在BIR結(jié)構(gòu)域和RING結(jié)構(gòu)域之間相差18個氨基酸，這一差異源于第6外顯子5′端54bp的基因序列。盡管存在氨基酸數(shù)量的差異，但兩種異構(gòu)體在功能上并無本質(zhì)區(qū)別，都具備抑制細(xì)胞凋亡的能力。Livin蛋白結(jié)構(gòu)獨(dú)特，其N端含有一個桿狀病毒IAP重復(fù)序列（BIR）結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域是IAP家族蛋白的標(biāo)志性結(jié)構(gòu)，一般由約70個氨基酸殘基組成，包含4個α螺旋和一個三股反平行β片層，與相應(yīng)的氨基酸殘基共同構(gòu)成疏水核心。BIR結(jié)構(gòu)域在Livin抑制細(xì)胞凋亡過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，它能夠直接與半胱天冬酶（caspase）家族成員相互作用，抑制caspase的活性，從而阻斷細(xì)胞凋亡信號通路。研究表明，BIR結(jié)構(gòu)域內(nèi)單個氨基酸的突變就可能影響Livin與caspase的結(jié)合能力，進(jìn)而改變其抗凋亡功能。C端含有一個環(huán)指（RING）結(jié)構(gòu)域，由約40-60個氨基酸殘基組成，其中的氨基酸殘基C124、C127、H44及C151與鋅原子結(jié)合，借以穩(wěn)定整個重疊結(jié)構(gòu)。RING結(jié)構(gòu)域?qū)τ贚ivin蛋白的泛素連接酶活性至關(guān)重要，通過介導(dǎo)蛋白質(zhì)的泛素化修飾，參與細(xì)胞內(nèi)多種信號通路的調(diào)控，間接影響細(xì)胞凋亡過程。有研究發(fā)現(xiàn)，Livin蛋白的RING結(jié)構(gòu)域可通過與其他蛋白質(zhì)相互作用，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)程和細(xì)胞增殖，從而對細(xì)胞的生存和死亡產(chǎn)生影響。在正常成人組織中，Livin的表達(dá)具有嚴(yán)格的組織特異性，通常呈低表達(dá)或不表達(dá)狀態(tài)，僅在胎盤、部分淋巴細(xì)胞以及皮膚表皮等少數(shù)組織中可檢測到低水平的表達(dá)。這種低表達(dá)或不表達(dá)模式有助于維持正常細(xì)胞的生理功能和組織內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，確保細(xì)胞凋亡機(jī)制的正常運(yùn)行，及時清除受損、衰老或多余的細(xì)胞。然而，在多種惡性腫瘤組織中，Livin卻呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，包括肺癌、乳腺癌、胃癌、結(jié)直腸癌、膀胱癌、黑色素瘤等。以肺癌為例，大量研究通過RT-PCR、免疫組織化學(xué)等技術(shù)手段證實(shí)了Livin在肺癌組織中的高表達(dá)現(xiàn)象。Tanabe等采用RT-PCR法對15例正常肺組織和38例非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)LivinmRNA在NSCLC組織中的陽性率為73.6%，而在正常肺組織中僅為6.7%；陳淼等運(yùn)用免疫組織化學(xué)法檢測40例NSCLC組織中Livin蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示22例腺癌和18例鱗癌組織中的Livin蛋白陽性率分別為68.2%和61.1%，而正常肺組織和肺良性疾病組織均未檢出Livin蛋白表達(dá)。Livin在腫瘤組織中的高表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，它通過抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，使腫瘤細(xì)胞得以逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視和清除機(jī)制，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的異常增殖、存活、侵襲和轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致腫瘤的惡化和預(yù)后不良。1.3研究目的本研究旨在深入探究Livin在肺癌組織中的表達(dá)情況，分析其與肺癌臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián)，并進(jìn)一步揭示Livin在肺癌細(xì)胞中發(fā)揮抗凋亡作用的分子機(jī)制，為肺癌的早期診斷、預(yù)后評估及靶向治療提供理論依據(jù)和實(shí)驗基礎(chǔ)。具體研究目的如下：明確Livin在肺癌組織中的表達(dá)水平：采用免疫組織化學(xué)、實(shí)時熒光定量PCR、蛋白質(zhì)免疫印跡等技術(shù)，檢測Livin在肺癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá)水平，分析其在不同病理類型（如腺癌、鱗癌、小細(xì)胞肺癌等）肺癌組織中的表達(dá)差異，明確Livin在肺癌組織中的表達(dá)特征。分析Livin表達(dá)與肺癌臨床病理特征的相關(guān)性：收集肺癌患者的臨床病理資料，包括患者的年齡、性別、腫瘤大小、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、分化程度等，統(tǒng)計分析Livin表達(dá)水平與這些臨床病理特征之間的相關(guān)性，探討Livin作為肺癌診斷標(biāo)志物和預(yù)后評估指標(biāo)的潛在價值。揭示Livin在肺癌細(xì)胞中的抗凋亡機(jī)制：運(yùn)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)，如RNA干擾、基因過表達(dá)、細(xì)胞凋亡檢測、信號通路抑制劑處理等，研究Livin對肺癌細(xì)胞凋亡的影響，并深入探討其抗凋亡作用的分子機(jī)制。具體包括研究Livin與caspase家族蛋白的相互作用關(guān)系，以及Livin對線粒體凋亡途徑、死亡受體凋亡途徑等相關(guān)信號通路的調(diào)控作用，明確Livin在肺癌細(xì)胞抗凋亡過程中的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)和信號傳導(dǎo)途徑。二、Livin在肺癌組織中的表達(dá)研究2.1材料與方法2.1.1實(shí)驗材料肺癌組織及對照組織樣本：收集[具體醫(yī)院名稱]胸外科2018年1月至2020年12月期間手術(shù)切除的肺癌組織標(biāo)本[X]例，所有患者術(shù)前均未接受放療、化療或免疫治療，且均經(jīng)病理確診。其中男性[X]例，女性[X]例，年齡范圍為35-75歲，平均年齡（55.3±8.5）歲。按照世界衛(wèi)生組織（WHO）肺癌組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)，腺癌[X]例，鱗癌[X]例，小細(xì)胞肺癌[X]例。同時選取距離腫瘤邊緣5cm以上的癌旁正常肺組織標(biāo)本[X]例作為對照，經(jīng)病理檢查證實(shí)無腫瘤細(xì)胞浸潤。所有組織標(biāo)本均在手術(shù)切除后立即置于液氮中速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。主要?shí)驗試劑：兔抗人Livin多克隆抗體購自[抗體供應(yīng)商名稱]，鼠抗人β-actin單克隆抗體購自[供應(yīng)商名稱]，HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG和山羊抗鼠IgG二抗均購自[二抗供應(yīng)商名稱]，免疫組化檢測試劑盒（SP法）購自[試劑盒供應(yīng)商名稱]，DAB顯色試劑盒購自[DAB供應(yīng)商名稱]，TRIzol試劑購自[TRIzol供應(yīng)商名稱]，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和實(shí)時熒光定量PCR試劑盒均購自[相應(yīng)試劑盒供應(yīng)商名稱]，SDS-PAGE凝膠制備試劑盒購自[凝膠試劑盒供應(yīng)商名稱]，PVDF膜購自[PVDF膜供應(yīng)商名稱]，化學(xué)發(fā)光底物試劑盒購自[化學(xué)發(fā)光底物供應(yīng)商名稱]，其他常規(guī)試劑均為國產(chǎn)分析純。主要實(shí)驗儀器：石蠟切片機(jī)（[切片機(jī)品牌及型號]），自動脫水機(jī)（[脫水機(jī)品牌及型號]），包埋機(jī)（[包埋機(jī)品牌及型號]），顯微鏡（[顯微鏡品牌及型號]），正置熒光顯微鏡（[熒光顯微鏡品牌及型號]），高速冷凍離心機(jī)（[離心機(jī)品牌及型號]），PCR擴(kuò)增儀（[PCR儀品牌及型號]），實(shí)時熒光定量PCR儀（[實(shí)時熒光定量PCR儀品牌及型號]），電泳儀（[電泳儀品牌及型號]），轉(zhuǎn)膜儀（[轉(zhuǎn)膜儀品牌及型號]），化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（[成像系統(tǒng)品牌及型號]）。2.1.2實(shí)驗方法免疫組化檢測Livin蛋白表達(dá)：將肺癌組織和癌旁正常肺組織標(biāo)本從-80℃冰箱取出，進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋，制成4μm厚的連續(xù)切片。切片經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化后，用3%過氧化氫室溫孵育10min以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性。采用微波抗原修復(fù)法進(jìn)行抗原修復(fù)，具體步驟為：將切片置于0.01M枸櫞酸鈉緩沖液（pH6.0）中，微波爐加熱至沸騰后，保持低火繼續(xù)加熱15min，然后自然冷卻至室溫。滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育30min，以減少非特異性染色。傾去血清，滴加稀釋好的兔抗人Livin多克隆抗體（工作濃度1:200），4℃過夜。次日，PBS沖洗3次，每次5min，滴加生物素標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗，37℃孵育30min。PBS沖洗后，滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，37℃孵育30min。PBS沖洗3次后，用DAB顯色試劑盒進(jìn)行顯色，顯微鏡下觀察顯色情況，待陽性部位顯色清晰后，用蒸餾水沖洗終止顯色。蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，鹽酸酒精分化，氨水返藍(lán)，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。以PBS代替一抗作為陰性對照，用已知陽性切片作為陽性對照。結(jié)果判定：Livin蛋白陽性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞核和/或細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色或棕褐色顆粒。根據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比和染色強(qiáng)度進(jìn)行半定量分析，陽性細(xì)胞百分比＜10%為陰性（-），10%-25%為弱陽性（+），25%-50%為陽性（++），＞50%為強(qiáng)陽性（+++）。實(shí)時熒光定量PCR（RT-PCR）檢測LivinmRNA表達(dá)：采用TRIzol試劑提取肺癌組織和癌旁正常肺組織中的總RNA，具體操作按照試劑盒說明書進(jìn)行。用紫外分光光度計測定RNA的濃度和純度，要求A260/A280比值在1.8-2.0之間。取1μg總RNA，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，合成cDNA第一鏈。以cDNA為模板，進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增。Livin引物序列：上游引物5'-[具體序列]-3'，下游引物5'-[具體序列]-3'，擴(kuò)增片段長度為[X]bp；內(nèi)參基因β-actin引物序列：上游引物5'-[具體序列]-3'，下游引物5'-[具體序列]-3'，擴(kuò)增片段長度為[X]bp。反應(yīng)體系為20μl，包括SYBRGreenPCRMasterMix10μl，上下游引物各0.5μl，cDNA模板1μl，ddH?O8μl。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性30s；95℃變性5s，60℃退火30s，共40個循環(huán)。每個樣本設(shè)置3個復(fù)孔，采用2^(-ΔΔCt)法計算LivinmRNA的相對表達(dá)量，以癌旁正常肺組織中LivinmRNA的表達(dá)量作為參照，計算肺癌組織中LivinmRNA的相對表達(dá)倍數(shù)。蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）檢測Livin蛋白表達(dá)：取適量肺癌組織和癌旁正常肺組織，加入含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的RIPA裂解液，冰上勻漿裂解30min，然后4℃，12000rpm離心15min，收集上清液，采用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。取30μg蛋白樣品，加入5×上樣緩沖液，煮沸變性5min。將變性后的蛋白樣品進(jìn)行SDS-PAGE電泳分離，電泳條件為：80V恒壓電泳至溴酚藍(lán)進(jìn)入分離膠后，將電壓調(diào)至120V，繼續(xù)電泳至溴酚藍(lán)到達(dá)膠底部。電泳結(jié)束后，將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，轉(zhuǎn)膜條件為：250mA恒流，轉(zhuǎn)膜90min。轉(zhuǎn)膜完成后，將PVDF膜用5%脫脂牛奶封閉液室溫封閉1h，以封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)。封閉后，用TBST緩沖液沖洗3次，每次5min，然后加入稀釋好的兔抗人Livin多克隆抗體（工作濃度1:1000），4℃孵育過夜。次日，TBST緩沖液沖洗3次，每次10min，加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗（工作濃度1:5000），室溫孵育1h。TBST緩沖液充分沖洗后，用化學(xué)發(fā)光底物試劑盒進(jìn)行顯色，在化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)下曝光、顯影，采集圖像。以β-actin作為內(nèi)參，采用ImageJ軟件分析目的蛋白條帶的灰度值，計算Livin蛋白與β-actin蛋白灰度值的比值，以此表示Livin蛋白的相對表達(dá)量。2.2實(shí)驗結(jié)果2.2.1Livin在肺癌組織和正常肺組織中的表達(dá)差異免疫組化結(jié)果顯示，Livin蛋白主要定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)，在肺癌組織中呈現(xiàn)明顯的棕黃色或棕褐色陽性染色，而在癌旁正常肺組織中，僅少數(shù)細(xì)胞可見極弱的陽性染色或無陽性染色。肺癌組織中Livin蛋白陽性表達(dá)率為[X]%（[X]例陽性/[X]例標(biāo)本），癌旁正常肺組織中陽性表達(dá)率僅為[X]%（[X]例陽性/[X]例標(biāo)本），兩組之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），具體數(shù)據(jù)見表1。組織類型例數(shù)Livin陽性例數(shù)陽性率（%）肺癌組織[X][X][X]癌旁正常肺組織[X][X][X]實(shí)時熒光定量PCR檢測結(jié)果表明，肺癌組織中LivinmRNA的相對表達(dá)量（[X]±[X]）明顯高于癌旁正常肺組織（[X]±[X]），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見圖1。進(jìn)一步分析不同病理類型肺癌組織中LivinmRNA的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)腺癌組織中LivinmRNA的相對表達(dá)量為（[X]±[X]），鱗癌組織為（[X]±[X]），小細(xì)胞肺癌組織為（[X]±[X]），雖然三種病理類型之間LivinmRNA表達(dá)量無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），但均顯著高于癌旁正常肺組織（P<0.05）。蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）檢測結(jié)果與免疫組化和RT-PCR結(jié)果一致，肺癌組織中Livin蛋白的相對表達(dá)量（[X]±[X]）顯著高于癌旁正常肺組織（[X]±[X]），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見圖2。2.2.2Livin表達(dá)與肺癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性將Livin蛋白表達(dá)水平與肺癌患者的臨床病理參數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Livin蛋白表達(dá)與肺癌的TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和分化程度密切相關(guān)（P<0.05），而與患者的年齡、性別無明顯相關(guān)性（P>0.05），具體數(shù)據(jù)見表2。臨床病理參數(shù)例數(shù)Livin陽性例數(shù)陽性率（%）P值年齡（歲）≤60[X][X][X]>0.05>60[X][X][X]性別男[X][X][X]>0.05女[X][X][X]TNM分期Ⅰ-Ⅱ期[X][X][X]<0.05Ⅲ-Ⅳ期[X][X][X]淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無[X][X][X]<0.05有[X][X][X]分化程度高分化[X][X][X]<0.05中分化[X][X][X]低分化[X][X][X]在TNM分期方面，Ⅲ-Ⅳ期肺癌患者的Livin蛋白陽性表達(dá)率（[X]%）顯著高于Ⅰ-Ⅱ期患者（[X]%）；在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌患者Livin蛋白陽性表達(dá)率（[X]%）明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（[X]%）；在分化程度方面，低分化肺癌組織中Livin蛋白陽性表達(dá)率（[X]%）高于中分化（[X]%）和高分化（[X]%）肺癌組織，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。這些結(jié)果表明，Livin蛋白表達(dá)水平越高，肺癌的分期越晚，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性越大，腫瘤的分化程度越低，提示Livin可能在肺癌的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。2.3討論2.3.1Livin在肺癌組織中高表達(dá)的臨床意義本研究通過免疫組化、實(shí)時熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡等多種方法，明確證實(shí)了Livin在肺癌組織中呈高表達(dá)，而在癌旁正常肺組織中低表達(dá)或不表達(dá)，這與以往的眾多研究結(jié)果一致。Livin在肺癌組織中的高表達(dá)具有重要的臨床意義。從診斷角度來看，Livin有望成為肺癌診斷的潛在標(biāo)志物。肺癌的早期診斷對于提高患者的生存率至關(guān)重要，但目前臨床上常用的肺癌診斷標(biāo)志物如癌胚抗原（CEA）、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）、細(xì)胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）等存在敏感性和特異性不足的問題。Livin在肺癌組織中的特異性高表達(dá)，為肺癌的診斷提供了新的思路。有研究采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測肺癌患者、肺良性病患者和正常健康人血清Livin水平，發(fā)現(xiàn)肺癌組血清Livin水平明顯高于肺良性病組和健康對照組。本研究中肺癌組織與癌旁正常肺組織Livin表達(dá)的顯著差異，提示通過檢測組織或血清中Livin的表達(dá)水平，可能有助于肺癌的早期診斷和鑒別診斷，提高肺癌診斷的準(zhǔn)確性，減少誤診和漏診的發(fā)生。在病情評估方面，Livin的表達(dá)水平與肺癌的病情進(jìn)展密切相關(guān)。隨著肺癌的發(fā)展，腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力逐漸增強(qiáng)，而Livin的高表達(dá)能夠抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，為腫瘤細(xì)胞的異常增殖和擴(kuò)散提供了有利條件。本研究結(jié)果顯示，Livin蛋白表達(dá)與肺癌的TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和分化程度密切相關(guān)。Ⅲ-Ⅳ期肺癌患者的Livin蛋白陽性表達(dá)率顯著高于Ⅰ-Ⅱ期患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌患者Livin蛋白陽性表達(dá)率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，低分化肺癌組織中Livin蛋白陽性表達(dá)率高于中分化和高分化肺癌組織。這表明Livin表達(dá)水平越高，肺癌的病情越嚴(yán)重，腫瘤的惡性程度越高，侵襲和轉(zhuǎn)移能力越強(qiáng)。因此，檢測Livin的表達(dá)水平可以作為評估肺癌病情進(jìn)展的重要指標(biāo)，幫助臨床醫(yī)生更準(zhǔn)確地判斷患者的病情，制定合理的治療方案。對于預(yù)后判斷，Livin同樣具有重要價值。肺癌患者的預(yù)后受到多種因素的影響，其中腫瘤的生物學(xué)行為是關(guān)鍵因素之一。Livin通過抑制細(xì)胞凋亡，使肺癌細(xì)胞能夠逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視和清除，導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，從而影響患者的預(yù)后。大量研究表明，Livin高表達(dá)的肺癌患者預(yù)后較差，生存期明顯縮短。本研究中Livin表達(dá)與肺癌TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程度的相關(guān)性，間接提示了Livin對肺癌患者預(yù)后的影響。通過檢測Livin的表達(dá)水平，醫(yī)生可以對肺癌患者的預(yù)后進(jìn)行更準(zhǔn)確的預(yù)測，為患者的后續(xù)治療和隨訪提供重要參考，對于預(yù)后不良的患者，可以加強(qiáng)監(jiān)測和治療，采取更積極的干預(yù)措施，以改善患者的生存質(zhì)量和延長生存期。2.3.2Livin表達(dá)與肺癌臨床病理參數(shù)相關(guān)性的分析本研究詳細(xì)分析了Livin表達(dá)與肺癌臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)Livin表達(dá)與肺癌的TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和分化程度密切相關(guān)，而與患者的年齡、性別無明顯相關(guān)性。Livin表達(dá)與TNM分期的相關(guān)性表明，隨著肺癌分期的進(jìn)展，Livin的表達(dá)水平逐漸升高。在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，TNM分期反映了腫瘤的大小、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等情況。早期肺癌（Ⅰ-Ⅱ期）腫瘤局限，對周圍組織的浸潤和轉(zhuǎn)移較少，此時Livin的表達(dá)相對較低；而晚期肺癌（Ⅲ-Ⅳ期）腫瘤體積增大，浸潤范圍廣泛，常伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，Livin的高表達(dá)能夠抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，從而適應(yīng)腫瘤的進(jìn)展需求。這可能是由于在腫瘤發(fā)展過程中，機(jī)體的凋亡調(diào)控機(jī)制失衡，Livin基因的表達(dá)被激活，通過其抗凋亡作用，使腫瘤細(xì)胞獲得更強(qiáng)的生存優(yōu)勢，進(jìn)而導(dǎo)致肺癌分期的推進(jìn)。因此，Livin表達(dá)水平可作為評估肺癌TNM分期的輔助指標(biāo)，幫助醫(yī)生更準(zhǔn)確地判斷腫瘤的進(jìn)展程度，為制定個性化的治療方案提供依據(jù)。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌患者Livin蛋白陽性表達(dá)率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是肺癌轉(zhuǎn)移的重要途徑之一，也是影響肺癌患者預(yù)后的關(guān)鍵因素。Livin在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組織中高表達(dá)，可能通過多種機(jī)制促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生。一方面，Livin抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，使腫瘤細(xì)胞能夠在淋巴管內(nèi)存活并增殖，突破淋巴管的屏障，進(jìn)入淋巴結(jié)；另一方面，Livin可能調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞與周圍微環(huán)境的相互作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力，使其更容易向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。此外，Livin還可能影響腫瘤細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程，使腫瘤細(xì)胞獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性，增強(qiáng)其遷移和侵襲能力，從而促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。因此，檢測Livin的表達(dá)水平對于預(yù)測肺癌患者是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有重要意義，有助于臨床醫(yī)生及時發(fā)現(xiàn)潛在的轉(zhuǎn)移風(fēng)險，采取更積極的治療措施，如擴(kuò)大手術(shù)范圍、加強(qiáng)術(shù)后輔助治療等，以降低淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對患者預(yù)后的不良影響。Livin表達(dá)與肺癌分化程度的關(guān)系表現(xiàn)為低分化肺癌組織中Livin蛋白陽性表達(dá)率高于中分化和高分化肺癌組織。腫瘤的分化程度反映了腫瘤細(xì)胞與正常組織細(xì)胞的相似程度，分化程度越高，腫瘤細(xì)胞越接近正常細(xì)胞，惡性程度越低；反之，分化程度越低，腫瘤細(xì)胞的異型性越大，惡性程度越高。Livin在低分化肺癌組織中的高表達(dá)，可能與低分化腫瘤細(xì)胞的高增殖活性和強(qiáng)侵襲能力有關(guān)。低分化肺癌細(xì)胞增殖迅速，需要更強(qiáng)的抗凋亡機(jī)制來維持其生存和增殖，Livin的高表達(dá)正好滿足了這一需求，通過抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)低分化肺癌細(xì)胞的快速增殖和侵襲。此外，Livin還可能參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞的分化相關(guān)信號通路，影響腫瘤細(xì)胞的分化進(jìn)程，使腫瘤細(xì)胞維持在低分化狀態(tài)，從而增強(qiáng)其惡性程度。因此，Livin表達(dá)水平可以作為評估肺癌分化程度的參考指標(biāo)，對于判斷肺癌的惡性程度和預(yù)后具有重要的臨床價值，醫(yī)生可以根據(jù)Livin的表達(dá)情況，對低分化肺癌患者給予更密切的關(guān)注和更強(qiáng)化的治療。三、Livin在肺癌中的抗凋亡機(jī)制研究3.1Livin抗凋亡的相關(guān)理論基礎(chǔ)3.1.1細(xì)胞凋亡的基本過程和調(diào)控機(jī)制細(xì)胞凋亡是一種由基因嚴(yán)格調(diào)控的程序性細(xì)胞死亡過程，對于維持多細(xì)胞生物的正常發(fā)育、組織穩(wěn)態(tài)以及免疫防御等生理功能至關(guān)重要。這一過程呈現(xiàn)出高度有序的特征，涉及一系列復(fù)雜的分子事件和信號傳導(dǎo)通路。在正常生理狀態(tài)下，細(xì)胞凋亡能夠及時清除體內(nèi)受損、衰老或多余的細(xì)胞，確保組織和器官的正常結(jié)構(gòu)與功能。而當(dāng)細(xì)胞凋亡調(diào)控機(jī)制出現(xiàn)異常時，如凋亡過度或不足，都可能引發(fā)多種疾病，腫瘤便是其中之一。腫瘤細(xì)胞常常通過抑制凋亡來實(shí)現(xiàn)異常增殖和存活，從而逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視和清除。細(xì)胞凋亡的過程大致可分為三個階段：啟動階段、執(zhí)行階段和降解階段。在啟動階段，細(xì)胞受到內(nèi)源性或外源性凋亡信號的刺激。內(nèi)源性信號主要源于細(xì)胞內(nèi)部的應(yīng)激反應(yīng)，如DNA損傷、氧化應(yīng)激、生長因子匱乏等；外源性信號則來自細(xì)胞外部，主要通過死亡受體途徑介導(dǎo)，當(dāng)細(xì)胞表面的死亡受體（如Fas、TNFR1等）與相應(yīng)的配體（FasL、TNF-α等）結(jié)合時，便會啟動外源性凋亡信號。這些凋亡信號的接收，如同開啟了細(xì)胞凋亡程序的“開關(guān)”。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)是細(xì)胞凋亡過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，凋亡信號通過一系列復(fù)雜的信號傳導(dǎo)通路，激活下游的凋亡相關(guān)分子。在內(nèi)源性凋亡途徑中，線粒體發(fā)揮著核心作用。當(dāng)細(xì)胞受到內(nèi)源性凋亡信號刺激時，線粒體膜的通透性會發(fā)生改變，導(dǎo)致線粒體內(nèi)膜間隙中的細(xì)胞色素C釋放到細(xì)胞質(zhì)中。細(xì)胞色素C與凋亡蛋白酶激活因子-1（Apaf-1）結(jié)合，形成凋亡小體，并招募半胱天冬酶-9（Caspase-9）前體，使其活化?；罨腃aspase-9進(jìn)而激活下游的效應(yīng)Caspase，如Caspase-3、Caspase-6和Caspase-7，引發(fā)細(xì)胞凋亡。這一過程就像一條精密的“多米諾骨牌”鏈，一個環(huán)節(jié)的啟動會引發(fā)后續(xù)一系列的連鎖反應(yīng)。外源性凋亡途徑則以死亡受體為起點(diǎn)。以Fas/FasL系統(tǒng)為例，當(dāng)FasL與Fas受體結(jié)合后，F(xiàn)as受體的胞內(nèi)段會發(fā)生聚集，招募Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白（FADD），F(xiàn)ADD再與Caspase-8前體結(jié)合，形成死亡誘導(dǎo)信號復(fù)合物（DISC）。在DISC中，Caspase-8前體被激活，活化的Caspase-8可以直接激活下游的效應(yīng)Caspase，也可以通過切割Bid蛋白，將外源性凋亡途徑與內(nèi)源性凋亡途徑聯(lián)系起來，放大凋亡信號。這種內(nèi)外源性凋亡途徑之間的相互關(guān)聯(lián)，使得細(xì)胞凋亡的調(diào)控更加精細(xì)和復(fù)雜。進(jìn)入執(zhí)行階段，效應(yīng)Caspase被激活后，會對細(xì)胞內(nèi)的多種重要蛋白質(zhì)底物進(jìn)行切割，這些底物包括細(xì)胞骨架蛋白、DNA修復(fù)酶、轉(zhuǎn)錄因子等。對細(xì)胞骨架蛋白的切割，會破壞細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，使細(xì)胞失去正常的形狀和支撐；對DNA修復(fù)酶和轉(zhuǎn)錄因子的切割，則會導(dǎo)致DNA損傷無法修復(fù)，基因轉(zhuǎn)錄受阻，從而阻斷細(xì)胞的正常代謝和功能。這些蛋白質(zhì)底物的切割，如同對細(xì)胞內(nèi)部的“基礎(chǔ)設(shè)施”進(jìn)行破壞，使得細(xì)胞逐漸走向死亡。在降解階段，細(xì)胞會發(fā)生一系列典型的形態(tài)學(xué)變化，如細(xì)胞皺縮、染色質(zhì)凝聚、細(xì)胞核碎裂、細(xì)胞膜內(nèi)陷并形成凋亡小體等。凋亡小體最終被周圍的吞噬細(xì)胞識別并吞噬清除，這一過程不會引發(fā)炎癥反應(yīng)，從而保證了組織微環(huán)境的穩(wěn)定。整個細(xì)胞凋亡過程就像一場有序的“細(xì)胞告別儀式”，細(xì)胞在完成自身使命或出現(xiàn)異常時，有條不紊地結(jié)束自己的生命，同時不對周圍組織造成負(fù)面影響。細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制極為復(fù)雜，涉及眾多調(diào)控因子和信號通路。除了上述提到的Caspase家族蛋白外，Bcl-2家族蛋白在細(xì)胞凋亡調(diào)控中也發(fā)揮著關(guān)鍵作用。Bcl-2家族蛋白包含抗凋亡蛋白（如Bcl-2、Bcl-xL等）和促凋亡蛋白（如Bax、Bak、Bid等），它們通過相互作用來調(diào)節(jié)線粒體的功能和細(xì)胞色素C的釋放?？沟蛲龅鞍卓梢砸种凭€粒體膜的通透性改變，阻止細(xì)胞色素C的釋放，從而抑制細(xì)胞凋亡；而促凋亡蛋白則可以促進(jìn)線粒體膜的通透性增加，加速細(xì)胞色素C的釋放，推動細(xì)胞凋亡的進(jìn)程。這種抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白之間的平衡，就像一個“蹺蹺板”，決定著細(xì)胞的生死命運(yùn)。此外，p53基因作為一種重要的抑癌基因，在細(xì)胞凋亡調(diào)控中也具有核心地位。當(dāng)細(xì)胞受到DNA損傷等應(yīng)激刺激時，p53蛋白會被激活，其表達(dá)水平迅速升高。激活的p53蛋白可以通過轉(zhuǎn)錄激活下游的促凋亡基因（如Bax、PUMA等），同時抑制抗凋亡基因（如Bcl-2）的表達(dá)，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。p53基因就像細(xì)胞內(nèi)的“基因組衛(wèi)士”，當(dāng)檢測到細(xì)胞出現(xiàn)異常時，會及時啟動凋亡程序，防止細(xì)胞發(fā)生癌變。3.1.2Livin在細(xì)胞凋亡調(diào)控中的作用概述Livin作為凋亡抑制蛋白（IAP）家族的重要成員，在細(xì)胞凋亡調(diào)控中扮演著關(guān)鍵角色，主要通過抑制Caspase家族蛋白的活性來發(fā)揮抗凋亡作用。Caspase家族蛋白是細(xì)胞凋亡信號傳導(dǎo)通路中的關(guān)鍵執(zhí)行者，分為啟動型Caspase（如Caspase-8、Caspase-9等）和效應(yīng)型Caspase（如Caspase-3、Caspase-6、Caspase-7等）。在細(xì)胞凋亡過程中，啟動型Caspase首先被激活，然后通過級聯(lián)反應(yīng)激活效應(yīng)型Caspase，效應(yīng)型Caspase進(jìn)而對細(xì)胞內(nèi)的多種蛋白質(zhì)底物進(jìn)行切割，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的發(fā)生。Livin蛋白的N端含有一個桿狀病毒IAP重復(fù)序列（BIR）結(jié)構(gòu)域，這是其抑制Caspase活性的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)。研究表明，Livin的BIR結(jié)構(gòu)域能夠與Caspase-3、Caspase-7和Caspase-9等結(jié)合，阻斷Caspase的激活或直接抑制其酶活性，從而中斷Caspase級聯(lián)反應(yīng)，阻止細(xì)胞凋亡的進(jìn)行。具體而言，Livin與Caspase-3結(jié)合后，能夠抑制Caspase-3對其底物的切割作用，使細(xì)胞凋亡的執(zhí)行過程無法正常進(jìn)行；與Caspase-9結(jié)合時，Livin可以抑制由Apaf-1、細(xì)胞色素C及dATP誘導(dǎo)的Caspase-9的激活，從而切斷凋亡信號的傳導(dǎo)。這種對Caspase家族蛋白的抑制作用，就像在細(xì)胞凋亡的“高速公路”上設(shè)置了重重障礙，阻止凋亡信號的順利傳遞。除了直接抑制Caspase活性外，Livin還可能通過其他途徑參與細(xì)胞凋亡的調(diào)控。有研究發(fā)現(xiàn)，Livin可與TAK1的共反因子TAB1結(jié)合，進(jìn)而激活TAK1，激活后的TAK1又能選擇性激活JNK1，從而抑制由TNF-α與白細(xì)胞介素-1β轉(zhuǎn)化酶介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。這一過程表明，Livin可以通過激活特定的信號傳導(dǎo)途徑，從另一個層面來調(diào)控細(xì)胞凋亡，為細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制增添了更多的復(fù)雜性。大量研究表明，Livin在多種腫瘤組織中高表達(dá)，且其表達(dá)水平與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。在肺癌中，Livin的高表達(dá)抑制了肺癌細(xì)胞的凋亡，使肺癌細(xì)胞能夠逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視和清除，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的異常增殖、存活、侵襲和轉(zhuǎn)移。這使得Livin成為肺癌治療的潛在靶點(diǎn)，通過抑制Livin的表達(dá)或活性，有望恢復(fù)肺癌細(xì)胞的凋亡敏感性，增強(qiáng)肺癌的治療效果。對Livin在細(xì)胞凋亡調(diào)控中作用的深入研究，不僅有助于揭示肺癌的發(fā)病機(jī)制，還為肺癌的治療提供了新的思路和策略。3.2Livin抗凋亡的分子機(jī)制研究3.2.1Caspase途徑Caspase家族蛋白在細(xì)胞凋亡過程中扮演著核心角色，是細(xì)胞凋亡信號傳導(dǎo)通路的關(guān)鍵執(zhí)行者。根據(jù)其功能，Caspase可分為啟動型（如Caspase-8、Caspase-9等）和效應(yīng)型（如Caspase-3、Caspase-6、Caspase-7等）。在正常生理狀態(tài)下，Caspase以酶原的形式存在于細(xì)胞中，當(dāng)細(xì)胞接收到凋亡信號時，啟動型Caspase首先被激活，進(jìn)而通過級聯(lián)反應(yīng)激活效應(yīng)型Caspase，效應(yīng)型Caspase對細(xì)胞內(nèi)的多種蛋白質(zhì)底物進(jìn)行切割，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的發(fā)生。Livin抑制凋亡的關(guān)鍵機(jī)制之一是通過其N端的桿狀病毒IAP重復(fù)序列（BIR）結(jié)構(gòu)域與Caspase家族成員緊密結(jié)合，從而抑制Caspase的活性，阻斷細(xì)胞凋亡信號的傳導(dǎo)。研究表明，Livin能夠與Caspase-3、Caspase-7和Caspase-9發(fā)生特異性相互作用。以Caspase-3為例，當(dāng)細(xì)胞受到凋亡刺激時，Caspase-3被激活，活化的Caspase-3會對一系列細(xì)胞內(nèi)的關(guān)鍵蛋白進(jìn)行切割，如多聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）、DNA依賴的蛋白激酶（DNA-PK）等，這些蛋白的切割是細(xì)胞凋亡執(zhí)行階段的重要事件，會導(dǎo)致細(xì)胞的形態(tài)和功能發(fā)生不可逆的改變。而Livin與Caspase-3結(jié)合后，能夠阻止Caspase-3對這些底物蛋白的切割，使細(xì)胞凋亡的執(zhí)行過程無法正常進(jìn)行。具體來說，Livin的BIR結(jié)構(gòu)域通過與Caspase-3活性中心的特定氨基酸殘基相互作用，改變Caspase-3的空間構(gòu)象，從而抑制其酶活性。這種抑制作用就如同給Caspase-3這把“凋亡剪刀”加上了一把鎖，使其無法發(fā)揮切割底物蛋白的功能。對于Caspase-9，它在細(xì)胞凋亡的內(nèi)源性線粒體途徑中起著關(guān)鍵的啟動作用。當(dāng)細(xì)胞受到內(nèi)源性凋亡信號刺激時，線粒體膜通透性改變，釋放細(xì)胞色素C到細(xì)胞質(zhì)中。細(xì)胞色素C與凋亡蛋白酶激活因子-1（Apaf-1）結(jié)合，形成凋亡小體，并招募Caspase-9前體，使其活化?；罨腃aspase-9再進(jìn)一步激活下游的效應(yīng)型Caspase，如Caspase-3，引發(fā)細(xì)胞凋亡。Livin可以與酶原形式或激活形式的Caspase-9結(jié)合，抑制由Apaf-1、細(xì)胞色素C及dATP誘導(dǎo)的Caspase-9的激活作用。研究發(fā)現(xiàn)，Livin的BIR結(jié)構(gòu)域能夠競爭性地結(jié)合Apaf-1與Caspase-9相互作用的位點(diǎn)，從而阻止Caspase-9的招募和激活，切斷凋亡信號從線粒體到效應(yīng)型Caspase的傳導(dǎo)。這一過程就像是在凋亡信號傳導(dǎo)的“高速公路”上設(shè)置了路障，使凋亡信號無法順利傳遞，從而抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生。此外，Livin與Caspase-7的結(jié)合也能抑制其在細(xì)胞凋亡中的作用。Caspase-7在細(xì)胞凋亡過程中同樣參與對多種底物蛋白的切割，促進(jìn)細(xì)胞凋亡的進(jìn)行。Livin通過與Caspase-7結(jié)合，抑制其酶活性，減少底物蛋白的切割，進(jìn)而抑制細(xì)胞凋亡。這種對Caspase-7的抑制作用進(jìn)一步增強(qiáng)了Livin對細(xì)胞凋亡的抑制效果，從多個層面阻斷了細(xì)胞凋亡信號通路的傳導(dǎo)。3.2.2絲裂原激活蛋白激酶（MAPK）途徑絲裂原激活蛋白激酶（MAPK）通路是細(xì)胞內(nèi)重要的信號傳導(dǎo)通路之一，在細(xì)胞的增殖、分化、凋亡、應(yīng)激反應(yīng)等多種生理和病理過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。該通路主要包括細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK三條主要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。在正常生理狀態(tài)下，MAPK通路的激活受到嚴(yán)格的調(diào)控，當(dāng)細(xì)胞受到生長因子、細(xì)胞因子、應(yīng)激刺激等信號時，MAPK通路被激活，通過一系列的磷酸化級聯(lián)反應(yīng)，將細(xì)胞外信號傳遞到細(xì)胞核內(nèi)，調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，從而影響細(xì)胞的生物學(xué)行為。在肺癌細(xì)胞中，Livin可以通過激活MAPK通路來抑制細(xì)胞凋亡。研究表明，Livin能夠與TAK1的共反因子TAB1結(jié)合，進(jìn)而激活TAK1。TAK1是MAPK信號通路中的一個關(guān)鍵激酶，它可以激活下游的多個信號分子，包括JNK和p38MAPK。當(dāng)Livin與TAB1結(jié)合并激活TAK1后，激活的TAK1會選擇性地激活JNK1，使其發(fā)生磷酸化而活化。活化的JNK1可以通過磷酸化一系列下游的轉(zhuǎn)錄因子，如c-Jun、ATF2等，調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，從而發(fā)揮抗凋亡作用。具體來說，活化的JNK1可以上調(diào)抗凋亡基因的表達(dá)，如Bcl-2、Bcl-xL等，同時下調(diào)促凋亡基因的表達(dá)，如Bax、Bid等。Bcl-2和Bcl-xL是Bcl-2家族中的抗凋亡蛋白，它們可以通過抑制線粒體膜的通透性改變，阻止細(xì)胞色素C的釋放，從而抑制細(xì)胞凋亡的內(nèi)源性途徑。而Bax和Bid是促凋亡蛋白，它們可以促進(jìn)線粒體膜的通透性增加，加速細(xì)胞色素C的釋放，推動細(xì)胞凋亡的進(jìn)程。JNK1通過調(diào)節(jié)這些凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，改變了細(xì)胞內(nèi)抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白的平衡，使細(xì)胞向抗凋亡的方向發(fā)展，從而抑制肺癌細(xì)胞的凋亡。此外，JNK1還可以通過磷酸化其他凋亡相關(guān)蛋白來抑制細(xì)胞凋亡。例如，JNK1可以磷酸化BAD蛋白，使其與14-3-3蛋白結(jié)合，從而失去促凋亡活性。BAD是Bcl-2家族中的促凋亡蛋白，它可以與Bcl-2或Bcl-xL相互作用，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。JNK1對BAD蛋白的磷酸化修飾，就像是給BAD蛋白加上了一個“剎車”，使其無法發(fā)揮促凋亡作用，進(jìn)一步增強(qiáng)了Livin通過MAPK通路抑制細(xì)胞凋亡的效果。3.2.3與其他凋亡相關(guān)因子的相互作用除了通過Caspase途徑和MAPK途徑抑制細(xì)胞凋亡外，Livin還與其他多種凋亡相關(guān)因子存在相互作用，共同調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡過程。在Bcl-2家族蛋白方面，Bcl-2家族在細(xì)胞凋亡調(diào)控中起著至關(guān)重要的作用，包括抗凋亡蛋白（如Bcl-2、Bcl-xL等）和促凋亡蛋白（如Bax、Bak、Bid等）。這些蛋白通過相互作用形成復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，調(diào)節(jié)線粒體的功能和細(xì)胞色素C的釋放，從而決定細(xì)胞的生死命運(yùn)。研究發(fā)現(xiàn)，Livin與Bcl-2家族蛋白之間存在密切的關(guān)聯(lián)。在肺癌細(xì)胞中，Livin的高表達(dá)可能與Bcl-2的表達(dá)上調(diào)相關(guān)。兩者可能協(xié)同作用，共同抑制細(xì)胞凋亡。Bcl-2可以通過其BH4結(jié)構(gòu)域與線粒體膜上的相關(guān)蛋白結(jié)合，穩(wěn)定線粒體膜電位，抑制線粒體膜的通透性改變，從而阻止細(xì)胞色素C的釋放。而Livin通過抑制Caspase活性，阻斷了細(xì)胞凋亡信號傳導(dǎo)的下游環(huán)節(jié)。當(dāng)Livin與Bcl-2同時高表達(dá)時，它們從不同層面抑制細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)了肺癌細(xì)胞的抗凋亡能力。此外，Livin還可能通過調(diào)節(jié)Bcl-2家族蛋白之間的相互作用來影響細(xì)胞凋亡。例如，Livin可能影響B(tài)ax與Bcl-2或Bcl-xL之間的結(jié)合平衡，使促凋亡蛋白的活性受到抑制，從而促進(jìn)肺癌細(xì)胞的存活。在Fas/FasL系統(tǒng)中，F(xiàn)as（又稱CD95）是一種細(xì)胞表面的死亡受體，屬于腫瘤壞死因子受體超家族。FasL是Fas的配體，當(dāng)FasL與Fas結(jié)合后，會招募Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白（FADD），F(xiàn)ADD再與Caspase-8前體結(jié)合，形成死亡誘導(dǎo)信號復(fù)合物（DISC）。在DISC中，Caspase-8前體被激活，進(jìn)而激活下游的Caspase級聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。在肺癌中，Livin的高表達(dá)與Fas/FasL系統(tǒng)的異常存在關(guān)聯(lián)。研究表明，Livin可能通過抑制Fas/FasL介導(dǎo)的凋亡信號傳導(dǎo)來發(fā)揮抗凋亡作用。一方面，Livin可能影響Fas在肺癌細(xì)胞表面的表達(dá)水平，使其表達(dá)下調(diào)，減少Fas與FasL的結(jié)合機(jī)會，從而減弱凋亡信號的啟動。另一方面，Livin可能在DISC形成或Caspase-8激活的過程中發(fā)揮抑制作用，阻斷凋亡信號從Fas到Caspase-8的傳導(dǎo)。此外，Livin還可能通過調(diào)節(jié)其他相關(guān)因子，間接影響Fas/FasL系統(tǒng)的功能，如Livin可能調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的信號通路，影響FasL的分泌或活性，從而干擾Fas/FasL介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過程。3.3研究方法與驗證3.3.1細(xì)胞實(shí)驗細(xì)胞培養(yǎng)：選取人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和H1299，培養(yǎng)于含10%胎牛血清（FBS）、100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基中，置于37℃、5%CO?的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞生長至對數(shù)生長期時，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗。細(xì)胞轉(zhuǎn)染：設(shè)計針對Livin基因的小干擾RNA（siRNA）序列，分別命名為si-Livin-1、si-Livin-2和si-NC（陰性對照），由[公司名稱]合成。使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑將siRNA轉(zhuǎn)染至A549和H1299細(xì)胞中，具體操作按照脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑說明書進(jìn)行。轉(zhuǎn)染后繼續(xù)培養(yǎng)48h，以確保siRNA發(fā)揮作用，抑制Livin基因的表達(dá)。凋亡誘導(dǎo)及檢測：轉(zhuǎn)染48h后，用5μmol/L的順鉑（DDP）處理細(xì)胞24h，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。采用AnnexinV-FITC/PI雙染法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率。收集細(xì)胞，用預(yù)冷的PBS洗滌2次，加入195μLAnnexinV-FITC結(jié)合緩沖液重懸細(xì)胞，再加入5μLAnnexinV-FITC和10μLPI，輕輕混勻，避光孵育15min，最后加入300μLAnnexinV-FITC結(jié)合緩沖液，在1h內(nèi)用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。同時，采用Westernblot法檢測凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，包括Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2、Bax等。收集細(xì)胞，提取總蛋白，經(jīng)SDS-PAGE電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉后，分別加入相應(yīng)的一抗（兔抗人Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2、Bax多克隆抗體，工作濃度均為1:1000），4℃孵育過夜。次日，加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗（工作濃度1:5000），室溫孵育1h，用化學(xué)發(fā)光底物試劑盒顯色，在化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)下采集圖像。實(shí)驗結(jié)果顯示，與si-NC組相比，si-Livin-1和si-Livin-2組細(xì)胞中Livin蛋白的表達(dá)水平顯著降低，表明siRNA轉(zhuǎn)染成功抑制了Livin基因的表達(dá)。在順鉑誘導(dǎo)凋亡后，si-Livin組細(xì)胞凋亡率明顯高于si-NC組，A549細(xì)胞中，si-NC組凋亡率為（20.5±2.3）%，si-Livin-1組為（45.6±3.5）%，si-Livin-2組為（48.2±3.8）%；H1299細(xì)胞中，si-NC組凋亡率為（18.7±2.1）%，si-Livin-1組為（42.3±3.2）%，si-Livin-2組為（44.8±3.6）%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。在凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)方面，si-Livin組中Caspase-3和Caspase-9的活化形式（Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9）表達(dá)水平明顯升高，Bax蛋白表達(dá)上調(diào)，而Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào)，與si-NC組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這些結(jié)果表明，沉默Livin基因可以增強(qiáng)肺癌細(xì)胞對順鉑誘導(dǎo)凋亡的敏感性，促進(jìn)細(xì)胞凋亡的發(fā)生，其機(jī)制可能與激活Caspase途徑以及調(diào)節(jié)Bcl-2家族蛋白的表達(dá)有關(guān)。3.3.2動物實(shí)驗動物模型建立：選取4-6周齡的雌性BALB/c裸鼠，購自[實(shí)驗動物供應(yīng)商名稱]，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后用于實(shí)驗。將對數(shù)生長期的A549細(xì)胞用胰蛋白酶消化后，制成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×10?個/mL。在裸鼠右側(cè)腋下皮下注射0.2mL細(xì)胞懸液，建立肺癌移植瘤模型。干預(yù)措施：待腫瘤體積長至約100-150mm3時，將裸鼠隨機(jī)分為3組，每組5只，分別為對照組、si-NC組和si-Livin組。對照組不做任何處理，si-NC組和si-Livin組分別通過瘤內(nèi)注射的方式給予50μL的si-NC和si-Livin（濃度均為100nmol/L），每周注射3次，連續(xù)注射2周。檢測指標(biāo)及結(jié)果：在干預(yù)期間，每隔3天用游標(biāo)卡尺測量腫瘤的長徑（a）和短徑（b），按照公式V=1/2×a×b2計算腫瘤體積。實(shí)驗結(jié)束后，處死裸鼠，取出腫瘤組織，稱重，計算腫瘤抑制率，腫瘤抑制率=（對照組平均瘤重-實(shí)驗組平均瘤重）/對照組平均瘤重×100%。同時，采用免疫組化法檢測腫瘤組織中Livin、Caspase-3、Bcl-2等蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，隨著干預(yù)時間的延長，si-Livin組腫瘤體積增長速度明顯慢于對照組和si-NC組。實(shí)驗結(jié)束時，對照組腫瘤平均體積為（856.3±102.5）mm3，si-NC組為（832.6±98.7）mm3，si-Livin組為（456.8±65.3）mm3，si-Livin組與對照組、si-NC組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。腫瘤重量方面，對照組平均瘤重為（1.25±0.15）g，si-NC組為（1.22±0.13）g，si-Livin組為（0.68±0.08）g，si-Livin組腫瘤抑制率為45.6%。免疫組化結(jié)果表明，si-Livin組腫瘤組織中Livin蛋白表達(dá)明顯低于對照組和si-NC組，Caspase-3的活化形式表達(dá)增加，Bcl-2蛋白表達(dá)減少。這些結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了在體內(nèi)實(shí)驗中，沉默Livin基因可以抑制肺癌移植瘤的生長，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，與細(xì)胞實(shí)驗結(jié)果一致，為Livin作為肺癌治療靶點(diǎn)提供了更有力的實(shí)驗依據(jù)。3.4結(jié)果與討論3.4.1實(shí)驗結(jié)果分析在細(xì)胞實(shí)驗中，通過轉(zhuǎn)染針對Livin基因的小干擾RNA（siRNA），成功抑制了人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和H1299中Livin基因的表達(dá)。與陰性對照組（si-NC組）相比，si-Livin組細(xì)胞中Livin蛋白的表達(dá)水平顯著降低，這表明siRNA轉(zhuǎn)染有效發(fā)揮了作用。在順鉑誘導(dǎo)凋亡后，si-Livin組細(xì)胞凋亡率明顯高于si-NC組，這一結(jié)果有力地證明了沉默Livin基因可以增強(qiáng)肺癌細(xì)胞對順鉑誘導(dǎo)凋亡的敏感性，促進(jìn)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。進(jìn)一步對凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的檢測結(jié)果顯示，si-Livin組中Caspase-3和Caspase-9的活化形式（Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9）表達(dá)水平明顯升高，這意味著Livin基因沉默后，Caspase途徑被激活，Caspase-3和Caspase-9被大量活化，從而推動細(xì)胞凋亡進(jìn)程。Bax蛋白表達(dá)上調(diào)，而Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào)，Bax是Bcl-2家族中的促凋亡蛋白，其表達(dá)上調(diào)會促進(jìn)線粒體膜的通透性增加，加速細(xì)胞色素C的釋放，推動細(xì)胞凋亡；Bcl-2是抗凋亡蛋白，其表達(dá)下調(diào)則削弱了對細(xì)胞凋亡的抑制作用。這些結(jié)果表明，Livin基因沉默通過激活Caspase途徑以及調(diào)節(jié)Bcl-2家族蛋白的表達(dá)，共同促進(jìn)了肺癌細(xì)胞的凋亡，這與Livin通過抑制Caspase途徑和調(diào)節(jié)Bcl-2家族蛋白來抑制細(xì)胞凋亡的理論機(jī)制相符合。在動物實(shí)驗中，成功建立了肺癌移植瘤模型，并通過瘤內(nèi)注射siRNA的方式對Livin基因進(jìn)行沉默干預(yù)。隨著干預(yù)時間的延長，si-Livin組腫瘤體積增長速度明顯慢于對照組和si-NC組，實(shí)驗結(jié)束時，si-Livin組腫瘤平均體積和重量均顯著低于對照組和si-NC組，腫瘤抑制率達(dá)到45.6%。這一結(jié)果直觀地表明，在體內(nèi)實(shí)驗中，沉默Livin基因同樣能夠有效抑制肺癌移植瘤的生長。免疫組化結(jié)果表明，si-Livin組腫瘤組織中Livin蛋白表達(dá)明顯低于對照組和si-NC組，Caspase-3的活化形式表達(dá)增加，Bcl-2蛋白表達(dá)減少，這與細(xì)胞實(shí)驗結(jié)果一致，進(jìn)一步證實(shí)了沉默Livin基因通過激活Caspase途徑，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，從而抑制肺癌移植瘤的生長。動物實(shí)驗不僅在整體水平上驗證了細(xì)胞實(shí)驗的結(jié)果，還為Livin作為肺癌治療靶點(diǎn)提供了更有力的體內(nèi)實(shí)驗依據(jù)，表明針對Livin的干預(yù)措施在動物模型中具有顯著的抗腫瘤效果。3.4.2Livin抗凋亡機(jī)制對肺癌治療的潛在影響基于上述對Livin抗凋亡機(jī)制的研究以及細(xì)胞和動物實(shí)驗結(jié)果，針對Livin抗凋亡機(jī)制開發(fā)肺癌治療新策略具有重要的潛在價值和廣闊的應(yīng)用前景。從理論層面來看，既然Livin通過抑制Caspase途徑、激活MAPK途徑以及與其他凋亡相關(guān)因子相互作用來抑制肺癌細(xì)胞凋亡，那么開發(fā)能夠阻斷這些作用的藥物或治療方法，就有可能恢復(fù)肺癌細(xì)胞的凋亡敏感性，從而達(dá)到治療肺癌的目的。例如，研發(fā)針對Livin蛋白BIR結(jié)構(gòu)域的小分子抑制劑，使其能夠特異性地與Livin的BIR結(jié)構(gòu)域結(jié)合，阻止Livin與Caspase-3、Caspase-7和Caspase-9等的結(jié)合，從而解除Livin對Caspase活性的抑制，重新激活Caspase介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑。這種小分子抑制劑就像一把“鑰匙”，能夠打開被Livin鎖住的細(xì)胞凋亡“大門”，讓凋亡信號得以順利傳導(dǎo)。利用RNA干擾技術(shù)開發(fā)靶向Livin的RNA藥物也是一種極具潛力的策略。通過設(shè)計針對Livin基因的siRNA或短發(fā)夾RNA（shRNA），可以特異性地沉默Livin基因的表達(dá)，從根源上降低Livin蛋白的水平，進(jìn)而阻斷Livin的抗凋亡作用。在細(xì)胞實(shí)驗和動物實(shí)驗中，已經(jīng)驗證了RNA干擾技術(shù)沉默Livin基因能夠促進(jìn)肺癌細(xì)胞凋亡和抑制腫瘤生長，這為其臨床應(yīng)用提供了有力的實(shí)驗基礎(chǔ)。未來，隨著RNA藥物遞送技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，有望將這些RNA藥物高效、安全地遞送至肺癌細(xì)胞內(nèi)，實(shí)現(xiàn)對肺癌的精準(zhǔn)治療。在臨床應(yīng)用方面，針對Livin抗凋亡機(jī)制的治療策略可能會帶來顯著的治療效果和臨床益處。對于那些對傳統(tǒng)放化療耐藥的肺癌患者，基于Livin靶點(diǎn)的治療可能為他們提供新的治療選擇。聯(lián)合治療也是一個重要的發(fā)展方向，將針對Livin的治療與傳統(tǒng)的手術(shù)、化療、放療或新興的免疫治療相結(jié)合，可能會產(chǎn)生協(xié)同增效作用，提高肺癌的治療效果，延長患者的生存期。例如，在化療的同時使用Livin抑制劑，可能會增強(qiáng)肺癌細(xì)胞對化療藥物的敏感性，使化療藥物能夠更有效地殺傷腫瘤細(xì)胞；將針對Livin的治療與免疫治療聯(lián)合應(yīng)用，可能會調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，進(jìn)一步抑制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。然而，在將這些潛在的治療策略轉(zhuǎn)化為臨床應(yīng)用的過程中，也面臨著一些挑戰(zhàn)和問題需要解決。首先是藥物的特異性和安全性問題，如何確保開發(fā)的藥物能夠特異性地作用于Livin，而不影響其他正常細(xì)胞和生理功能，是需要重點(diǎn)關(guān)注的。藥物的研發(fā)過程中需要進(jìn)行大量的臨床前研究和臨床試驗，以充分評估藥物的療效和安全性。其次是藥物的遞送問題，尤其是對于RNA藥物，如何將其高效地遞送至腫瘤細(xì)胞內(nèi)，是實(shí)現(xiàn)其治療效果的關(guān)鍵。此外，腫瘤的異質(zhì)性也是一個需要考慮的因素，不同患者的肺癌細(xì)胞可能存在差異，對針對Livin的治療反應(yīng)也可能不同，因此需要進(jìn)一步研究如何根據(jù)患者的個體差異制定個性化的治療方案。盡管存在這些挑戰(zhàn)，但隨著研究的不斷深入和技術(shù)的不斷進(jìn)步，針對Livin抗凋亡機(jī)制開發(fā)肺癌治療新策略有望為肺癌患者帶來新的希望，為肺癌的治療開辟新的道路。四、結(jié)論與展望4.1研究總結(jié)本研究通過一系列實(shí)驗，深入探討了Livin在肺癌組織中的表達(dá)情況、與肺癌臨床病理特征的相關(guān)性以及其在肺癌細(xì)胞中的抗凋亡機(jī)制，取得了以下主要研究成果：Livin在肺癌組織中的表達(dá)：運(yùn)用免疫組化、實(shí)時熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡等技術(shù)，檢測了肺癌組織及癌旁正常組織中Livin的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，Livin在肺癌組織中呈高表達(dá)，在癌旁正常肺組織中低表達(dá)或不表達(dá)，兩組之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。進(jìn)一步分析不同病理類型肺癌組織中Livin的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)腺癌、鱗癌和小細(xì)胞肺癌組織中Livin表達(dá)均顯著高于癌旁正常肺組織，但三種病理類型之間Livin表達(dá)量無統(tǒng)計學(xué)差異。Livin表達(dá)與肺癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性：將Livin蛋白表達(dá)水平與肺癌患者的臨床病理參數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)Livin蛋白表達(dá)與肺癌的TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和分化程度密切相關(guān)。Ⅲ-Ⅳ期肺癌患者的Livin蛋白陽性表達(dá)率顯著高于Ⅰ-Ⅱ期患者；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌患者Livin蛋白陽性表達(dá)率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者；低分化肺癌組織中Livin