第1章基因工程第2節(jié)基因工程的基本操作程序?qū)W習(xí)目標(biāo)學(xué)習(xí)目標(biāo)1.運(yùn)用系統(tǒng)思想解釋基因工程的基本步驟和原理。（生命觀念）2.能結(jié)合情境和資料，采用歸納與概括、模型與建模的方法，以文字或圖示的形式，掌握目的基因的篩選與獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定的具體方法。（科學(xué)思維）3.結(jié)合PCR擴(kuò)增DNA片段并完成電泳鑒定實(shí)驗(yàn)，掌握實(shí)驗(yàn)原理和操作。（科學(xué)探究）自主預(yù)習(xí)自主預(yù)習(xí)一、目的基因的篩選與獲取1.目的基因(1)概念:用于改變或獲得等的基因。

(2)實(shí)例:培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉用到的目的基因是基因。

2.篩選合適的目的基因(1)較為有效的方法:從相關(guān)的和的基因中進(jìn)行篩選。

(2)實(shí)例:在培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉之前,科學(xué)家不僅掌握了Bt基因的序列信息,也對(duì)Bt基因的表達(dá)產(chǎn)物——有了較為深入的了解。

(3)認(rèn)識(shí)基因結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)方法:技術(shù)、數(shù)據(jù)庫(kù)、工具。

3.利用PCR獲取和擴(kuò)增目的基因(1)PCR的含義:PCR是的縮寫。它是一項(xiàng)根據(jù)的原理,在體外提供的各種組分與反應(yīng)條件,對(duì)進(jìn)行大量復(fù)制的技術(shù)。

(2)條件:DNA模板、分別與兩條模板鏈結(jié)合的2種、4種、。

(3)過程①變性:當(dāng)溫度上升到90℃時(shí),雙鏈DNA。

②復(fù)性:當(dāng)溫度下降到50℃左右時(shí),通過堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合。

③延伸:當(dāng)溫度上升到72℃左右時(shí),溶液中的在耐高溫的的作用下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則合成新的DNA鏈。

④重復(fù)循環(huán)多次。(4)結(jié)果:每次循環(huán)后目的基因的量增加一倍,即成形式擴(kuò)增(約為2n,其中n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù))。

二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建1.構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的(1)使目的基因在受體細(xì)胞中,并且給下一代。

(2)使目的基因能夠和發(fā)揮作用。

2.基因表達(dá)載體的組成[填圖]3.基因表達(dá)載體的構(gòu)建首先用一定的切割載體,使它出現(xiàn)一個(gè)切口;然后用限制酶或的限制酶切割含有目的基因的DNA片段;再利用將目的基因片段拼接到載體的切口處。

三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1.轉(zhuǎn)化:目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并在受體細(xì)胞內(nèi)和的過程。

2.目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法(1)目的基因?qū)胫参锛?xì)胞①花粉管通道法Ⅰ.用微量注射器將含目的基因的DNA溶液直接注入中。

Ⅱ.在植物受粉后的一定時(shí)間內(nèi),剪去柱頭,將DNA溶液滴加在花柱切面上,使目的基因借助進(jìn)入。

②農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法Ⅰ.農(nóng)桿菌的特點(diǎn):農(nóng)桿菌自然條件下侵染植物和植物;農(nóng)桿菌細(xì)胞中的Ti質(zhì)粒上的能夠整合到所侵染細(xì)胞的上。

Ⅱ.轉(zhuǎn)化方法:將目的基因插入農(nóng)桿菌中,讓農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞。

(2)目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞①常用方法:法。

②常用受體細(xì)胞:。

(3)目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞①方法:用處理細(xì)胞,使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài),然后將重組的基因表達(dá)載體導(dǎo)入其中。

②常用受體細(xì)胞:原核細(xì)胞(使用最廣泛的是大腸桿菌)。四、目的基因的檢測(cè)與鑒定1.分子水平檢測(cè)(1)通過等技術(shù)檢測(cè)受體細(xì)胞染色體DNA上是否插入了目的基因或檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA。

(2)從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì),用相應(yīng)的抗體進(jìn)行雜交,檢測(cè)目的基因是否翻譯成了蛋白質(zhì)。

2.個(gè)體生物學(xué)水平鑒定包括的接種實(shí)驗(yàn),以確定是否有抗蟲的特性及抗性的程度;與天然產(chǎn)品活性進(jìn)行比較等。

五、DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定(1)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)①PCR原理：利用了________________原理。②電泳：DNA分子具有可解離的基團(tuán)，這些基團(tuán)可以帶上正電荷或負(fù)電荷。在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與它所帶電荷______的電極移動(dòng)，這個(gè)過程就是電泳。③PCR的產(chǎn)物一般通過瓊脂糖凝膠電泳來(lái)鑒定。在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的________________等有關(guān)。(2)PCR實(shí)驗(yàn)操作步驟(3)DNA的電泳鑒定：凝膠中的DNA分子通過染色，可以在波長(zhǎng)為____________的紫外燈下被檢測(cè)出來(lái)?！疚业睦Щ蟆縋CR過程中的引物是否越長(zhǎng)越好？課堂探究課堂探究1997年,我國(guó)政府首次批準(zhǔn)商業(yè)化種植轉(zhuǎn)基因抗蟲棉。到2015年,我國(guó)已育成轉(zhuǎn)基因抗蟲棉新品種100多個(gè)，減少農(nóng)藥用量40萬(wàn)噸，增收節(jié)支社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益450億元。你知道轉(zhuǎn)基因抗蟲棉抗蟲的機(jī)制是什么嗎?培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉一般需要哪些步驟?探究一、目的基因的篩選與獲取閱讀教材P76～79，結(jié)合下列資料，完成學(xué)案問題[資料]下圖是PCR擴(kuò)增技術(shù)獲得Bt抗蟲基因部分過程，請(qǐng)思考完成下列問題：1.利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因需要提供什么條件？2.DNA復(fù)制時(shí)為什么需要引物？3.在PCR過程中，引物是什么？PCR過程引物的作用是什么？4.構(gòu)建模型：請(qǐng)根據(jù)圖示，利用引物A、B畫第二、三輪PCR。5.PCR所需引物是依據(jù)________的一段已知序列設(shè)計(jì)而成的，圖中引物A與引物B________(填“相同”或“不同”)，其在PCR過程中________(填“能”或“不能”)重復(fù)利用。6.圖中所示利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，在第______輪循環(huán)產(chǎn)物中開始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長(zhǎng)的DNA片段，出現(xiàn)____個(gè)這樣的等長(zhǎng)的DNA片段。一個(gè)目的基因分子在第3次擴(kuò)增時(shí)，需要________種引物，需要________個(gè)引物。如果循環(huán)n次，則共需消耗________對(duì)引物。7.用PCR技術(shù)可以擴(kuò)增mRNA嗎？【歸納提升】PCR技術(shù)與生物體內(nèi)DNA復(fù)制的比較比較項(xiàng)目PCR技術(shù)DNA復(fù)制區(qū)別解旋方式DNA在作用下變性解旋

催化

場(chǎng)所細(xì)胞(在PCR擴(kuò)增儀內(nèi))

細(xì)胞(主要在細(xì)胞核內(nèi))

酶耐高溫的

、普通的等

溫度條件需控制溫度,在溫度下

細(xì)胞內(nèi)條件

合成的對(duì)象DNA片段或基因DNA分子聯(lián)系①模板:均需要作為模板進(jìn)行物質(zhì)合成;

②原料:均為;

③酶:均需要進(jìn)行催化;

④引物:均需要引物,使DNA聚合酶從引物的端開始連接脫氧核苷酸

探究二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建閱讀教材P80第1～3段，結(jié)合下列資料，完成下列問題【資料】下圖中目的基因?yàn)锽t基因，為了讓目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且遺傳給下一代;同時(shí),使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用，進(jìn)行基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程。請(qǐng)結(jié)合圖示，回答下列問題：1.獲取Bt基因后能不能直接將它導(dǎo)入受體細(xì)胞？為什么？2.構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是什么？3.目的基因插入載體時(shí)，插入位點(diǎn)是不是隨意的？為什么？4.據(jù)圖分析，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，能否用限制酶SmaⅠ切割質(zhì)粒？為什么？5.用同一種限制酶分別切割質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組DNA的方法，稱為“單酶切法”。如使用限制酶EcoRⅠ分別切割質(zhì)粒和外源DNA，其結(jié)果如下，分析下列回答：①黏性末端1與2能被DNA連接酶連接嗎？黏性末端3與4呢？②黏性末端1與3、2與4能被DNA連接酶連接嗎？1與4、2與3呢？6.用兩種能產(chǎn)生不同黏性末端的限制酶分別同時(shí)切割質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組DNA的方法，稱為“雙酶切法”。如使用限制酶BamHⅠ和HindⅢ分別同時(shí)切割質(zhì)粒和外源DNA，其結(jié)果如下，分析下列回答：①黏性末端1與2能被DNA連接酶連接嗎？黏性末端3與4呢？②黏性末端1與3、2與4能被DNA連接酶連接嗎？1與4、2與3呢？③通過上述分析，與“單酶切法”相比，“雙酶切法”有何優(yōu)點(diǎn)？【歸納提升】限制酶的選擇技巧根據(jù)目的基因兩端的限制酶切割位點(diǎn)確定限制酶的種類(1)應(yīng)選擇切割位點(diǎn)位于目的基因兩端的限制酶，如圖甲可選擇________。(2)不能選擇切割位點(diǎn)位于目的基因內(nèi)部的限制酶，如圖甲不能選擇_____。(3)為避免目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化和隨意連接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，如圖甲也可選擇用PstⅠ和EcoRⅠ兩種限制酶(但要確保質(zhì)粒上也有這兩種酶的切割位點(diǎn))。探究三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞及目的基因的檢測(cè)與鑒定閱讀教材P80～82，結(jié)合下列資料，完成下列問題【資料】基因工程中務(wù)必使目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)。受體細(xì)胞不同，采用的導(dǎo)入方法也不同。常見的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、花粉管通道法、顯微注射法以及用Ca2＋處理等。下面為利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法制備轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的過程圖。1.在用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的過程中，一定要將目的基因插入Ti質(zhì)粒的T－DNA上的原因是什么？2.將基因表達(dá)載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌細(xì)胞時(shí)，應(yīng)怎樣處理農(nóng)桿菌細(xì)胞？3.農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法是將目的基因?qū)腚p子葉植物和裸子植物的一種方法，原因是雙子葉植物和裸子植物能夠產(chǎn)生一種吸引農(nóng)桿菌的化學(xué)物質(zhì)，而單子葉植物不能產(chǎn)生這種物質(zhì)，能不能利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)雴巫尤~植物？說明原因。4.目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞時(shí)，常用的受體細(xì)胞是什么？5.檢測(cè)棉花的染色體DNA上是否插入了Bt基因或檢測(cè)Bt基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，用_________________等方法;從轉(zhuǎn)基因棉花中提取____________，用相應(yīng)的________進(jìn)行________________，檢測(cè)Bt基因是否翻譯成Bt抗蟲蛋白等，其次，還需要進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定。例如，通過___________來(lái)確定Bt基因是否賦予了棉花抗蟲特性以及抗性的程度?！練w納提升】農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中的兩次拼接和兩次導(dǎo)入(1)第一次拼接是將目的基因拼接到Ti質(zhì)粒的________上，第二次拼接(非人工直接操作)是指插入目的基因的T－DNA拼接到受體細(xì)胞的_______________。(2)第一次導(dǎo)入是將含目的基因的Ti質(zhì)粒導(dǎo)入__________________，第二次導(dǎo)入(非人工直接操作)是指含目的基因的T－DNA導(dǎo)入______________。探究四、DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定自主閱讀教材P84～85，結(jié)合下列資料，完成下列問題【資料】可通過PCR技術(shù)擴(kuò)增Bt基因的數(shù)量，PCR的產(chǎn)物一般通過瓊脂糖凝膠電泳來(lái)鑒定，回答下列有關(guān)問題：1．是否成功擴(kuò)增出DNA片段，判斷的依據(jù)是什么？2．進(jìn)行電泳鑒定的結(jié)果如果不止一條條帶，請(qǐng)分析產(chǎn)生這個(gè)結(jié)果的可能原因。1.下列有關(guān)體內(nèi)DNA復(fù)制與PCR技術(shù)比較的敘述，錯(cuò)誤的是()A.二者子鏈的延伸方向相同，均為5′端→3′端B.二者均需要解旋酶破壞氫鍵來(lái)實(shí)現(xiàn)解旋C.體內(nèi)DNA復(fù)制需要能量，PCR反應(yīng)也需要能量D.二者遵循的堿基互補(bǔ)配對(duì)原則相同2.下面是利用基因工程技術(shù)培育轉(zhuǎn)基因植物，進(jìn)而生產(chǎn)可食用疫苗的部分過程示意圖，其中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ為四種限制性內(nèi)切核酸酶。下列說法錯(cuò)誤的是()A.圖示過程是基因工程的核心步驟B.表達(dá)載體構(gòu)建時(shí)需要用到限制酶SmaⅠC.抗卡那霉素基因的存在有利于將含有抗原基因的細(xì)胞篩選出來(lái)D.除圖示組成外，表達(dá)載體中還應(yīng)該含有啟動(dòng)子和終止子等結(jié)構(gòu)3．（不定項(xiàng)）如圖為科學(xué)家通過基因工程培育抗蟲棉時(shí)，從蘇云金桿菌中提取抗蟲基因“放入”棉花細(xì)胞中，與棉花的DNA分子“結(jié)合起來(lái)”而發(fā)揮作用的過程示意圖。下列相關(guān)說法正確的是()A．圖中Ⅰ是質(zhì)粒，步驟①需要用到限制酶和DNA連接酶B．圖中Ⅱ是含目的基因的重組質(zhì)粒，步驟②是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入棉花細(xì)胞C．圖中Ⅲ是農(nóng)桿菌，通過步驟③將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞D．剔除培育成功的抗蟲棉體內(nèi)的四環(huán)素抗性基因不會(huì)影響抗蟲基因的表達(dá)4.目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，需要檢測(cè)目的基因是否可以維持穩(wěn)定和表達(dá)其遺傳特性。下列關(guān)于目的基因的檢測(cè)和鑒定的敘述，正確的是()A.目的基因能否在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是能否轉(zhuǎn)錄出mRNAB.可采用PCR檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄和翻譯C.可從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)來(lái)檢測(cè)目的基因是否翻譯成相應(yīng)蛋白質(zhì)D.抗蟲、抗病檢驗(yàn)用于確定轉(zhuǎn)基因生物是否具備相關(guān)性狀屬于分子水平的檢測(cè)5.某實(shí)驗(yàn)小組利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育耐鹽水稻，圖1表示含有耐鹽基因的外源DNA分子，圖2表示質(zhì)粒，其上含有BamHⅠ、SmaⅠ和HindⅢ三種限制酶的切割位點(diǎn)。請(qǐng)回答下列問題。(1)分析上圖可知，欲構(gòu)建重組DNA分子，應(yīng)選用____________________兩種限制酶切割質(zhì)粒和外源DNA分子，使用兩種不同的限制酶切割含目的基因的外源DNA和質(zhì)粒的優(yōu)點(diǎn)是__________________________________________________。(2)題(1)中不使用另外一種限制酶切割的原因是____________________________。題(1)中構(gòu)建成功的重組質(zhì)粒若用該酶完全切割能產(chǎn)生________種不同的DNA片段。(3)從個(gè)體水平上鑒定耐鹽基因是否成功表達(dá)的方法是___________________________________________________________________________________________。[課堂小結(jié)]請(qǐng)以概念圖形式總結(jié)本節(jié)課的內(nèi)容參考答案參考答案自主預(yù)習(xí)一、1.(1)受體細(xì)胞性狀預(yù)期表達(dá)產(chǎn)物(2)Bt抗蟲蛋白2.(1)已知結(jié)構(gòu)功能清晰(2)Bt抗蟲蛋白(3)測(cè)序序列序列比對(duì)3.(1)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)DNA半保留復(fù)制參與DNA復(fù)制目的基因的核苷酸序列(2)引物脫氧核苷酸耐高溫的DNA聚合酶(3)①解聚為單鏈②兩種引物③4種脫氧核苷酸DNA聚合酶(4)指數(shù)二、1.(1)穩(wěn)定存在遺傳(2)表達(dá)2.3.限制酶同種能產(chǎn)生相同末端DNA連接酶三、1.維持穩(wěn)定表達(dá)2.(1)①Ⅰ.子房Ⅱ.花粉管通道胚囊②Ⅰ.雙子葉裸子TDNA染色體DNAⅡ.Ti質(zhì)粒的TDNA(2)①顯微注射②受精卵(3)①Ca2+四、1.(1)PCR(2)抗原—抗體2.抗蟲、抗病五、①DNA的熱變性②相反③大小和構(gòu)象(2)微量移液器離心管底部(3)300nm課堂探究探究一、1.模板、酶、原料、引物以及特定的溫度。2.在DNA擴(kuò)增時(shí)，DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA，只能從引物的3′端延伸DNA鏈，因此DNA復(fù)制時(shí)應(yīng)加入兩種引物。3.引物是一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對(duì)的短單鏈核酸。使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸。4.5.目的基因不同不能6.3228(2n－1)7.mRNA不可以直接擴(kuò)增，需要將它逆轉(zhuǎn)錄成cDNA再進(jìn)行擴(kuò)增?！練w納提升】高溫解旋酶外內(nèi)DNA聚合酶解旋酶DNA聚合酶較高溫和脫氧核苷酸鏈4種脫氧核苷酸DNA聚合酶3′探究二、1.不能，是因?yàn)橛坞x的DNA進(jìn)入受體細(xì)胞，一般會(huì)直接被分解，即使可以轉(zhuǎn)錄翻譯成蛋白質(zhì)，游離的DNA片段也無(wú)法隨著細(xì)胞分裂而進(jìn)行復(fù)制，導(dǎo)致子代細(xì)胞中不再含有目的基因。2.讓目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。3.不是，目的基因應(yīng)插入到啟動(dòng)子和終止子之間的部位，因?yàn)橹挥胁迦朐趩?dòng)子和終止子之間，目的基因才可以正常表達(dá)。4.不能；因?yàn)镾maⅠ會(huì)破壞質(zhì)粒的抗生素抗性基因。質(zhì)粒上的抗生素抗性基因是標(biāo)記基因，便于重組DNA分子的篩選，若被破壞，無(wú)法進(jìn)一步篩選。5.①能，能。②都能，都能。6.①不能，不能。②能，能，不能，不能。③可以防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化以及目的基因與質(zhì)粒的反向連接?！練w納提升】(1)PstⅠ（2）SmaⅠ探究三、1.原因是農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T－DNA(可轉(zhuǎn)移的DNA)可轉(zhuǎn)移至被侵染的細(xì)胞，并且整合到該細(xì)胞的染色體DNA上。2.基因表達(dá)載體(重組質(zhì)粒)導(dǎo)入農(nóng)桿菌細(xì)胞時(shí)，要用Ca2＋處理農(nóng)桿菌細(xì)胞，使其處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，利于重組質(zhì)粒的導(dǎo)入。3.能，可從雙子葉植物中提取該化學(xué)物質(zhì)，再用該化學(xué)物質(zhì)處理單子葉植物細(xì)胞，然后就可用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)雴巫尤~植物細(xì)胞。4.對(duì)于動(dòng)物來(lái)說，受體細(xì)胞一般是受精卵，因?yàn)槭芫驯憩F(xiàn)全能性相對(duì)容易，而高度分化的動(dòng)物體細(xì)胞的全能性不易表現(xiàn)。5.PCR蛋白質(zhì)抗體抗原—抗體雜交采摘抗蟲棉的葉片飼喂棉鈴蟲【歸納提升】（1）T-DNA染色體DNA上（2）農(nóng)桿菌(Ca2＋處理法)受體細(xì)胞(農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法)探究四、1．可以通過在紫外燈下直接觀察DNA條帶的分布及粗細(xì)程度來(lái)評(píng)價(jià)擴(kuò)增的結(jié)果。2．如果擴(kuò)增結(jié)果不止一條條帶，可能的原因有：引物設(shè)計(jì)不合理，它們與非目的序列有同源性或容易聚合形成二聚體；復(fù)性溫度過低；DNA聚合酶的質(zhì)量不好等。當(dāng)堂訓(xùn)練1.B解析:DNA體內(nèi)復(fù)制與利用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA時(shí)，子鏈的延伸方向相同，均為5′端→3′端，A正確；PCR擴(kuò)增DNA時(shí)，解旋不需要解旋酶，而是在高溫條件下使氫鍵斷裂，B錯(cuò)誤；體內(nèi)DNA復(fù)制與利用PCR擴(kuò)增DNA時(shí)都需要能量，但兩者所需能量來(lái)源不同，C正確；體內(nèi)DNA復(fù)制與利用PCR擴(kuò)增DNA時(shí)，遵循的堿基互補(bǔ)配對(duì)原則相同，D正確。2.B解析:圖示過程為基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，是基因工程中的核心步驟，A正確；構(gòu)建表達(dá)載體過程中需要將目的基因完整切割下來(lái)，此時(shí)要用到限制酶