2025湖北省pcr上崗證考試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的基本原理是（）A.基因重組B.核酸雜交C.堿基互補(bǔ)配對(duì)D.蛋白質(zhì)合成答案：C2.在PCR反應(yīng)中，起模板作用的是（）A.dNTPB.引物C.待擴(kuò)增的DNAD.Taq酶答案：C3.Taq酶的特點(diǎn)不包括（）A.耐高溫B.不耐高溫C.具有DNA聚合酶活性D.常用于PCR反應(yīng)答案：B4.PCR反應(yīng)中，引物的作用是（）A.提供3'-OH末端，啟動(dòng)DNA合成B.提供5'-OH末端，啟動(dòng)DNA合成C.提供能量D.結(jié)合模板DNA的中間部分答案：A5.以下關(guān)于PCR循環(huán)次數(shù)的說法正確的是（）A.循環(huán)次數(shù)越多越好B.循環(huán)次數(shù)過少會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)物量不足C.一般循環(huán)次數(shù)固定為30次D.循環(huán)次數(shù)與產(chǎn)物量無關(guān)答案：B6.PCR產(chǎn)物的分析方法不包括（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.測(cè)序C.蛋白質(zhì)印跡法D.熒光定量PCR分析答案：C7.在熒光定量PCR中，用來檢測(cè)產(chǎn)物量的是（）A.熒光染料B.放射性同位素C.酶標(biāo)記D.生物素標(biāo)記答案：A8.進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，防止污染的重要措施不包括（）A.實(shí)驗(yàn)分區(qū)操作B.頻繁更換手套C.所有試劑混合后再分裝D.使用一次性耗材答案：C9.以下哪種情況可能導(dǎo)致PCR假陽性結(jié)果（）A.模板DNA量過少B.引物設(shè)計(jì)不合理C.存在污染D.反應(yīng)溫度過高答案：C10.PCR反應(yīng)體系中，Mg2?的作用是（）A.激活Taq酶B.提供能量C.穩(wěn)定引物D.穩(wěn)定DNA模板答案：A二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)的基本要素包括（）A.模板B.引物C.Taq酶D.dNTPE.Mg2?答案：ABCDE2.引物設(shè)計(jì)的原則有（）A.長(zhǎng)度合適B.避免二級(jí)結(jié)構(gòu)C.特異性高D.GC含量適中E.3'端避免錯(cuò)配答案：ABCDE3.以下哪些是PCR技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域（）A.基因診斷B.法醫(yī)鑒定C.遺傳疾病研究D.生物進(jìn)化研究E.轉(zhuǎn)基因檢測(cè)答案：ABCDE4.影響PCR反應(yīng)特異性的因素有（）A.引物特異性B.模板純度C.Mg2?濃度D.退火溫度E.循環(huán)次數(shù)答案：ABCDE5.在PCR實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)分區(qū)包括（）A.試劑準(zhǔn)備區(qū)B.樣本制備區(qū)C.擴(kuò)增區(qū)D.產(chǎn)物分析區(qū)E.清潔區(qū)答案：ABCD6.防止PCR污染的方法有（）A.嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范B.物理隔離不同實(shí)驗(yàn)區(qū)C.定期對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行清潔和消毒D.對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備進(jìn)行定期維護(hù)和校準(zhǔn)E.使用有防污染設(shè)計(jì)的試劑和耗材答案：ABCDE7.熒光定量PCR的特點(diǎn)有（）A.靈敏度高B.特異性強(qiáng)C.能定量分析D.可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)E.需要特殊的儀器設(shè)備答案：ABCDE8.PCR反應(yīng)中可能出現(xiàn)的問題有（）A.假陽性B.假陰性C.非特異性擴(kuò)增D.擴(kuò)增效率低E.引物二聚體形成答案：ABCDE9.以下關(guān)于Taq酶的說法正確的是（）A.是一種熱穩(wěn)定的DNA聚合酶B.從嗜熱微生物中提取C.其活性受溫度影響D.在PCR反應(yīng)中不可或缺E.不同來源的Taq酶活性可能有差異答案：ABCDE10.PCR產(chǎn)物的電泳檢測(cè)中，影響電泳結(jié)果的因素有（）A.瓊脂糖濃度B.電泳電壓C.緩沖液種類D.上樣量E.電泳時(shí)間答案：ABCDE三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)可以在常溫下進(jìn)行。（）答案：錯(cuò)誤2.引物長(zhǎng)度越長(zhǎng)，特異性越高。（）答案：錯(cuò)誤3.在PCR反應(yīng)中，dNTP的濃度越高越好。（）答案：錯(cuò)誤4.熒光定量PCR只能檢測(cè)DNA。（）答案：錯(cuò)誤5.只要操作規(guī)范，PCR實(shí)驗(yàn)就不會(huì)出現(xiàn)污染。（）答案：錯(cuò)誤6.Taq酶在低溫下也具有很高的活性。（）答案：錯(cuò)誤7.所有的DNA都可以作為PCR的模板。（）答案：錯(cuò)誤8.瓊脂糖凝膠電泳可以精確測(cè)定PCR產(chǎn)物的大小。（）答案：錯(cuò)誤9.引物二聚體的形成會(huì)影響PCR反應(yīng)的特異性。（）答案：正確10.增加PCR的循環(huán)次數(shù)一定會(huì)提高產(chǎn)物量。（）答案：錯(cuò)誤四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述PCR反應(yīng)的基本步驟。答案：PCR反應(yīng)基本步驟包括變性（高溫使模板DNA雙鏈解開）、退火（低溫使引物與模板DNA互補(bǔ)鏈結(jié)合）、延伸（中溫由Taq酶催化合成新的DNA鏈），這三個(gè)步驟循環(huán)進(jìn)行。2.說明防止PCR假陽性結(jié)果的措施。答案：防止PCR假陽性結(jié)果措施包括實(shí)驗(yàn)分區(qū)操作、避免交叉污染、使用一次性耗材、對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境和儀器設(shè)備清潔消毒、試劑嚴(yán)格分裝保存等。3.簡(jiǎn)述引物設(shè)計(jì)時(shí)如何考慮特異性。答案：考慮引物特異性時(shí)要保證引物長(zhǎng)度合適、避免二級(jí)結(jié)構(gòu)、GC含量適中、3'端避免錯(cuò)配，使其與目的基因序列特異性結(jié)合，避免與其他非目的基因結(jié)合。4.解釋熒光定量PCR中熒光信號(hào)產(chǎn)生的原理。答案：在熒光定量PCR中，熒光染料可特異性結(jié)合雙鏈DNA或通過標(biāo)記的探針與產(chǎn)物結(jié)合，隨著產(chǎn)物增加，結(jié)合的熒光染料或探針增加，產(chǎn)生的熒光信號(hào)增強(qiáng)。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論P(yáng)CR技術(shù)在新型冠狀病毒檢測(cè)中的應(yīng)用及意義。答案：PCR技術(shù)可快速檢測(cè)新冠病毒核酸。其意義在于能早期診斷，對(duì)于控制疫情傳播、及時(shí)隔離患者、防止病毒進(jìn)一步擴(kuò)散非常關(guān)鍵。2.分析PCR實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增的原因及解決方法。答案：原因包括引物特異性差、退火溫度不合適等。解決方法有重新設(shè)計(jì)引物、優(yōu)化退火溫度等。