TechnicalspecificationonantimicrobialsusceptibilityWS/T639—目 附錄A臨床各種屬細(xì)菌的藥敏試驗方法和試驗條 附錄B不常見苛養(yǎng)菌和非苛養(yǎng)菌藥敏試驗折 WS/TWS/T639—抗微生物藥物敏感性試驗Antimicrobialsusceptibility Minimalinhibitory折 敏 中 劑量依賴型敏感Susceptible-dose耐 非敏感 Epidemiologicalcutoff野生型Wild- 效 WS/TWS/T639—基本一致性Essential分類一致性Categorical極重大誤差Verymajor Major小誤差Minor Routine補充（非常規(guī)）藥敏試驗Supplementalnotrouting) Screening SurrogateagentWS/TWS/T639— EquivalentagentMICMIC（mg/Lμg/mL）和結(jié)果解釋；紙片擴散法報告抑菌圈直徑值（應(yīng)Mueller-Hinton（Mueller-Hinton103.4Kpa、121.315min40～50培養(yǎng)基制備完畢后室溫下（25）校正pH7.2～7.4A。對大多數(shù)穩(wěn)定、且不易降解的抗菌藥物，將未用完的儲液分裝至無菌小管，置于-70640℃～50MHAMHA3mm～4mm2℃～85被測菌株和質(zhì)控菌株配制0.5麥?zhǔn)蠞岫葐挝坏木鷳乙?，約1×108CFU/mL～2×108CFU/mL，作為初始1μL～3μL104CFU/點（5mm～8mm）。置于35±216h～20h?？琉B(yǎng)菌的藥敏試驗平皿孵育條件和時間見附錄AMueller-Hinton（Cation-adjustedMueller-Hinton103.4Kpa、121.315min℃法）1mL13mm×100mm（宏量肉湯稀釋法），當(dāng)日使用或凍存于≤-20℃?zhèn)溆?。被測菌株和相應(yīng)質(zhì)控菌株如大腸埃希菌ATCC25922配制0.5麥?zhǔn)蠞岫葐挝坏木鷳乙海鳛槌跏冀臃N稀釋法）稀釋，混勻，菌液濃度約為1×106CFU/mL。1mL4.2.2.1.2（5×105CFU/mL）15min35216h～20h種菌懸液濃度為5×105CFU/mL，具體步驟：0.01mL10mL（1:1000）0.1mL（根據(jù)不同細(xì)菌生長特性選取非35216h～20h50CFU5×105CFU/mL。MICMHA103.4Kpa、121.315min4050將無菌空平皿（9cm14cm）MHA3mm～4mm。平皿室溫冷卻后，2～84mL～6mL，密封，置于室溫避光環(huán)境。使用A）。4mL～5mL35±2濃度（2h～6h）。0.5（1×108CFU/mL～2×108CFU/mL），也15minMHA3min～5min用紙片分配器或無菌鑷子將抗菌藥物紙片緊密貼于平皿。各紙片中心相距≥24mm。紙片貼上貼上紙片15min內(nèi)，須把平皿倒置放于3516h～18h。對于某些特殊抗菌藥物如苯唑西林或萬古霉素，孵育時間需延長至24h。苛養(yǎng)菌等孵育環(huán)境和時間見附錄A。直徑（含紙片）mm。商品化梯度擴散法條是一條5mm50mm的無孔試劑載體，一面固定有一系列預(yù)先制備的、濃度呈連續(xù)指數(shù)增長的抗菌藥物，另一面有讀數(shù)和判別刻度。梯度擴散法條抗菌藥物濃度梯度可覆蓋有20MIC35±216h～18h表1β-金黃色葡萄球菌（當(dāng)青霉素0.12mg/L或紙片擴散法抑菌圈直徑≥29mm）金黃色葡萄球菌和包括路登葡萄球MIC≤0.12mg/L抑菌圈直徑≥29mm（青霉素抑菌圈-邊緣試驗β青霉素紙片（10單位16h～20h誘導(dǎo)生長（16h～18hMHA平皿或血平皿上青霉素或頭孢西丁紙片邊緣的生長物35℃±21h16h～181h①陽性：抑菌圈邊緣銳利或如同②陰性：抑菌圈邊緣模糊或如同驗確認(rèn)是否產(chǎn)β陽性：金黃色葡萄球菌ATCC29213陰性：ATCC25923唑西林耐藥，即對所有β-內(nèi)酰胺類（頭孢洛林除外）藥物耐藥。表2（1（30resistantEnterococcus,VRE）3。表3242424①VSSA：≤2③VRSAc：≥16①敏感：≥17MIC8mg/L～16mg/L，需進一步VRE：≤14mm（和）①敏感：≤4③VREc：≥32陽性：糞腸球菌ATCC51299；陰性：糞腸球菌ATCC29212器法。微量肉湯稀釋法是將4mg/L的紅霉素和0.5mg/L的克林霉素置于同一孔里，352境孵育18h～24h檢測后，檢測菌株是否生長。生長即為陽性，不生長為陰性。表4β紅霉素（15μg）和克林霉素（2μg）紅霉素（15μg）和克林霉素（2μg）15mm～261235℃±23525CO216h～1820h～24ATCCATCC腸球菌屬氨基糖苷類高水平耐藥（High-levelaminoglycosideresistance,HLAR）表型檢測腸球5。表5微量肉湯?。?20500500（30010002000標(biāo)準(zhǔn)微量肉湯稀釋法操10μL0.5懸液到瓊脂表吸取10的0.5麥?zhǔn)蠞岫染鷳乙?5℃±235℃±235℃±235℃±235℃±216h～18242416h～1824h～4824h～48②不確定：7mm～9③敏感：≥10②不確定：7mm～9③敏感：≥10ATCC51299ATCC產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（Extended-spectrumβ-lactamasesESBLs）頭孢噻肟/克拉維酸（30μg/10μg）復(fù)合物紙片進行檢測，當(dāng)任何一種復(fù)合物紙片抑菌圈直徑比其單獨藥敏紙片抑菌圈直徑大于或等于5mm，可確證該菌株產(chǎn)ESBLs。頭孢噻肟（0.25mg/L～64mg/L）、頭孢噻肟/克拉維酸（0.25/4mg/L～64/4mg/L）進行檢測，當(dāng)與克拉維酸聯(lián)合藥物組的MIC小于或等于單獨藥物組MIC3個倍比稀釋度時（或比值≥8），可確證該菌株霉烯酶表型檢測方法為改良碳青霉烯類滅活試驗（Modifiedcarbapeneminactivationmethod，mCIM）1μL（10μL2mL（TSB）2mLTSB20μL0.5MEDTA（5mM）置于該管中。10s～15s10μgb)步驟含和不含EDTATSB35±24h±15min4hATCC259220.515minMHA3min～10min10μLTSB-美羅培南紙片懸液中取出美羅培南紙片，排出過多液體，將其貼在芐啶/磺胺甲噁唑和美羅培南。這四個藥物的敏感性折點分別為≤2mg/L2mg/L,0.5/9.5mg/L、值很少超過0.5mg/L。檢測藥物為青霉素類、阿莫西林/克拉維酸、頭孢曲松、氟喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)酯質(zhì)量控制（Qualitycontrol,表620300-2-102-2030MIC表7150-2-5）2-1）；④污染，菌株失活；⑤菌株性能改變（如突變或質(zhì)粒丟失等）。株、室間質(zhì)評或其他來源的菌株。檢測前，凍存菌株傳代2次，且傳代后24h內(nèi)使用。的（表）。表8①新系統(tǒng)的紙片擴散法與通過權(quán)威機構(gòu)認(rèn)可的實驗室的紙片S、IRCAaMICMICMICEAaMICS、IRCACAEAMICaMICMICMICEAaa人工MIC表9使用新方法（相同的制造商使用來自新制造商的肉湯或現(xiàn)存系統(tǒng)中添加新的抗菌藥改用具有自身質(zhì)控規(guī)程的設(shè)改為用戶自身技術(shù)進行接種進行附加試驗（5指采用相同分析方法對同一菌株連續(xù)檢測結(jié)果的一致性。藥敏檢測系統(tǒng)精密度評估應(yīng)考慮正常變1析自己的數(shù)據(jù)以確保檢測系統(tǒng)正常運行?！安町悺保壑卮蟛町悾╩ajordiscrepancy，MD）差異（verymajordiscrepancy，VMD）］指不同藥敏試驗檢測系統(tǒng)之間結(jié)果的差別，“誤差”（ME和附錄表A.1血平皿3518h～2035216h～18h，20血平皿3518h～2035216h～20h，20h～24355CO2環(huán)境18h～20h35℃±25%CO220h～24355CO2環(huán)境18h～20h35℃±220h～24355CO220h～24h35℃±25%CO216h～18巧克力平皿35℃±2℃35℃±220h～24巧克力平皿35℃5%CO220h～24h375%CO220h～24巧克力平皿35℃5%CO220h～22h35℃±25%CO220h～24微量肉湯稀釋CAMHB-355CO220h～22h35℃±25%CO220h～24CAMHB-醛）355CO2環(huán)境孵20h～24h35℃20h～24CAMHB-355CO2環(huán)境20h～24h355%CO220h～24CAMHB-355CO2環(huán)境24h～48h355%CO224h～48CAMHB-血平皿35℃空氣環(huán)境孵20h～243520h～24血平皿35℃空氣環(huán)境孵16h～203520h～24CAMHB-3520h～243520h～24CAMHB-3520h～243520h～24CAMHB-血平皿或巧克力平皿3524h35℃20h～24CAMHB-355CO2環(huán)境24h～48h355%CO224h～48Trueperella和CAMHB-若檢測達(dá)托霉素，CAMHB-50mg/L血平皿3520h～2435℃24h～4848h，其24hCAMHB-3520h～243520h～24需氧芽胞桿菌屬（包括炭疽芽胞桿菌3516h～203516h～20CAMHB-3520h～243520h～243516h～20355%CO220h～24微量肉湯稀釋3516h～203520h～24HACEK（包括凝聚桿蝕艾肯菌和金桿菌屬微量肉湯稀釋CAMHB-HTMmg/L）+5%血平皿或巧克力平皿35355%CO224h～483520～243516h～18微量肉湯稀釋CAMHB-3520h～243518h～24血平皿3518h～203516h～18微量肉湯稀釋355CO2環(huán)境20h～24h3516h～203520h～2435℃±216h～18微量肉湯稀釋3520h～2435℃±216h～20空腸彎曲菌/大腸彎MHAMueller-Hinton36℃～37℃微需氧環(huán)境（10CO2、5O28548h42244224微量肉湯稀釋CAMHB-Mueller-Hinton36℃～37℃微需氧環(huán)境48h422436℃～37℃微需氧環(huán)境孵48h42孵育24h（364236～377235℃±272微量肉湯稀釋CAMHB0.535216h～20微量肉湯稀釋CAMHB0.535216h～20微量肉湯稀釋CAMHB0.535216h～20微量肉湯稀釋35224h，若生24微量肉湯稀釋7.1±0.1CAMHB0.535248微量肉湯稀釋CAMHB+23520h～2435℃±248微量肉湯稀釋血平皿或TSA352℃空氣環(huán)境孵育直至（通常3～73725布魯瓊脂+血紅素（5mg/L）+K1（1mg/L）+536142h～48布魯瓊脂+血紅素（5mg/L）+K1（1mg/L）+536146h～48A.1（續(xù)0.002%的聚山梨醇酯-80。24h。15mg/L5g/L1.1g0.03g0.003g0.013g0.01gB12、0.1g0.85NaCl0.50.85NaCl2.0酸鳥嘌呤、0.01gB12、0.1g0.25g10g0.02g100g葡萄糖、3mg13mg1L附錄表B.1MIC0.5-表B.2MIC0.25-0.5-0.25-MIC1-1-1-1-表B.3MIC0.25-1-0.25-1-1-表B.4MIC頭孢呋辛（口服1515153025-1-1.25/23.7511-表B.5HACEKMIC和金桿菌屬（凝聚桿菌屬（其他菌種（凝聚桿菌屬（其他菌種20/1010WS/TWS/T639—MIC1030553030151525-3023.75表B.618-頭孢呋辛鈉（注射3015-30