基孔肯雅熱實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方案2025年8月為指導(dǎo)各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)、疾控機(jī)構(gòu)和相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)機(jī)構(gòu)開(kāi)展基孔肯雅熱實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作，規(guī)范檢測(cè)程序，提高檢測(cè)質(zhì)量，制定本方案。前言導(dǎo)讀目錄CONTENTS01檢測(cè)對(duì)象02樣本采集、保存和運(yùn)輸03病例實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)04蚊媒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)05結(jié)果報(bào)送和反饋06生物安全檢測(cè)對(duì)象01一、檢測(cè)對(duì)象基孔肯雅熱病例、排查對(duì)象，媒介伊蚊成蚊和幼蟲(chóng)。檢測(cè)對(duì)象樣本采集、保存和運(yùn)輸02二、樣本采集、保存和運(yùn)輸1.血清樣本。（1）病例急性期血清。用無(wú)菌真空干燥管，采集患者非抗凝血5mL，及時(shí)分離血清，分裝2份保存于做好標(biāo)記的、帶螺旋蓋、內(nèi)有墊圈的凍存管內(nèi)。（2）病例恢復(fù)期血清。必要時(shí)，用無(wú)菌真空干燥管，采集發(fā)病7日后恢復(fù)期患者靜脈血5ml（非抗凝血），及時(shí)分離血清，分裝2份保存于做好標(biāo)記的、帶螺旋蓋、內(nèi)有墊圈的凍存管內(nèi)。采集時(shí)間與急性期血清間隔時(shí)間不少于3天。2.蚊媒樣本。收集雙層疊帳法監(jiān)測(cè)捕獲的媒介伊蚊成蚊和布雷圖指數(shù)法監(jiān)測(cè)獲得的幼蚊，增加引誘劑捕蚊器法采集媒介伊蚊成蚊，分類鑒定后，填寫媒介伊蚊樣本采集信息表，按照采集地點(diǎn)分裝，每管10～20只，低溫保存。（一）樣本采集。二、樣本采集、保存和運(yùn)輸24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)的樣本可置于4℃環(huán)境中保存，1周內(nèi)檢測(cè)的樣本應(yīng)置于-20℃環(huán)境中保存，需長(zhǎng)期使用的樣本應(yīng)置于-70℃或以下環(huán)境中保存。（二）樣本保存。二、樣本采集、保存和運(yùn)輸基孔肯雅病毒的危害程度屬第二類病原微生物，血清和伊蚊標(biāo)本應(yīng)采用A類包裝（編號(hào)：UN2814）。樣本運(yùn)輸時(shí)應(yīng)遵守國(guó)家相關(guān)生物安全規(guī)定，采用低溫運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融。用于開(kāi)展病原學(xué)監(jiān)測(cè)的樣本，應(yīng)于48小時(shí)內(nèi)運(yùn)送至地市級(jí)或省級(jí)疾控中心。（三）樣本運(yùn)輸。病例實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)03三、病例實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)1.核酸檢測(cè)。一般發(fā)病后7天內(nèi)血液樣本病毒核酸檢出率較高，常采用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR基于核酸擴(kuò)增的方法進(jìn)行檢測(cè)，可用于早期診斷。2.病毒培養(yǎng)分離。一般發(fā)病后5天內(nèi)血液樣本病毒培養(yǎng)分離率較高，通常將樣本接種至哺乳動(dòng)物細(xì)胞（Vero、BHK21）中進(jìn)行分離與培養(yǎng)，待其出現(xiàn)病變特征后，采用抗原或核酸檢測(cè)手段鑒定病毒種類。3.抗原檢測(cè)。常用雙抗體夾心ELISA法或免疫層析法進(jìn)行抗原檢測(cè)，一般適用于發(fā)病后5天以內(nèi)血液樣本，檢出陽(yáng)性可用于早期診斷。4.基因組序列分析。采用一代Sanger法或擴(kuò)增子技術(shù)進(jìn)行病毒E2和E1蛋白編碼基因序列或全基因組測(cè)序，測(cè)序技術(shù)經(jīng)質(zhì)控合格后，方可用于后續(xù)生物信息分析。二代測(cè)序平臺(tái)覆蓋深度應(yīng)不低于10×，三代測(cè)序平臺(tái)覆蓋深度應(yīng)不低于50×，全基因組測(cè)序覆蓋度應(yīng)不低于98%。（一）病原學(xué)檢測(cè)。三、病例實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)1.特異性IgM抗體。采用ELISA、免疫層析等方法檢測(cè)，是輔助診斷基孔肯雅熱急性期或近期感染的重要指標(biāo)。2.特異性IgG抗體。采用ELISA、免疫熒光（IFA）、免疫層析等方法檢測(cè)。患者恢復(fù)期血清IgG抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)或滴度較急性期呈4倍及以上升高可以確診。3.中和抗體。采用空斑減少中和實(shí)驗(yàn)、微量中和實(shí)驗(yàn)等方法檢測(cè)，可用于分型?；颊呋謴?fù)期血清中和抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)或滴度較急性期呈4倍及以上升高可以確診。（二）血清學(xué)檢測(cè)。蚊媒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)04四、蚊媒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)將分類分裝后的媒介伊蚊成蚊或幼蟲(chóng)進(jìn)行研磨，開(kāi)展核酸檢測(cè)，病毒核酸陽(yáng)性的樣本可由有能力或資質(zhì)的地市級(jí)或省級(jí)疾控中心進(jìn)行病毒培養(yǎng)分離和基因組序列分析。蚊媒核酸檢測(cè)、病毒分離培養(yǎng)和基因組序列分析的檢測(cè)方法同病例檢測(cè)。將分類分裝后的媒介伊蚊成蚊或幼蟲(chóng)進(jìn)行研磨，開(kāi)展核酸檢測(cè)。結(jié)果報(bào)送和反饋05五、結(jié)果報(bào)送和反饋各縣（市、區(qū)）實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果應(yīng)在24小時(shí)內(nèi)反饋樣本送檢單位。本地疫情發(fā)生后，省級(jí)疾控中心應(yīng)于每月中旬將上月基孔肯雅熱實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)與病原學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果匯總報(bào)送至中國(guó)疾控中心。各縣（市、區(qū)）實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果應(yīng)在24小時(shí)內(nèi)反饋樣本送檢單位。生物安全06六、生物安全基孔肯雅熱實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)應(yīng)按照《人