實(shí)驗(yàn)室生物樣本管理制度與操作規(guī)范1.引言生物樣本是實(shí)驗(yàn)室開展基礎(chǔ)研究、臨床轉(zhuǎn)化及藥物開發(fā)的核心資源，其質(zhì)量與管理水平直接決定研究結(jié)果的可靠性、可重復(fù)性及倫理合規(guī)性。為規(guī)范生物樣本全生命周期管理（采集-接收-存儲-使用-處置），保障樣本質(zhì)量、生物安全及數(shù)據(jù)溯源，依據(jù)《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB____）、《生物樣本庫質(zhì)量和能力通用要求》（GB/T____）、《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》等國家標(biāo)準(zhǔn)及法規(guī)，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況，制定本制度與操作規(guī)范。本規(guī)范適用于實(shí)驗(yàn)室所有生物樣本（包括人體樣本、動物樣本、微生物樣本及環(huán)境樣本等）的管理，覆蓋樣本從產(chǎn)生到廢棄的全流程。2.生物樣本分類與標(biāo)識管理2.1樣本分類原則遵循“科學(xué)、明確、可追溯”原則，按來源、性質(zhì)、危害等級劃分：來源分類：人體樣本（血液、組織、尿液等）、動物樣本（小鼠組織、大鼠血清等）、微生物樣本（細(xì)菌、病毒、真菌等）、環(huán)境樣本（土壤、水體微生物等）。性質(zhì)分類：固體樣本（組織塊、細(xì)胞爬片）、液體樣本（血清、培養(yǎng)液）、氣體樣本（呼出氣體）、生物大分子樣本（核酸、蛋白提取物）。危害等級：依據(jù)《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》，分為Ⅰ類（無危害，如正常人體血清）、Ⅱ類（中等危害，如乙肝病毒樣本）、Ⅲ類（高危害，如結(jié)核桿菌樣本）、Ⅳ類（極高危害，如埃博拉病毒樣本）。Ⅲ、Ⅳ類樣本需在對應(yīng)等級生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-3/BSL-4）處理。2.2樣本標(biāo)識規(guī)范標(biāo)識是樣本溯源的關(guān)鍵，需滿足唯一性、清晰性、耐久性要求：標(biāo)識內(nèi)容：必含樣本唯一ID（格式：實(shí)驗(yàn)室代碼-采集日期-流水號，如“LAB-____”）、樣本來源（如“人體外周血”“C57BL/6小鼠肝臟”）、采集時(shí)間（精確到分鐘）、保存條件（如“-80℃”“液氮”）、采集人縮寫（如“張三-ZS”）、生物危害等級（如“BSL-2”）。標(biāo)識方式：采用二維碼+文字組合。二維碼存儲樣本唯一ID及詳細(xì)信息（通過手機(jī)或掃碼槍讀?。?，文字用耐低溫、耐酒精marker筆書寫于容器（凍存管、離心管）上，避免使用易脫落標(biāo)簽。唯一性要求：每個(gè)樣本分配唯一ID，分裝后子樣本需加后綴（如“LAB-____”），標(biāo)注“分裝”及日期。3.生物樣本采集與接收操作規(guī)范3.1樣本采集要求倫理合規(guī)：人體樣本需經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)及受試者知情同意；動物樣本需符合《實(shí)驗(yàn)動物福利倫理審查指南》（GB/T____）；微生物樣本需符合病原微生物管理規(guī)定。采集前準(zhǔn)備：確認(rèn)采集方案（樣本類型、數(shù)量、保存條件），準(zhǔn)備無菌工具（注射器、離心管、拭子）及保存液（EDTA抗凝血管、RNA保存液），檢查工具是否過期/破損。采集操作：嚴(yán)格無菌操作，避免污染：人體血液：專業(yè)醫(yī)護(hù)人員采集，注入抗凝管后輕輕顛倒混勻（避免溶血）。動物組織：麻醉或處死后盡快采集，去除非目標(biāo)組織（脂肪、結(jié)締組織），生理鹽水沖洗后放入凍存管。微生物：用無菌拭子或采樣管采集，避免雜菌污染。采集記錄：填寫《生物樣本采集記錄表》，內(nèi)容包括樣本ID、采集對象信息（受試者編號、動物品系）、采集時(shí)間/地點(diǎn)、采集人、樣本類型/數(shù)量/保存條件、備注（如“采集時(shí)受試者未空腹”）。3.2樣本接收流程接收前檢查：核對采集記錄與樣本一致性，檢查：1.容器是否破損/泄漏；2.標(biāo)識是否清晰/完整；3.采集時(shí)間是否在保存期限內(nèi)（如全血需4小時(shí)內(nèi)處理）；4.樣本量是否符合要求（如血清≥1ml）；5.樣本狀態(tài)是否正常（如血清無溶血、渾濁）。拒收情形：容器破損/泄漏、標(biāo)識不清、超期、量不足、污染的樣本需拒收，通知采集人員重新采集。接收記錄：填寫《生物樣本接收記錄表》，內(nèi)容包括樣本ID、接收時(shí)間/人、采集人、樣本狀態(tài)（正常/異常）、拒收原因（若有）、處理結(jié)果（如重新采集）。4.生物樣本存儲與保管制度4.1存儲條件選擇根據(jù)樣本類型及保存期限選擇：短期（≤7天）：全血（4℃）、血清/血漿（-20℃）、新鮮組織（4℃保濕）。長期（＞7天）：核酸/蛋白（-80℃）、細(xì)胞/組織（液氮-196℃）、微生物（-80℃甘油管）。特殊樣本：RNA需用RNA保存液，避免降解；活細(xì)胞需液氮?dú)庀啻鎯Γū苊鈨龃婀芷屏眩?.2存儲設(shè)備管理設(shè)備選擇：選用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的存儲設(shè)備（如-80℃超低溫冰箱、液氮罐），具備溫度顯示、聲光報(bào)警功能。溫度監(jiān)控：自動監(jiān)控：用冷鏈監(jiān)控系統(tǒng)實(shí)時(shí)記錄溫度（如每10分鐘一次），超范圍時(shí)報(bào)警（如-80℃冰箱溫度＞-70℃）。人工記錄：每天上午、下午各記錄一次，填寫《存儲設(shè)備溫度記錄表》。設(shè)備維護(hù)：-80℃冰箱：每半年清理冷凝水，每年更換密封條。液氮罐：每周檢查液位（確保樣本浸沒在液氮中），每半年清理罐內(nèi)冰晶。4.3樣本擺放與盤點(diǎn)樣本擺放：按分類、批次、存儲條件擺放：1.不同類型分開（人體與動物、感染性與非感染性）；2.同一項(xiàng)目集中存放；3.凍存管放入標(biāo)注項(xiàng)目名稱/ID范圍的凍存盒，凍存盒放入固定層架（標(biāo)注層架編號）。樣本盤點(diǎn)：每月一次，核對樣本數(shù)量、位置與系統(tǒng)記錄一致性。盤點(diǎn)時(shí)記錄：1.樣本狀態(tài)（破損/泄漏）；2.數(shù)量變化（使用/廢棄）；3.設(shè)備狀態(tài)（溫度是否正常）。若發(fā)現(xiàn)丟失或不符，立即查找原因（記錄錯(cuò)誤、擺放錯(cuò)誤），報(bào)告負(fù)責(zé)人。5.生物樣本使用與流轉(zhuǎn)管理5.1使用審批流程申請：申請人填寫《生物樣本使用申請表》，內(nèi)容包括：申請人、項(xiàng)目名稱/編號、樣本ID/類型/數(shù)量、用途（如“RNA提取”）、使用時(shí)間、備注（如“避免反復(fù)凍融”）。審批：項(xiàng)目負(fù)責(zé)人審核（合法性與必要性）→實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人審批（可用性與安全性）。領(lǐng)取：憑審批表領(lǐng)取，與管理員核對樣本ID/數(shù)量/狀態(tài)，領(lǐng)取后在系統(tǒng)中記錄使用情況（時(shí)間、用途、剩余量）。5.2流轉(zhuǎn)追溯機(jī)制內(nèi)部流轉(zhuǎn)：實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部轉(zhuǎn)移（存儲區(qū)→實(shí)驗(yàn)區(qū)）需填寫《內(nèi)部流轉(zhuǎn)記錄表》，內(nèi)容包括樣本ID、流轉(zhuǎn)時(shí)間、轉(zhuǎn)出/轉(zhuǎn)入人、原因（實(shí)驗(yàn)使用）、狀態(tài)。轉(zhuǎn)入方更新系統(tǒng)位置。外部流轉(zhuǎn)：需實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)，簽訂《流轉(zhuǎn)協(xié)議》（明確權(quán)利義務(wù)：用途、保密、責(zé)任）。流轉(zhuǎn)前檢查樣本狀態(tài)，包裝符合要求（如液氮罐運(yùn)輸細(xì)胞樣本），填寫《外部流轉(zhuǎn)記錄表》（樣本ID、流轉(zhuǎn)時(shí)間、雙方單位/聯(lián)系人、快遞單號）。5.3分裝與復(fù)用規(guī)范分裝：避免反復(fù)凍融，將樣本分裝成小份（如血清分裝為0.5ml/管），標(biāo)注子ID（如“LAB-____”）、“分裝”及日期。復(fù)用：需符合：1.樣本質(zhì)量未受影響（無反復(fù)凍融、污染）；2.用途與原申請一致；3.項(xiàng)目負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)。復(fù)用前檢查狀態(tài)，填寫《復(fù)用記錄表》（樣本ID、復(fù)用時(shí)間/用途/申請人、審批人）。6.生物樣本廢棄與處置規(guī)范6.1廢棄判定標(biāo)準(zhǔn)自然廢棄：超保存期限（如血清保存2年）、質(zhì)量不達(dá)標(biāo)（如RNARIN值＜7）。人為廢棄：污染（血清溶血、雜菌污染）、用途終止（項(xiàng)目結(jié)束）、數(shù)量過多（超出需求）。6.2處置操作流程分類處置：樣本類型處置方式非感染性（正常血清）|醫(yī)療廢物袋→有資質(zhì)機(jī)構(gòu)收集|感染性（乙肝樣本）|感染性廢物袋→高壓滅菌（121℃，30分鐘）→機(jī)構(gòu)收集|化學(xué)污染（甲醛組織）|化學(xué)廢物容器→有資質(zhì)機(jī)構(gòu)收集|生物大分子（核酸）|含氯消毒液（500mg/L）處理→倒入下水道|操作要求：佩戴手套、口罩，避免直接接觸。處置前核對樣本ID與廢棄記錄，處置后消毒區(qū)域（75%乙醇擦拭）。6.3處置記錄管理廢棄記錄：填寫《生物樣本廢棄記錄表》，內(nèi)容包括：樣本ID、廢棄時(shí)間/原因（超期/質(zhì)量差）、處置方式、處置人、備注（如“已滅菌”）。記錄保存：與采集/接收/使用記錄一并保存，期限10年（涉及倫理的延長至20年）。7.生物樣本質(zhì)量控制體系7.1樣本質(zhì)量檢測檢測項(xiàng)目：樣本類型檢測項(xiàng)目合格標(biāo)準(zhǔn)核酸|完整性（RIN值）、濃度、純度（OD260/OD280）|RNARIN≥7；DNA1.8-2.0|蛋白|濃度（BCA）、純度（OD280/OD260）、活性（WB）|濃度≥1mg/ml；比值≥1.5|細(xì)胞|活率（臺盼藍(lán)）、濃度（計(jì)數(shù)板）|活率≥90%；濃度符合實(shí)驗(yàn)要求|檢測頻率：每季度抽檢10%樣本（如10份血清的核酸完整性）。若不合格，查找原因（存儲溫度高、反復(fù)凍融），采取糾正措施（重新采集、改進(jìn)存儲）。7.2設(shè)備校準(zhǔn)與維護(hù)設(shè)備校準(zhǔn)：存儲設(shè)備（冰箱、液氮罐）每年校準(zhǔn)一次，校準(zhǔn)機(jī)構(gòu)需有資質(zhì)（如中國計(jì)量院）。校準(zhǔn)后粘貼標(biāo)簽（校準(zhǔn)日期/有效期），記錄結(jié)果（如冰箱溫度誤差±1℃）。設(shè)備維護(hù)：定期維護(hù)（如冰箱清理冷凝水、液氮罐檢查液位），填寫《設(shè)備維護(hù)記錄表》。7.3過程質(zhì)量監(jiān)控操作檢查：每月檢查采集/接收/存儲/使用/處置環(huán)節(jié)，確保符合規(guī)范（如采集記錄是否完整、接收時(shí)是否檢查狀態(tài)）。客戶反饋：收集使用人反饋（如“樣本質(zhì)量好”“有污染”），分析改進(jìn)（如更換凍存管、加強(qiáng)培訓(xùn)）。8.生物樣本安全管理8.1生物安全防護(hù)個(gè)人防護(hù)（PPE）：樣本危害等級PPE要求Ⅰ/Ⅱ類|手套、口罩、實(shí)驗(yàn)服|Ⅲ/Ⅳ類|手套、N95口罩、護(hù)目鏡、防護(hù)服、鞋套（BSL-3/4實(shí)驗(yàn)室）|操作規(guī)范：實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止飲食/吸煙，操作后洗手（肥皂+流動水15分鐘）。處理感染性樣本需用生物安全柜（BSC）。8.2實(shí)驗(yàn)室環(huán)境管理環(huán)境消毒：1.臺面：75%乙醇擦拭，每天一次；2.地面：含氯消毒液（1000mg/L）拖洗，每周一次；3.設(shè)備：75%乙醇擦拭外部，每月一次。廢物管理：分類收集，感染性/化學(xué)/醫(yī)療廢物放入專用容器，標(biāo)注類型/日期，定期由機(jī)構(gòu)收集。8.3應(yīng)急處理機(jī)制樣本泄漏處理：1.停止操作，撤離人員（感染性樣本關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室門）；2.佩戴PPE，用含氯消毒液（5000mg/L）覆蓋泄漏區(qū)域，靜置30分鐘；3.清理泄漏物，放入感染性廢物袋；4.消毒區(qū)域（75%乙醇擦拭兩次）；5.填寫《泄漏應(yīng)急處理記錄表》，報(bào)告負(fù)責(zé)人，分析原因（凍存管質(zhì)量、操作不當(dāng)），采取預(yù)防措施（更換凍存管、培訓(xùn)）。人員暴露處理：1.流動水沖洗暴露部位（皮膚15分鐘，眼睛生理鹽水15分鐘）；2.報(bào)告負(fù)責(zé)人，填寫《暴露記錄表》；3.根據(jù)樣本危害等級采取預(yù)防措施（接種疫苗、抗病毒藥物）；4.跟蹤健康狀況（如