pcr上崗證考試題及答案湖北省

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應中，引物的作用是（）A.提供起始的3'-OH末端B.提供起始的5'-P末端C.結(jié)合模板DNAD.終止反應答案：A2.以下哪種酶在PCR反應中起關鍵作用（）A.逆轉(zhuǎn)錄酶B.Taq酶C.限制性內(nèi)切酶D.DNA連接酶答案：B3.PCR的變性溫度一般為（）A.50-55℃B.72℃C.94-95℃D.60-65℃答案：C4.在PCR產(chǎn)物分析中，瓊脂糖凝膠電泳的主要作用是（）A.擴增DNAB.檢測DNA大小C.合成引物D.純化DNA答案：B5.下列關于PCR反應體系的敘述，錯誤的是（）A.包含dNTPB.不需要緩沖液C.有模板DNAD.有引物答案：B6.PCR反應中，循環(huán)次數(shù)過多可能導致（）A.特異性增加B.產(chǎn)量降低C.非特異性擴增增加D.酶活性增強答案：C7.用于PCR反應的模板可以是（）A.基因組DNAB.RNAC.質(zhì)粒DNAD.以上都可以答案：D8.在熒光定量PCR中，熒光信號的檢測是為了（）A.確定反應溫度B.確定循環(huán)次數(shù)C.定量分析目的基因D.檢測酶活性答案：C9.以下哪個不是PCR的應用領域（）A.基因克隆B.遺傳病診斷C.蛋白質(zhì)合成D.病原體檢測答案：C10.PCR反應中，鎂離子的作用是（）A.激活酶活性B.抑制酶活性C.提供能量D.穩(wěn)定DNA結(jié)構(gòu)答案：A二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應的基本要素包括（）A.模板B.引物C.Taq酶D.dNTPE.鎂離子答案：ABCDE2.以下哪些因素會影響PCR反應的特異性（）A.引物設計B.退火溫度C.模板純度D.循環(huán)次數(shù)E.酶的種類答案：ABCDE3.在熒光定量PCR中，常用的熒光染料有（）A.SYBRGreenB.TaqMan探針C.溴化乙錠D.考馬斯亮藍E.結(jié)晶紫答案：AB4.PCR產(chǎn)物出現(xiàn)非特異性擴增的原因可能是（）A.引物特異性差B.退火溫度過低C.模板量過多D.酶量過多E.循環(huán)次數(shù)過多答案：ABCDE5.以下關于PCR技術(shù)的描述，正確的是（）A.具有高靈敏度B.具有高特異性C.可用于微量樣本檢測D.操作復雜E.耗時較長答案：ABC6.可用于PCR模板制備的方法有（）A.酚-氯仿抽提法B.試劑盒提取法C.煮沸法D.堿裂解法E.超聲破碎法答案：ABCDE7.PCR反應中，引物設計的原則包括（）A.長度合適B.避免二級結(jié)構(gòu)C.特異性高D.G+C含量適中E.3'端避免錯配答案：ABCDE8.以下屬于PCR技術(shù)衍生技術(shù)的是（）A.巢式PCRB.反向PCRC.多重PCRD.實時熒光定量PCRE.數(shù)字PCR答案：ABCDE9.對于PCR反應的質(zhì)量控制，需要考慮的方面有（）A.試劑質(zhì)量B.儀器性能C.操作規(guī)范D.樣本質(zhì)量E.結(jié)果分析準確性答案：ABCDE10.以下關于Taq酶的特點，正確的是（）A.熱穩(wěn)定性高B.具有5'-3'聚合酶活性C.具有3'-5'外切酶活性D.催化dNTP連接到引物后延伸E.是一種RNA聚合酶答案：ABD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應可以直接以RNA為模板進行擴增。（）答案：錯誤2.引物越長，PCR反應的特異性越高。（）答案：錯誤3.退火溫度越高，PCR反應的特異性一定越高。（）答案：錯誤4.熒光定量PCR只能用于絕對定量分析。（）答案：錯誤5.PCR反應中，dNTP濃度越高越好。（）答案：錯誤6.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應。（）答案：錯誤7.在PCR產(chǎn)物分析中，聚丙烯酰胺凝膠電泳比瓊脂糖凝膠電泳分辨率更高。（）答案：正確8.巢式PCR可以提高檢測的特異性。（）答案：正確9.PCR反應體系中不需要添加緩沖液。（）答案：錯誤10.實時熒光定量PCR中，Ct值越大，說明起始模板量越高。（）答案：錯誤四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR的基本原理。答案：PCR即聚合酶鏈式反應，是一種體外擴增特定DNA片段的技術(shù)。它以DNA為模板，在引物、Taq酶、dNTP和鎂離子等存在的情況下，經(jīng)過變性（使模板DNA雙鏈解開）、退火（引物與模板結(jié)合）、延伸（Taq酶催化dNTP合成新的DNA鏈）三個步驟的多次循環(huán)，使目的DNA片段得到大量擴增。2.請列出PCR引物設計時的至少三個注意事項。答案：首先，引物長度要合適，一般18-25bp；其次，特異性要高，避免與非目的序列互補；再者，G+C含量適中，一般在40%-60%；最后，3'端要避免錯配，保證引物與模板正確結(jié)合。3.簡述熒光定量PCR中相對定量和絕對定量的區(qū)別。答案：相對定量是測定目的基因相對于內(nèi)參基因的表達量變化，常用于比較不同樣本間基因表達的差異。絕對定量是測定目的基因在樣本中的實際拷貝數(shù)，需要標準曲線來確定起始模板量。4.在PCR反應中，如何避免非特異性擴增？答案：可通過優(yōu)化引物設計，提高引物特異性；適當提高退火溫度；控制模板量和酶量不過多；減少循環(huán)次數(shù)等方法來避免非特異性擴增。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論PCR技術(shù)在新型冠狀病毒檢測中的應用。答案：PCR技術(shù)在新冠檢測中作用巨大。可通過設計新冠病毒特異性引物，從患者樣本（如咽拭子）中擴增病毒核酸，從而檢測是否感染。熒光定量PCR還能定量分析病毒載量，有助于判斷病情嚴重程度和治療效果等。2.如何確保PCR實驗室的質(zhì)量控制？答案：要確保試劑質(zhì)量合格，儀器定期校準維護，操作人員嚴格按規(guī)范操作，樣本采集、保存、運輸符合要求，同時做好室內(nèi)和室間質(zhì)量評價，保證結(jié)果準確性。3.闡述PCR技術(shù)在遺傳病診斷中的意義。答案：PCR技術(shù)可用于遺傳病診斷。通過擴增與遺傳病相關的基