課時跟蹤檢測（二）微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)

一、概念檢測

1.判斷正誤，正確的畫“J”，錯誤的畫“X”。

（1）液體培養(yǎng)基含有水，而固體培養(yǎng)基不含水。（X）

提示：液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基都含有水，它們的區(qū)別為是否含有凝固劑。

（2）獲得純凈微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染。（J）

（3）用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基都要進(jìn)行消毒。（義）

提示：用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基都要進(jìn)行滅菌。

（4）培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進(jìn)行滅菌。（X）

提示：培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿之前要進(jìn)行滅菌。

（5）平板冷凝后應(yīng)將平板倒置，防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基，造成污染。（J）

（6）轉(zhuǎn)換劃線角度后需要灼燒接種環(huán)再進(jìn)行劃線。（J）

2.某桿菌只有在含蛋白陳、牛肉膏、氯化鈉和微量維生素的培養(yǎng)基中才能生長，此時

微量維生素對該菌的培養(yǎng)而言屬于（）

A.碳源B.氮源

C.激素D.特殊營養(yǎng)物質(zhì)

解析：選D碳源是指能為微生物生長發(fā)育提供所需碳元素的營養(yǎng)物質(zhì)，如蛋白魅、牛

肉膏均可作為碳源；氮源是指能為微生物生長發(fā)育提供所需氮元素的營養(yǎng)物質(zhì)，如蛋白陳、

牛肉膏；激素不是細(xì)菌培素基的成分；特殊營養(yǎng)物質(zhì)走指微生物生命活動不可缺少，而微生

物自身又不能合成的微量有機(jī)物，如維生素。

3.高溫滅菌的原理是（）

A.每種微生物生長的最適溫度是一定的

B.微生物不適宜生活在高溫的環(huán)境中

C.高溫破壞了細(xì)菌體內(nèi)的蛋白質(zhì)和核酸

D.高溫降低了環(huán)境中氧的濃度

解析：選C蛋白質(zhì)和核酸是細(xì)胞表現(xiàn)生命活動的最重要物質(zhì)，它們都是高分子化合物，

具有復(fù)雜的空間結(jié)構(gòu)，高溫能使他們的空間結(jié)構(gòu)受到破壞而失去活性，所以高溫滅菌的原理

是高溫破壞了細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸，影響其生命活動。

4.冷凝后的固體培養(yǎng)基平板要倒置，其目的是（）

A.有利于大腸桿菌的接種

B.防止雜菌落入而造成污染

C.有利于培養(yǎng)基的冷卻和保存

D.防止冷凝水倒流入培養(yǎng)基

解析：選D平板冷凝后皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，若

將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，

造成污染。

5.下列關(guān)于消毒和滅菌方法的說法，錯誤的是（）

A.酒精擦拭屬于消毒方法

B.高壓蒸汽法、干熱法、灼燒法的滅菌原理相同

C.消毒處理可以殺死所有類型的活細(xì)胞

D.巴氏消毒法屬于一種低溫消毒法

解析：選C酒精擦拭屬于消毒方法，A正確；微生物的培養(yǎng)過程中常用的滅菌方法有

灼燒法、干熱滅菌法、高壓蒸氣滅菌法，原理都是殺死環(huán)境中的所有微生物（包括芽花和池子）,

B正確：消毒只能殺死部分生活狀態(tài)的微生物細(xì)胞，不能殺死芽花、把子，C錯誤；巴氏消

毒法屬于一種低溫消毒法，D正確。

二、綜合遷移

6.下列關(guān)于培養(yǎng)基的敘述，正確的是（）

A.在配制培養(yǎng)基時，除滿足營養(yǎng)需求外，還應(yīng)考慮pH、O2及特殊營養(yǎng)物質(zhì)的需求

B.獲得假單胞桿菌菌落后，在進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)時，應(yīng)選用固體培養(yǎng)基

C.從土壤中獲取乙草胺降解菌，為了防止雜菌的污染，可在培養(yǎng)基中加入青霉素

I）.倒平板時，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上

解析：選A培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽等營養(yǎng)物質(zhì)，此外培養(yǎng)基還要

滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)（如維生索）以及O2的需求，A正確；獲得假單胞桿菌

菌落后，在進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)時，應(yīng)選用液體培養(yǎng)基，B錯誤；青霉素抑制細(xì)菌的繁殖，在培養(yǎng)

基中加入青霉素，在抑制雜菌繁殖的同時，也會抑制目的菌（乙草胺降解菌）的繁殖，C錯誤;

倒平板時，用左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基（約10-

20mL）倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋，D錯誤。

7.微生物培養(yǎng)過程中，要十分重視無菌操作，現(xiàn)代生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的許多方面也要進(jìn)行

無菌操作，防止雜菌污染，請分析下列操作錯誤的是（）

①煮沸消毒可以殺死微生物的營養(yǎng)細(xì)胞和部分芽徇

②接種操作要在酒精燈火焰旁進(jìn)行

③家庭制作葡萄酒時要將容器和葡萄進(jìn)行滅菌

④培養(yǎng)基要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌

⑤加入培養(yǎng)基中的指示劑和染料不需要滅菌

A.@@@B.

C.?@?D.@@

解析：選D100°C熬沸5?6min可以殺死微生物的營界細(xì)胞和一部分芽把，①正確；

酒精燈火焰附近存在一個無菌區(qū)，為了防止雜菌污染，接種操作要在酒精燈火焰附近進(jìn)行，

②正確；家庭制作葡萄酒利用的是附著于葡萄皮表面的野生型酵母菌，所以制作葡萄酒時葡

萄不進(jìn)行滅菌，以免殺死酵母菌，③錯誤；培養(yǎng)基的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，④正確；指

示劑和染料可能混有微生物，故加入培養(yǎng)基前需滅菌，⑤錯誤。

8.制備牛肉膏蛋白陳固體培養(yǎng)基的過程中，下列關(guān)于倒平板的描述正確的是（）

A.等培養(yǎng)基冷卻至40°C左右時，方可進(jìn)行倒平板

B.將滅過菌的培養(yǎng)皿放在桌面上，打開培養(yǎng)皿蓋

C.等待平板冷卻5?10s,將平板倒過來放置

D.倒平板后無需將培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌

解析：選D等培養(yǎng)寒冷卻至50°C左右時，在酒精燈火焰附近倒平板，防止雜菌污染，

A錯誤；倒平板時，用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，不能打開皿

蓋，B錯誤；等待平板冷卻凝固后，將平板倒過來放置，使皿蓋在下，皿底在上，C錯誤；

倒平板后無需將培界基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，滅菌應(yīng)在倒平板之前進(jìn)行，D正確。

9.下列有關(guān)無菌技術(shù)的敘述，錯誤的是（）

A.對實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒

B.用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基要進(jìn)行滅菌

C.高壓蒸汽滅菌鍋需將冷空氣徹底排出后才能將鍋密閉

D.煮沸消毒法可以殺死所有微生物包括芽狗和孩子

解析：選D為避免雜菌污染，對實(shí)險操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒，

A正確；用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基要進(jìn)行滅菌，一般是進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，

B正確；高壓蒸汽滅菌鍋需將冷空氣徹底排出后才能將鍋密閉，否則冷空氣的存在會影響滅

菌效果，C正確；煮沸消毒法可以殺死微生物的營養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽胞，D錯誤。

10.下圖是從葡萄果實(shí)上獲取酵母菌菌種的簡要操作步驟。下列相關(guān)敘述錯誤的是

（）

前鋤無菌水沖洗.收集接種一選擇培養(yǎng)挑選一體一擴(kuò)大

果實(shí)―@―"沖洗液—葉基培養(yǎng)—?一'培養(yǎng)

A.圖中接種的方法只有平板劃線法

B.圖中①②③步驟都必須確保是無菌操作

C.圖中選擇培養(yǎng)基為固體，而擴(kuò)大培養(yǎng)的培養(yǎng)基為液體

D.擴(kuò)大培養(yǎng)酵母菌過程中，為加快酵母菌繁殖需要通入無菌空氣

解析：選A微生物培養(yǎng)中常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法，A錯誤；

微生物培養(yǎng)過程必須保證無菌操作以防止雜菌污染，B正確；在進(jìn)行酵母菌篩選時用固體培

養(yǎng)基，而進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)時用液體培養(yǎng)基，C正確；酵母菌為兼性厭氧菌，所以在擴(kuò)大培恭酵

母菌過程中為加快酵母菌繁殖需要通入無菌空氣，否則會造成雜菌污染，D正確。

11.下表是某微生物培養(yǎng)基的成分及含量，請據(jù)此回答下列問題:

編號成分含量

①粉狀硫10g

②

(NH4)2SO40.4g

③K2HPO44.0g

④

MgSO49.25g

⑤FeSO40.5g

CaCl20.5g

—

⑦H2O

(1)上表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型是____________________________

(2)若除去成分②，加入(CHzO),該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)

(3)表中營養(yǎng)成分共有類。

(4)使用后的培養(yǎng)基在丟棄前，要進(jìn)行的是________________________

(5)上表中各成分含量確定的原則是______________________________

(6)若要利用上表培養(yǎng)基觀察菌落，應(yīng)該增加的成分是____________o

解析：(1)分析題表中該微生物培養(yǎng)基的成分及含量可知，該培養(yǎng)基中沒有添加有機(jī)碳源，

由此說明該培養(yǎng)基培養(yǎng)的是能夠自身合成有機(jī)碳源的微生物，因此該培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物

類型是自養(yǎng)型微生物。(2)若除去成分②，加入(CFhO),也就是除去氮源加入有機(jī)碳源，則

該培養(yǎng)基培養(yǎng)的生物類型能夠進(jìn)行固氮作用合成氮源即為固氮微生物。(3)表中培養(yǎng)基的成分

包括水、無機(jī)鹽和氮源，總共是3類。(4)使用后的培養(yǎng)基為了避免污染環(huán)境以及感染人類，

在丟棄之前要進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌處理。(5)培養(yǎng)基的制備一般是根據(jù)所要培界的微生物的生長需

要來確定，以滿足不同微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，使微生物正常的生長。(6)要利用該培

養(yǎng)基來觀察菌落，通常要制備固體培養(yǎng)基，因此該培養(yǎng)基中還需要添加凝固劑，常用的凝固

劑是瓊脂。

答案:(1)自養(yǎng)型微生物(2)固氮微生物(3)3(4)滅菌(5)根據(jù)所要培養(yǎng)的微生物的生

長需要確定(6)瓊脂(或凝固劑)

12.在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個細(xì)胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是一

個純化的細(xì)菌菌落。實(shí)驗(yàn)基本步驟如下，請回答下列有關(guān)問題：

配制培養(yǎng)圜一|滅菌、倒坐板—4^—4^

(1)無論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分裝前，要進(jìn)行的是________o

(2)倒平板的適宜溫度是50℃左右，原因是。

待平板冷凝后，要將平板倒置，這樣既可避免培養(yǎng)基表面的水分過快地?fù)]發(fā)，又可防止—O

（3）若使用平板劃線法進(jìn)行接種，應(yīng)選擇的接種工具是圖中的（填選項(xiàng)）。

Z1//

ABCD

（4）劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區(qū)

域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤有

_________________________________________________________________________（答出兩點(diǎn)）。

（5）若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用過的培養(yǎng)基及培養(yǎng)物必須經(jīng)過__________處理后才能丟

棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散C

解析：（1）微生物生長需要一定的pH,所以培養(yǎng)基裝瓶前需要調(diào)節(jié)pHo（2）倒平板時要

選擇適宜的溫度，溫度過高會燙手，溫度過低培養(yǎng)基又會凝固，不容易倒出來，因此選用50°C

左右的溫度倒平板最適合c將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防

止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。（3）分析題圖可知，A為接種環(huán)，B為涂布器，C為膠

頭滴管，D為接種針，平板劃線法應(yīng)選擇的接種工具是接種環(huán)（A）。（4）第二劃線區(qū)域所劃的

第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落，造成此現(xiàn)象的原因可能有兩個：一是接種環(huán)灼燒后

未冷卻，菌種接觸到高溫的接種環(huán)死亡；二是劃第二劃線區(qū)域第一條線時未從第一區(qū)域末端

開始，因此沒有菌落。（5）有的大腸桿菌會釋放一種強(qiáng)烈的毒素，因此，若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)

驗(yàn)，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。

答案：（1）調(diào)節(jié)pH⑵溫度過高會燙手，過低培養(yǎng)基又會凝固皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)

基，造成污染（3）A（4）接種環(huán)灼燒后未冷卻：劃線未從第一區(qū)域末端開始（S）滅菌

三、應(yīng)用創(chuàng)新

13.下列有關(guān)微生物培養(yǎng)和平板劃線法的敘述，正確的是（）

A.培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后要進(jìn)行滅菌

B.轉(zhuǎn)換劃線角度時，需在酒精燈火焰上灼燒接種環(huán)后直接進(jìn)行劃線

C.蘸取菌液和劃線要在酒精燈火焰旁進(jìn)行

D.劃線時要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線相連

解析：選C培芥基需滅菌后再分裝到培養(yǎng)皿中，A錯誤；轉(zhuǎn)換劃線角度時要先灼燒接

種環(huán)，待冷卻后再從上次劃線的末端開始進(jìn)行劃線，B錯誤；為防止雜菌污染，蘸取菌液和

劃線應(yīng)在酒精燈附近操作，C正確；劃線時，為挑選出單個菌落，最后一區(qū)的劃線（細(xì)菌數(shù)最

少）和第一區(qū)（細(xì)菌數(shù)最多）的劃線不能相連，D錯誤。

14.MRSA菌是一種引起皮膚感染的“超級細(xì)菌”，對青霉素等多種抗生素有抗性。為

了研究人母乳中新發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)H與青霉素組合使用對MRSA菌生長的影響，某興趣小組

的實(shí)驗(yàn)設(shè)計及結(jié)果如下表，下列說法錯誤的是（）

項(xiàng)目培養(yǎng)基中的添加物MRSA菌

1100ng/mL蛋白質(zhì)H生長正常

220jig/mL青霉素生長正常

32pg/mL青霉素+100pg/niL蛋白質(zhì)H死亡

A.細(xì)菌的死亡不能通過光學(xué)顯微鏡觀察其細(xì)胞核的有無來確定

B.第2、3組對比表明，使用低濃度的青霉素可殺死MRSA菌

C.實(shí)驗(yàn)還需設(shè)計用2Mg/mL青霉素做處理的對照組

D.此實(shí)驗(yàn)設(shè)計不能揭示蛋白質(zhì)H的作用機(jī)理

解析：選B細(xì)菌是原核生物，其細(xì)胞中無細(xì)胞核，因而不能通過光學(xué)顯微鏡觀察其細(xì)

胞核的有無來確定細(xì)菌的死亡與否，A正確；第2組和第3組對比表明，使用低濃度青霉素

和高濃度蛋白質(zhì)H可殺死MRSA菌，B錯誤；由于2pg/mL青霉素+100jig/mL蛋白質(zhì)H

可以殺死MRSA菌，所以實(shí)驗(yàn)還需設(shè)計用2yg/mL青霉素做處理的對照組，C正確；此實(shí)

驗(yàn)設(shè)計只能表明低濃度青霉素和高濃度蛋白H的混合物可殺死MRSA菌，但不能揭示蛋白

質(zhì)H的作用機(jī)理，D正確。

15.某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機(jī)化合物A,研究人員用化合物

A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌(目的

菌)。實(shí)驗(yàn)的主要步驟如下圖所示。請分析回答下列問題：

(2)“目的菌”生長所需的氮源和碳源是來自培養(yǎng)基中的o實(shí)驗(yàn)需要振