3.1.2微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)3.1.2微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用二微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)篩選菌株的思路：人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度、pH等），同時抑制或阻止其他微生物的生長。是指允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基：

例如，在培養(yǎng)基中加入_________，可用于選擇培養(yǎng)真菌；在培養(yǎng)基中加入高濃度的鹽水，可用于選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌；不加氮源的無氮培養(yǎng)基可用于選擇培養(yǎng)_______生物；不加碳源的培養(yǎng)基可用于選擇培養(yǎng)_______生物；以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基可用于選擇培養(yǎng)______________；以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基可用于選擇培養(yǎng)_________________。抗生素固氮自養(yǎng)尿素分解菌纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基：是指允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基

常用方法：________________法

①當(dāng)樣品的__________足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的___________，來源于稀釋培養(yǎng)液中的____________；

②通過統(tǒng)計平板上的__________來推測樣品中大約含有的活菌數(shù)。稀釋涂布平板稀釋度一個菌落一個活菌菌落數(shù)微生物的數(shù)量測定微生物的數(shù)量測定

思考1、1g土的體積約為___ml，10g土加入到90ml無菌水，相當(dāng)于稀釋了____倍。

思考2、假如104稀釋度下涂布的3個平板的菌落數(shù)分別為42、40和38，則1ml稀釋液中的菌株數(shù)為_________，104稀釋度的試管中的菌株數(shù)為_________，102稀釋度的試管中的菌株數(shù)為_________，101稀釋度的錐形瓶中的菌株數(shù)為_________。101稀釋度的試管中的菌株來自于10g土，所以1g土中的菌株數(shù)為_________。1014004*1034*1054*1074*1064ⅹ1074ⅹ1054ⅹ1044ⅹ1034ⅹ1074ⅹ1074ⅹ1054ⅹ1044ⅹ1034ⅹ107（2）計算公式：___g土中的菌株數(shù)=（C÷V）×MC：代表______________________V：代表_____________________M：______________1某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)涂布平板時所用的稀釋液體積稀釋倍數(shù)

注意事項：①為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，每個稀釋度，一般設(shè)置____個平板，選擇菌落數(shù)在___________的平板進(jìn)行計數(shù)，并取_________。②統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目_____。原因是當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是____個菌落。因此，統(tǒng)計結(jié)果一般用_________而不是用_________來表示。③設(shè)置對照：主要目的是排除實(shí)驗(yàn)中_________因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的_________。1g土（或1ml原始菌液）中的菌株數(shù)=（C÷V）×MC：代表___________________________________________V：代表___________________________________M：_____________某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)涂布平板時所用的稀釋液體積稀釋倍數(shù)330—300平均值低1菌落數(shù)活菌數(shù)非測試可信度微生物的數(shù)量測定血細(xì)胞計數(shù)板（厚、深）細(xì)菌計數(shù)板（薄、淺）統(tǒng)計微生物數(shù)量還可以用顯微鏡直接計數(shù)法微生物的數(shù)量測定血細(xì)胞計數(shù)板由一塊厚玻璃片特制而成，其中央有計數(shù)室。計數(shù)室分為9個大方格，每個大方格的面積為________，加蓋玻片后的菌液的深度為___________。因此，每個大方格的容積為_________。大方格又分為兩種規(guī)格。規(guī)格I：1個大方格=16個中方格×25個小方格；規(guī)格II：1個大方格=25個中方格×16個小方格。1毫升=1cm3=1000mm3一個大方格的容積：0.1mm3=_______毫升1mm20.1mm0.1mm310-4

如果使用規(guī)格I的血細(xì)胞計數(shù)板，先統(tǒng)計位于角落的4個中方格中的總菌數(shù)，求得每個中方格的__________再乘以16，就得出一個大方格中的總菌數(shù)，然后再換算成1mL菌液中的總菌數(shù)。

如果使用規(guī)格II的血細(xì)胞計數(shù)板，先統(tǒng)計位于______________的5個中方格中的總菌數(shù)，求得每個中方格的___________再乘以_____，就得出一個大方格中的總菌數(shù)，然后再換算成1mL菌液中的總菌數(shù)。平均菌數(shù)中間和四角平均菌數(shù)25若使用規(guī)格II的血細(xì)胞計數(shù)板，5個中方格中總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B，則細(xì)菌計數(shù)板菌落數(shù)尿素［CO(NH2)2］是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中一種重要的氮肥。尿素施入土壤后，會被土壤中的某些細(xì)菌分解成____________，再轉(zhuǎn)化為________________等被植物吸收。而這些細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣蒧______。NH3和CO22NH3+CO2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)NO3—、NH4+脲酶土壤取樣細(xì)菌適宜在酸堿度接近中性的潮濕土壤中生長，絕大多數(shù)分布在距地表3～8cm的土壤層。因此，取樣時，一般要鏟去表層土。樣品稀釋測定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般需要1×104、1×105和1×106倍稀釋進(jìn)行平板培養(yǎng)。第一次做實(shí)驗(yàn)適當(dāng)放寬，以保證能選取菌落數(shù)為30～300之間的平板。接種涂布平板的方法進(jìn)行接種。設(shè)置對照。培養(yǎng)30～37℃培養(yǎng)1～2d，每隔24h菌落計數(shù)一次，選擇菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果。觀察相同的培養(yǎng)條件下，同種微生物會表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。觀察你分離得到的菌落，記錄菌落特征（如形狀、大小和顏色等）。中性潮濕唯一氮源104、105和106放線菌102、103和104時間溫度菌落數(shù)目穩(wěn)定培養(yǎng)時間不足平均值

操作提示：1、無菌操作：

①取土樣的用具在使用前都需要滅菌。②應(yīng)在__________________旁稱取土壤，并在火焰附近將稱好的土樣倒入錐形瓶中，塞好棉塞。③在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在酒精燈火焰旁操作。2、做好標(biāo)記：

本實(shí)驗(yàn)使用的平板和試管比較多。為避免混淆，最好使用前就做好_________。

①培養(yǎng)皿的標(biāo)記：注明__________、______________以及平板上培養(yǎng)樣品的_____________等。

②試管的標(biāo)記：將已經(jīng)進(jìn)行過稀釋操作的試管，按稀釋度遞增的順序，依次放在試管架的另一行。3、制定計劃：對于耗時較長的生物實(shí)驗(yàn)，要事先制定計劃，以便提高工作效率。酒精燈的火焰標(biāo)記培養(yǎng)基種類培養(yǎng)日期稀釋度在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中，只有能分解尿素的細(xì)菌才能利用尿素這種氮源來生長繁殖，并長出菌