152021-05-25發(fā)布本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定I規(guī)?；?chǎng)牛病毒性腹瀉-黏膜病凈化技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了規(guī)?；?chǎng)牛病毒性腹瀉-黏膜病凈化的檢測(cè)方法，無疫場(chǎng)群的建立、維持及綜合生GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)GB/T18637-2018牛病毒性腹瀉/粘膜病診農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2017〕25號(hào)病死及病害動(dòng)物無害化處牛病毒性腹瀉-黏膜病Bovineviraldiarrhea-muc對(duì)規(guī)模化牛場(chǎng)采取一系列措施，達(dá)到清除牛病毒性腹瀉-黏膜病的過程。在某一限定的牛場(chǎng)內(nèi)，根4材料與方法4.1儀器PCR儀、凝膠成像系統(tǒng)、高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)、組織研磨器或者研缽、普通冰箱、微量移液器、酶1RNA提取試劑盒；反轉(zhuǎn)錄酶、聚合酶，-20℃保存，避免反復(fù)凍融；除非另有說明，在檢測(cè)中使用4.3檢測(cè)方法4.3.1抗原檢測(cè)4.3.2血清學(xué)檢測(cè)參照GB/T18637-2018，6.2病毒中和試驗(yàn)部分或6.4部分BVDV抗體間接ELISA試驗(yàn)4.3.3合格免疫抗體判定標(biāo)準(zhǔn)4.3.3.1個(gè)體免疫抗體合格標(biāo)準(zhǔn)，采用病毒中和試驗(yàn)，參照GB/T18637-2018，6.2病毒中和試驗(yàn)部5.1凈化策略5.2感染狀況普查階段5.2.1.1采血用豬耳斷屑器從每頭牛的耳廊腹部采取三角形的皮膚活組織樣品，大小約為12×52首次全群采樣普查。之后新生犢牛、1月齡犢5.3免疫間斷5.3.1疫苗5.4檢測(cè)與淘汰階5.4.1.2對(duì)步驟5.4.1.1報(bào)告的抗原抗體陰性牛只復(fù)查，采用ELISA或PCR法檢測(cè)抗原，與步驟5.4.1.15.4.2.21月齡犢牛，按照上述方法復(fù)檢，逐5.5凈化場(chǎng)的評(píng)估階段在進(jìn)入“假定健康階段”后，按照免疫無疫標(biāo)準(zhǔn)、凈化標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行凈化場(chǎng)35.5.3.2停止免疫兩年以上，無牛病毒性腹瀉-黏膜病抗原陽性牛。6.2.3嚴(yán)格檢疫引進(jìn)牛只，逐頭檢測(cè)，確保加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，減少應(yīng)激。做好通風(fēng)、保溫、適宜的飼7.5.2病死畜無害化處理按農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布的《病禁止在場(chǎng)內(nèi)飼養(yǎng)犬、貓等其它易感動(dòng)物。每6個(gè)月至少開展1次47.8.1做好生產(chǎn)記錄、飼料和飼料添加劑購進(jìn)和使用記錄、獸藥購進(jìn)和使用記錄、免疫記錄、消毒記5BVDV病毒核酸RT-PCR檢測(cè)方法所用引物序列見表A.BVDVFA.2RT-PCR提取RNA，取每份樣品的RNA5.0μL，置0.2mL小時(shí)，70℃作用10分鐘。反轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA用于PCR擴(kuò)增或置?15