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文檔簡介

15F?Owen型甜菜細(xì)胞質(zhì)類型快速鑒定技術(shù)2022-08-30發(fā)布本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定I0型系maintainerline4.2試劑4.2.150mmol/LEDTApH8.0(1L:800mlH?0中加186.1gEDTANa?·2H?0,用NaOH調(diào)pH至8.0,定容至1L,滅菌)。4.2.250×TAE緩沖液(1L:500mlH?O中加242gTris,溶解后加100ml10.5mol/LEDTApH8.0和57.1ml冰乙酸，定容)。2TR1:5'-AGAACTTCGATAGGCG選取擬鑒定甜菜生長期的新鮮幼嫩葉片，單株裝入塑封袋，放入有冰袋的低將樣品洗凈擦干，稱取0.5g,放入研缽，倒入液氮，迅速將樣品研成粉末，裝入1.ODzgo/OD2≈1.8(大于1.9,表明有RNA污染；小于1.6,表明有蛋白質(zhì)、酚等污染)。對于純的樣品，只94℃預(yù)變性5min;95℃變性30s,57℃退火30s,72℃延伸1min,共30個循環(huán)；72℃進(jìn)一3取PCR產(chǎn)物5μL,使用1%瓊脂糖凝膠在1×TAE電泳緩沖液中電泳，電泳電壓120V,電泳時長30min。用凝膠成像系統(tǒng)紫外光下檢測電泳結(jié)果。8結(jié)果分析結(jié)果分析見圖1所示是對部分材料進(jìn)行PCR電泳檢測部分結(jié)果，泳道M為DL2000Marker,泳道1、3、4、5、6條帶位置在750bp,細(xì)胞質(zhì)類型為N型，為具有保持能力0型材料；2、7、8、9、10、11、12條帶位置在500bp,細(xì)胞質(zhì)類型為S型，為CMS型材料，泳道1、2

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