1.前言-80℃超低溫冰箱（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“超低溫冰箱”）是生物醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)及生物制藥領(lǐng)域的核心設(shè)備，主要用于長(zhǎng)期保存細(xì)胞株、病毒、血清、組織樣本、特殊藥品等對(duì)溫度敏感的高價(jià)值物品。其工作原理是通過(guò)壓縮機(jī)循環(huán)制冷，維持箱內(nèi)-80℃±5℃的穩(wěn)定低溫環(huán)境，確保樣本的生物活性與理化性質(zhì)不受破壞。由于超低溫環(huán)境的特殊性（如低溫凍傷風(fēng)險(xiǎn)、樣本易受溫度波動(dòng)影響）及樣本的高價(jià)值性（如稀有細(xì)胞株、臨床樣本），規(guī)范操作流程是避免樣本損失、設(shè)備故障及人員安全事故的關(guān)鍵。本規(guī)范結(jié)合GB/T____《超低溫保存箱》《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》等標(biāo)準(zhǔn)及實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)制定，旨在為操作人員提供專(zhuān)業(yè)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹笇?dǎo)。2.適用范圍本規(guī)范適用于實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)院、生物制藥企業(yè)等場(chǎng)所使用的-80℃超低溫冰箱（包括立式、臥式機(jī)型）的日常操作、維護(hù)及應(yīng)急處理。不適用于-20℃冰箱、液氮罐等其他溫度范圍的低溫設(shè)備。3.操作前準(zhǔn)備3.1人員資質(zhì)要求操作人員需經(jīng)設(shè)備廠家培訓(xùn)或內(nèi)部考核合格，掌握超低溫冰箱的工作原理、操作步驟及安全注意事項(xiàng)；處理感染性樣本時(shí)，需具備相應(yīng)生物安全等級(jí)資質(zhì)（如BSL-2實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)）；熟悉應(yīng)急處理流程（如停電、溫度異常時(shí)的樣本轉(zhuǎn)移方法）。3.2環(huán)境與設(shè)備檢查環(huán)境檢查：冰箱放置區(qū)域需通風(fēng)良好（周?chē)A(yù)留≥10cm散熱空間），遠(yuǎn)離熱源（如暖氣、陽(yáng)光直射、大型設(shè)備散熱口）；環(huán)境溫度≤25℃，相對(duì)濕度≤60%；地面平整、干燥，避免震動(dòng)。電源檢查：確認(rèn)電源插座為接地插座（三線(xiàn)插頭），電壓穩(wěn)定（220V±10%），避免與大功率設(shè)備（如離心機(jī)、烤箱）共用同一電路；電源線(xiàn)無(wú)破損、老化。設(shè)備外觀檢查：觀察冰箱門(mén)是否關(guān)緊，密封條無(wú)變形、裂紋或異物；外殼無(wú)凹陷、銹蝕；顯示屏無(wú)溫度異?！半娫垂收稀钡葓?bào)警提示。3.3物品與防護(hù)準(zhǔn)備物品準(zhǔn)備：提前準(zhǔn)備耐低溫樣本盒（如聚丙烯材質(zhì)，密封良好）、耐低溫標(biāo)簽（如聚酯薄膜標(biāo)簽，避免結(jié)冰脫落）、樣本登記本（或電子記錄系統(tǒng)）、專(zhuān)用取放工具（如長(zhǎng)柄鑷子、冷凍盒夾）。防護(hù)準(zhǔn)備：佩戴防寒手套（如氯丁橡膠手套，避免直接接觸-80℃物品）、護(hù)目鏡（防止樣本飛濺入眼）；處理感染性樣本時(shí)，需加戴生物安全手套、防護(hù)服。4.基本操作流程4.1開(kāi)機(jī)操作注：新設(shè)備或長(zhǎng)期停機(jī)（＞7天）后開(kāi)機(jī)，需先預(yù)冷再放樣本。1.樣本轉(zhuǎn)移：確認(rèn)冰箱內(nèi)無(wú)樣本（若有，需轉(zhuǎn)移至其他-80℃冰箱）；2.通電：插入電源插頭，打開(kāi)背部主電源開(kāi)關(guān)（部分機(jī)型為底部開(kāi)關(guān)）；3.啟動(dòng)設(shè)備：按下顯示屏“開(kāi)機(jī)”鍵（或按說(shuō)明書(shū)操作），壓縮機(jī)啟動(dòng)，顯示屏顯示當(dāng)前溫度；4.預(yù)冷等待：預(yù)冷時(shí)間通常為24-48小時(shí)（具體以廠家說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)），直至溫度穩(wěn)定在-80℃±5℃；5.確認(rèn)狀態(tài)：預(yù)冷完成后，檢查顯示屏無(wú)異常報(bào)警，方可放入樣本。4.2樣本存放操作1.樣本包裝：液體樣本（如血清、細(xì)胞懸液）需裝入帶螺旋蓋的凍存管，旋緊蓋子（避免液氮進(jìn)入或樣本泄漏），并預(yù)留10%-20%膨脹空間（防止結(jié)冰破裂）；固體樣本（如組織塊）需裝入密封袋，再放入樣本盒。2.標(biāo)簽規(guī)范：在樣本容器或樣本盒上粘貼耐低溫標(biāo)簽，標(biāo)注樣本名稱(chēng)、編號(hào)、保存日期、保存人、生物安全等級(jí)（若有）；電子標(biāo)簽需確認(rèn)可在低溫環(huán)境下讀取。3.存放位置：分類(lèi)存放（如細(xì)胞株、血清、組織樣本分開(kāi)）；遵循“先進(jìn)先出”原則（近期需取出的樣本放在靠近門(mén)口的位置）；避免直接接觸冰箱內(nèi)壁（防止局部溫度過(guò)低損傷樣本）或出風(fēng)口（影響冷氣循環(huán)）。4.擺放方式：樣本盒間保留1-2cm通風(fēng)間隙，確保冷氣循環(huán)；每層擱架載重不超過(guò)廠家規(guī)定（通?！?0kg/層），避免擱架變形。5.記錄：將樣本信息錄入電子系統(tǒng)或登記本，包括樣本名稱(chēng)、編號(hào)、存放位置、保存日期、保存人。4.3樣本取出操作關(guān)鍵：減少開(kāi)門(mén)時(shí)間，避免溫度波動(dòng)。1.準(zhǔn)備工作：提前確認(rèn)需取出的樣本信息（名稱(chēng)、編號(hào)、存放位置），準(zhǔn)備好預(yù)冷的接收容器（如冰盒加干冰、液氮罐）。2.開(kāi)門(mén)操作：快速打開(kāi)冰箱門(mén)（單次開(kāi)門(mén)時(shí)間≤30秒），若需取出多層樣本，分多次開(kāi)門(mén)（每次取一層后及時(shí)關(guān)門(mén)）。3.取出樣本：用專(zhuān)用工具（如長(zhǎng)柄鑷子）取出目標(biāo)樣本，避免手直接接觸（防止凍傷或樣本溫度升高）；若樣本凍在擱架上，不要用力拉扯，可用鑷子輕輕撬動(dòng)（或待其稍微解凍后取出）。4.關(guān)門(mén)檢查：取出后立即關(guān)閉冰箱門(mén)，確認(rèn)門(mén)已關(guān)緊（密封條與門(mén)框貼合無(wú)間隙）；檢查顯示屏溫度，若升高超過(guò)5℃，需及時(shí)處理（如檢查門(mén)密封）。5.樣本處理：將取出的樣本立即放入預(yù)冷容器，盡快轉(zhuǎn)移至實(shí)驗(yàn)區(qū)域；復(fù)溫時(shí)遵循緩慢復(fù)溫原則（如4℃冰箱復(fù)溫30分鐘，再室溫復(fù)溫），避免熱沖擊損傷樣本。4.4關(guān)機(jī)操作注：長(zhǎng)期停機(jī)（＞7天）或維修時(shí)需關(guān)機(jī)。1.樣本轉(zhuǎn)移：將所有樣本轉(zhuǎn)移至其他-80℃冰箱或液氮罐，確保樣本安全；2.關(guān)閉電源：按下顯示屏“關(guān)機(jī)”鍵，待壓縮機(jī)停止運(yùn)行后，關(guān)閉背部主電源，拔下插頭；3.清理內(nèi)部：待箱內(nèi)溫度回升至0℃以上（約12-24小時(shí)），取出擱架、抽屜，用75%乙醇擦拭內(nèi)膽（避免用含氯消毒劑，防止腐蝕）；清理密封條上的異物；4.干燥處理：打開(kāi)冰箱門(mén)，自然干燥24小時(shí)（避免滋生細(xì)菌）；5.記錄：記錄關(guān)機(jī)時(shí)間、原因、樣本轉(zhuǎn)移情況。5.日常維護(hù)與校準(zhǔn)5.1每日巡檢溫度記錄：每天早、晚各記錄1次顯示屏溫度（若有溫度記錄儀，同步記錄）；溫度波動(dòng)超過(guò)±5℃時(shí)，需排查原因（如門(mén)未關(guān)緊、密封條損壞）；門(mén)密封檢查：用手觸摸門(mén)邊緣，確認(rèn)無(wú)冷氣泄漏（若有，清理密封條異物或更換）；異常噪音檢查：傾聽(tīng)運(yùn)行噪音，若有壓縮機(jī)異響、風(fēng)扇卡頓，聯(lián)系廠家維修；樣本狀態(tài)檢查：查看樣本盒是否破損、泄漏，標(biāo)簽是否清晰（若有異常，及時(shí)處理并記錄）。5.2每周清潔外部清潔：用溫水擦拭外殼、門(mén)把手（避免用濕手碰電源）；內(nèi)部清潔：取出擱架、抽屜，用75%乙醇擦拭，晾干后放回；清理底部積水（若有）。5.3月度維護(hù)密封條維護(hù)：用硅酮潤(rùn)滑劑（廠家推薦）涂抹密封條，防止老化；檢查密封條是否有裂紋，若有，及時(shí)更換；擱架檢查：檢查擱架是否變形、銹蝕，若有，更換；調(diào)整擱架位置，確保樣本擺放符合要求。5.4季度保養(yǎng)冷凝器清理：關(guān)閉電源，用吸塵器或毛刷清理冷凝器（位于背部或底部）上的灰塵（避免碰傷翅片）；風(fēng)扇檢查：檢查風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)是否正常，有無(wú)卡頓，若有，聯(lián)系廠家維修。5.5年度校準(zhǔn)溫度校準(zhǔn)：請(qǐng)第三方資質(zhì)機(jī)構(gòu)或廠家工程師，用標(biāo)準(zhǔn)溫度計(jì)（如鉑電阻溫度計(jì)）校準(zhǔn)溫度傳感器；校準(zhǔn)結(jié)果記錄并存檔；性能驗(yàn)證：進(jìn)行滿(mǎn)負(fù)荷溫度分布測(cè)試（將溫度計(jì)放在箱內(nèi)不同位置，記錄24小時(shí)溫度變化），確認(rèn)所有位置溫度均在-80℃±5℃范圍內(nèi)。6.應(yīng)急處理6.1突發(fā)停電短期停電（≤2小時(shí)）：關(guān)閉冰箱門(mén)，避免開(kāi)門(mén)；利用保溫層維持溫度（-80℃冰箱關(guān)閉門(mén)后，溫度升高≤10℃/2小時(shí)）；長(zhǎng)期停電（＞2小時(shí)）：1.啟動(dòng)備用電源（如UPS）；2.若無(wú)備用電源，將樣本轉(zhuǎn)移至其他-80℃冰箱或液氮罐（轉(zhuǎn)移時(shí)用干冰保持低溫）；記錄：記錄停電時(shí)間、處理措施、樣本轉(zhuǎn)移情況。6.2溫度異常溫度升高：排查原因：門(mén)未關(guān)緊？密封條損壞？冷凝器堵塞？風(fēng)扇故障？處理：若以上均正常，聯(lián)系廠家維修；維修期間，轉(zhuǎn)移樣本至其他冰箱；溫度過(guò)低：排查原因：溫度設(shè)置誤操作？傳感器故障？處理：恢復(fù)默認(rèn)設(shè)置（-80℃），若仍異常，聯(lián)系廠家維修。6.3樣本泄漏/污染立即處理：關(guān)閉冰箱門(mén)，佩戴防護(hù)裝備（生物安全手套、防護(hù)服、護(hù)目鏡）；清理泄漏物：1.用吸水紙吸干液體；2.用75%乙醇擦拭污染區(qū)域（感染性樣本需用1g/L含氯消毒液擦拭，作用30分鐘后用清水擦凈）；樣本處理：泄漏樣本按生物安全規(guī)程處理（如高壓滅菌、焚燒）；污染樣本盒更換并重新標(biāo)注；記錄：記錄泄漏原因、處理措施、樣本損失情況。6.4人員凍傷急救措施：1.將凍傷部位放入37-40℃溫水中浸泡（避免熱水，防止?fàn)C傷），15-30分鐘至感覺(jué)恢復(fù)；2.不要揉搓凍傷部位（避免皮膚破損），不要用冰雪擦拭（加重?fù)p傷）；就醫(yī)：若出現(xiàn)水皰、潰瘍或疼痛劇烈，及時(shí)就醫(yī)；記錄：記錄凍傷原因、處理措施、人員情況。7.注意事項(xiàng)7.1物品存放限制禁止存放易燃、易爆物品（如乙醇、丙酮），避免爆炸；禁止存放揮發(fā)性強(qiáng)的物品（如乙醚），避免腐蝕內(nèi)膽；禁止存放食品、飲料或個(gè)人物品，避免交叉污染；感染性樣本需用雙層密封容器存放，并標(biāo)注生物安全等級(jí)。7.2操作規(guī)范開(kāi)門(mén)時(shí)間≤30秒/次，開(kāi)門(mén)次數(shù)≤10次/天（減少溫度波動(dòng)）；熱物品（如剛滅菌的樣本）需冷卻至室溫后再放入（避免壓縮機(jī)過(guò)載）；不要用尖銳物品（如螺絲刀）敲擊內(nèi)膽或擱架（防止損壞）。7.3設(shè)備安全不要隨意更改溫度設(shè)置（默認(rèn)-80℃），如需調(diào)整，需經(jīng)專(zhuān)業(yè)人員確認(rèn)；頂部不要放置重物（≤5kg），避免壓壞部件；長(zhǎng)期停機(jī)時(shí)，按關(guān)機(jī)流程處理（避免內(nèi)部滋生細(xì)菌）