152024-02-23發(fā)布本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAM/TC1I瘤胃微生物體外培養(yǎng)操作規(guī)程GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和124.2.1.1營(yíng)養(yǎng)元素溶液A準(zhǔn)確稱量氯化鈣13.20g,氯化錳10.00g,氯化鈷1.00g,氯化鐵8.00g,溶解后定容到100mL。準(zhǔn)確稱取磷酸二氫鈉5.70g,磷酸二氫鉀6.20g,硫酸鎂0.60g,溶解后定容到105.1實(shí)驗(yàn)室用植物樣品粉碎機(jī)，篩網(wǎng)孔徑16目～32目。5.2分析天平，感量0.0001g。5.3干燥箱：RT+10℃~250℃,控溫精度±5℃。5.5震蕩培養(yǎng)箱(數(shù)顯水浴震蕩培養(yǎng)箱或氣浴震蕩培養(yǎng)箱):內(nèi)徑大于30cm×40cm,震蕩頻率0r/min～100r/min,控溫范圍室溫至99.9℃,溫控精度±0.1℃。5.6pH計(jì)：測(cè)量范圍0～14,精度±0.1。按照GB/T14699.1制備培養(yǎng)底物，置于干燥箱內(nèi)65℃烘干，粉碎或研磨后過(guò)16目篩，混勻后取100474mL水中，通入CO?至飽和，并保存在39℃水浴恒溫培養(yǎng)箱中，最后再加入49.5mL還原劑溶液，加選擇健康、體重接近的3只(頭)裝有永久性瘤胃瘺管的供試動(dòng)物，單欄飼養(yǎng)。在晨飼前經(jīng)瘤胃瘺管利用瘤胃液取樣器采集供試動(dòng)物的瘤胃液，每只(頭)動(dòng)物采集150mL～200mL,轉(zhuǎn)入預(yù)熱至39℃的每個(gè)培養(yǎng)瓶中加入培養(yǎng)底物約0.5g（準(zhǔn)確至0.0001g），每種培養(yǎng)底物設(shè)3個(gè)重復(fù)，每每個(gè)培養(yǎng)瓶中迅速加入20mL瘤胃液。瘤胃培養(yǎng)液通入CO23min，立即擰上瓶蓋，放入39.5℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)箱的震蕩頻率為15次/分，持續(xù)培養(yǎng)3A.1瘤胃微生物體外培養(yǎng)的操作瘤胃微生物體外培養(yǎng)的操作包括6個(gè)步驟見(jiàn)圖A.1，在瘤胃微生物體外培養(yǎng)過(guò)程中進(jìn)行產(chǎn)氣量的記錄，培養(yǎng)完成后，可以進(jìn)行pH值測(cè)定、氨氮和揮發(fā)性脂肪酸的測(cè)定和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消失率的測(cè)A.2體外培養(yǎng)參數(shù)利用產(chǎn)氣測(cè)量系統(tǒng)每隔60s記錄產(chǎn)氣模塊內(nèi)的氣體壓力變化，最后由樣品模塊內(nèi)壓力減去空白模塊內(nèi)壓力得到，計(jì)算出0.5h、1h、2h、3h、4h、5h、6h、8h、10h、12h、16h、18h、24h、28h、32h、36h、40h、4發(fā)酵至48h時(shí)，打開(kāi)培養(yǎng)瓶采集培養(yǎng)液樣品10mL，立即用pH計(jì)測(cè)定培養(yǎng)液pH值。pH值的適宜范圍取剩余培養(yǎng)殘?jiān)娓珊?，測(cè)定相關(guān)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的含量，計(jì)算營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)Y——代表試樣中某一營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消失率，單位為百分比（%W1——培養(yǎng)底物中某一營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量，單45DB15/T3培養(yǎng)底物的制備(見(jiàn)6.1)培養(yǎng)底物的制備