ICS67.120.99CCSB4534DB34/T1373—2025代替DB34/T1373-2011動物組織中氯丙嗪的殘留測定酶聯(lián)免疫DeterminationofchlorpromazineresiduesinanimaltissuesEnzyme-linkedimmunosorbentassay2025-01-24發(fā)布2025-02-24實(shí)施安徽省市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB34/T1373—2025.本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替DB34/T1373-2011《動物組織中氯丙嗪的殘留測定酶聯(lián)免疫吸附法》，與DB34/T1373-2011相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性修改外，主要技術(shù)變化如下：a)增加了“禽蛋中氯丙嗪檢測范圍”（見第1章）；b)增加了“術(shù)語和定義”（見第3章）；c)更改了“試樣制備”（見7.1，2011版的7.1）；d)增加了“禽蛋”制備方法（見7.1.2）；e)更改了“測定步驟”（見第8章，2011版的第7章）；f)更改了“結(jié)果判定和表述”（見第9章，2011版的第8章）；g)更改了“檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度”（見第10章，2011版的第9章）；h)增加了“資料性附錄”氯丙嗪酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒組成（見附錄A）。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由安徽省獸藥飼料監(jiān)察所提出。本文件由安徽省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳歸口。本文件起草單位：安徽省獸藥飼料監(jiān)察所、安徽中青檢驗檢測有限公司、安徽賽如分析檢測科技有限公司、安徽科博產(chǎn)品檢測研究院有限公司、合肥市農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)技術(shù)服務(wù)管理總站、安徽省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站。本文件主要起草人：劉發(fā)全、汪秀娟、魏濤、王偉、商魯寧、陳斌、吳昊、許世富、王媛媛、程瑩、林赤瑜。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：——2011年首次發(fā)布為DB34/T1373-2011，2025年第一次修訂。DB34/T1373—20251動物組織中氯丙嗪的殘留測定酶聯(lián)免疫吸附法本文件規(guī)定了畜禽肌肉、肝臟、腎臟和禽蛋中氯丙嗪殘留量的酶聯(lián)免疫吸附測定方法。本文件適用于畜禽肌肉、肝臟、腎臟和禽蛋中氯丙嗪殘留量的快速篩選測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T33411酶聯(lián)免疫分析試劑盒通則3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理殘留在畜禽肌肉、肝臟、腎臟和禽蛋中的氯丙嗪經(jīng)三氯乙酸溶液、乙腈溶液提取后用于酶聯(lián)免疫測定。試樣中的氯丙嗪與包被于微孔板中的抗原同特異性抗體進(jìn)行競爭性免疫反應(yīng)，加入一定量的顯色底物和終止液，在450nm處測定吸光度值，在一定濃度范圍內(nèi)，試樣中氯丙嗪的含量與吸光度大小成反比，換算后可以獲得樣本中氯丙嗪的殘留量。5試劑和材料除非另有說明，本法所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682的二級水。5.1氯丙嗪酶聯(lián)免疫試劑盒，應(yīng)符合GB/T33411的規(guī)定，組成見附錄A。5.3正己烷。5,4三氯乙酸溶液（2.5稱取2.5g三氯乙酸，加入100mL水，攪拌至完全溶解。5.5氫氧化鈉溶液（12稱取12.0g氫氧化鈉加入100mL水，溶解混勻。6儀器和設(shè)備6.2分析天平：感量0.01g。6.3粉碎機(jī)。2DB34/T1373—20256.5離心機(jī)：≥4000g。6.6漩渦混合機(jī)。6.7冰箱。6.8氮吹儀。6.9微量加樣器及配套吸頭單道20μL，50μL，100μL，多道50μL～300μL）。7樣品處理7.1.1畜禽肌肉、肝臟、腎臟去筋膜切成小塊，粉碎機(jī)制成糜狀，10000rpm均質(zhì)2min。7.1.2禽蛋，去殼，將蛋清和蛋黃攪拌均勻。7.2試樣提取稱取2.0±0.05g均質(zhì)或攪拌均勻后組織樣品于50mL離心管中，分別加入2mL三氯乙酸溶液（5.2）、6mL乙腈（5.3），渦動5min，室溫4000g離心5min后，取2mL上層液于另一50mL離心管中，依次加入2mL氫氧化鈉溶液（5.4）和4.5mL正已烷（5.5），渦動5min，4000g離心5min，取上層有機(jī)相3mL于離心管中，50℃~60℃氮?dú)獯蹈?，加?.5mL復(fù)溶工作液（5.1.9渦動1min，取50μL用于檢測。7.3試樣貯存制備好的試樣按檢樣和備樣置于4℃下可保存3天～4天，或于-18℃以下保存6個月。8測定步驟8.1測定在室溫（20℃~25℃)條件下操作，測定之前將試劑盒以及所有試劑恢復(fù)至室溫（約1h～28.2按標(biāo)準(zhǔn)工作液和供試樣品數(shù)量取孔條插入酶標(biāo)板（5.1.1），標(biāo)準(zhǔn)工作液和供試樣品做兩孔平行，記錄下好對應(yīng)的位置。8.3分別在各孔中加入50μL標(biāo)準(zhǔn)工作液（5.1.2）或7.3項下待測試樣溶液，每孔加入50μL抗體工作液（5.1.3），用蓋板膜封板，輕輕振蕩酶標(biāo)板10s，充分混勻，室溫下避光反應(yīng)60min。8.4揭開蓋板膜，傾出板孔中的液體，在所有微孔中加260μL洗滌工作液（5.6），輕輕振蕩酶標(biāo)板15s～30s，充分混勻，傾出微孔中的洗滌液，在吸水紙上拍干，徹底清除微孔中的殘留液和氣泡，重復(fù)洗板4遍。8.5每孔加100μL底物A、B混合液（5.7）用蓋板膜封板，輕輕振蕩酶標(biāo)板10s，充分混勻，室溫下避光反應(yīng)15min～20min。8.6揭開蓋板膜，每孔加50μL終止液（5.1.8輕輕振蕩酶標(biāo)板10s，充分混勻，5min內(nèi)在450nm下測定吸光度值。9結(jié)果判定和表述9.1用獲得的標(biāo)準(zhǔn)工作液和供試樣品溶液吸光度值的比值進(jìn)行計算，見式（1）：DB34/T1373—20253相對吸光度值B—標(biāo)準(zhǔn)工作液或供試樣品溶液的平均吸光度值；B0—0濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液的平均吸光度值。9.2將計算的相對吸光度值對應(yīng)氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(μg/L）的自然對數(shù)作半對數(shù)坐標(biāo)系統(tǒng)曲線圖，對應(yīng)的試樣濃度（A）可從校正曲線算出，畜禽肌肉、肝臟、腎臟及禽蛋中氯丙嗪殘留量結(jié)果計算見式（2）：X—供試樣中氯丙嗪的含量，單位為微克/千克(μg/kgA—供試樣的相對吸光度值（％）對應(yīng)的氯丙嗪的含量，單位為微克/升(μg/L）；V—加入復(fù)溶工作液體積，單位為毫升(mL)；f—稀釋倍數(shù)；m—試樣的取樣量，單位為克（g）。9.3檢測結(jié)果小于檢出限時判為未檢出，大于或等于檢出限時，應(yīng)使用色譜質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)行確認(rèn)。10檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度本方法在畜禽肌肉、肝臟、腎臟及禽蛋的檢出限為0.5μg/kg。10.2準(zhǔn)確度本方法在2～5倍檢出限添加濃度水平上的回收率為80120％。10.3精密度本方法的批內(nèi)變異系數(shù)CV%≤30批間變異系數(shù)CV%≤30％。DB34/T1373—20254氯丙嗪酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒組成A.1酶標(biāo)板：包被有氯丙嗪抗體。A.2氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)工作液：濃度分別為：0.0μg/L、0.1μg/L、0.2μg/L、0.5μg/L、1.0μg/