ICS65.020.99

CCSB44

DB23

黑龍江省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB23/TXXXX—XXXX

實(shí)驗(yàn)動物獲取SPF豬的剖腹產(chǎn)技術(shù)規(guī)范

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

黑龍江省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB23/TXXXX—XXXX

實(shí)驗(yàn)動物獲取SPF豬的剖腹產(chǎn)技術(shù)規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了妊娠母豬的選擇、術(shù)前準(zhǔn)備、保定與麻醉、剖腹產(chǎn)手術(shù)、新生仔豬處置和母豬護(hù)理等。

本文件適用于利用生物學(xué)凈化方法從普通級豬和SPF豬通過剖腹產(chǎn)手術(shù)獲取SPF豬的操作。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB14925實(shí)驗(yàn)動物環(huán)境及設(shè)施

GB16551豬瘟診斷技術(shù)

GB/T18641偽狂犬病診斷方法

GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

GB/T27416實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量和能力的通用要求

GB/T34791實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量控制要求

GB/T35823實(shí)驗(yàn)動物動物實(shí)驗(yàn)通用要求

GB/T35892實(shí)驗(yàn)動物福利倫理審查指南

GB/T50333醫(yī)院潔凈手術(shù)部建筑技術(shù)規(guī)范

NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存于運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范

NY/T678豬偽狂犬病免疫酶試驗(yàn)方法

NY/T679豬繁殖與呼吸綜合癥免疫酶試驗(yàn)方法

NY/T3466實(shí)驗(yàn)用豬微生物學(xué)等級及監(jiān)測

SN/T1919豬細(xì)小病毒病檢疫技術(shù)規(guī)范

3妊娠母豬的選擇

3.1普通級豬

3.1.1母豬來源

應(yīng)來源于未注射PRRS疫苗、臨床上無經(jīng)胎盤垂直傳播的疾病，即豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征和豬

偽狂犬病、豬細(xì)小病毒病等癥狀的豬場。

3.1.2胎次的選擇與采樣

選擇第二至第六胎妊娠母豬，剖腹產(chǎn)前現(xiàn)場采集樣本，按照NY/T541規(guī)定的采樣方法采樣。

3.1.3豬瘟病原檢測

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按照GB/T16551規(guī)定的方法進(jìn)行檢測。

3.1.4豬繁殖與呼吸綜合征病原檢測

按照NY/T679規(guī)定的方法進(jìn)行檢測。

3.1.5豬偽狂犬病病原檢測

按照GB/T18641規(guī)定的方法進(jìn)行檢測。

3.1.6豬細(xì)小病毒病原檢測

按照SN/T1919規(guī)定的方法進(jìn)行檢測。

3.2SPF豬

3.2.1微生物學(xué)質(zhì)量

符合NY/T3466中的規(guī)定。

3.2.2寄生蟲學(xué)質(zhì)量

符合NY/T3466中的規(guī)定。

3.3手術(shù)時間

預(yù)產(chǎn)期前一周觀察母豬分娩征兆，盡量接近自然順產(chǎn)時間施行手術(shù)。

4術(shù)前準(zhǔn)備

4.1器械

母豬剖腹產(chǎn)常規(guī)手術(shù)器械、脊髓穿刺針、豬用開口器、動物用喉鏡、滅菌紗布、滅菌毛巾、20mL

金屬注射器、滅菌綁定繩等若干，使用前滅菌；5mL和10mL一次性注射器若干。

4.2設(shè)備

動物用外科手術(shù)臺、動物用呼吸麻醉機(jī)、動物用監(jiān)護(hù)設(shè)備、手術(shù)用隔離器和保育設(shè)備。

4.3藥品

4.3.1麻醉藥品

丙泊酚注射液（100mg/10mL）、異氟烷（100mL/瓶）、鹽酸利多卡因注射液（100mg/5mL）。

4.3.2急救藥品

鹽酸腎上腺素注射液（1mg/mL）、尼可剎米注射液（375mg/1.5mL）、硫酸阿托品注射液（5mg/mL）、

鹽酸納洛酮注射液（400mg/mL）、酚磺乙胺注射液（0.25g/2mL）。

4.3.3常用藥品

1%碘伏、5%碘酊、75%酒精、5%新潔爾滅消毒液、0.2%～0.5%過氧乙酸消毒液、0.9%NaCl注射

液、10%葡萄糖注射液、廣譜抗生素（如頭孢類等）。

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4.4手術(shù)室

手術(shù)室的環(huán)境控制與檢測，按照GB50333中的規(guī)定執(zhí)行。

4.5保育豬舍

保育豬舍的質(zhì)量控制和檢測，按照GB14925中的規(guī)定執(zhí)行。

5保定與麻醉

5.1術(shù)前清洗消毒

待術(shù)母豬稱重后，全身用溫?zé)崆逅疀_洗，噴涂5%新潔爾滅消毒液，暖風(fēng)吹干，再進(jìn)入手術(shù)室。

5.2保定

母豬采用側(cè)臥保定，牢固固定頭及四肢，保定后，將腹部全部涂抹1%碘伏消毒。

5.3麻醉

5.3.1麻醉方法

麻醉方法為全身麻醉結(jié)合局部麻醉。

5.3.2誘導(dǎo)麻醉

手術(shù)前12h禁食，實(shí)時監(jiān)測實(shí)驗(yàn)豬的生理指標(biāo)（體溫、呼吸頻率、心率、脈搏、黏膜顏色和毛細(xì)血

管再充盈時間、血氧飽和度）；

麻醉前需檢查呼吸麻醉設(shè)備（直流呼末二氧化碳探頭需提前預(yù)熱）及監(jiān)護(hù)設(shè)備的功能完整性以及麻

醉機(jī)的氣密性，以保證麻醉順利進(jìn)行；

麻醉前準(zhǔn)備工作做好后，預(yù)吸氧3min～5min（3L/min），肌肉注射阿托品（0.04mg/kg），15min

后耳緣靜脈注射丙泊酚（7mg/kg），緩慢推注，嚴(yán)格監(jiān)測麻醉狀態(tài)，直至四肢肌肉松弛、下頜松弛并

可將舌拉出口腔即刻停止推注。

5.3.3維持麻醉

用開口器或人工打開豬上下頜，迅速進(jìn)行氣管插管，連接呼吸麻醉機(jī)，設(shè)置潮氣量（Vt）10mL/kg，

呼吸頻率15bpm，氧流量1L/min，呼吸比2:1，異氟烷吸入濃度設(shè)置為2%～3%維持麻醉，術(shù)中可根據(jù)豬

臨床體征進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié)。

5.3.4局部麻醉

硬膜外腔麻醉+切口線性阻滯麻醉：用脊髓穿刺針經(jīng)腰薦結(jié)合處進(jìn)入硬膜外腔后，推注利多卡因（0.2

mg/kg）。手術(shù)切口可使用利多卡因（0.2mg/kg）進(jìn)行線性阻滯麻醉。

6剖腹產(chǎn)手術(shù)

6.1術(shù)部選擇

6.1.1腹側(cè)壁斜切口

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沿左側(cè)或右側(cè)髖結(jié)節(jié)下角與臍孔連接線中點(diǎn)（為切口中點(diǎn)）做15cm～20cm的切口。

6.1.2腹中線旁切口

在最后3個乳頭外側(cè)乳腺基部以外3cm～4cm左右處，做20cm左右平行于腹中線切口。

6.2術(shù)部消毒

在手術(shù)準(zhǔn)備區(qū)，剃除術(shù)部20cm～30cm范圍內(nèi)被毛，用清水沖洗，同時使用5%新潔爾滅消毒液清

洗術(shù)部。待實(shí)驗(yàn)豬麻醉后，對術(shù)部距創(chuàng)緣20cm范圍剃毛，并用清水沖洗。用滅菌紗布擦干，使用75%

酒精脫脂。用5%碘伏消毒創(chuàng)術(shù)部，使用75%酒精脫碘，覆蓋創(chuàng)巾并使用無菌自粘外科手術(shù)膜進(jìn)行覆蓋。

6.3剖宮產(chǎn)手術(shù)

6.3.1切開腹腔

切開術(shù)部皮膚，鈍性分離皮下組織，逐層切開肌層直至腹膜，按照外科標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行止血處理，暴露腹

腔。手術(shù)助手使用滅菌紗布對創(chuàng)口進(jìn)行堵塞，防止腸管、網(wǎng)膜等其它組織涌出創(chuàng)口。

6.3.2檢查子宮角

暴露腹腔后，術(shù)者將手伸入腹腔探查含有胎兒的子宮角，將一側(cè)子宮角牽引至切口外的滅菌創(chuàng)布上，

并用浸潤過溫生理鹽水的紗布覆蓋。根據(jù)胎兒數(shù)量及分布位置確定另一側(cè)子宮角的暴露程度，避免過度

牽出引起子宮血管受壓迫，影響胎兒血液供應(yīng)。

6.3.3取出胎兒

子宮角暴露以后，根據(jù)子宮角內(nèi)胎兒數(shù)量及分布位置，若兩側(cè)子宮角中都有胎兒，且能暴露子宮角

基部，則僅在基部做一切口；若兩側(cè)胎兒均較多，不能暴露子宮角基部，宜在兩個子宮角的中段分別做

1個切口。

切口選在子宮大彎，靠近子宮體的背側(cè)血管相對較少處，切開子宮壁5cm～8cm，小心依次取出胎

兒。

6.3.4術(shù)后縫合

逐個取出胎兒，再次探查胎兒數(shù)量和取出胎盤數(shù)量，檢查兩側(cè)子宮角內(nèi)有無殘留胎兒。待清理干凈

后，縫合子宮創(chuàng)口（創(chuàng)口進(jìn)行兩次縫合，第一次連續(xù)縫合，第二次采用內(nèi)翻縫合）。用35℃溫生理鹽

水（內(nèi)加廣譜抗生素）進(jìn)行體外子宮沖洗，沖洗時使用滅菌紗布對創(chuàng)口進(jìn)行堵塞與保護(hù)，避免沖洗液流

入腹腔，沖洗干凈后將子宮還納回腹腔；在腹腔內(nèi)布撒廣譜抗生素，依次按照獸醫(yī)外科學(xué)操作標(biāo)準(zhǔn)縫合

腹膜、各肌肉層及皮膚。

6.4子宮摘除取胎術(shù)

腹腔暴露同6.3.1。將雙側(cè)子宮角及子宮體全部牽引至腹腔外，全部牽出后，在子宮頸處使用2把腸

鉗雙重夾持，進(jìn)行子宮隔斷。隔斷子宮后將輸卵管、子宮頸結(jié)扎，進(jìn)行全子宮摘除術(shù)。將摘除子宮放入

含有0.5-1.0%過氧乙酸的渡槽中消毒10s～20s，30s內(nèi)將子宮傳送至保育裝置內(nèi)。結(jié)扎及包埋縫合，保

留部分子宮斷端，在腹腔內(nèi)布撒廣譜抗生素，依次按照獸醫(yī)外科學(xué)操作標(biāo)準(zhǔn)縫合腹膜、各肌肉層及皮膚。

6.5母豬處置

非存活母豬按照GB/T35823中的規(guī)定實(shí)施安死術(shù)。

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7新生仔豬處置

新生幼崽取出后，交由手術(shù)助手或保育助手結(jié)扎臍帶，0.55%碘伏涂擦臍帶斷端，并用滅菌毛巾迅

速清理口鼻黏液，擦干體表并按摩體表，軀體做屈伸運(yùn)動，必要時進(jìn)行胸肺復(fù)蘇和急救操作。確定生命

體征良好，稱重記錄，置于保育箱內(nèi)哺育。

8母豬護(hù)理

8.1術(shù)中護(hù)理

母豬在手術(shù)過程中維持耳靜脈輸入10%葡萄糖注射液，80mL/h，至手術(shù)結(jié)束。

8.2術(shù)后護(hù)理

8.2.1飼養(yǎng)空間要求