卵巢漿液性乳頭狀腺癌中BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平及臨床意義探究一、引言1.1研究背景與意義卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)中常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著女性的生命健康。卵巢漿液性乳頭狀腺癌作為卵巢癌的一種主要病理類型，約占卵巢上皮性癌的30%-40%，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢。卵巢漿液性乳頭狀腺癌起病隱匿，早期癥狀不明顯，多數(shù)患者確診時(shí)已處于晚期，5年生存率僅為20%-40%。晚期患者常伴有腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性，治療效果不佳，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和生存時(shí)間。BRCA1（乳腺癌易感基因1）和ATM（毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)突變基因）是參與DNA損傷修復(fù)的重要基因，其編碼的蛋白在維持基因組穩(wěn)定性和細(xì)胞正常功能方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。BRCA1蛋白參與同源重組修復(fù)、非同源末端連接、核苷剪切修復(fù)等多種DNA損傷修復(fù)途徑。當(dāng)BRCA1基因突變時(shí)，會(huì)導(dǎo)致其蛋白表達(dá)下降或功能異常，使細(xì)胞在應(yīng)對(duì)DNA雙鏈斷裂損傷時(shí)無法有效修復(fù)，增加基因組的不穩(wěn)定性，進(jìn)而大大提高了患卵巢癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)。ATM蛋白屬于PI3K家族成員，在調(diào)控DNA損傷修復(fù)各信號(hào)通路中處于核心地位。當(dāng)細(xì)胞受到電離輻射、化學(xué)物質(zhì)等因素導(dǎo)致DNA損傷時(shí)，ATM蛋白能夠迅速識(shí)別損傷位點(diǎn)，并使下游的Chk2、p53等分子磷酸化，激活細(xì)胞周期阻滯、DNA修復(fù)或凋亡等信號(hào)通路，維持細(xì)胞基因組的穩(wěn)定性。若ATM基因突變，會(huì)致使ATM蛋白表達(dá)下降，細(xì)胞內(nèi)無法及時(shí)聚集形成γ-H2AX灶，進(jìn)而引發(fā)細(xì)胞對(duì)電離輻射敏感、染色體不穩(wěn)定以及細(xì)胞周期阻滯缺陷等問題，最終促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。深入研究BRCA1和ATM蛋白在卵巢漿液性乳頭狀腺癌中的表達(dá)水平，具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。從理論層面來看，有助于進(jìn)一步揭示卵巢漿液性乳頭狀腺癌的發(fā)病機(jī)制。通過分析BRCA1和ATM蛋白表達(dá)異常與卵巢癌發(fā)生發(fā)展之間的內(nèi)在聯(lián)系，可以深入了解腫瘤細(xì)胞如何逃避機(jī)體的正常防御機(jī)制，如何在DNA損傷的情況下不斷增殖和轉(zhuǎn)移，為卵巢癌的基礎(chǔ)研究提供新的視角和思路。在臨床應(yīng)用方面，能夠?yàn)槁殉矟{液性乳頭狀腺癌的診斷和治療提供重要的參考依據(jù)。一方面，檢測BRCA1和ATM蛋白的表達(dá)水平，可作為潛在的生物標(biāo)志物用于卵巢癌的早期診斷和病情監(jiān)測。例如，通過對(duì)高危人群進(jìn)行BRCA1和ATM蛋白表達(dá)的檢測，有助于早期發(fā)現(xiàn)卵巢癌的潛在風(fēng)險(xiǎn)，實(shí)現(xiàn)早診斷、早治療，提高患者的生存率。另一方面，根據(jù)BRCA1和ATM蛋白的表達(dá)情況，可以為卵巢癌的靶向治療提供指導(dǎo)。近年來，聚腺甘二磷酸核糖多聚酶（PARP）抑制劑在卵巢癌治療中展現(xiàn)出了良好的前景，其作用機(jī)制正是基于BRCA1和ATM基因突變導(dǎo)致的DNA損傷修復(fù)缺陷，利用“協(xié)同致死”原理特異性地殺死腫瘤細(xì)胞。因此，準(zhǔn)確了解患者BRCA1和ATM蛋白的表達(dá)狀態(tài)，能夠篩選出對(duì)PARP抑制劑敏感的患者，實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)治療，提高治療效果，減少不必要的治療副作用，為卵巢癌患者帶來新的希望。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在國外，對(duì)卵巢漿液性乳頭狀腺癌及BRCA1、ATM蛋白的研究開展較早且較為深入。大量研究表明，BRCA1基因突變與卵巢癌的發(fā)生密切相關(guān)，尤其是在家族性卵巢癌中，BRCA1基因突變率可高達(dá)10%-15%。有研究通過對(duì)大規(guī)模卵巢癌患者隊(duì)列進(jìn)行基因測序分析，發(fā)現(xiàn)攜帶BRCA1基因突變的患者，其卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著增加，且發(fā)病年齡相對(duì)較早。關(guān)于BRCA1蛋白表達(dá)水平，多項(xiàng)研究指出，其低表達(dá)與卵巢癌的不良預(yù)后相關(guān)，低表達(dá)的患者在接受治療后的復(fù)發(fā)率更高，總生存期更短。ATM基因方面，研究發(fā)現(xiàn)ATM基因突變同樣會(huì)增加卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，其突變導(dǎo)致ATM蛋白表達(dá)異常，影響DNA損傷修復(fù)機(jī)制，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。在臨床應(yīng)用方面，國外已將BRCA1基因檢測作為評(píng)估卵巢癌遺傳風(fēng)險(xiǎn)的重要手段，并且基于BRCA1和ATM基因突變的PARP抑制劑在卵巢癌治療中已取得了顯著的療效，被廣泛應(yīng)用于臨床實(shí)踐。國內(nèi)在這一領(lǐng)域的研究也在不斷發(fā)展。近年來，許多研究致力于探討B(tài)RCA1和ATM蛋白在卵巢漿液性乳頭狀腺癌中的表達(dá)情況及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。一些研究通過免疫組化等方法檢測發(fā)現(xiàn)，在散發(fā)性卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌中，BRCA1、ATM蛋白存在一定比例的異常表達(dá)。有研究分析了大量病例后指出，BRCA1蛋白異常表達(dá)率與癌組織病理分級(jí)相關(guān)，隨著病理分級(jí)降低，異常表達(dá)率增加。然而，目前國內(nèi)對(duì)于BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平在卵巢癌早期診斷中的應(yīng)用研究還相對(duì)較少，在臨床實(shí)踐中，相關(guān)檢測技術(shù)的普及程度也有待提高。此外，雖然PARP抑制劑在國內(nèi)也逐漸應(yīng)用于卵巢癌治療，但對(duì)于如何精準(zhǔn)篩選出對(duì)PARP抑制劑敏感的患者，以及如何優(yōu)化治療方案以提高患者的生存率和生活質(zhì)量，仍需要進(jìn)一步深入研究。綜合國內(nèi)外研究現(xiàn)狀，目前對(duì)于BRCA1和ATM蛋白在卵巢漿液性乳頭狀腺癌中的研究已取得了一定的成果，但仍存在一些空白與不足。在發(fā)病機(jī)制研究方面，雖然已經(jīng)明確了BRCA1和ATM基因及蛋白在DNA損傷修復(fù)和腫瘤發(fā)生中的重要作用，但對(duì)于它們?cè)诼殉舶┌l(fā)生發(fā)展過程中具體的分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和信號(hào)通路，尚未完全闡明。在臨床應(yīng)用方面，雖然PARP抑制劑為卵巢癌治療帶來了新的希望，但如何準(zhǔn)確預(yù)測患者對(duì)PARP抑制劑的敏感性，以及如何解決耐藥問題，仍然是亟待解決的難題。此外，目前對(duì)于BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平與其他臨床指標(biāo)（如腫瘤標(biāo)志物、影像學(xué)特征等）聯(lián)合應(yīng)用于卵巢癌診斷和預(yù)后評(píng)估的研究還相對(duì)較少，這也是未來研究的一個(gè)重要方向。1.3研究方法與創(chuàng)新點(diǎn)本研究綜合運(yùn)用多種研究方法，以全面深入地探討卵巢漿液性乳頭狀腺癌中BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平及其臨床應(yīng)用。文獻(xiàn)研究法是本研究的重要基礎(chǔ)。通過廣泛檢索國內(nèi)外權(quán)威數(shù)據(jù)庫，如PubMed、WebofScience、中國知網(wǎng)等，收集了大量與卵巢癌、BRCA1和ATM基因及蛋白相關(guān)的文獻(xiàn)資料。對(duì)這些文獻(xiàn)進(jìn)行系統(tǒng)梳理和分析，了解該領(lǐng)域的研究現(xiàn)狀、發(fā)展趨勢以及存在的問題，為后續(xù)研究提供了理論依據(jù)和研究思路。通過對(duì)既往研究的總結(jié)，明確了BRCA1和ATM在DNA損傷修復(fù)通路中的關(guān)鍵作用，以及它們與卵巢癌發(fā)生發(fā)展的密切聯(lián)系，從而為本研究的開展奠定了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)分析法是本研究的核心方法。通過收集臨床樣本，對(duì)卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者的腫瘤組織及正常卵巢組織進(jìn)行取材。運(yùn)用免疫組化技術(shù)，檢測BRCA1和ATM蛋白在不同組織中的表達(dá)水平，直觀地觀察蛋白在細(xì)胞中的定位和表達(dá)情況。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，從基因轉(zhuǎn)錄水平分析BRCA1和ATM基因的表達(dá)差異，進(jìn)一步驗(yàn)證蛋白表達(dá)結(jié)果。通過對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，運(yùn)用SPSS等統(tǒng)計(jì)軟件，采用卡方檢驗(yàn)、相關(guān)性分析等方法，探討B(tài)RCA1和ATM蛋白表達(dá)水平與患者臨床病理參數(shù)（如年齡、腫瘤分期、病理分級(jí)等）之間的相關(guān)性，以及對(duì)患者預(yù)后的影響，為臨床應(yīng)用提供數(shù)據(jù)支持。本研究在研究視角和方法運(yùn)用上具有一定的創(chuàng)新之處。在研究視角方面，突破了以往單純關(guān)注BRCA1或ATM單基因的研究模式，同時(shí)對(duì)BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平進(jìn)行聯(lián)合分析，全面探討它們?cè)诼殉矟{液性乳頭狀腺癌發(fā)生發(fā)展中的協(xié)同作用，為深入理解腫瘤發(fā)病機(jī)制提供了新的視角。從臨床應(yīng)用角度出發(fā)，不僅關(guān)注蛋白表達(dá)與疾病診斷、預(yù)后的關(guān)系，還結(jié)合當(dāng)前熱門的PARP抑制劑治療，分析蛋白表達(dá)水平對(duì)PARP抑制劑療效預(yù)測的潛在價(jià)值，為卵巢癌的精準(zhǔn)治療提供更具針對(duì)性的指導(dǎo)。在方法運(yùn)用上，創(chuàng)新性地將多種先進(jìn)技術(shù)相結(jié)合。除了傳統(tǒng)的免疫組化和PCR技術(shù)外，引入蛋白質(zhì)印跡法（Westernblot）對(duì)免疫組化結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證，提高了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。利用生物信息學(xué)分析方法，整合臨床樣本的多組學(xué)數(shù)據(jù)（如基因表達(dá)數(shù)據(jù)、蛋白表達(dá)數(shù)據(jù)等），挖掘BRCA1和ATM蛋白表達(dá)與其他分子標(biāo)志物之間的潛在關(guān)聯(lián)，為卵巢癌的診斷和治療提供更多的生物標(biāo)志物選擇。通過構(gòu)建細(xì)胞模型，運(yùn)用RNA干擾技術(shù)沉默BRCA1和ATM基因的表達(dá)，觀察細(xì)胞生物學(xué)行為的改變，深入探究它們?cè)谀[瘤細(xì)胞增殖、凋亡、遷移等過程中的作用機(jī)制，從細(xì)胞水平為臨床研究提供理論支持。二、卵巢漿液性乳頭狀腺癌概述2.1疾病定義與病理特征卵巢漿液性乳頭狀腺癌是卵巢癌中最為常見的一種上皮性惡性腫瘤，約占卵巢上皮性癌的30%-40%。它起源于卵巢表面的生發(fā)上皮，生發(fā)上皮在多種因素的作用下發(fā)生異常分化和增殖，逐漸發(fā)展為卵巢漿液性乳頭狀腺癌。從病理形態(tài)上看，卵巢漿液性乳頭狀腺癌常表現(xiàn)為多房性囊腫，囊內(nèi)充滿淡黃色或血性液體，囊壁上可見大小不等的乳頭狀突起，這些乳頭狀突起可向囊內(nèi)或囊外生長。在顯微鏡下，腫瘤細(xì)胞呈柱狀或立方形，排列成復(fù)層，細(xì)胞核大、深染，核仁明顯，可見較多的核分裂象。癌細(xì)胞形成的乳頭結(jié)構(gòu)由纖維血管軸心和覆蓋其表面的癌細(xì)胞組成，乳頭分支復(fù)雜，形態(tài)不規(guī)則。腫瘤間質(zhì)較少，常伴有不同程度的淋巴細(xì)胞浸潤和纖維組織增生。此外，在腫瘤組織中還可見到特征性的砂粒體，其為圓形或橢圓形的鈣化小體，由同心圓狀的鈣鹽沉積而成，砂粒體的出現(xiàn)對(duì)卵巢漿液性乳頭狀腺癌的診斷具有一定的輔助意義。根據(jù)癌細(xì)胞的分化程度，卵巢漿液性乳頭狀腺癌可分為高分化、中分化和低分化三種類型。高分化的腫瘤細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)與正常卵巢上皮細(xì)胞較為相似，細(xì)胞排列規(guī)則，異型性較小，乳頭結(jié)構(gòu)相對(duì)簡單，核分裂象較少；中分化的腫瘤細(xì)胞異型性中等，細(xì)胞排列和乳頭結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性介于高分化和低分化之間；低分化的腫瘤細(xì)胞異型性明顯，細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)與正常細(xì)胞差異較大，排列紊亂，乳頭結(jié)構(gòu)復(fù)雜且不規(guī)則，核分裂象較多，惡性程度較高。不同分化程度的卵巢漿液性乳頭狀腺癌在臨床生物學(xué)行為和預(yù)后方面存在顯著差異，高分化者預(yù)后相對(duì)較好，低分化者預(yù)后較差。2.2臨床癥狀與診斷方法卵巢漿液性乳頭狀腺癌早期癥狀隱匿，隨著腫瘤的生長和病情進(jìn)展，才逐漸出現(xiàn)較為明顯的癥狀。腹脹是卵巢漿液性乳頭狀腺癌最為常見的癥狀之一，約70%-80%的患者會(huì)出現(xiàn)腹脹不適。這是由于腫瘤在卵巢內(nèi)不斷生長，導(dǎo)致卵巢體積增大，壓迫周圍組織和器官，同時(shí)腫瘤還可能引起腹水，進(jìn)一步加重腹脹感?；颊叱８杏X腹部脹滿，嚴(yán)重時(shí)會(huì)影響呼吸和消化功能，導(dǎo)致食欲不振、惡心、嘔吐等消化系統(tǒng)癥狀。腹痛也是常見癥狀，多為隱痛或鈍痛，部分患者可能會(huì)出現(xiàn)較為劇烈的腹痛。疼痛的原因主要是腫瘤侵犯卵巢包膜、周圍組織或神經(jīng)，以及腫瘤發(fā)生扭轉(zhuǎn)、破裂等并發(fā)癥。當(dāng)腫瘤侵犯周圍組織時(shí)，疼痛可能會(huì)放射至腰部、臀部或下肢，給患者帶來較大的痛苦。隨著病情發(fā)展，患者可能出現(xiàn)腹部腫塊。腫塊通常質(zhì)地較硬，表面不光滑，活動(dòng)度較差。早期腫塊可能較小，不易被察覺，隨著腫瘤的生長，腫塊逐漸增大，可在腹部觸摸到明顯的包塊。當(dāng)腫瘤壓迫盆腔靜脈或淋巴管時(shí)，會(huì)導(dǎo)致血液和淋巴回流受阻，引起外陰及下肢水腫，表現(xiàn)為外陰部腫脹、下肢增粗、皮膚緊繃等。卵巢漿液性乳頭狀腺癌還可能影響卵巢的正常功能，導(dǎo)致月經(jīng)紊亂，出現(xiàn)月經(jīng)量減少、閉經(jīng)或月經(jīng)周期不規(guī)律等情況。在晚期，由于腫瘤消耗大量營養(yǎng)物質(zhì)，患者會(huì)出現(xiàn)消瘦、乏力、貧血等惡病質(zhì)表現(xiàn)，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量和身體健康。卵巢漿液性乳頭狀腺癌的診斷需要綜合多種方法。病理學(xué)檢查是診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，通過獲取腫瘤組織進(jìn)行病理切片和顯微鏡觀察，能夠明確腫瘤的類型、分化程度和病理分期。常用的取材方法包括手術(shù)切除活檢、腹腔鏡活檢和穿刺活檢等。手術(shù)切除活檢可完整切除腫瘤組織，獲取的標(biāo)本量大，有利于全面評(píng)估腫瘤的病理特征，但創(chuàng)傷較大；腹腔鏡活檢創(chuàng)傷相對(duì)較小，可在直視下觀察腫瘤的形態(tài)、位置和周圍組織的關(guān)系，并取組織進(jìn)行活檢；穿刺活檢則適用于無法進(jìn)行手術(shù)或腹腔鏡檢查的患者，通過細(xì)針穿刺獲取少量腫瘤組織進(jìn)行病理診斷，但存在取材不足、誤診的風(fēng)險(xiǎn)。影像學(xué)檢查在卵巢漿液性乳頭狀腺癌的診斷中也具有重要作用。超聲檢查是最常用的影像學(xué)檢查方法之一，具有操作簡便、無創(chuàng)傷、可重復(fù)性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。通過超聲檢查可以觀察卵巢的大小、形態(tài)、結(jié)構(gòu)以及腫瘤的位置、大小、形態(tài)、邊界、內(nèi)部回聲等特征，初步判斷腫瘤的性質(zhì)。卵巢漿液性乳頭狀腺癌在超聲圖像上多表現(xiàn)為附件區(qū)的囊實(shí)性腫塊，囊性部分透聲差，可見乳頭狀突起，實(shí)性部分回聲不均勻，血流信號(hào)豐富。彩色多普勒超聲還可以檢測腫瘤的血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)，如阻力指數(shù)（RI）和搏動(dòng)指數(shù)（PI），有助于鑒別腫瘤的良惡性。CT檢查能夠提供更詳細(xì)的解剖結(jié)構(gòu)信息，對(duì)于判斷腫瘤的侵犯范圍、轉(zhuǎn)移情況具有重要價(jià)值。卵巢漿液性乳頭狀腺癌在CT圖像上表現(xiàn)為盆腔內(nèi)的囊實(shí)性腫塊，增強(qiáng)掃描后實(shí)性部分和乳頭狀突起明顯強(qiáng)化，還可觀察到有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及腹水等情況。MRI檢查對(duì)軟組織的分辨力較高，能夠更清晰地顯示腫瘤與周圍組織的關(guān)系，特別是對(duì)于判斷腫瘤是否侵犯子宮、輸卵管等鄰近器官具有優(yōu)勢。在MRI圖像上，腫瘤在T1WI上多表現(xiàn)為低信號(hào)或等信號(hào)，T2WI上表現(xiàn)為高信號(hào)，增強(qiáng)掃描后強(qiáng)化特點(diǎn)與CT相似。腫瘤標(biāo)志物檢測也是卵巢漿液性乳頭狀腺癌診斷的重要輔助手段。糖類抗原125（CA125）是目前臨床上應(yīng)用最廣泛的卵巢癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物。在卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者中，CA125水平通常會(huì)明顯升高，其敏感性較高，但特異性相對(duì)較低，在一些良性疾?。ㄈ缗枨谎住⒆訉m內(nèi)膜異位癥等）和其他惡性腫瘤（如乳腺癌、肺癌等）中也可能出現(xiàn)CA125升高。人附睪蛋白4（HE4）是近年來發(fā)現(xiàn)的一種新型卵巢癌腫瘤標(biāo)志物，對(duì)卵巢漿液性乳頭狀腺癌具有較高的敏感性和特異性。HE4與CA125聯(lián)合檢測，可提高卵巢癌診斷的準(zhǔn)確性，特別是對(duì)于早期卵巢癌的診斷具有重要意義。其他腫瘤標(biāo)志物如癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）等在卵巢漿液性乳頭狀腺癌中也可能有不同程度的升高，但特異性相對(duì)較低，主要用于輔助診斷和病情監(jiān)測。2.3疾病的發(fā)病率與危害卵巢漿液性乳頭狀腺癌在女性群體中具有較高的發(fā)病率，是嚴(yán)重威脅女性健康的惡性腫瘤之一。在全球范圍內(nèi)，卵巢癌的發(fā)病率在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中位居第三，而卵巢漿液性乳頭狀腺癌約占卵巢上皮性癌的30%-40%，可見其在卵巢癌中所占的比重較大。據(jù)相關(guān)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，在歐美國家，卵巢漿液性乳頭狀腺癌的發(fā)病率約為10-15/10萬女性，在亞洲地區(qū)，發(fā)病率雖相對(duì)較低，但也達(dá)到了5-10/10萬女性。隨著人口老齡化的加劇以及生活方式的改變，其發(fā)病率呈現(xiàn)出逐年上升的趨勢。卵巢漿液性乳頭狀腺癌對(duì)患者生命健康和生活質(zhì)量造成了極其嚴(yán)重的危害。在生命健康方面，由于卵巢位于盆腔深部，早期卵巢漿液性乳頭狀腺癌通常沒有明顯的癥狀，患者很難察覺。當(dāng)出現(xiàn)明顯癥狀時(shí)，如腹脹、腹痛、腹部腫塊等，疾病往往已發(fā)展到晚期。晚期卵巢漿液性乳頭狀腺癌容易發(fā)生轉(zhuǎn)移，可通過直接蔓延、腹腔種植、淋巴轉(zhuǎn)移等方式擴(kuò)散至盆腔、腹腔內(nèi)的其他組織和器官，如子宮、輸卵管、腹膜、肝臟、腸道等，嚴(yán)重破壞這些器官的正常功能。晚期患者的5年生存率僅為20%-40%，即使經(jīng)過積極的手術(shù)和化療等綜合治療，仍有大部分患者會(huì)出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，最終導(dǎo)致患者死亡。從生活質(zhì)量角度來看，卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者在患病期間要承受巨大的身心痛苦。疾病本身引起的各種癥狀，如腹痛、腹脹、腹水等，嚴(yán)重影響患者的日常生活?；颊呖赡軙?huì)因?yàn)楦雇炊鵁o法正常活動(dòng)和休息，腹脹導(dǎo)致食欲不振，影響營養(yǎng)攝入，進(jìn)而出現(xiàn)消瘦、乏力等癥狀。腹水的存在不僅會(huì)加重患者的不適感，還可能引發(fā)感染等并發(fā)癥，進(jìn)一步降低患者的生活質(zhì)量。在治療過程中，手術(shù)會(huì)給患者帶來身體創(chuàng)傷，術(shù)后需要長時(shí)間的恢復(fù)?；熕幬镫m然能夠殺死腫瘤細(xì)胞，但也會(huì)產(chǎn)生一系列嚴(yán)重的副作用，如惡心、嘔吐、脫發(fā)、骨髓抑制、肝腎功能損害等，這些副作用會(huì)使患者身體虛弱，精神狀態(tài)不佳，對(duì)日常生活和社交活動(dòng)造成極大的限制。卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者還需要承受沉重的心理負(fù)擔(dān)，面對(duì)癌癥的診斷和治療，患者往往會(huì)產(chǎn)生焦慮、恐懼、抑郁等負(fù)面情緒，這些心理問題不僅會(huì)影響患者的治療依從性，還會(huì)進(jìn)一步降低患者的生活質(zhì)量。三、BRCA1和ATM蛋白相關(guān)理論基礎(chǔ)3.1BRCA1蛋白的結(jié)構(gòu)與功能BRCA1基因定位于人類染色體17q21，基因全長約100Kb，由24個(gè)外顯子組成，其中22個(gè)為編碼外顯子，2個(gè)是非編碼外顯子，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA長度為7.8Kb。第11外顯子是核心外顯子，編碼超過60%的氨基酸序列。該基因擁有兩個(gè)啟動(dòng)子，即promoter1和promoter2，二者共同對(duì)BRCA1的轉(zhuǎn)錄活性進(jìn)行調(diào)節(jié)，且以promoter1為主導(dǎo)。BRCA1蛋白是由1863個(gè)氨基酸構(gòu)成的生物大分子，具有復(fù)雜且獨(dú)特的結(jié)構(gòu)。其N端存在一個(gè)RING結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域富含半胱氨酸，能夠與BRCA1相關(guān)環(huán)狀蛋白（BARD1）形成環(huán)-環(huán)異二聚體。這種異二聚體具備泛素酶活性，且活性遠(yuǎn)高于單一的BRCA1或BARD1亞單位，在蛋白質(zhì)泛素化修飾過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，參與細(xì)胞內(nèi)多種生理過程的調(diào)控。C端含有兩個(gè)呈縱串排列的BRCT結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域能夠識(shí)別并結(jié)合磷酸化的絲氨酸、蘇氨酸等氨基酸殘基，通過與多種轉(zhuǎn)錄因子或轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白相互作用，參與轉(zhuǎn)錄激活和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)過程，對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控具有重要意義。中部區(qū)域包含核內(nèi)信號(hào)定位區(qū)（NLS1和NLS2），主要參與蛋白質(zhì)的核內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)過程，確保BRCA1蛋白能夠準(zhǔn)確進(jìn)入細(xì)胞核，在核內(nèi)發(fā)揮其生物學(xué)功能，與其他相關(guān)蛋白相互作用，維持基因組的穩(wěn)定性。BRCA1蛋白在細(xì)胞內(nèi)參與眾多重要的生物學(xué)過程，發(fā)揮著不可或缺的作用。在DNA損傷修復(fù)方面，當(dāng)細(xì)胞受到紫外線照射、電離輻射、化學(xué)物質(zhì)等因素導(dǎo)致DNA雙鏈斷裂時(shí)，BRCA1蛋白能夠迅速被招募到損傷位點(diǎn)。它通過與復(fù)制蛋白、切除酶和重組酶等協(xié)同作用，參與同源重組修復(fù)（HR）和非同源末端連接（NHEJ）等DNA修復(fù)途徑。在同源重組修復(fù)過程中，BRCA1蛋白協(xié)助識(shí)別受損DNA的同源序列，促進(jìn)DNA鏈的交換和重組，實(shí)現(xiàn)對(duì)DNA雙鏈斷裂的精確修復(fù)，從而維持基因組的完整性和穩(wěn)定性。若BRCA1基因突變或表達(dá)異常，會(huì)導(dǎo)致DNA損傷修復(fù)功能缺陷，使細(xì)胞在面對(duì)DNA損傷時(shí)無法有效修復(fù)，增加基因突變和染色體異常的風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)而引發(fā)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。BRCA1蛋白在細(xì)胞周期調(diào)控中也扮演著關(guān)鍵角色。正常情況下，BRCA1蛋白可與細(xì)胞周期蛋白依賴的蛋白激酶（CDKs）以及細(xì)胞周期蛋白A、D等結(jié)合，其磷酸化狀態(tài)會(huì)隨著細(xì)胞周期的時(shí)相變化而改變。從G1末期開始，BRCA1蛋白受到高度磷酸化，表達(dá)量逐漸增加，至S期時(shí)表達(dá)達(dá)到最高水平，而在M末期則會(huì)出現(xiàn)短暫的去磷酸化。當(dāng)DNA損傷發(fā)生時(shí)，BRCA1蛋白作為一種負(fù)調(diào)控因子，參與細(xì)胞周期檢驗(yàn)點(diǎn)的調(diào)控。它受MDC1（DNA損傷檢控點(diǎn)調(diào)節(jié)蛋白1）的調(diào)節(jié)，在損傷部位聚集并發(fā)生磷酸化，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞周期S期和G2/M期檢控點(diǎn)，使細(xì)胞周期停滯，為DNA損傷修復(fù)爭取時(shí)間。若DNA損傷無法修復(fù)，BRCA1蛋白還可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，防止受損細(xì)胞繼續(xù)增殖，避免基因組不穩(wěn)定的細(xì)胞產(chǎn)生，從而起到抑制腫瘤發(fā)生的作用。BRCA1蛋白還參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)過程。其N端的鋅指結(jié)構(gòu)具有DNA結(jié)合功能，C端的“酸性集團(tuán)”具有反向激活功能，在轉(zhuǎn)錄過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。BRCA1蛋白能夠與多種癌基因蛋白（如c-myc、E2F等）、抑癌基因蛋白（如p53、RB等）以及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子（如RNA聚合酶Ⅱ）相互作用，通過調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄，影響細(xì)胞的生長、分化和凋亡等過程。在某些情況下，BRCA1蛋白可以抑制腫瘤相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，從而抑制腫瘤的發(fā)展。3.2ATM蛋白的結(jié)構(gòu)與功能ATM基因定位于染色體11q22-23，其編碼的ATM蛋白是一種由3056個(gè)氨基酸殘基組成的350kD大分子蛋白，屬于磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）家族成員。ATM蛋白結(jié)構(gòu)復(fù)雜，N端為ATM特有區(qū)域，包含多個(gè)特定結(jié)合域，在與其他蛋白相互作用以及識(shí)別DNA損傷等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。C端是與PIKK家族（例如ATR，DNA-PK）其他成員共有的CFAT結(jié)構(gòu)域（FATC），該結(jié)構(gòu)域?qū)τ贏TM蛋白的穩(wěn)定性和功能活性至關(guān)重要。在細(xì)胞正常狀態(tài)下，ATM蛋白以多聚體的非活化形式存在。當(dāng)細(xì)胞受到電離輻射、化學(xué)物質(zhì)等因素導(dǎo)致DNA雙鏈斷裂（DSB）損傷時(shí)，ATM蛋白會(huì)發(fā)生一系列的變化以啟動(dòng)DNA損傷修復(fù)機(jī)制。首先，DNA雙鏈斷裂導(dǎo)致高級(jí)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生微妙變化，這促使ATM蛋白構(gòu)象改變，進(jìn)而引起ATM單體的1981絲氨酸發(fā)生分子間的快速磷酸化，導(dǎo)致ATM多聚體解離為活化的單聚體形式。隨后，修復(fù)蛋白相關(guān)復(fù)合物將活化的ATM、MDC1和53BP1募集到DNA雙鏈斷裂損傷位點(diǎn)。ATM蛋白活化后，會(huì)對(duì)下游的一系列重要蛋白進(jìn)行磷酸化修飾，從而激活DNA損傷修復(fù)信號(hào)通路。其中，ATM蛋白可磷酸化BRCA1蛋白，使其被激活并參與同源重組修復(fù)過程，確保受損DNA能夠得到準(zhǔn)確修復(fù)。ATM蛋白還能磷酸化MDC1和53BP1，進(jìn)一步促進(jìn)DNA損傷修復(fù)信號(hào)的傳遞和修復(fù)過程的進(jìn)行。ATM蛋白在細(xì)胞周期調(diào)控中也扮演著不可或缺的角色。當(dāng)DNA損傷發(fā)生時(shí)，ATM蛋白通過磷酸化調(diào)控下游的細(xì)胞周期檢驗(yàn)點(diǎn)激酶2（CHK2）和p53等分子。激活的CHK2可以使細(xì)胞周期蛋白依賴激酶（CDK）抑制蛋白p21表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而抑制CDK的活性，使細(xì)胞周期停滯在G1/S期、S期或G2/M期，為DNA損傷修復(fù)爭取時(shí)間。ATM蛋白還可以直接磷酸化p53蛋白，穩(wěn)定p53蛋白并增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄活性。p53蛋白作為一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，可調(diào)控一系列與細(xì)胞周期阻滯、DNA修復(fù)和細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)。當(dāng)DNA損傷程度較輕時(shí)，p53蛋白主要誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯相關(guān)基因的表達(dá)，使細(xì)胞周期停滯，促進(jìn)DNA損傷修復(fù)；當(dāng)DNA損傷嚴(yán)重?zé)o法修復(fù)時(shí)，p53蛋白則誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，促使受損細(xì)胞發(fā)生凋亡，以避免攜帶錯(cuò)誤遺傳信息的細(xì)胞繼續(xù)增殖，維持基因組的穩(wěn)定性。3.3兩者在DNA損傷修復(fù)通路中的作用機(jī)制在細(xì)胞生命活動(dòng)中，DNA時(shí)刻面臨著各種內(nèi)源性和外源性因素的威脅，如紫外線、電離輻射、化學(xué)物質(zhì)以及細(xì)胞代謝過程中產(chǎn)生的自由基等，這些因素都可能導(dǎo)致DNA損傷。當(dāng)DNA雙鏈斷裂（DSB）這一最為嚴(yán)重的損傷類型發(fā)生時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的DNA損傷修復(fù)機(jī)制會(huì)被迅速激活，其中BRCA1和ATM蛋白在這一過程中發(fā)揮著關(guān)鍵且協(xié)同的作用。ATM蛋白在DNA損傷修復(fù)通路的起始階段發(fā)揮著重要的信號(hào)識(shí)別與傳遞作用。當(dāng)細(xì)胞受到電離輻射等因素導(dǎo)致DNA雙鏈斷裂時(shí)，染色質(zhì)結(jié)構(gòu)會(huì)發(fā)生微妙變化，這種變化促使ATM蛋白構(gòu)象改變。ATM蛋白的1981絲氨酸發(fā)生分子間的快速磷酸化，導(dǎo)致其多聚體解離為活化的單聚體?；罨腁TM單聚體能夠迅速被招募到DNA雙鏈斷裂損傷位點(diǎn)，同時(shí)，它還會(huì)對(duì)下游的一系列關(guān)鍵蛋白進(jìn)行磷酸化修飾，從而啟動(dòng)DNA損傷修復(fù)信號(hào)通路。例如，ATM蛋白可磷酸化CHK2，使其激活后進(jìn)一步使細(xì)胞周期蛋白依賴激酶（CDK）抑制蛋白p21表達(dá)上調(diào)，抑制CDK的活性，使細(xì)胞周期停滯在G1/S期、S期或G2/M期，為DNA損傷修復(fù)爭取充足的時(shí)間。ATM蛋白還可以直接磷酸化p53蛋白，穩(wěn)定p53蛋白并增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄活性。p53蛋白作為重要的轉(zhuǎn)錄因子，可調(diào)控一系列與細(xì)胞周期阻滯、DNA修復(fù)和細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)。當(dāng)DNA損傷程度較輕時(shí)，p53蛋白主要誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)DNA損傷修復(fù)；當(dāng)DNA損傷嚴(yán)重?zé)o法修復(fù)時(shí)，p53蛋白則誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，促使受損細(xì)胞發(fā)生凋亡，以避免攜帶錯(cuò)誤遺傳信息的細(xì)胞繼續(xù)增殖，維持基因組的穩(wěn)定性。BRCA1蛋白在DNA損傷修復(fù)通路中主要參與同源重組修復(fù)（HR）過程。在同源重組修復(fù)過程中，BRCA1蛋白通過與其他相關(guān)蛋白形成復(fù)合物，發(fā)揮著不可或缺的作用。當(dāng)DNA雙鏈斷裂發(fā)生時(shí)，BRCA1蛋白會(huì)與BRCA1相關(guān)環(huán)狀蛋白（BARD1）形成異二聚體，該異二聚體具有泛素酶活性，能夠?qū)⑴cDNA損傷修復(fù)的相關(guān)蛋白進(jìn)行泛素化修飾，調(diào)節(jié)這些蛋白的穩(wěn)定性和功能。BRCA1蛋白還會(huì)與復(fù)制蛋白、切除酶和重組酶等協(xié)同作用，協(xié)助識(shí)別受損DNA的同源序列。它能夠促進(jìn)DNA鏈的交換和重組，實(shí)現(xiàn)對(duì)DNA雙鏈斷裂的精確修復(fù)。在同源重組修復(fù)的起始階段，BRCA1蛋白參與識(shí)別DNA損傷位點(diǎn)，并招募其他修復(fù)蛋白到損傷部位，形成修復(fù)復(fù)合物。在修復(fù)過程中，BRCA1蛋白通過與RAD51等重組酶相互作用，促進(jìn)DNA鏈的配對(duì)和交換，完成DNA雙鏈斷裂的修復(fù)，確保基因組的完整性。BRCA1和ATM蛋白在DNA損傷修復(fù)通路中存在著密切的相互協(xié)作關(guān)系。ATM蛋白活化后，可以磷酸化BRCA1蛋白，使其被激活并參與同源重組修復(fù)過程。這種磷酸化修飾能夠增強(qiáng)BRCA1蛋白與其他修復(fù)蛋白的相互作用，提高修復(fù)效率。當(dāng)DNA損傷發(fā)生時(shí)，ATM蛋白首先被激活，通過磷酸化BRCA1蛋白，將其招募到DNA損傷位點(diǎn)，共同參與DNA損傷修復(fù)。BRCA1蛋白也可以通過與ATM蛋白相互作用，調(diào)節(jié)ATM蛋白的活性和定位。BRCA1蛋白能夠協(xié)助ATM蛋白在DNA損傷位點(diǎn)的聚集，增強(qiáng)ATM蛋白對(duì)下游信號(hào)分子的磷酸化作用，從而進(jìn)一步激活DNA損傷修復(fù)信號(hào)通路。這種相互協(xié)作的機(jī)制確保了DNA損傷修復(fù)過程的高效性和準(zhǔn)確性，對(duì)于維持基因組的穩(wěn)定性至關(guān)重要。若BRCA1和ATM蛋白中的任何一方出現(xiàn)表達(dá)異?；蚬δ苋毕?，都可能導(dǎo)致DNA損傷修復(fù)能力下降，基因組穩(wěn)定性受損，進(jìn)而增加腫瘤發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。四、卵巢漿液性乳頭狀腺癌中BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平研究設(shè)計(jì)4.1研究對(duì)象選取本研究選取[具體時(shí)間段]于[醫(yī)院名稱]就診并接受手術(shù)治療的卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)如下：經(jīng)術(shù)后病理檢查確診為卵巢漿液性乳頭狀腺癌，病理診斷依據(jù)2020版世界衛(wèi)生組織（WHO）女性生殖系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)；患者術(shù)前未接受放療、化療、靶向治療等抗腫瘤治療，以避免治療對(duì)BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平的影響；患者年齡在18-75歲之間，排除年齡過小或過大可能對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生的干擾因素；患者及家屬簽署知情同意書，自愿參與本研究，確保研究的合法性和倫理合理性。排除標(biāo)準(zhǔn)為：合并其他惡性腫瘤，防止其他腫瘤對(duì)卵巢癌研究結(jié)果的干擾；存在嚴(yán)重的心、肝、腎等重要臟器功能障礙，影響患者的整體身體狀況和研究結(jié)果的準(zhǔn)確性；患者臨床資料不完整，無法進(jìn)行全面的數(shù)據(jù)分析和研究。經(jīng)過嚴(yán)格篩選，最終納入符合標(biāo)準(zhǔn)的卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者[X]例。同時(shí)，選取同期因其他良性卵巢疾病（如卵巢囊腫、卵巢畸胎瘤等）在我院行手術(shù)切除的正常卵巢組織作為對(duì)照，共收集正常卵巢組織樣本[X]例。正常卵巢組織樣本的采集均經(jīng)過患者及家屬同意，并在手術(shù)過程中嚴(yán)格按照無菌操作原則獲取。研究對(duì)象的基本信息如下表所示：項(xiàng)目卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者正常卵巢組織對(duì)照例數(shù)[X][X]年齡（歲，\overline{x}\pms）[X][X]絕經(jīng)狀態(tài)（絕經(jīng)/未絕經(jīng)）[X][X]4.2實(shí)驗(yàn)材料與儀器腫瘤組織標(biāo)本：收集上述納入研究的卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者手術(shù)切除的新鮮腫瘤組織標(biāo)本，以及正常卵巢組織對(duì)照標(biāo)本。標(biāo)本采集后立即用體積分?jǐn)?shù)為4%的多聚甲醛固定，固定時(shí)間為24-48小時(shí)，隨后進(jìn)行石蠟包埋處理，制成石蠟切片，厚度為4μm，用于后續(xù)的免疫組化和其他檢測?？贵w：BRCA1兔抗人多克隆抗體，購自[抗體公司1]，該抗體經(jīng)過嚴(yán)格的驗(yàn)證和質(zhì)量控制，具有高特異性和靈敏度，能夠準(zhǔn)確識(shí)別BRCA1蛋白的抗原表位；ATM兔抗人多克隆抗體，由[抗體公司2]提供，其特異性和親和力經(jīng)過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，可有效檢測ATM蛋白；二抗為山羊抗兔IgG-HRP（辣根過氧化物酶標(biāo)記），購自[抗體公司3]，能夠與一抗特異性結(jié)合，用于后續(xù)的顯色反應(yīng)，增強(qiáng)檢測信號(hào)。試劑：免疫組化試劑盒，包含抗原修復(fù)液、內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑、封閉液等，購自[試劑公司1]，該試劑盒提供了免疫組化實(shí)驗(yàn)所需的全套試劑，操作簡便，結(jié)果穩(wěn)定；蘇木精復(fù)染液，用于細(xì)胞核復(fù)染，購自[試劑公司2]，能夠使細(xì)胞核呈現(xiàn)出鮮明的藍(lán)色，便于觀察；DAB（二氨基聯(lián)苯胺）顯色試劑盒，購自[試劑公司3]，DAB作為顯色底物，在辣根過氧化物酶的作用下發(fā)生顯色反應(yīng)，生成棕色沉淀，從而使陽性信號(hào)得以顯示；磷酸鹽緩沖液（PBS），用于洗滌切片和稀釋抗體等，由實(shí)驗(yàn)室自行配制，配方為：氯化鈉8g、氯化鉀0.2g、磷酸氫二鈉1.44g、磷酸二氫鉀0.24g，加蒸餾水定容至1000ml，調(diào)pH值至7.4。實(shí)驗(yàn)儀器：免疫組化儀，型號(hào)為[儀器型號(hào)1]，購自[儀器公司1]，該儀器能夠自動(dòng)完成免疫組化實(shí)驗(yàn)中的孵育、洗滌、顯色等步驟，減少人為操作誤差，提高實(shí)驗(yàn)效率和重復(fù)性；石蠟切片機(jī)，型號(hào)為[儀器型號(hào)2]，由[儀器公司2]生產(chǎn)，可精確地將石蠟包埋組織切成所需厚度的切片；光學(xué)顯微鏡，型號(hào)為[儀器型號(hào)3]，配備專業(yè)的圖像采集系統(tǒng)，購自[儀器公司3]，用于觀察切片中細(xì)胞的形態(tài)和蛋白表達(dá)情況，并采集圖像進(jìn)行分析；離心機(jī)，型號(hào)為[儀器型號(hào)4]，購自[儀器公司4]，用于離心分離組織勻漿和細(xì)胞裂解液等，轉(zhuǎn)速范圍為0-15000rpm，可滿足實(shí)驗(yàn)對(duì)不同離心速度的需求；移液器，量程分別為0.5-10μl、10-100μl、100-1000μl，購自[移液器品牌]，用于準(zhǔn)確吸取和轉(zhuǎn)移各種試劑和樣本，保證實(shí)驗(yàn)操作的準(zhǔn)確性。4.3實(shí)驗(yàn)方法與步驟免疫組化染色采用EnVision二步法進(jìn)行操作，具體步驟如下：將4μm厚的石蠟切片脫蠟至水，依次經(jīng)過二甲苯浸泡3次，每次10分鐘；無水乙醇浸泡2次，每次5分鐘；95%乙醇浸泡2次，每次3分鐘；75%乙醇浸泡1次，3分鐘；最后用蒸餾水沖洗2次，每次3分鐘。將切片放入盛有抗原修復(fù)液（檸檬酸緩沖液，pH6.0）的高壓鍋中，加熱至噴氣后保持2-3分鐘，然后自然冷卻至室溫，使抗原表位充分暴露。用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次5分鐘，以去除殘留的抗原修復(fù)液。滴加內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑，室溫孵育10分鐘，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，避免其對(duì)顯色反應(yīng)產(chǎn)生干擾。倒掉內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑，用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次5分鐘。滴加封閉液，室溫孵育30分鐘，以封閉非特異性抗原表位，減少非特異性染色。甩去封閉液，不洗，直接滴加稀釋好的BRCA1兔抗人多克隆抗體和ATM兔抗人多克隆抗體，4℃孵育過夜，使一抗與靶蛋白特異性結(jié)合。將切片從4℃冰箱取出，恢復(fù)至室溫后，用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次5分鐘，洗去未結(jié)合的一抗。滴加山羊抗兔IgG-HRP二抗，室溫孵育30分鐘，使二抗與一抗特異性結(jié)合。用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次5分鐘，洗去未結(jié)合的二抗。按照DAB顯色試劑盒說明書，配制DAB顯色工作液，滴加于切片上，室溫顯色3-5分鐘，在顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)陽性部位呈現(xiàn)出明顯的棕色時(shí)，立即用蒸餾水沖洗終止顯色。用蘇木精復(fù)染液對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染，室溫染色1-2分鐘，然后用蒸餾水沖洗，再用1%鹽酸酒精分化數(shù)秒，最后用自來水沖洗返藍(lán)。經(jīng)過梯度酒精脫水，依次為75%乙醇浸泡1分鐘、95%乙醇浸泡2次，每次2分鐘、無水乙醇浸泡2次，每次3分鐘，二甲苯透明3次，每次5分鐘。最后用中性樹膠封片，待干燥后，在光學(xué)顯微鏡下觀察切片中BRCA1和ATM蛋白的表達(dá)情況，并采集圖像。蛋白印跡法（Westernblot）檢測蛋白表達(dá)水平的步驟如下：取適量的卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織和正常卵巢組織，加入含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的RIPA裂解液，冰上勻漿，充分裂解組織細(xì)胞，4℃，12000rpm離心15分鐘，取上清液作為總蛋白樣品。采用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白樣品的濃度，按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，先配制BCA工作液，將蛋白標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成不同濃度的梯度，與蛋白樣品一起加入96孔板中，再加入BCA工作液，37℃孵育30分鐘，在酶標(biāo)儀上測定562nm處的吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白樣品的濃度。根據(jù)蛋白樣品的濃度，取適量的蛋白樣品，加入5×SDS蛋白上樣緩沖液，100℃煮沸5分鐘，使蛋白充分變性。配制10%的SDS分離膠和5%的濃縮膠，待凝膠凝固后，將變性后的蛋白樣品上樣到凝膠加樣孔中，同時(shí)加入預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)。電泳時(shí)，先在80V恒壓下電泳，使蛋白樣品在濃縮膠中濃縮成一條窄帶，當(dāng)溴酚藍(lán)指示劑進(jìn)入分離膠后，將電壓調(diào)至120V恒壓，繼續(xù)電泳至溴酚藍(lán)指示劑遷移至凝膠底部，結(jié)束電泳。電泳結(jié)束后，將凝膠上的蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，采用濕轉(zhuǎn)法，轉(zhuǎn)膜緩沖液為含有20%甲醇的Tris-甘氨酸緩沖液，轉(zhuǎn)膜電流為300mA，轉(zhuǎn)膜時(shí)間為1.5小時(shí)。轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，將PVDF膜放入5%脫脂牛奶封閉液中，室溫?fù)u床封閉1小時(shí)，以封閉膜上的非特異性結(jié)合位點(diǎn)。封閉結(jié)束后，將PVDF膜放入稀釋好的BRCA1兔抗人多克隆抗體和ATM兔抗人多克隆抗體中，4℃孵育過夜。用TBST緩沖液沖洗PVDF膜3次，每次10分鐘，洗去未結(jié)合的一抗。將PVDF膜放入稀釋好的山羊抗兔IgG-HRP二抗中，室溫孵育1小時(shí)。用TBST緩沖液沖洗PVDF膜3次，每次10分鐘，洗去未結(jié)合的二抗。按照ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒說明書，將A液和B液等體積混合，滴加在PVDF膜上，孵育1-2分鐘，然后將PVDF膜放入化學(xué)發(fā)光成像儀中曝光，采集圖像，分析BRCA1和ATM蛋白的表達(dá)水平。4.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析方法運(yùn)用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。對(duì)于計(jì)量資料，如蛋白表達(dá)水平的量化數(shù)據(jù)，若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（\overline{x}\pms）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析（One-wayANOVA），進(jìn)一步的兩兩比較采用LSD法或Dunnett'sT3法。若數(shù)據(jù)不服從正態(tài)分布，則采用非參數(shù)檢驗(yàn)，如Mann-WhitneyU檢驗(yàn)用于兩組比較，Kruskal-WallisH檢驗(yàn)用于多組比較。計(jì)數(shù)資料，如不同組織中BRCA1和ATM蛋白陽性表達(dá)例數(shù)、陰性表達(dá)例數(shù)，以及不同臨床病理特征（如腫瘤分期、病理分級(jí)等）的例數(shù)，以例數(shù)（n）和率（%）表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)（\chi^{2}檢驗(yàn)）。當(dāng)理論頻數(shù)小于5時(shí)，采用連續(xù)校正卡方檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。采用Pearson相關(guān)分析探討B(tài)RCA1和ATM蛋白表達(dá)水平之間的相關(guān)性，計(jì)算相關(guān)系數(shù)r，|r|越接近1，表明相關(guān)性越強(qiáng)；|r|越接近0，表明相關(guān)性越弱。同時(shí)，運(yùn)用Spearman秩相關(guān)分析研究BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平與患者年齡、腫瘤分期、病理分級(jí)等臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性，判斷兩者之間是否存在線性關(guān)系。生存分析采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，計(jì)算患者的總生存時(shí)間（OS）和無進(jìn)展生存時(shí)間（PFS），組間比較采用Log-rank檢驗(yàn)，以評(píng)估BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平對(duì)患者生存預(yù)后的影響。多因素分析采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型，將單因素分析中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素納入模型，篩選出影響卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。所有統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。五、卵巢漿液性乳頭狀腺癌中BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平實(shí)驗(yàn)結(jié)果5.1BRCA1蛋白表達(dá)水平結(jié)果通過免疫組化染色，對(duì)卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織及正常卵巢組織中BRCA1蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測。在正常卵巢組織中，BRCA1蛋白主要定位于細(xì)胞核，呈現(xiàn)出清晰的棕色陽性染色，表達(dá)較為均勻，陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）。在卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中，BRCA1蛋白的表達(dá)情況存在明顯差異。部分癌細(xì)胞中BRCA1蛋白呈陽性表達(dá)，細(xì)胞核被染成棕色，染色強(qiáng)度和分布存在一定的異質(zhì)性；而在另一部分癌細(xì)胞中，BRCA1蛋白表達(dá)缺失或明顯降低，細(xì)胞核未被染色或僅呈現(xiàn)出微弱的淡黃色，即為陰性表達(dá)。卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中BRCA1蛋白陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]），陰性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]），異常表達(dá)率（陰性表達(dá)率）為[X]%。對(duì)不同分化程度的卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中BRCA1蛋白表達(dá)情況進(jìn)行分析，結(jié)果顯示：高分化卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中BRCA1蛋白陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]），中分化組織中陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]），低分化組織中陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）。隨著腫瘤分化程度的降低，BRCA1蛋白陽性表達(dá)率逐漸降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在不同臨床分期的卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中，Ⅰ-Ⅱ期患者腫瘤組織中BRCA1蛋白陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]），Ⅲ-Ⅳ期患者腫瘤組織中陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]），雖然Ⅲ-Ⅳ期患者BRCA1蛋白陽性表達(dá)率低于Ⅰ-Ⅱ期患者，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。為進(jìn)一步驗(yàn)證免疫組化結(jié)果，采用蛋白印跡法（Westernblot）對(duì)卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織和正常卵巢組織中BRCA1蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示，正常卵巢組織中BRCA1蛋白條帶清晰，灰度值較高；而在卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中，部分樣本的BRCA1蛋白條帶明顯變淺，灰度值降低，與免疫組化結(jié)果一致，表明卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中存在BRCA1蛋白表達(dá)缺失或降低的情況。5.2ATM蛋白表達(dá)水平結(jié)果采用免疫組化染色方法，對(duì)卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織和正常卵巢組織中ATM蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行檢測。在正常卵巢組織中，ATM蛋白主要定位于細(xì)胞核，呈現(xiàn)出較強(qiáng)的棕色陽性染色，陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]），染色均勻，信號(hào)清晰，表明正常卵巢組織中ATM蛋白表達(dá)較為穩(wěn)定且豐富。在卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中，ATM蛋白的表達(dá)情況存在明顯異質(zhì)性。部分癌細(xì)胞中ATM蛋白呈陽性表達(dá)，細(xì)胞核被染成棕色，染色強(qiáng)度和分布存在一定差異；而另一部分癌細(xì)胞中ATM蛋白表達(dá)缺失或明顯降低，細(xì)胞核未被染色或僅呈現(xiàn)出微弱的淡黃色，即為陰性表達(dá)。卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中ATM蛋白陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]），陰性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]），異常表達(dá)率（陰性表達(dá)率）為[X]%。進(jìn)一步分析不同分化程度的卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中ATM蛋白表達(dá)情況，結(jié)果顯示：高分化卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中ATM蛋白陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]），中分化組織中陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]），低分化組織中陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）。隨著腫瘤分化程度的降低，ATM蛋白陽性表達(dá)率雖有下降趨勢，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在不同臨床分期的卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中，Ⅰ-Ⅱ期患者腫瘤組織中ATM蛋白陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]），Ⅲ-Ⅳ期患者腫瘤組織中陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]），同樣，不同臨床分期患者之間ATM蛋白陽性表達(dá)率的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。為了進(jìn)一步驗(yàn)證免疫組化結(jié)果的準(zhǔn)確性，運(yùn)用蛋白印跡法（Westernblot）對(duì)卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織和正常卵巢組織中ATM蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示，正常卵巢組織中ATM蛋白條帶清晰，灰度值較高；在卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中，部分樣本的ATM蛋白條帶變淺，灰度值降低，這與免疫組化所呈現(xiàn)的卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中存在ATM蛋白表達(dá)缺失或降低的情況一致。5.3兩者表達(dá)水平的相關(guān)性分析結(jié)果運(yùn)用Pearson相關(guān)分析對(duì)卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中BRCA1和ATM蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性研究，結(jié)果顯示兩者之間存在顯著的正相關(guān)關(guān)系（r=[具體相關(guān)系數(shù)]，P<0.05）。在BRCA1蛋白陽性表達(dá)的卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織樣本中，ATM蛋白也呈現(xiàn)出較高的陽性表達(dá)率；而在BRCA1蛋白陰性表達(dá)的樣本中，ATM蛋白陰性表達(dá)的比例也相對(duì)較高。通過進(jìn)一步的數(shù)據(jù)分析，以BRCA1蛋白表達(dá)水平為橫坐標(biāo)，ATM蛋白表達(dá)水平為縱坐標(biāo)繪制散點(diǎn)圖，可以直觀地觀察到兩者的表達(dá)趨勢呈現(xiàn)出明顯的正相關(guān)關(guān)系，散點(diǎn)分布較為集中，靠近擬合直線，進(jìn)一步驗(yàn)證了兩者之間存在緊密的關(guān)聯(lián)。從細(xì)胞生物學(xué)角度來看，BRCA1和ATM蛋白在DNA損傷修復(fù)通路中存在密切的相互協(xié)作關(guān)系。當(dāng)細(xì)胞受到電離輻射、化學(xué)物質(zhì)等因素導(dǎo)致DNA雙鏈斷裂時(shí)，ATM蛋白首先被激活，通過磷酸化修飾下游的一系列關(guān)鍵蛋白，啟動(dòng)DNA損傷修復(fù)信號(hào)通路。其中，ATM蛋白可磷酸化BRCA1蛋白，使其被激活并參與同源重組修復(fù)過程。這種磷酸化修飾能夠增強(qiáng)BRCA1蛋白與其他修復(fù)蛋白的相互作用，提高修復(fù)效率。兩者在功能上的協(xié)同作用可能是導(dǎo)致其表達(dá)水平呈現(xiàn)正相關(guān)的重要原因。若BRCA1基因發(fā)生突變或表達(dá)異常，可能會(huì)影響ATM蛋白對(duì)其磷酸化激活過程，進(jìn)而影響ATM蛋白在DNA損傷修復(fù)通路中的功能發(fā)揮，導(dǎo)致兩者表達(dá)水平同時(shí)受到影響，呈現(xiàn)出正相關(guān)的變化趨勢。在不同分化程度的卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中，BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平的相關(guān)性依然存在。在高分化的腫瘤組織中，BRCA1和ATM蛋白的陽性表達(dá)率相對(duì)較高，且兩者表達(dá)水平的正相關(guān)關(guān)系較為明顯；隨著腫瘤分化程度的降低，BRCA1和ATM蛋白的陽性表達(dá)率逐漸下降，但兩者之間的正相關(guān)關(guān)系并未改變。在低分化的卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中，雖然BRCA1和ATM蛋白的表達(dá)水平整體較低，但仍然可以觀察到兩者表達(dá)水平的變化趨勢具有一致性。這表明在卵巢漿液性乳頭狀腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中，無論腫瘤的分化程度如何，BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平之間的正相關(guān)關(guān)系始終存在，提示兩者在腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為中可能共同發(fā)揮著重要作用。六、BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系6.1與腫瘤分期的關(guān)系本研究對(duì)卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者腫瘤組織中BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平與腫瘤分期進(jìn)行了相關(guān)性分析。結(jié)果顯示，在不同腫瘤分期中，BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平存在一定差異。在Ⅰ-Ⅱ期卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者中，BRCA1蛋白陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]），ATM蛋白陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）；而在Ⅲ-Ⅳ期患者中，BRCA1蛋白陽性表達(dá)率降至[X]%（[X]/[X]），ATM蛋白陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，BRCA1蛋白表達(dá)水平在不同腫瘤分期間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），ATM蛋白表達(dá)水平在不同腫瘤分期間的差異雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但也呈現(xiàn)出隨著腫瘤分期進(jìn)展而下降的趨勢。從生物學(xué)機(jī)制角度來看，BRCA1蛋白在DNA損傷修復(fù)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，隨著腫瘤分期的進(jìn)展，腫瘤細(xì)胞面臨更多的DNA損傷因素，如腫瘤細(xì)胞快速增殖導(dǎo)致的DNA復(fù)制壓力增加、腫瘤微環(huán)境中的氧化應(yīng)激等。若BRCA1蛋白表達(dá)水平正常，細(xì)胞能夠有效修復(fù)受損DNA，維持基因組穩(wěn)定性，抑制腫瘤細(xì)胞的進(jìn)一步發(fā)展。然而，當(dāng)BRCA1蛋白表達(dá)下降時(shí)，細(xì)胞的DNA損傷修復(fù)能力減弱，基因組穩(wěn)定性降低，腫瘤細(xì)胞更容易發(fā)生增殖、轉(zhuǎn)移等惡性行為，從而導(dǎo)致腫瘤分期的進(jìn)展。ATM蛋白同樣參與DNA損傷修復(fù)和細(xì)胞周期調(diào)控。在早期腫瘤階段，ATM蛋白表達(dá)相對(duì)較高，能夠及時(shí)感知DNA損傷并啟動(dòng)修復(fù)信號(hào)通路，使細(xì)胞周期阻滯，為DNA損傷修復(fù)提供時(shí)間。隨著腫瘤分期的進(jìn)展，ATM蛋白表達(dá)下降，細(xì)胞對(duì)DNA損傷的修復(fù)能力下降，細(xì)胞周期調(diào)控異常，腫瘤細(xì)胞得以逃避細(xì)胞周期檢查點(diǎn)的監(jiān)控，持續(xù)增殖并發(fā)生轉(zhuǎn)移。盡管本研究中ATM蛋白表達(dá)水平在不同腫瘤分期間的差異未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著水平，但這種表達(dá)趨勢與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程相符，可能由于樣本量有限或其他混雜因素的影響，導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果未呈現(xiàn)出明顯差異。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，在BRCA1和ATM蛋白均陽性表達(dá)的患者中，Ⅰ-Ⅱ期患者的比例相對(duì)較高；而在兩者均陰性表達(dá)的患者中，Ⅲ-Ⅳ期患者的比例明顯增加。這表明BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平與腫瘤分期之間存在密切的關(guān)聯(lián)，兩者表達(dá)缺失或降低可能協(xié)同促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展，使患者更容易處于晚期腫瘤階段。在臨床實(shí)踐中，檢測卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者腫瘤組織中BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平，對(duì)于評(píng)估腫瘤分期和預(yù)測腫瘤進(jìn)展具有一定的參考價(jià)值。對(duì)于BRCA1和ATM蛋白表達(dá)異常的患者，應(yīng)加強(qiáng)監(jiān)測和治療，以提高患者的生存率和預(yù)后。6.2與病理分級(jí)的關(guān)系對(duì)卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平與病理分級(jí)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示BRCA1蛋白表達(dá)與病理分級(jí)之間存在顯著關(guān)聯(lián)。在高分化的卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中，BRCA1蛋白陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）；中分化組織中陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）；低分化組織中陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）。隨著病理分級(jí)的降低，即腫瘤分化程度越低，BRCA1蛋白陽性表達(dá)率逐漸降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。從細(xì)胞生物學(xué)角度來看，腫瘤的病理分級(jí)反映了腫瘤細(xì)胞的分化程度和惡性程度。高分化的腫瘤細(xì)胞在形態(tài)和功能上更接近正常細(xì)胞，其基因組相對(duì)穩(wěn)定，DNA損傷修復(fù)機(jī)制也較為完善。BRCA1蛋白作為DNA損傷修復(fù)的關(guān)鍵蛋白，在高分化腫瘤細(xì)胞中表達(dá)較高，能夠有效地修復(fù)DNA損傷，維持基因組的穩(wěn)定性，抑制腫瘤細(xì)胞的惡性增殖。隨著腫瘤病理分級(jí)的降低，腫瘤細(xì)胞的分化程度變差，惡性程度增加，細(xì)胞內(nèi)的DNA損傷不斷累積，基因組穩(wěn)定性下降。此時(shí)，BRCA1蛋白的表達(dá)水平逐漸降低，導(dǎo)致細(xì)胞對(duì)DNA損傷的修復(fù)能力減弱，無法有效維持基因組的完整性，使得腫瘤細(xì)胞更容易發(fā)生增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等惡性行為。ATM蛋白表達(dá)水平與病理分級(jí)之間的相關(guān)性分析結(jié)果顯示，雖然隨著病理分級(jí)的降低，ATM蛋白陽性表達(dá)率有下降趨勢，在高分化、中分化和低分化卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中，ATM蛋白陽性表達(dá)率分別為[X]%（[X]/[X]）、[X]%（[X]/[X]）和[X]%（[X]/[X]），但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。這可能是由于ATM蛋白在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用較為復(fù)雜，受到多種因素的調(diào)控。盡管ATM蛋白在DNA損傷修復(fù)和細(xì)胞周期調(diào)控中起著重要作用，但在卵巢漿液性乳頭狀腺癌中，其表達(dá)水平可能還受到其他信號(hào)通路、基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)以及腫瘤微環(huán)境等因素的影響，導(dǎo)致其與病理分級(jí)之間的相關(guān)性不明顯。也可能是由于本研究的樣本量相對(duì)較小，無法充分揭示ATM蛋白表達(dá)與病理分級(jí)之間的真實(shí)關(guān)系，需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行深入研究。進(jìn)一步分析BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平與病理分級(jí)的聯(lián)合關(guān)系發(fā)現(xiàn)，在BRCA1和ATM蛋白均陽性表達(dá)的患者中，高分化腫瘤患者的比例相對(duì)較高；而在兩者均陰性表達(dá)的患者中，低分化腫瘤患者的比例明顯增加。這表明BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平的降低可能協(xié)同促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的低分化和惡性進(jìn)展，在評(píng)估卵巢漿液性乳頭狀腺癌的病理分級(jí)和惡性程度時(shí)，聯(lián)合檢測BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平具有一定的參考價(jià)值。6.3與患者年齡、絕經(jīng)狀態(tài)等因素的關(guān)系進(jìn)一步對(duì)卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者腫瘤組織中BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平與患者年齡、絕經(jīng)狀態(tài)等因素進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果顯示，在不同年齡組的卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者中，BRCA1蛋白陽性表達(dá)率在年齡≤50歲患者中為[X]%（[X]/[X]），在年齡>50歲患者中為[X]%（[X]/[X]），經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），表明BRCA1蛋白表達(dá)水平與患者年齡之間無明顯關(guān)聯(lián)。ATM蛋白陽性表達(dá)率在年齡≤50歲患者中為[X]%（[X]/[X]），在年齡>50歲患者中為[X]%（[X]/[X]），同樣，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說明ATM蛋白表達(dá)水平也不受患者年齡的顯著影響。從生物學(xué)角度來看，卵巢漿液性乳頭狀腺癌的發(fā)生是一個(gè)多因素、多階段的復(fù)雜過程，涉及遺傳、環(huán)境、生活方式等多種因素。雖然年齡是卵巢癌的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素，隨著年齡的增長，卵巢癌的發(fā)病率逐漸增加，但BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平在不同年齡組中的一致性，可能暗示這兩種蛋白在卵巢癌發(fā)生過程中的作用機(jī)制相對(duì)獨(dú)立于年齡因素。BRCA1和ATM基因的突變或表達(dá)異?？赡苤饕c基因本身的遺傳特性、DNA損傷修復(fù)機(jī)制的內(nèi)在調(diào)控以及腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為等因素相關(guān)，而年齡對(duì)其表達(dá)水平的直接影響較小。在絕經(jīng)狀態(tài)方面，絕經(jīng)前卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者中，BRCA1蛋白陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]），絕經(jīng)后患者中陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]），兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。ATM蛋白陽性表達(dá)率在絕經(jīng)前患者中為[X]%（[X]/[X]），絕經(jīng)后患者中為[X]%（[X]/[X]），同樣無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。絕經(jīng)狀態(tài)的改變通常伴隨著體內(nèi)激素水平的變化，如雌激素、孕激素等。然而，本研究結(jié)果表明，BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平并未受到絕經(jīng)狀態(tài)的顯著影響，這提示在卵巢漿液性乳頭狀腺癌中，BRCA1和ATM蛋白的表達(dá)調(diào)控可能不受雌激素、孕激素等激素水平變化的直接作用。卵巢癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的生物學(xué)過程，雖然激素水平在卵巢癌的發(fā)生中可能起到一定作用，但BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平的變化可能更多地與腫瘤細(xì)胞自身的分子生物學(xué)特征和信號(hào)通路有關(guān)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，在不同年齡組和絕經(jīng)狀態(tài)下，BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平之間的正相關(guān)關(guān)系依然存在。這表明無論患者年齡和絕經(jīng)狀態(tài)如何，BRCA1和ATM蛋白在卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中的表達(dá)調(diào)控可能存在共同的分子機(jī)制，兩者在腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為中共同發(fā)揮作用，且這種作用不依賴于患者的年齡和絕經(jīng)狀態(tài)。在臨床實(shí)踐中，對(duì)于卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者，無論其年齡和絕經(jīng)狀態(tài)如何，檢測BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平對(duì)于評(píng)估腫瘤的生物學(xué)特性和指導(dǎo)治療均具有一定的參考價(jià)值。七、BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平在卵巢漿液性乳頭狀腺癌臨床應(yīng)用7.1在診斷中的應(yīng)用價(jià)值早期準(zhǔn)確診斷對(duì)于卵巢漿液性乳頭狀腺癌的有效治療和患者預(yù)后至關(guān)重要。傳統(tǒng)的診斷方法雖有一定作用，但存在局限性。BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平檢測為卵巢漿液性乳頭狀腺癌的診斷提供了新的思路和潛在方法。研究表明，卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中BRCA1和ATM蛋白存在異常表達(dá)。本研究中，卵巢漿液性乳頭狀腺癌組織中BRCA1蛋白異常表達(dá)率為[X]%，ATM蛋白異常表達(dá)率為[X]%。與正常卵巢組織相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這種異常表達(dá)模式使得檢測BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平在卵巢漿液性乳頭狀腺癌的診斷中具有一定的應(yīng)用價(jià)值。通過檢測BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平，能夠輔助醫(yī)生對(duì)卵巢腫瘤的性質(zhì)進(jìn)行判斷。當(dāng)卵巢組織中BRCA1和ATM蛋白表達(dá)出現(xiàn)明顯異常時(shí)，如表達(dá)缺失或顯著降低，提示卵巢漿液性乳頭狀腺癌的可能性較大。這為臨床醫(yī)生在面對(duì)卵巢占位性病變時(shí)，提供了除傳統(tǒng)影像學(xué)和腫瘤標(biāo)志物檢測之外的重要診斷依據(jù)，有助于提高診斷的準(zhǔn)確性，減少誤診和漏診的發(fā)生。將BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平檢測與傳統(tǒng)的腫瘤標(biāo)志物檢測相結(jié)合，能夠進(jìn)一步提高卵巢漿液性乳頭狀腺癌的診斷效能。糖類抗原125（CA125）是目前臨床上廣泛應(yīng)用的卵巢癌腫瘤標(biāo)志物，但其特異性相對(duì)較低，在一些良性疾病中也會(huì)出現(xiàn)升高。而BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平檢測具有較高的特異性，與CA125聯(lián)合檢測，可以相互補(bǔ)充，提高診斷的準(zhǔn)確性。在一項(xiàng)針對(duì)卵巢腫瘤患者的研究中，同時(shí)檢測CA125和BRCA1、ATM蛋白表達(dá)水平，結(jié)果顯示聯(lián)合檢測的診斷靈敏度為[X]%，特異度為[X]%，明顯高于單獨(dú)檢測CA125的診斷效能。這表明，聯(lián)合檢測BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平與傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物，能夠更準(zhǔn)確地判斷卵巢腫瘤的良惡性，為患者的早期診斷和及時(shí)治療提供有力支持。在卵巢漿液性乳頭狀腺癌的早期篩查中，BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平檢測也具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。對(duì)于有卵巢癌家族史、攜帶BRCA1或ATM基因突變等高危人群，定期檢測BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平，有助于早期發(fā)現(xiàn)卵巢癌的潛在風(fēng)險(xiǎn)。通過對(duì)高危人群進(jìn)行前瞻性研究，發(fā)現(xiàn)BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平的異常變化往往早于臨床癥狀和影像學(xué)改變，能夠?yàn)樵缙谠\斷提供重要線索。這使得醫(yī)生可以在疾病的早期階段采取干預(yù)措施，提高患者的生存率和預(yù)后。7.2在預(yù)后評(píng)估中的作用BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平在卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者的預(yù)后評(píng)估中具有重要價(jià)值，能夠?yàn)榕R床醫(yī)生提供關(guān)鍵信息，幫助預(yù)測患者的生存時(shí)間和疾病進(jìn)展情況。從本研究結(jié)果來看，BRCA1蛋白表達(dá)水平與卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者的預(yù)后存在一定關(guān)聯(lián)。在BRCA1蛋白陽性表達(dá)的患者中，其生存情況相對(duì)較好，中位生存時(shí)間較長；而BRCA1蛋白陰性表達(dá)的患者，中位生存時(shí)間明顯縮短。這表明BRCA1蛋白表達(dá)缺失或降低可能預(yù)示著患者預(yù)后不良。BRCA1蛋白作為DNA損傷修復(fù)的關(guān)鍵蛋白，在維持基因組穩(wěn)定性方面發(fā)揮著重要作用。當(dāng)BRCA1蛋白表達(dá)正常時(shí)，細(xì)胞能夠有效修復(fù)受損DNA，抑制腫瘤細(xì)胞的惡性增殖和轉(zhuǎn)移，從而改善患者的預(yù)后。若BRCA1蛋白表達(dá)異常，細(xì)胞的DNA損傷修復(fù)能力下降，基因組穩(wěn)定性受到破壞，腫瘤細(xì)胞更容易發(fā)生增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等惡性行為，導(dǎo)致患者的生存時(shí)間縮短。ATM蛋白表達(dá)水平同樣對(duì)卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者的預(yù)后具有一定的預(yù)測價(jià)值。在ATM蛋白陽性表達(dá)的患者中，其生存情況相對(duì)更優(yōu)；而ATM蛋白陰性表達(dá)的患者，生存時(shí)間相對(duì)較短。ATM蛋白參與DNA損傷修復(fù)和細(xì)胞周期調(diào)控，當(dāng)ATM蛋白表達(dá)正常時(shí)，能夠及時(shí)感知DNA損傷并啟動(dòng)修復(fù)信號(hào)通路，使細(xì)胞周期阻滯，為DNA損傷修復(fù)提供時(shí)間，從而維持細(xì)胞的正常功能，抑制腫瘤的發(fā)展。若ATM蛋白表達(dá)異常，細(xì)胞對(duì)DNA損傷的修復(fù)能力下降，細(xì)胞周期調(diào)控異常，腫瘤細(xì)胞得以逃避細(xì)胞周期檢查點(diǎn)的監(jiān)控，持續(xù)增殖并發(fā)生轉(zhuǎn)移，進(jìn)而影響患者的預(yù)后。進(jìn)一步分析BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平與患者預(yù)后的聯(lián)合關(guān)系發(fā)現(xiàn)，在BRCA1和ATM蛋白均陽性表達(dá)的患者中，其生存情況最佳，中位生存時(shí)間最長；而在兩者均陰性表達(dá)的患者中，生存情況最差，中位生存時(shí)間最短。這表明BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平的降低可能協(xié)同促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展，對(duì)患者的預(yù)后產(chǎn)生不利影響。從生物學(xué)機(jī)制角度來看，BRCA1和ATM蛋白在DNA損傷修復(fù)通路中存在密切的相互協(xié)作關(guān)系，兩者表達(dá)異常會(huì)導(dǎo)致DNA損傷修復(fù)能力嚴(yán)重受損，基因組穩(wěn)定性大幅下降，腫瘤細(xì)胞的惡性程度增加，從而使患者更容易出現(xiàn)疾病復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，生存時(shí)間縮短。在臨床實(shí)踐中，檢測卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者腫瘤組織中BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平，能夠?yàn)獒t(yī)生制定個(gè)性化的治療方案和預(yù)后評(píng)估提供重要依據(jù)。對(duì)于BRCA1和ATM蛋白表達(dá)異常的患者，醫(yī)生可以加強(qiáng)監(jiān)測和治療，如采用更積極的化療方案、靶向治療或免疫治療等，以提高患者的生存率和預(yù)后。還可以根據(jù)患者的BRCA1和ATM蛋白表達(dá)情況，對(duì)患者進(jìn)行分層管理，為患者提供更精準(zhǔn)的醫(yī)療服務(wù)和隨訪計(jì)劃。7.3在靶向治療中的潛在應(yīng)用基于BRCA1和ATM蛋白在DNA損傷修復(fù)通路中的關(guān)鍵作用以及其在卵巢漿液性乳頭狀腺癌中的異常表達(dá)，它們?cè)诼殉舶┌邢蛑委熤姓宫F(xiàn)出了巨大的潛在應(yīng)用價(jià)值，為卵巢癌的精準(zhǔn)治療提供了新的方向。聚腺苷二磷酸核糖多聚酶（PARP）抑制劑是目前基于BRCA1和ATM蛋白異常表達(dá)開發(fā)的重要靶向藥物之一。PARP在DNA單鏈損傷修復(fù)中起著關(guān)鍵作用，而BRCA1和ATM基因參與DNA雙鏈斷裂的同源重組修復(fù)通路。當(dāng)BRCA1或ATM基因突變或蛋白表達(dá)異常時(shí)，細(xì)胞的同源重組修復(fù)功能受損，此時(shí)若再抑制PARP的活性，會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞DNA損傷的累積，無法有效修復(fù)，最終引發(fā)細(xì)胞死亡，這一現(xiàn)象被稱為“合成致死”效應(yīng)。在卵巢漿液性乳頭狀腺癌中，部分患者存在BRCA1和ATM蛋白表達(dá)異常，對(duì)于這部分患者，PARP抑制劑具有較高的治療潛力。研究表明，攜帶BRCA1或ATM基因突變或蛋白表達(dá)缺失的卵巢癌患者，對(duì)PARP抑制劑的敏感性顯著提高，治療有效率明顯增加。在一項(xiàng)臨床研究中，使用PARP抑制劑治療BRCA1基因突變的卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者，其無進(jìn)展生存期較傳統(tǒng)化療顯著延長，客觀緩解率也有明顯提升。這表明通過檢測卵巢漿液性乳頭狀腺癌患者腫瘤組織中BRCA1和ATM蛋白表達(dá)水平，篩選出對(duì)PARP抑制劑敏感的患者，能夠?qū)崿F(xiàn)精準(zhǔn)靶向治療，提高治療效果，減少不必要的治療副作用。除了PARP抑制劑，針對(duì)BRCA1和ATM蛋白表達(dá)異常的其他靶向治療策略也在不斷探索中。一些研究致力于開發(fā)能夠直接調(diào)控BRCA1和ATM蛋白表達(dá)或活性的小分子藥物。通過小分子化合物與BRCA1或ATM蛋白的特定結(jié)構(gòu)域結(jié)合，調(diào)節(jié)其在DNA損傷修復(fù)通路中的功能，從而抑制腫瘤細(xì)胞的生長和增殖。目前已有一些小分子化合物在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物模型中