中醫(yī)藥治療呼吸道合胞病毒感染實驗研究進展教育論文按照體內(nèi)體外不同研究途徑,對近年來中醫(yī)藥治療呼吸道合胞病毒(RSV)感染的實驗研究進展進行綜述,為以后相關研究進行展望。認為應該加強抗病毒作用環(huán)節(jié)和免疫學相關機制研究,以求開發(fā)針對RSV感染的抗病毒、提高機體抗病能力的新藥,進而產(chǎn)生新的中醫(yī)藥理論來指導RSV的臨床治療。呼吸道合胞病毒;實驗研究;呼吸道合胞病毒(Respiratorysyncytialvirus,RSV)是導致嬰幼兒下呼吸道感染最重要的病原,能引起支氣管炎、毛細支氣管炎、呼吸道合胞病毒肺炎等疾病,尚可誘發(fā)過敏癥和哮喘[1-2],某些體弱患兒可發(fā)生心力衰竭等危重情況,甚至可導致患兒死亡,嚴重危害嬰幼兒安康,西醫(yī)尚無平安有效的疫苗和藥物控制[3]。中醫(yī)藥在抗RSV感染方面有獨特的優(yōu)勢,多項臨床研究證實其療效顯著,進一步闡釋相關機理并開發(fā)平安有效的抗RSV感染藥物有重大意義。本文僅就近年來中醫(yī)藥治療RSV感染的實驗研究進展綜述如下。1.1單味藥物研究1.1.1藥物有效成分實驗研究梁榮感等[4]觀察大黃蒽醌類化合物對RSV引起的細胞病變(CPE)的抑制作用,結(jié)果證實其對RSV抑制作用存在明顯的量效反響關系,證實RAA在人喉癌細胞(Hep2)中對RSV有抑制作用。張鳳梅等[5]通過細胞培養(yǎng)法觀察敗醬草抗病毒多糖AP4對RSV感染人宮頸癌細胞(Hela)的治療作用,發(fā)現(xiàn)AP4抑制RSV的半數(shù)有效濃度(EC50)為0.097mg/mL,治療指數(shù)(TI)為114,證實敗醬草抗病毒有效部位AP4在Hela細胞中對呼吸道合胞病毒有明顯的抑制作用。王意忠等[6]采用細胞培養(yǎng)技術,利用CPE法觀察梔子提取物ZG對RSV等6種呼吸道病毒致細胞病變的影響。實驗結(jié)果顯示,體外抗病毒試驗中,梔子提取物ZG對RSV、甲型流感病毒等所致細胞病變有明顯抑制作用。王秀琴等[7]采用煎煮法、二氯甲烷萃取法和柱層析法提取別離得到甘草抗病毒有效部位(GD4),觀察GD4在Hela細胞中對RSV的抑制作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)GD4對RSV的抑制作用存在量效關系;在感染后至少12h以內(nèi)給藥,GD4能夠有效抑制RSV的復制。認為GD4在Hela細胞中對RSV有明顯的抑制作用。1.1.2含藥血清實驗研究楊潔等[8]采用水提醇沉法提取中藥黃芩有效成分,采用觀察細胞病變和MTT法,觀察清熱抗感沖劑及其含藥血清在Hep2細胞中抑制RSV的作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃芩提取物及其含藥血清具有不同程度抑制RSV病毒復制的作用。趙宇紅等[9]采用MTT比色法檢測魚腥草對Hep2單層細胞的毒性作用,通過空斑試驗和試管觀察細胞病變法確定魚腥草對RSV的抑制作用。結(jié)果顯示魚腥草(1∶10)可以完全抑制稀釋度為10-5(100CID50)的RSV、半數(shù)抑制10-4(1000TCID50)的RSV,可使空斑明顯變小,認為魚腥草注射液對RSV有體外抑制作用。1.2中藥復方機理實驗研究1.2.1藥物有效成分實驗研究楊道鋒等[10]觀察復方抗病毒制劑作用后的病毒對細胞的攻擊作用,結(jié)果顯示復方抗病毒制劑能抑制流感病毒的血凝活性和RSV對靶細胞的攻擊作用,認為復方抗病毒制劑體外對流感病毒和RSV具有較強的抑制作用。王孟清等[11]將RSV接種于Hela細胞單層增殖,取不同濃度的截哮口服液藥液參加病毒,觀察在細胞單層上的空斑形成以判定病毒產(chǎn)量。結(jié)果截哮口服液使RSV產(chǎn)量減少,藥物濃度的上下與病毒產(chǎn)量的上下呈明顯的負相關;其對RSV有直接滅活作用,且能影響病毒的`吸附與吸附后的復制過程。王桂亭等[12]通過銀黃直接抗病毒、病毒感染細胞同時使用銀黃、先使用銀黃再感染病毒3種給藥方法,觀察Hep2和Hela細胞病變效應。結(jié)果發(fā)現(xiàn)注射用銀黃在Hep2和Hela細胞上對RSV均有明顯的抗病毒作用。認為注射用銀黃對RSV具有抑制和直接殺滅的特異性。馮旰珠等[13]以CPE法及四氮唑鹽復原法(MTT法)比擬不同藥物濃度及不同給藥方式下熱毒寧對RSV的抑制作用效果,發(fā)現(xiàn)熱毒寧注射液預防給藥方式、細胞外直接滅活及治療給藥方式均有抗RSV作用,該抑制作用存在著明顯的量效反響關系。認為熱毒寧對RSV有直接滅活作用,對RSV侵入Hep2細胞有阻斷作用,對RSV在Hep2細胞內(nèi)增殖有抑制作用,相同濃度下,預防作用更顯著。葉卉初等[14]將Hep2細胞分成病毒唑、咳喘平、病毒唑+咳喘平3組,運用細胞培養(yǎng)技術,各細胞組參加RSVLong株病毒并分別參加上述3種藥物的稀釋液,通過觀察CPE來觀察RSV的抑制作用。試驗說明,在用藥量降至1/4時,在Hep2細胞上連續(xù)觀察5d,仍不產(chǎn)生細胞病理變化,對RSV有完全抑制作用。說明兩藥聯(lián)合應用時產(chǎn)生了很強的協(xié)同作用。1.2.2含藥血清實驗研究汪受傳等[15]用不同劑量的清肺口服液制成含藥血清處理RSV感染后的Hep2細胞,用組織細胞培養(yǎng)法,采用CPE觀察和MTT法檢測清肺口服液含藥血清對RSV感染細胞的增殖抑制作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在Hep2細胞上,清肺口服液的最大無毒濃度為1∶9。100TCID50RSV攻擊后Hep2細胞的OD值明顯降低,參加中、高劑量含藥血清后OD值升高。證實清肺口服液含藥血清對RSV有抑制作用。廖輝等[16]在組織培養(yǎng)半數(shù)感染量以及含藥血清對細胞最大無毒濃度測定根底上,行溫度轉(zhuǎn)換試驗。結(jié)果顯示:溫度轉(zhuǎn)換前(黏附階段)參加金欣口服液含藥血清,實驗組和對照組OD值差異無統(tǒng)計意義;溫度轉(zhuǎn)換后(侵入階段)參加金欣口服液,含藥血清組OD值明顯升高,與對照組比擬差異有高度統(tǒng)計意義(P<0.01)。認為金欣口服液含藥血清的抗病毒作用在RSV黏附后的膜融合及侵入階段。廖輝等[17]將人胚肺成纖維細胞分組,RSV病毒攻擊后,利用電鏡觀察各組人胚肺成纖維細胞超微結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果說明:病毒感染組細胞核增大,核質(zhì)比增加,核仁凝聚,核膜凹陷成夾層,包涵體形成,線粒體凝聚,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張,溶酶體增多,核染色質(zhì)濃縮,細胞外可見病毒顆粒。含藥血清感染后給藥組,細胞核增大,核仁凝聚,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張,線粒體凝聚,但程度較輕。證實RSV感染人胚肺成纖維細胞后,細胞可出現(xiàn)超微結(jié)構(gòu)的改變,清肺口服液含藥血清可以減輕這種改變,感染時給藥比感染后給藥作用更明顯。莫紅纓等[18]以ELISA法測定炎癥介質(zhì)的含量,觀察復方雙黃連及其含藥血清以不同的給藥方式對RSV刺激A549細胞引發(fā)的炎癥介質(zhì)IL8.IL6.TNFα釋放的作用。研究發(fā)現(xiàn)雙黃連復方及其含藥血清均能顯著降低RSV誘導A549釋放的IL8水平,并以感染前給藥的途徑下調(diào)IL8的作用最為明顯,在病毒感染的氣道炎癥控制中起著一定的作用。2.1病毒抑制作用研究徐霞等[19]用金貝清肺顆粒不同劑量給雄性BALB/C小鼠灌胃,3d后鼻腔接種RSV,繼續(xù)給藥7d,動物眼靜脈叢取血,牽頸臼處死,無菌取肺組織,做肺組織病毒含量檢測。結(jié)果顯示,金貝清肺顆粒4個劑量組動物的肺組織病毒含量與模型對照組比擬下降均超過一個指數(shù)。說明金貝清肺顆粒對小鼠體內(nèi)RSV具有明顯的抑制作用。吳成林等[20]在小鼠體內(nèi)觀察雙黃連口服液對RSV染毒小鼠的死亡保護作用以及對小鼠心、腦、肺內(nèi)病毒增殖的影響,發(fā)現(xiàn)雙黃連口服液能抑制RSV的增殖,并見病毒的感染性滴度隨藥物濃度的增加而下降;治療RSV感染鼠結(jié)果發(fā)現(xiàn),雙黃連口服液對RSV感染鼠有保護作用,隨著藥物劑量增加,療效增強;該口服液還能降低組織內(nèi)病毒滴度,阻止體內(nèi)病毒復制,抗RSV作用類似于同劑量的病毒唑。2.2免疫功能調(diào)節(jié)作用機制研究夏泉等[21]在小鼠感染RSV的同時,各給藥組分別灌胃利巴韋林和莪術油油溶液,腹腔注射莪術油葡萄糖注射液。按肺質(zhì)量除以體質(zhì)量逐個計算肺指數(shù)(LI)和各組肺指數(shù)抑制率。結(jié)果說明,病毒對照組小鼠的LI明顯增加,應用莪術油油溶液后,動物LI明顯減低,治療效果呈現(xiàn)較顯著的劑量相關性。且高劑量莪術油油溶液治療效果優(yōu)于利巴韋林。此外,莪術油葡萄糖注射液和利巴韋林對RSV感染小鼠的LI也具有明顯的降低作用。鄭淑梅等[22]對60例RSV肺炎患兒外周血T細胞亞群及血清白細胞介素-2水平進行測定,應用雙黃連粉劑靜滴治療7d,療程結(jié)束后復查發(fā)現(xiàn)患兒CD+4.CD+4/CD+8及血清IL2水平升高,CD+8降低,認為雙黃連可調(diào)節(jié)T細胞亞群平衡、增強細胞免疫功能,對疾病康復有促進作用。RSV感染對小兒和局部免疫功能低下的成年人安康構(gòu)成較大威脅,日益為人們重視。中醫(yī)藥在抗RSV感染中展示了自身獨有的優(yōu)勢,對其作用機制也進行了積極的探索。隨著研究的不斷深入,細胞培養(yǎng)、MTT、血清藥理學方法等研究手段逐漸為人們所熟知,細胞因子對炎癥部位細胞凋亡機制的影響等分子生物學方面的研究也正為更多的研究人員所承受,但仍存在著研究方法單一、研究指標、研究思路和方法缺乏創(chuàng)新性等諸多問題。在抑制病毒的作用研究中,多是通過檢測細胞病變改善的程度來描述藥物的抗病毒作用,對于其具體作用環(huán)節(jié)尚缺乏詳盡的研究,值得我們進一步深入探討?？上驳氖且恍┥锘瘜W、免疫學等相關專業(yè)科研人員從研制新的有效單體等角度進行探索,為進一步提醒藥物抗病毒規(guī)律及免疫學相關機制提供了新的方法,為中醫(yī)藥學的整體開展注入了新的力量,提供了新的思路。當前研制開發(fā)平安可靠的防治RSV感染的新藥,仍是國際醫(yī)學界有待解決的重要課題之一。[1]DurbinJE,DurbinRK.Respiratorysyncytialvirusinducedimmunoprotectionandimmunopathology[J].Virualimmunol,xx,17(3):370-380.[2]HackingD,HullJ.Respiratorysyncytialvirusviralbiologyandthehostresponse[J].JInfect,xx,45:18-24.[3]PiedraPA.Respiratorysyncytialvirusvaine:recentdevelopments[J].PediatrInfectDis,2000,19:805-808.[4]梁榮感,劉衛(wèi)兵,李麗亞,等.大黃蒽醌類化合物體外抗呼吸道合胞病毒作用的研究[J].廣西醫(yī)科大學學報,xx,24(2):280.[5]張鳳梅,李洪源,李霞,等.敗醬草多糖體外抗呼吸道合胞病毒作用的研究[J].黑龍江醫(yī)藥科學,xx,29(1):48.[6]王意忠,崔曉蘭,高英杰,等.梔子提取物抗病毒試驗研究[J].中國中藥雜志,xx,31(14):1176-1178.[7]王秀琴,李洪源,劉鑫妍,等.甘草抗病毒有效部位(GD4)體外抑制呼吸道合胞病毒作用的研究[J].中藥材,xx,29(7):692-694.[8]楊潔,劉萍.黃芩提取物及含藥血清體外抑制呼吸道合胞病毒作用的實驗研究[J].科學技術與工程,xx,7(12):2784.[9]趙宇紅,申昆玲,劉亞誼,等.魚腥草注射液治療呼吸道合胞病毒感染的體外實驗研究[J].首都醫(yī)科大學學報,xx,26(5):571.[10]楊道鋒,徐莉,邵靜芳,等.復方抗病毒制劑體外抗流感病毒和呼吸道合胞病毒作用及毒性研究[J].醫(yī)藥導報,xx,27(4）:392.[11]王孟清,羅銀河,董曉斐,等.截哮口服液對呼吸道合胞病毒的抑制作用研究[J].中醫(yī)藥學刊,xx,24(5):819.[12]王桂亭,宋艷艷,任桂杰,等.注射用銀黃體外抗呼吸道合胞病毒[J].中國新藥與臨床雜志,xx,24(11):887-889.[13]馮旰珠,周鋒,黃茂,等.熱毒寧抗呼吸道合胞病毒(RSV,Long株)作用體外實驗研究[J].南京醫(yī)科大學學報(自然科學版),xx,27(9):1009.[14]葉卉初,劉玉華,侯安存,等.咳喘平與病毒唑聯(lián)合應用體外對呼吸道合胞病毒抑制作用的研究[J].臨床和實驗醫(yī)學雜志,xx,4(3):147-149.[15]汪受傳,王霖,陳超,等.清肺口服液含藥血清對呼吸道合胞病毒抑制作用的實驗研究[J].南京中醫(yī)藥大學學報,xx,24(1):25-26.[16]廖輝,汪受傳,徐建亞.金欣口服液含藥血清對呼吸道合胞病毒黏附、膜融合影響的實驗研究[J].實用中西醫(yī)結(jié)合臨床,xx,8(1):3.[17]廖輝,王霖,汪受傳.呼吸道合胞病毒感染細胞超微結(jié)構(gòu)的改變及清肺口服液含藥血清對其作用的研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,xx,35(5):656-657.[18]莫紅纓,賴克方,江永南,等.雙黃連對呼吸道合胞病毒感染的氣道上皮細胞炎癥因子釋放的影響[J].廣州醫(yī)學院學報,xx,33(2):16.[19]徐霞,隋在