陜西省pcr上崗證考試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術的基本原理是（）A.基因重組B.核酸雜交C.核酸復制D.蛋白質合成答案：C2.以下哪種酶是PCR反應所必需的（）A.解旋酶B.RNA聚合酶C.Taq酶D.逆轉錄酶答案：C3.PCR反應的變性溫度一般為（）A.90-95℃B.70-75℃C.50-55℃D.30-35℃答案：A4.在PCR反應中，引物的作用是（）A.提供起始的3'-OHB.提供起始的5'-OHC.提供模板D.提供能量答案：A5.以下哪種物質不是PCR反應體系的常規(guī)成分（）A.dNTPB.模板DNAC.抗體D.緩沖液答案：C6.PCR產物的特異性主要取決于（）A.模板B.引物C.酶D.反應溫度答案：B7.熒光定量PCR檢測的是（）A.PCR產物的大小B.PCR產物的數(shù)量C.PCR反應的速度D.PCR反應的溫度答案：B8.進行PCR實驗時，防止污染的關鍵措施不包括（）A.分區(qū)操作B.頻繁更換試劑C.嚴格遵守操作規(guī)程D.使用一次性耗材答案：B9.對于低拷貝數(shù)的模板進行PCR擴增時，以下做法錯誤的是（）A.增加循環(huán)次數(shù)B.增加模板量C.提高退火溫度D.優(yōu)化反應體系答案：C10.PCR反應中，引物的長度一般為（）A.5-10個核苷酸B.15-30個核苷酸C.40-50個核苷酸D.60-70個核苷酸答案：B二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術可應用于（）A.基因診斷B.法醫(yī)學鑒定C.疾病的預防D.生物進化研究答案：ABCD2.影響PCR反應的因素包括（）A.模板純度B.引物設計C.酶的活性D.反應體系的離子濃度答案：ABCD3.以下哪些是熒光定量PCR的特點（）A.特異性強B.靈敏度高C.可定量分析D.操作復雜答案：ABC4.PCR反應中的污染來源可能有（）A.樣本間交叉污染B.試劑污染C.實驗室環(huán)境污染D.操作人員污染答案：ABCD5.引物設計時需要考慮的因素有（）A.長度B.特異性C.GC含量D.3'端互補性答案：ABCD6.在PCR反應中，以下哪些措施可以提高產物的產量（）A.增加模板量B.增加酶量C.優(yōu)化反應條件D.增加循環(huán)次數(shù)答案：ABCD7.以下關于PCR的敘述正確的是（）A.可以擴增RNAB.需要一對引物C.是一種體外核酸擴增技術D.反應過程包括變性、退火和延伸答案：BCD8.PCR產物的分析方法有（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.聚丙烯酰胺凝膠電泳C.測序D.酶切分析答案：ABCD9.以下哪些情況可能導致PCR擴增失?。ǎ〢.引物設計不當B.模板質量差C.酶失活D.反應體系配置錯誤答案：ABCD10.對于PCR實驗室的要求包括（）A.嚴格分區(qū)B.良好的通風C.穩(wěn)定的溫度和濕度D.定期清潔和消毒答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR只能擴增DNA，不能擴增RNA。（）答案：錯誤2.引物在PCR反應中可以反復使用。（）答案：錯誤3.熒光定量PCR不需要進行標準曲線的繪制。（）答案：錯誤4.PCR反應體系中緩沖液的作用是維持反應體系的pH值。（）答案：正確5.在PCR反應中，退火溫度越高，特異性越強。（）答案：錯誤6.只要有模板和酶，PCR反應就一定能成功。（）答案：錯誤7.PCR產物可以直接用于測序。（）答案：正確8.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應。（）答案：錯誤9.實驗室中PCR反應的污染只會影響當前反應的結果。（）答案：錯誤10.引物的特異性只與長度有關。（）答案：錯誤四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR反應的基本步驟。答案：PCR反應基本步驟包括變性、退火和延伸。變性是將模板DNA加熱至90-95℃，使雙鏈解開；退火是降溫至合適溫度（一般50-65℃），使引物與模板特異性結合；延伸是在72℃左右，由Taq酶催化合成新的DNA鏈。2.說明PCR實驗中防止污染的重要性及主要措施。答案：重要性：污染會導致假陽性結果，影響實驗準確性。主要措施：分區(qū)操作、使用一次性耗材、嚴格遵守操作規(guī)程、定期對實驗室進行清潔和消毒等。3.簡述引物設計的基本原則。答案：引物長度一般15-30個核苷酸；要有特異性，避免非特異性結合；合適的GC含量（40%-60%為宜）；3'端不能有較多互補性以免形成引物二聚體。4.簡述熒光定量PCR的原理。答案：在PCR反應體系中加入熒光基團，隨著PCR反應的進行，產物不斷積累，熒光信號強度也隨之增加。通過檢測熒光信號的變化來實時監(jiān)測PCR進程，實現(xiàn)對起始模板的定量分析。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論PCR技術在疾病診斷中的應用優(yōu)勢與局限性。答案：優(yōu)勢：特異性強能準確檢測病原體；靈敏度高可檢測低拷貝數(shù)病原體；可快速得到結果。局限性：易受污染產生假陽性；對操作人員和設備要求較高；不能直接反映病原體的活性。2.如何優(yōu)化PCR反應條件以提高產物特異性？答案：優(yōu)化引物設計確保特異性；調整退火溫度找到最佳值；控制模板和酶的質量與用量；優(yōu)化反應體系中的離子濃度等。3.闡述PCR實驗室分區(qū)的意義及各分區(qū)的主要功能。答案：意義：減少污染風險。試劑準