教學(xué)大綱（海洋天然產(chǎn)物化學(xué)）一、課程簡介課程名稱：海洋天然產(chǎn)物化學(xué)（Marinenaturalproductchemistry）代碼：屬性：理論課性質(zhì)：必修課類型：專業(yè)核心課學(xué)時(shí)：總118學(xué)時(shí)，其中講課60學(xué)時(shí)、實(shí)驗(yàn)50學(xué)時(shí)、PBL教學(xué)6學(xué)時(shí)、指導(dǎo)性自學(xué)2學(xué)時(shí)，理實(shí)比1：1.2適合專業(yè)：海洋藥學(xué)（四年制本科）考核方式：考試開課學(xué)期：第六學(xué)期課程性質(zhì)、目的和任務(wù)：《海洋藥物化學(xué)》是運(yùn)用化學(xué)的理論和方法及其他現(xiàn)代科學(xué)理論和技術(shù)等研究海洋藥物化學(xué)成分的一門學(xué)科。海洋藥物化學(xué)中天然活性成分的研究是海洋藥物開發(fā)的基礎(chǔ)和源泉。在我國的海洋藥學(xué)教育和研究中占有獨(dú)特的地位和作用，它為充分利用豐富的海洋生物資源，提高科學(xué)技術(shù)水平和造福于人類的健康和社會(huì)的發(fā)展都具有重要的意義。因此，將《海洋藥物化學(xué)》課程設(shè)置為海洋藥學(xué)專業(yè)本科主干課程之一，隸屬于海洋藥學(xué)教研室。教師隊(duì)伍目前為4人。教學(xué)設(shè)施完備，實(shí)驗(yàn)室已安裝良好的通風(fēng)設(shè)備，保障了師生的身體健康。能夠獨(dú)立地承擔(dān)我校海洋藥學(xué)專業(yè)本科《海洋藥物化學(xué)》課程的理論教學(xué)與實(shí)驗(yàn)教學(xué)工作。二、教學(xué)方法：理論教學(xué)運(yùn)用課堂講授、RBL教學(xué)法、自主學(xué)習(xí)等方法，實(shí)踐教學(xué)運(yùn)用實(shí)驗(yàn)、示教等方法。（1）課堂講授①對(duì)“掌握”的內(nèi)容，應(yīng)講深、講透，使學(xué)生能深入領(lǐng)會(huì)其基本知識(shí)或基本理論，以便運(yùn)用于分析問題和解決問題。②對(duì)“熟悉”的內(nèi)容，應(yīng)重點(diǎn)講解，使學(xué)生能在全面理解各知識(shí)點(diǎn)之間的內(nèi)在聯(lián)系，抓住重點(diǎn)。③對(duì)“了解”的內(nèi)容，可做概括性講解，使學(xué)生對(duì)某一方面的知識(shí)達(dá)到一般的認(rèn)識(shí)。（2）自主學(xué)習(xí)：讓學(xué)生對(duì)照大綱，依托網(wǎng)絡(luò)課程平臺(tái)自己學(xué)習(xí)目標(biāo)內(nèi)容，并通過網(wǎng)絡(luò)習(xí)題測試評(píng)價(jià)學(xué)習(xí)效果，教師通過網(wǎng)絡(luò)平臺(tái)進(jìn)行答疑。自主學(xué)習(xí)不占用課程學(xué)時(shí)。成績評(píng)定方法：過程性考核和終結(jié)性考核兩種方式結(jié)合。終結(jié)性考核采用閉卷機(jī)考形式；過程性考核包括考勤、網(wǎng)絡(luò)平臺(tái)測驗(yàn)、同步練習(xí)題完成情況、實(shí)驗(yàn)考核成績等。三、考核方式(一)過程性考核（30%）：考勤成績5%+自主學(xué)習(xí)5%+實(shí)驗(yàn)考核20%。過程性考核低于60分者，不得參加終結(jié)性考核。(二)終結(jié)性考核（70%）：采用閉卷機(jī)考。卷面成績?nèi)绲陀?0分，課程總成績計(jì)不及格。(三)課程成績構(gòu)成：過程性考核30%+終結(jié)性考核70%。四、教學(xué)目標(biāo)要求（一）思想道德與職業(yè)素質(zhì)要求培養(yǎng)學(xué)生具備海洋藥學(xué)崗位應(yīng)有的職業(yè)道德和海洋藥學(xué)研究的倫理道德，熟悉藥品流通、調(diào)劑配發(fā)中的道德責(zé)任；熟悉海洋藥學(xué)人員與服務(wù)對(duì)象之間的和海洋藥學(xué)人員之間的道德準(zhǔn)則。培養(yǎng)學(xué)生具備具有高尚、靈活、開放的人文精神，表現(xiàn)出關(guān)心、愛護(hù)、尊重藥學(xué)服務(wù)對(duì)象和認(rèn)真、嚴(yán)謹(jǐn)、熱情、勤快的工作作風(fēng)。培養(yǎng)學(xué)生具備牢固的專業(yè)思想、正確的學(xué)習(xí)目標(biāo)、良好的學(xué)習(xí)態(tài)度。（二）知識(shí)結(jié)構(gòu)要求掌握海洋藥物化學(xué)的基本理論、基本概念，各類型天然藥物化學(xué)成分的提取分離和鑒別的一般方法，為畢業(yè)后從事與海洋藥物相關(guān)的工作打下理論基礎(chǔ)掌握主要類型天然藥物化學(xué)成分在海洋生物中的存在形式、結(jié)構(gòu)特征和理化性質(zhì)和鑒定方法。熟悉尋找海洋天然產(chǎn)物活性成分的一般途徑，并對(duì)各類主要類型化合物的成分有初識(shí)判斷能力。了解各類海洋天然產(chǎn)物為先導(dǎo)化合物的藥物在臨床中的運(yùn)用以及海洋天然產(chǎn)物的發(fā)展前景。（三）能力結(jié)構(gòu)要求具備提取分離和鑒別的基本操作技能。具有根據(jù)各類化合物的存在形式、結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)等特點(diǎn)選擇適當(dāng)?shù)奶崛》蛛x和鑒定方法的能力。學(xué)會(huì)用化學(xué)檢識(shí)法和色譜法初步鑒別天然藥物化學(xué)成分的基本技術(shù)。具有團(tuán)結(jié)合作的能力、觀察能力、提出問題、綜合分析和解決藥物的生產(chǎn)、分析檢驗(yàn)、調(diào)劑中的問題的能力。具有學(xué)習(xí)和更新海洋天然產(chǎn)物相關(guān)知識(shí)的能力及運(yùn)用所學(xué)知識(shí)獨(dú)立思考、分析和解決實(shí)際問題的能力。四、學(xué)時(shí)分配內(nèi)容講授實(shí)驗(yàn)小計(jì)第一章緒言22第二章海洋藥用活性成分的提取分離辦法22第三章藥物效應(yīng)動(dòng)力學(xué)4.54.5第四章傳出神經(jīng)系統(tǒng)藥理學(xué)概論11第五章膽堿能系統(tǒng)激動(dòng)藥和阻斷藥33第六章腎上腺素能神經(jīng)系統(tǒng)激動(dòng)藥和阻斷藥33第十章鎮(zhèn)靜催眠藥11第十二章精神障礙治療藥物3第十三章鎮(zhèn)痛藥22第十六章利尿藥和脫水藥22第十七章抗高血壓藥22第十八章抗心絞痛藥3實(shí)驗(yàn)一預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測化合物成分55實(shí)驗(yàn)二海帶多糖的提取和含量測定1010實(shí)驗(yàn)三海馬蛋白的提取和測定1515實(shí)驗(yàn)四海洋微生物的培養(yǎng)和次級(jí)代謝產(chǎn)物的提取1010實(shí)驗(yàn)五演示實(shí)驗(yàn)55合計(jì)5150110五、推薦的教材與教學(xué)參考書（一）教材：《海洋藥物化學(xué)》，奚濤，邢瑩瑩，陸園園，自編，2016年版《海洋藥學(xué)綜合實(shí)驗(yàn)教程》，張小坡、高炳淼、李友賓、范宇光、董琳、劉雪菲丹，自編，2021年版（二）參考書：《海洋藥物化學(xué)》，奚濤，邢瑩瑩，陸園園，自編，2016年版六、推薦的教學(xué)網(wǎng)站和相關(guān)專業(yè)文獻(xiàn)網(wǎng)站/webapps/login/36/Jweb_cjpt/CN/volumn/current.shtml//Journal/Home/224274/v_show/id_XOTEyNjg5ODA=.html/v_show/id_XOTEyNzM3OTY=.html七、責(zé)任人：高炳淼審閱人：劉雪菲丹制（修）訂時(shí)間：2021年3月八、教學(xué)目標(biāo)、教學(xué)內(nèi)容、重點(diǎn)、難點(diǎn)、方法（一）、理論課程第一章

海洋藥物化學(xué)總論-緒言【教學(xué)目標(biāo)】掌握海洋藥物化學(xué)研究內(nèi)容，有效成分與無效成分的定義。熟悉海洋藥物的各種化學(xué)成分的溶解性能。了解海洋藥物化學(xué)發(fā)展史、現(xiàn)狀及未來和學(xué)習(xí)海洋藥物化學(xué)的重要意義?！窘虒W(xué)內(nèi)容】海洋藥物化學(xué)的性質(zhì)與任務(wù)海洋藥物化學(xué)研究進(jìn)展與前景研究海洋藥物化學(xué)的意義和作用。新藥的開發(fā)與研究?！窘虒W(xué)方法】課堂講授。第二章

海洋藥用活性成分的提取分離辦法【教學(xué)目標(biāo)】掌握溶劑提取法與水蒸氣蒸餾法的適用范圍及其操作要點(diǎn)，溶劑的極性和選用原則，海洋藥物化學(xué)成分分離、鑒定的基本方法與技術(shù)；海洋藥物化學(xué)成分薄層色譜，紙色譜和柱色譜的適用范圍及其操作要點(diǎn)。熟悉各種提取分離和鑒定方法的基本原理和影響因素。了解離子交換柱色譜和凝膠色譜的原理及操作要點(diǎn)?！窘虒W(xué)內(nèi)容】溶劑提取法與水蒸氣蒸餾法溶劑的極性和選用原則。海洋藥物化學(xué)成分分離、鑒定的基本方法與技術(shù)。各類色譜洋藥物化學(xué)成分薄層色譜，紙色譜和柱色譜的適用范圍及其操作要點(diǎn)。海洋藥物化學(xué)離子交換柱色譜和凝膠色譜的原理及操作要點(diǎn)。藥動(dòng)學(xué)基本參數(shù)、計(jì)算及其意義。各種提取分離和鑒定方法的基本原理和影響因素。【教學(xué)方法】課堂講授。第三章海洋藥用成分的波普解析【教學(xué)目標(biāo)】掌握各類譜圖的基本概念，特征吸收，在實(shí)際運(yùn)用于鑒定化合物的結(jié)構(gòu)和濃度。熟悉各種波普的原理。了解各種波普的發(fā)展?！窘虒W(xué)內(nèi)容】UV、IRUV、IR的原理。UV、IR在實(shí)際實(shí)驗(yàn)中的運(yùn)用。NMRNMR的原理。NMR在實(shí)際實(shí)驗(yàn)中的運(yùn)用。MSMS的原理MS在實(shí)際實(shí)驗(yàn)中的運(yùn)用。【教學(xué)方法】課堂講授。第四章海洋藥用活性成分-烴類【教學(xué)目標(biāo)】掌握海洋烴類的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)、生理活性。熟悉海洋烴類的來源。了解海洋烴類的生物合成?！窘虒W(xué)內(nèi)容】烴類的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)和分類開鏈脂肪烴及其衍生物。環(huán)烴及其衍生物。芳香烴及其衍生物鹵代烴及其衍生物。烴類的生物活性海洋烴類的來源和生物合成?！窘虒W(xué)方法】課堂講授第五章海洋藥用活性成分-甾類【教學(xué)目標(biāo)】掌握海洋甾類的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)、生理活性。熟悉海洋甾類的來源。了解海洋甾類的生物合成。【教學(xué)內(nèi)容】海洋甾類的結(jié)構(gòu)和分類飽和甾醇不飽和甾醇側(cè)鏈?zhǔn)肩薮紓?cè)鏈含碳甾醇母核股價(jià)變化甾醇多羥基甾醇海洋甾類的生物活性海洋甾類的來源和生物合成【教學(xué)方法】課堂講授第六章海洋藥用活性成分-萜類【教學(xué)目標(biāo)】掌握海洋萜類的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)、分類、生理活性。熟悉海洋萜類的來源。了解海洋萜類的生物合成?！窘虒W(xué)內(nèi)容】萜類的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)和分類單萜。倍半萜二萜二倍半萜三萜四萜海洋萜類的生物活性海洋萜類的來源和生物合成【教學(xué)方法】課堂講授。第七章海洋藥用活性成分-皂苷【教學(xué)目標(biāo)】掌握海洋皂苷的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)、母核結(jié)構(gòu)、生理活性。熟悉海洋皂苷的來源。了解海洋皂苷的生物合成?！窘虒W(xué)內(nèi)容】皂苷的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)和分類海參皂苷海星皂苷海綿皂苷海洋皂苷的生物活性海洋皂苷的來源和生物合成【教學(xué)方法】課堂講授第八章海洋藥用活性成分-大環(huán)內(nèi)酯【教學(xué)目標(biāo)】掌握海洋大環(huán)內(nèi)酯的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)、生理活性。熟悉海洋大環(huán)內(nèi)酯的來源。了解海洋大環(huán)內(nèi)酯的生物合成。【教學(xué)內(nèi)容】大環(huán)內(nèi)酯的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu).大環(huán)內(nèi)酯的生物活性大環(huán)內(nèi)酯的來源和生物合成【教學(xué)方法】課堂講授。第九章海洋藥用活性成分-含氮類化合物【教學(xué)目標(biāo)】掌握海洋含氮類化合物的分類、基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)、生理活性。熟悉海洋含氮類化合物的來源。了解海洋含氮類化合物的生物合成?！窘虒W(xué)內(nèi)容】含氮類化合物的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)和分類簡單胺類氨基酸類生物堿類酰胺類肽類含氮類化合物的生物活性含氮類化合物的來源和生物合成【教學(xué)方法】課堂講授。第十章海洋藥用活性成分-乙酸原類化合物【教學(xué)目標(biāo)】掌握海洋乙酸原類類的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)、生理活性。熟悉海洋乙酸原類的來源。了解海洋乙酸原類的生物合成?！窘虒W(xué)內(nèi)容】乙酸原類化合物的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)和分類直鏈乙酸原類化合物環(huán)氧化物其他類乙酸原化合物乙酸原類化合物的生物活性乙酸原類化合物的來源和生物合成【教學(xué)方法】課堂講授。第十一章海洋藥用活性成分-前列腺素【教學(xué)目標(biāo)】掌握海洋前列腺素的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)、生理活性。熟悉海洋前列腺素的來源。了解海洋前列腺素的生物合成?！窘虒W(xué)內(nèi)容】前列腺素的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)前列腺素的生物活性前列腺素的來源和生物合成【教學(xué)方法】課堂講授。第十二章海洋藥用活性成分-糖和糖苷類【教學(xué)目標(biāo)】掌握海洋糖類和苷類的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)、生理活性。熟悉海洋糖類和苷類的來源。了解海洋糖類和苷類的生物合成?！窘虒W(xué)內(nèi)容】糖類和苷類的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)和分類單糖和低聚糖類化合物多糖類化合物糖苷類化合物糖類和苷類的生物活性糖類和苷類的來源和生物合成【教學(xué)方法】課堂講授。第十三章海洋藥用活性成分-其他類【教學(xué)目標(biāo)】掌握海洋脂肪酸的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)、生理活性。熟悉海洋黃酮類的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)、生理活性。了解海洋酚類的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)、生理活性?！窘虒W(xué)內(nèi)容】海洋脂肪酸的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)、生理活性海洋黃酮類的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)、生理活性。海洋酚類的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)、生理活性?！窘虒W(xué)方法】課堂講授。第十四章海洋藥用活性成分的構(gòu)效關(guān)系【教學(xué)目標(biāo)】掌握海洋化合物活性成分構(gòu)效關(guān)系研究的方法。熟悉結(jié)構(gòu)修飾的幾種類型。了解海洋化合物生物活性的測定方法?！窘虒W(xué)內(nèi)容】海洋化合物活性成分構(gòu)效關(guān)系研究的方法結(jié)構(gòu)修飾法。組合化學(xué)法。基因工程手段。結(jié)構(gòu)修飾的幾種類型硫酸化降解【教學(xué)時(shí)數(shù)】課堂講授。（二）、實(shí)驗(yàn)課程實(shí)驗(yàn)一、海洋藥物化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)海洋生物體內(nèi)的化學(xué)成分比較復(fù)雜，總成分含量少，有效成分含量低。同一種海洋生物中往往含有多種結(jié)構(gòu)類型的化學(xué)成分，在分離海洋藥用活性化學(xué)成分時(shí)，一般需要經(jīng)過生物活性篩選。在著手研究其化學(xué)成分時(shí)，就要借助預(yù)實(shí)驗(yàn)，檢測其大致含有那種類型的化學(xué)成分，以便于選用合適的分離手段和方法進(jìn)行下一步化學(xué)成分的分離和分析。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)海洋天然產(chǎn)物化學(xué)成分的預(yù)實(shí)驗(yàn)方法及原理。掌握海洋天然產(chǎn)物預(yù)實(shí)驗(yàn)的程序及結(jié)果的判斷。二、實(shí)驗(yàn)原理根據(jù)中藥中所含各類化學(xué)成分在不同極性的溶劑中溶解度不同。先選用不同極性的溶劑把溶解度相近的成分提取出來，分成極性不同的幾個(gè)部分，即供試液；然后再選用各類成分的定性反應(yīng)（包括沉淀反應(yīng)和顯色反應(yīng)等）及層析法（TLC、PC等）檢查，最后進(jìn)行分析判斷，初步確定有無哪幾類化學(xué)成分。預(yù)試驗(yàn)可歸納為兩類：一類是單項(xiàng)預(yù)試法，即為尋找某類成分而做的有針對(duì)性的檢查。另一類是系統(tǒng)預(yù)試法（系統(tǒng)分析），即在未知情況下對(duì)植物藥中可能含有的各類成分進(jìn)行比較全面系統(tǒng)的定性檢查。預(yù)試驗(yàn)的原理是根據(jù)各部位可能含有的化學(xué)成分類型，選擇各類成分特有的化學(xué)反應(yīng)如顏色反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、熒光性質(zhì)等作一般定性預(yù)試。三、實(shí)驗(yàn)材料及試劑實(shí)驗(yàn)材料：海帶多糖；海星；白骨壤果實(shí)；白骨壤葉；老鼠簕；白鮮皮乙醇提取液。實(shí)驗(yàn)試劑：蒸餾水，95%乙醇，70%乙醇，石油醚。Molish試劑，醋酐，濃硫酸，碘化鉍鉀試劑，三氯化鐵，鎂粉，鹽酸。實(shí)驗(yàn)儀器：水浴鍋，抽濾裝置，試管，滴管，濾紙，天平，蒸發(fā)皿，具塞錐形瓶，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，漏斗，50ml圓底燒瓶，小分液漏斗。實(shí)驗(yàn)方法（一）預(yù)實(shí)驗(yàn)溶液的制備在進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，首先要對(duì)樣品進(jìn)行提取，且使得提取液中盡可能包含多種待測成分。目前常用的提取方法是使用水和乙醇（或甲醇），可以將大多數(shù)常見的天然產(chǎn)物化學(xué)成分提取出來供實(shí)驗(yàn)用。預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，樣品溶液的一般制備方法如下：1、水浸液：取藥材粉末2g，加5-10倍量的蒸餾水，在70-80℃的水浴上加熱提取50分鐘后過濾。此濾液即可在試管及濾紙片（或薄層板）上進(jìn)行糖、多糖、有機(jī)酸、皂苷、苷類、酚類、鞣質(zhì)、氨基酸、蛋白質(zhì)等項(xiàng)預(yù)實(shí)驗(yàn)。2、乙醇提取液：取植物粉末2g，加5-10倍量95%乙醇，在70-80℃的水浴上加熱提取50分鐘后過濾。此濾液即可在試管及濾紙片（或薄層板）上進(jìn)行黃酮、酚類、蒽醌、苷類、有機(jī)酸、香豆素、生物堿、萜類、甾體化合物等項(xiàng)預(yù)實(shí)驗(yàn)。若被試植物為樹葉，其中含很多葉綠素，應(yīng)盡量先將葉綠毒素除去，才不致妨礙預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判斷。方法是將醇提取液稀釋成含醇量約70%濃度的溶液，倒入分液漏斗，再加等體積的石油醚振搖，使葉綠素轉(zhuǎn)移到上層石油醚溶液中。分出下層70%乙醇提取液，減壓抽干呈糖漿狀，再作上述預(yù)實(shí)驗(yàn)。（二）、實(shí)驗(yàn)用藥材：1、海星：甾體、皂苷；2、白骨壤果實(shí)：酚類、生物堿；3、白骨壤葉：黃酮；4、白鮮皮：黃酮；5、海帶：多糖。藥材簡介：海星（starfish）屬于棘皮動(dòng)物門（Echinodermata），海星綱（Asteroidea）。海星是傳統(tǒng)的民間中藥材，其味咸，性平，具有厚腸止瀉、鎮(zhèn)驚安神、和胃止痛等作用。海星體內(nèi)含有比較豐富的蛋白質(zhì)、多糖、甾體、皂苷、生物堿等多種化學(xué)成分。海欖雌Avicenniamarina(Forssk)Vierh為馬鞭草科海欖雌屬植物，是紅樹植物的一種，嫩葉搗爛后外敷能止血消炎，治療膿腫，樹皮能治療皮膚瘙癢，果實(shí)可以治療痢疾。白骨壤果實(shí)可作為糧食、菜肴食用，還可作為釀酒原料，民間用其果實(shí)配以排骨可治療高血壓；主要化學(xué)成分有酚苷、萜、黃酮、多糖、生物堿等。老鼠簕：老鼠簕（AcanthusilicifoliusL.）是爵床科老鼠簕屬藥用紅樹植物，一般生長在高鹽堿度熱帶海濱泥灘、淤泥較厚的海灣或河口高潮線以下的鹽漬土壤，全株或根入藥，具有清熱解毒、消腫散結(jié)、止咳平喘之功效。老鼠簕植物中含有多糖、生物堿、黃酮、萜類和甾體、飽和直鏈和支鏈烴、脂肪酸酯類等化合物。樣品制備海星乙醇提取液：稱取2g海星粉末，2份，分別加5-10倍量70%乙醇、95%乙醇，在70-80℃的水浴上加熱提取50分鐘后過濾，進(jìn)行泡沫實(shí)驗(yàn)、醋酐濃硫酸實(shí)驗(yàn)。白骨壤果實(shí)乙醇提取液：稱取2g白骨壤果實(shí)粉末，加5-10倍量95%乙醇，在70-80℃的水浴上加熱提取50分鐘后過濾。進(jìn)行碘化鉍鉀實(shí)驗(yàn)、三氯化鐵實(shí)驗(yàn)。取已制備好的白鮮皮乙醇提取液，進(jìn)行鹽酸鎂粉實(shí)驗(yàn)。取海帶多糖少許溶于水中，進(jìn)行α-萘酚試驗(yàn)。自選藥材提取液(白骨壤葉或老鼠簕根)，稱取2g藥材，自行設(shè)計(jì)、安排合理的提取方法，，根據(jù)藥材可能含有的成分自行選擇鑒別方法。（三）顯色及鑒別反應(yīng)1、糖α-萘酚試驗(yàn)（Molish試劑）：取熱水提取液1ml，加入10%α-萘酚乙醇液2-3滴，搖勻，沿試管壁緩緩加入濃硫酸（約0.5-lml，勿振搖），在試液與硫酸的交界面產(chǎn)生紫色或紫紅色環(huán)，即表示有糖類，多糖或甙類。2、甾體、三萜及皂苷類（1）泡沫試驗(yàn)：取熱水提取液1-2ml置于試管中，密塞，激烈振搖2分鐘，如產(chǎn)生大量持續(xù)性泡沫，且放置10分鐘以上，或加熱，或加入乙醇泡沫均無明顯地減少，即表示可能有皂甙。（2）醋酐濃硫酸試驗(yàn)（Liebermann-Burchard反應(yīng)）：取乙醇提取液，蒸干乙醇，將殘?jiān)芙饣驊腋∮诖佐?.5m1并轉(zhuǎn)移至試管內(nèi)（保持干燥環(huán)境），加濃硫酸1滴，若呈紫紅色，且溶液上層逐漸變綠，即表明含有甾體、三萜類或皂甙。其中甾體化合物顏色變化較快，而三萜類化合物相應(yīng)顏色變化較慢。3、生物堿類成分碘化鉍鉀試劑（Dragendorff試劑）：取濾液0.5ml，加入碘化鉍鉀試劑1-2滴，如有桔紅色沉淀產(chǎn)生，即表示可能有生物堿。4、酚酸類三氯化鐵反應(yīng)：取濾液0.5ml，樣品溶液如為酸性，即可直接進(jìn)行檢查。如為堿性，可加醋酸酸化后再滴加1滴三氯化鐵試劑。藍(lán)、墨綠或藍(lán)紫色，證明可能含有酚類或鞣質(zhì)。注：酚類化合物在紙片上單獨(dú)用三氯化鐵顯色靈敏度較差，可采用其他試劑。5、黃酮類成分鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取乙醇提取液1ml，加入鎂粉少許，再加入濃鹽酸2-3滴（必要時(shí)水浴加熱），如反應(yīng)液或產(chǎn)生的泡沫顯紅→紫紅色，即表示可能有黃酮類化合物。實(shí)驗(yàn)說明和注意事項(xiàng)1、系統(tǒng)預(yù)試結(jié)束以后，首先對(duì)反應(yīng)結(jié)果明顯的成分進(jìn)行分析判斷，作出初步結(jié)論。某些反應(yīng)的結(jié)果不十分明顯，應(yīng)處理供試液，再進(jìn)行檢識(shí)或再選擇一些試劑進(jìn)行檢識(shí)。2、判斷層析各反應(yīng)結(jié)果時(shí)，應(yīng)進(jìn)行綜合考慮。例如，酚類的檢識(shí)為陽性反應(yīng)時(shí)，應(yīng)當(dāng)考慮簡單酚類化合物、鞣質(zhì)以及黃酮、蒽醌、香豆素等含酚羥基化合物都有可能呈現(xiàn)陽性反應(yīng)。此時(shí)應(yīng)配合這些化合物的檢識(shí)反應(yīng)，方能作出合理的判斷。3、海洋藥物中成分十分復(fù)雜，在經(jīng)過水、乙醇、乙酸乙酯、石油醚等溶劑的系統(tǒng)分離，但各溶劑中仍混有多種化合物，進(jìn)行檢識(shí)反應(yīng)時(shí)，成分間的相互干擾仍然存在。另外，由于檢識(shí)反應(yīng)本身的限制，（如反應(yīng)的靈敏度不高、專屬性不強(qiáng)等），通過系統(tǒng)預(yù)試，一般只能提供樣品中可能含有哪幾類化學(xué)成分，而不能確定是何種單一的成分。4、需要說明的是預(yù)實(shí)驗(yàn)僅是初步分析，由于很多定性試劑并不是完全專一的僅與某種成分反應(yīng)，加上所含成分較復(fù)雜，可能互相干擾，根據(jù)預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果立即肯定或否定某種成分的存在與否并不科學(xué)。例如由于植物內(nèi)有些成分的含量很低，運(yùn)用一般的預(yù)試驗(yàn)方法可能不易發(fā)現(xiàn)，同時(shí)，可能存在難以預(yù)料的新型成分，目前的預(yù)試驗(yàn)方法不一定能做到全部預(yù)檢。因此要完全肯定或否定某類化學(xué)成分，往往需要通過進(jìn)一步的研究工作。實(shí)驗(yàn)二、海帶多糖的提取及含量測定1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募霸砗呛衷彘T植物，海帶多糖是海帶藥用價(jià)值的最集中體現(xiàn)，海帶多糖的種類很多。本實(shí)驗(yàn)的主要目的是掌握海帶多糖的提取及測定方法。對(duì)海帶多糖的提取方法有很多，堿提取法是其中重要的一種。多糖中的己糖能與苯酚-硫酸試劑發(fā)生顯色反應(yīng)，顏色的深淺與己糖含量成正比。顏色的深淺可通過分光光度計(jì)測定，因此，可建立不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)己糖與吸光度間的呈線性關(guān)系，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定樣品的吸光度值，再從表中曲線中查到樣品中多糖的含量。2、實(shí)驗(yàn)基本內(nèi)容和要求（1）掌握堿提取法提取海帶多糖（2）掌握利用繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線方法測定多糖含量3、實(shí)驗(yàn)所用儀器設(shè)備和試劑（1）基本儀器：分光光度計(jì)，離心機(jī)（2）實(shí)驗(yàn)材料及試劑：干海帶1%碳酸鈉溶液：稱取15g無水碳酸鈉加入1500ml蒸餾水95%乙醇溶液，氯化鈣溶液(2g/100ml)，1.0ml6%的苯酚溶液，98%濃硫酸標(biāo)準(zhǔn)糖溶液：用巖藻糖和半乳糖fuc/gal(3:1)作為標(biāo)準(zhǔn)糖，取其混合物0.1g，其中0.075g的巖藻糖，0.025g的半乳糖，將其溶解到1000ml的水中，制成0.1mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。梯度稀釋，用蒸餾水稀釋分別配成，0,0.02,0.04,0.06,0.08,0.1mg/ml。4、實(shí)驗(yàn)步驟4.1海帶多糖的提?。?）購買海帶后,用自來水將其洗凈,曬干，研磨，過60目80目的篩,收集備用。稱取制備好的2g海帶粉,置于燒杯中,加入28ml剛配好的碳酸鈉溶液。（2）在50℃水浴中水浴,趁熱用棉綸網(wǎng)進(jìn)行吊濾,并不斷用熱水沖洗保持溫度,獲得的吊濾液于5000r/min離心15min,保留上清液。上清液經(jīng)減壓濃縮(40℃)后,加入三倍體積95%乙醇,沉淀過夜。離心后獲得海帶粗多糖。4.2海帶多糖的測定（1）將標(biāo)準(zhǔn)糖配成0.1mg/ml溶液（2）取少量標(biāo)準(zhǔn)糖溶液，用蒸餾水稀釋到2.0ml，向其中加入1.0ml6%的苯酚溶液，振蕩器混勻，再加入濃硫酸5.0ml，振蕩混勻。靜置5min，沸水浴15min，冷卻至室溫后于490nm比色測定吸光度，（3）將測得的吸光度填寫到下表中：分組123456樣品濃度c（mg/ml）00.020.040.060.080.1吸光度A根據(jù)A值，制作糖含量標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)比多糖提取的海帶多糖的A值，求得糖含量。實(shí)驗(yàn)三、海馬總蛋白的提取海馬為我國名貴中藥，具有溫腎壯陽，散結(jié)消腫的功效?，F(xiàn)代藥理研究表明，海馬具有抗氧化，抗腫瘤，抗疲勞，抗衰老，抗血栓，鎮(zhèn)痛和激素樣等作用。海馬所含化學(xué)成分主要有甾體、脂肪酸、微量元素、蛋白質(zhì)及氨基酸等?！吨袊幍洹?015版海馬為海龍科動(dòng)物線紋海馬、刺海馬、大海馬、三斑海馬和小海馬（海蛆）的干燥。海馬是珍貴的海洋生物藥用資源，隨著海馬養(yǎng)殖技術(shù)的發(fā)展，其研究及開發(fā)利用具有非常重要的意義。實(shí)驗(yàn)原理海馬蛋白提取的方法海馬蛋白鑒定的方法實(shí)驗(yàn)部分一、材料、儀器及試劑實(shí)驗(yàn)儀器超高速粉碎機(jī)電熱恒溫水浴鍋多功能酶標(biāo)儀真空冷凍干燥機(jī)冷凍高速離心機(jī)小型臺(tái)式離心機(jī)電子天平電泳儀凝膠成像儀實(shí)驗(yàn)試劑海馬三氯乙酸丙酮EDTA硝酸銀P0010增強(qiáng)型BCA蛋白濃度測定試劑盒考馬斯亮藍(lán)超快染色液AmiconUltra-4超濾離心管透析袋氯化鈉(NaCl)2%碳酸氫鈉（2NaCO3）二、試劑配制三氯乙酸/丙酮溶液：稱取三氯乙酸（TCA）固體1g，加入預(yù)冷的丙酮溶液10mL配制成丙酮（含10%三氯乙酸）溶液；1mol/LNaCl溶液：稱取17.75gNaCl，將稱量好的NaCl在燒杯中溶解，用500ml規(guī)格容量瓶定容，取出100ml即可。1%硝酸銀溶液：稱取1g硝酸銀，用無氯去離子水溶解，至體積為100ml水溶液，轉(zhuǎn)移至棕色試劑瓶并貼標(biāo)簽。三、海馬原材料的預(yù)處理將購買的海馬清洗干凈，用剪刀將海馬剪成塊狀，放入-20℃冰箱中，冷凍4h，將冷凍的海馬碎塊放入真空冷凍干燥機(jī)中，-50℃凍干48小時(shí)，凍干后取出，放入超高速粉碎機(jī)中粉碎成細(xì)小粉末，4℃條件下密封備用。四、海馬總蛋白粗提取三氯乙酸/丙酮法提取總蛋白稱取海馬粉碎物100mg，加入配制好的三氯乙酸/丙酮溶液5mL，置于冰箱4℃浸泡24h。4℃條件，10000r/min離心15min，棄去上清，沉淀物用丙酮溶液清洗3遍，室溫條件下，待丙酮揮發(fā)完。將干燥沉淀物用RIPA裂解緩沖液裂解1h，4℃，1000r/min離心30min，取上清液保存下來，得到粗品總蛋白，將總蛋白放入-20℃冰箱保存。BCA法檢測兩種方法總蛋白含量取濃度為0.5mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品溶液，將配置好的標(biāo)準(zhǔn)品按0、1、2、4、8、16、20μL加到96孔板中，每孔標(biāo)準(zhǔn)品不足20μL，加蛋白標(biāo)準(zhǔn)稀釋液補(bǔ)足至20μL。每孔加入配制好的200μLBCA工作液，提取的樣品總蛋白20μL/孔，做三個(gè)復(fù)孔，加入96孔板中。每孔加入200μLBCA工作液，37℃孵育30min，用酶標(biāo)儀檢測562nm波長的吸光值。五、海馬總蛋白透析除鹽取海馬粉末10g，按照最佳提取條件提取總蛋白，10000r/min離心20min，取上清。準(zhǔn)備抽濾裝置，將上清抽濾，收集濾液，裝入50mL離心管中，存放于4℃冰箱保存。把透析袋剪成15cm的小段，在大體積的2%（w/v）將15cm的透析袋放入2%NaHCO3和1mol/L的EDTA溶液中煮沸10分鐘，用蒸餾水沖洗干凈。再用1mol/L的EDTA溶液煮沸10分鐘，用蒸餾水清洗，冷卻后放入20%的乙醇溶液中4℃保存。將提取的總蛋白上清液放入經(jīng)2%NaHCO3和1mol/L的EDTA處理的透析袋中，在4℃條件下用去離子水浸泡，每隔1h換一次去離子水，用1%