細胞因子與粘附因子檢測演示文稿第一頁，共38頁。（優(yōu)選）細胞因子與粘附因子檢測第二頁，共38頁。掌握：細胞因子、粘附分子概念；臨床常用的測定方法熟悉：細胞因子的特性與功能；了解：其他齊齊哈爾醫(yī)學院免疫第三頁，共38頁。第一節(jié)概述第二節(jié)臨床常用的測定方法第三節(jié)細胞因子與黏附分子測定的臨床應用齊齊哈爾醫(yī)學院免疫第四頁，共38頁。第一節(jié)

概述細胞因子(cytokine)

是由免疫細胞及組織細胞表達并分泌，通過結(jié)合細胞表面的相應受體，在細胞間發(fā)揮相互調(diào)控作用的一類小分子蛋白質(zhì)或多肽。齊齊哈爾醫(yī)學院免疫掌握第五頁，共38頁。1.細胞因子的種類

白細胞介素（IL）干擾素（IFN）集落刺激因子（CSF）腫瘤壞死因子（TNF）生長因子（GF）趨化因子一、細胞因子及其受體的特性與功能齊齊哈爾醫(yī)學院免疫熟悉第六頁，共38頁。自分泌內(nèi)分泌血液循環(huán)遠距離作用旁分泌作用于比鄰細胞細胞因子發(fā)揮作用的三種方式作用于分泌細胞自身2.細胞因子的共同特性與生物學功能齊齊哈爾醫(yī)學院免疫熟悉第七頁，共38頁。高效性、多效性、重疊性、網(wǎng)絡性、協(xié)同性、拮抗性迅速高效性非特異性

2.細胞因子的共同特性齊齊哈爾醫(yī)學院免疫熟悉第八頁，共38頁。肥大細胞胸腺細胞BIL-4活化、增殖、分化增殖

增殖

多效性齊齊哈爾醫(yī)學院免疫第九頁，共38頁。IL-2、IL-4、IL-5IL-4+IL-5IL-4IFN-

拮抗性重疊性協(xié)同性均有刺激B細胞增殖的功能更有效地誘導IgE類別轉(zhuǎn)換IL-4阻斷IFN-

誘導類別轉(zhuǎn)化的作用BBB齊齊哈爾醫(yī)學院免疫第十頁，共38頁。2.細胞因子的生物學功能參與調(diào)控免疫細胞的發(fā)育、分化和功能參與調(diào)控免疫應答抗感染抗腫瘤誘導細胞凋亡齊齊哈爾醫(yī)學院免疫了解第十一頁，共38頁。3、細胞因子受體的共同特性細胞因子發(fā)揮作用：

細胞因子與靶細胞表面特異性受體結(jié)合細胞因子受體結(jié)構(gòu)：胞膜外區(qū)、跨膜區(qū)和胞質(zhì)區(qū)組成細胞因子家族：Ⅰ型細胞因子受體家族、Ⅱ型細胞因子受體家族、腫瘤壞死因子受體超家族、免疫球蛋白受體超家族、趨化因子受體家族。齊齊哈爾醫(yī)學院免疫了解第十二頁，共38頁。齊齊哈爾醫(yī)學院免疫第十三頁，共38頁。二、

黏附分子的特性與功能黏附分子（AM）是介導細胞間或細胞與細胞外基質(zhì)間相互結(jié)合的分子。齊齊哈爾醫(yī)學院免疫掌握第十四頁，共38頁。1.黏附分子的特性

黏附分子均為跨膜糖蛋白，由胞膜外區(qū)、跨膜區(qū)和胞質(zhì)區(qū)三部分組成，根據(jù)其結(jié)構(gòu)特點可分為免疫球蛋白超家族、整合素家族、選擇素家族和鈣黏蛋白家族。齊齊哈爾醫(yī)學院免疫了解第十五頁，共38頁。2.黏附分子的主要生物學功能參與細胞的信號轉(zhuǎn)導與活化、細胞分化及發(fā)育參與免疫應答和炎癥反應、淋巴細胞歸巢、傷口愈合與血栓形成、調(diào)節(jié)細胞凋亡等功能齊齊哈爾醫(yī)學院免疫了解第十六頁，共38頁。B細胞與Th細胞間信號轉(zhuǎn)導的細胞粘附分子齊齊哈爾醫(yī)學院免疫第十七頁，共38頁。第二節(jié)臨床常用的測定方法一、酶聯(lián)免疫吸附試驗方法二、化學發(fā)光酶免疫試驗三、流式細胞分析法四、酶聯(lián)免疫斑點試驗五、免疫學測定方法學評價齊齊哈爾醫(yī)學院免疫第十八頁，共38頁。

基因水平：PCR技術。檢測水平生物活性測定

蛋白水平

免疫學測定

第二節(jié)臨床常用的測定方法掌握齊齊哈爾醫(yī)學院免疫第十九頁，共38頁。

生物活性測定：測活性。靈敏性高,特異性低蛋白水平ELISA

免疫學測定化學發(fā)光酶免疫試驗

（含量）流式細胞術酶聯(lián)免疫斑點試驗

第二節(jié)臨床常用的測定方法掌握齊齊哈爾醫(yī)學院免疫第二十頁，共38頁。一、酶聯(lián)免疫吸附試驗（一）基本方法1.直接法---雙抗體夾心法

（測CK最常用方法）2.間接法3.抗原競爭法齊齊哈爾醫(yī)學院免疫熟悉第二十一頁，共38頁。敏感性偏低不能區(qū)分細胞因子的生物學活性（二）方法學評價特異、簡便成本低、易于推廣和標準化等優(yōu)點可同時檢測大量標本且試驗廢棄物便于處理細胞因子測定的首選方法缺點優(yōu)點齊齊哈爾醫(yī)學院免疫了解第二十二頁，共38頁。二、化學發(fā)光酶免疫試驗是以發(fā)光劑作為酶免疫測定的底物，通過發(fā)光反應增強測定的靈敏度。（一）基本方法雙抗體夾心法（二）方法學評價特異性好、靈敏度高、線性范圍寬、試劑穩(wěn)定、可自動化檢測齊齊哈爾醫(yī)學院免疫了解第二十三頁，共38頁。三、流式細胞術（flowcytometry,FCM)分離和培養(yǎng)待檢細胞細胞破膜與固定封閉非特異性結(jié)合位點染色與分析基本方法了解第二十四頁，共38頁。方法學評價優(yōu)點：特異、高效、靈敏.應用:對單個細胞水平CK或AM檢測；檢測細胞內(nèi)CK；膜上AM、CK受體同一細胞內(nèi)兩種以上細胞因子表達

齊齊哈爾醫(yī)學院免疫熟悉第二十五頁，共38頁。四、酶聯(lián)免疫斑點試驗(ELISPOT)

包被有待測細胞因子抗體的微孔板

分泌相應細胞因子的待測細胞

有或無刺激物培養(yǎng)細胞因子被板上的特異性抗體捕獲后續(xù)的反應如同ELISA一個斑點代表一個細胞因子分泌細胞，斑點的顏色深淺程度與細胞分泌的細胞因子量相關

基本原理+了解第二十六頁，共38頁。齊齊哈爾醫(yī)學院免疫第二十七頁，共38頁。方法學評價比常規(guī)ELISA法的靈敏度提高200倍應用：檢測分泌特定細胞因子的細胞熟悉第二十八頁，共38頁。五、免疫學測定方法學評價優(yōu)點：

特異性高操作簡便、快速，無需依賴細胞株影響因素較少且易控制，重復性好，方法容易標準化。缺點：

所測定含量，與其生物活性不一定呈正比結(jié)果與所用的抗體來源及親和力有很大的關系

敏感性相對較低標本中可溶性受體，會影響特異性抗體對細胞因子結(jié)合熟悉第二十九頁，共38頁。第三節(jié)細胞因子與黏附分子測定的臨床應用1.特定疾病的輔助診斷2.機體免疫狀態(tài)的評估3.臨床疾病治療效果的監(jiān)測和指導用藥4.疾病預防的應用熟悉第三十頁，共38頁。一、臨床應用原則方法選擇和結(jié)果判斷作出綜合考慮:

異質(zhì)性

功能交叉性和多樣性

來源的復雜性

組織細胞的非特異性細胞因子和粘附分子第三十一頁，共38頁。

全身免疫或炎癥狀態(tài)——血漿、血清炎癥局部細胞因子的水平——局部分泌液細胞分泌細胞因子的特性——外周單個核細胞細胞表面細胞因子受體或黏附分子定位檢測疾病療效觀察和預后判斷1.標本的適當選取第三十二頁，共38頁。敏感性高-------特異性低，廢棄物難處理活性測定-------不能精確蛋白定量基因分析-------操作繁瑣，有助于疾病分析多種方法—綜合分析—正確評價

2.方法的聯(lián)合應用第三十三頁，共38頁。意義：細胞因子具有網(wǎng)絡狀調(diào)節(jié)的特點級聯(lián)效應或相互抑制作用的網(wǎng)絡系統(tǒng)有助于提供有效的疾病診斷和機體免疫狀態(tài)信息舉例：免疫細胞分泌：IL-1、IL-2、IFN-γ和GM-CSFTh1/Th2細胞平衡狀態(tài)：IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ3.細胞因子的聯(lián)合檢測第三十四頁，共38頁。二、特定疾病的輔助診斷（一）細胞因子與疾病1.細胞因子風暴—IL-1、IL-2、IL-6、IFN-γ等

引發(fā)全身炎癥反應綜合征2.變態(tài)反應性疾病—哮喘IL-4促進IgE合成3.自身免疫病—類風濕性關節(jié)炎（TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、MCP-1）第三十五頁，共38頁。（一）細胞因子與疾病4.免疫缺陷病—IL-2Rγ基因缺陷（重癥聯(lián)合免疫缺陷病）；IL-6（漿細胞瘤、膀胱癌）5.器官移植排斥反應—TNF-α、IL-1、IL-2、IL-6、IFN-γ水平升高6.惡性腫瘤—檢測IL-2、IL-6、IFN-γ水平