練案45基因工程的基本工具和基本操作程序

A組

一、選擇題

1.（2025?高中生物規(guī)范訓(xùn)練）下列關(guān)于基因工程的敘述錯(cuò)誤的是（）

A.基因的“剪刀”是限制酶

B.基因的“針線”是DNA聚合酶

C.常用的運(yùn)載體有質(zhì)粒、噬菌體和動(dòng)植物病毒

D.基因工程操作的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建

答案：B

解析：限制酶能識(shí)別DNA分子中特定的堿基序列進(jìn)而在該部位對(duì)DNA分子實(shí)現(xiàn)剪切,

因而被稱為基因的“剪刀”，A正確；DNA連接酶能夠?qū)蓚€(gè)DNA片段通過(guò)磷酸二酯鍵連接

起來(lái)，因而被稱為基因的“針線”，B錯(cuò)誤；目前常用的運(yùn)載體有質(zhì)粒、噬菌體和動(dòng)植物病毒,

C正確；基因工程的操作一般有四個(gè)步驟，目的基因的篩選與獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、

將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定，其中基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的

核心步驟，D正確。

2.（2024?北師大附中隨堂檢測(cè)）下列有關(guān)限制性內(nèi)切核酸酶的敘述，正確的是（）

A.用限制酶切割DNA分子獲得一個(gè)目的基因時(shí)，被水解的磷酸二酯鍵有2個(gè)

B.限制酶識(shí)別序列越短，則該序列在DNA中出現(xiàn)的概率就越大

C.-CATGJ一和一GJGATCC一序列被限制酶切出的黏性末端可用DNA連接酶連接

D.只有用相同的限制酶處理含目的基因的片段和質(zhì)粒，才能形成重組質(zhì)粒

答案：B

解析：用限制性內(nèi)切核酸酶切割一個(gè)DNA分子獲得一個(gè)目的基因時(shí)，需要切割目的基

因的兩側(cè)，因此要斷裂4個(gè)磷酸二酯鍵，即被水解的磷酸二酯鍵有4個(gè)，A錯(cuò)誤；限制性內(nèi)

切核酸酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核甘酸序列，其識(shí)別序列越短，則該序列在

DNA中出現(xiàn)的概率就越大，B正確；一CATG「和一G】GATCC一序列被限制酶切出的黏性

末端不同，分別為CATG和GATC,不能用DNA連接酶連接，C錯(cuò)誤；用不同的限制性內(nèi)

切核酸酶處理含目的基因的DNA片段和質(zhì)粒，若產(chǎn)生的黏性末端相同，也能形成重組質(zhì)粒,

D錯(cuò)誤。

3.（2025?北師大附中模擬）在重組DNA技術(shù)中，將外源基因?qū)胧荏w細(xì)胞，通常是利

用質(zhì)粒作為載體，下列關(guān)于質(zhì)粒的說(shuō)法正確的是（）

A.質(zhì)粒是獨(dú)立于原核細(xì)胞擬核DNA之外的雙鏈DNA分子

B.沒(méi)有限制酶就無(wú)法使用質(zhì)粒，其復(fù)制和表達(dá)不遵循中心法則

C.質(zhì)粒只有把目的基因整合到受體細(xì)胞的DNA中才能表達(dá)

1/18

D.真正被用作載體的質(zhì)粒都是對(duì)天然質(zhì)粒進(jìn)行過(guò)人工改造的

答案：D

解析：質(zhì)粒是存在于許多細(xì)菌擬核DNA之外以及酵母菌（真核細(xì)胞）細(xì)胞核外的、有自

主復(fù)制能力的小型環(huán)狀DNA分子，A錯(cuò)誤；質(zhì)粒的復(fù)制和表達(dá)都遵循中心法則，B錯(cuò)誤；

只需要將含有目的基因的質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞，無(wú)需整合到受體細(xì)胞的DNA中也能表達(dá)，C

錯(cuò)誤；天然的質(zhì)粒不能直接作為載體，基因工程中用到的質(zhì)粒都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行

過(guò)人工改造的，D正確。

4.如表列舉了幾種限制酶的識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)（箭頭表示相關(guān)酶的切割位點(diǎn)）。圖

是酶切后產(chǎn)生的幾種末端。下列說(shuō)法正確的是（）

限制酶AluIBamH.ISmaISau3AI

識(shí)別AG’CTI1I

GGATCCCCCGGGGATC

TCGACCTAGfGGGGCCCCTAGA

序列tt

—AGGATCA——CCCGATCC——T

IIIIIIII

—TCT——GGGG——ACTAG

①②③④⑤

A.BGTVHI切割的是氫鍵，//"I切割的是磷酸二酯鍵

B.&M3AI和BamHI切割產(chǎn)生的片段能夠相連，但連接后的片段兩者都不能再切割

C.②④⑤對(duì)應(yīng)的識(shí)別序列均能被Sa”3AI識(shí)別并切割

D.T4DNA連接酶即能連接①③，也能連接②⑤，但后者連接效率低

答案：C

解析：BamHI與//MI切割的均是磷酸二酯鍵，A錯(cuò)誤；BamHI切割GiGATCC,

Sa"3Al切割】GATC,故二者切割后產(chǎn)生的黏性末端是相同的，因此二者切割后產(chǎn)生的黏性

末端能夠相連，連接后仍然存在GATC的序列，能被Sa"3Al切割，但是瓦?HI不一定能

切割，B錯(cuò)誤；②④⑤對(duì)應(yīng)的識(shí)別序列都存在GATC,都能被Sa"3Al識(shí)別并切割，C正確;

T4DNA連接酶既可以連接黏性末端也可以連接平末端，而圖中①③屬于平末端，②⑤是黏

性末端，T4DNA連接酶連接平末端時(shí)效率較低，D錯(cuò)誤。

5.（2025?東北育才學(xué)校適應(yīng)性測(cè)試）常規(guī)PCR只能擴(kuò)增兩引物間的DNA區(qū)段，要擴(kuò)增

已知DNA序列兩側(cè)的未知DNA序列，可用反向PCR技術(shù)。反向PCR技術(shù)擴(kuò)增的原理如

圖所示。下列敘述正確的是（）

MLN

侏利序列）（已知序列）侏可序列）酶切

a

&e環(huán)化

V

A.酶切階段，L中不能含有酶切時(shí)所選限制酶的識(shí)別序列

2/18

B.環(huán)化階段，可選￡.co〃DNA連接酶而不能選T4DNA連接酶

C.應(yīng)選擇引物2和引物3進(jìn)行PCR,且二者不能互補(bǔ)配對(duì)

D.PCR擴(kuò)增，每輪循環(huán)前應(yīng)加入限制酶將環(huán)狀DNA切割成線狀

答案：A

解析：在酶切階段，已知序列L中不能含有酶切時(shí)所選限制酶的識(shí)別序列，不然會(huì)將

已知序列L切斷，造成序列識(shí)別混亂，A正確；T4DNA連接酶或￡.co〃DNA連接酶都可

以用來(lái)連接黏性末端，因此環(huán)化階段，可選用Eco〃DNA連接酶或T4DNA連接酶，B錯(cuò)

誤；PCR過(guò)程需要兩種引物，能分別與目的基因兩條鏈的3,端通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，為

保證延伸的是已知序列兩側(cè)的未知序列，應(yīng)該選擇引物1和引物4,且二者間不能互補(bǔ)配對(duì),

C錯(cuò)誤；PCR的擴(kuò)增只需要第一次循環(huán)前加入足夠的限制酶，并不需要每輪都加入，D錯(cuò)誤。

6.（2024?山東日照校際聯(lián)合考試）下列關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的

是（）

A.可選用在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌作為實(shí)驗(yàn)材料

B.向含DNA的濾液中加入2moi/L的NaCl溶液，有利于去除雜質(zhì)

C.將過(guò)濾液放入4℃冰箱或加入預(yù)冷的酒精都可抑制DNA酶的活性

D.鑒定DNA時(shí)，將二苯胺試劑加入到含DNA的溶液中即可出現(xiàn)藍(lán)色

答案：D

解析：大腸桿菌是細(xì)菌，含有擬核和質(zhì)粒，DNA含量也較多，適合提取DNA,故可選

用在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌作為實(shí)驗(yàn)材料，A正確；在2mol/L的NaCl溶液中DNA

的溶解度較高，攪拌過(guò)濾后，DNA存在于濾液中，有利于去除雜質(zhì)，B正確；酶活性的發(fā)

揮需要適宜的溫度等條件，將過(guò)濾液放入4℃冰箱或加入預(yù)冷的酒精的目的是抑制DNA酶

的活性，避免DNA被水解，C正確；向DNA溶液中加入二苯胺試劑后還需要沸水浴加熱

才可出現(xiàn)藍(lán)色，D錯(cuò)誤。

7.用A和B兩種限制酶同時(shí)和分別處理同一DNA片段，限制酶對(duì)應(yīng)切點(diǎn)一定能切開(kāi)。

兩種酶切位點(diǎn)及酶切產(chǎn)物電泳分離結(jié)果如圖1和圖2所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

限制酶A限制酶BY

1

3500X1500500

圖1

電泳方向A+B酶①②

d(

)q

M玄

?

圖2

A.圖1中限制酶A、B識(shí)別的核甘酸序列不相同

3/18

B.圖1中X代表的堿基對(duì)數(shù)為4500

C.推測(cè)圖1中Y是限制酶B的酶切位點(diǎn)

D.推測(cè)圖2中①是限制酶A處理得到的酶切產(chǎn)物

答案：C

解析：酶具有專一性，不同的限制酶識(shí)別并切割不同的核甘酸序列，A正確；從圖2

的A+B酶一組結(jié)果可知，限制酶A和B切完后總共有4個(gè)片段，長(zhǎng)度分別為500、1500、

3500、4500,而圖1表示酶A和B切割時(shí)只會(huì)得到3個(gè)片段，長(zhǎng)度應(yīng)該是3500、X、2000,

所以可推測(cè)Y是限制酶A或限制酶B的酶切位點(diǎn)，X代表的堿基對(duì)數(shù)為4500,B正確，C

錯(cuò)誤；根據(jù)以上結(jié)論，圖1中有兩個(gè)限制酶A的酶切位點(diǎn)，切割完后得到三個(gè)長(zhǎng)度的片段:

3500、(4500+1500)>500,正好與圖2的①結(jié)果相符，故推測(cè)圖2中①是限制酶A處理

得到的酶切產(chǎn)物，D正確。

二、非選擇題

8.(2024?遼寧高三聯(lián)考三模)某真菌的W基因可編碼一種高效降解纖維素的酶：已知圖

中W基因轉(zhuǎn)錄方向?yàn)閺淖笸?。為使放線菌產(chǎn)生該酶，以圖1中質(zhì)粒為載體，進(jìn)行轉(zhuǎn)基因。

不同限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如下表所示。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

限制酶BamHIEcoRIMfeIKpnIHindUI

識(shí)別序

列及切GiGATTCGiAATTCCiAATTGGGTAOCA1AGCTT

割位點(diǎn)

終止子

啟動(dòng)子

BamHI

MfeI

氨芳青霉素EcoRI

抗性基因HindHI

KpnI

啟動(dòng)子

終止子

EcoRI

甲

甲鏈5'

乙鏈3

(1)限制酶主要是從中分離純化出來(lái)的。應(yīng)使用限制酶切割

圖1中質(zhì)粒，使用限制酶切割圖2中含W基因的DNA片段，以獲得能正確

表達(dá)W基因的重組質(zhì)粒。

(2)與質(zhì)粒中啟動(dòng)子結(jié)合的酶是。啟動(dòng)子通常具有物種特異性，在質(zhì)粒中

4/18

插入W基因，其上游啟動(dòng)子應(yīng)選擇啟動(dòng)子（選填“植物”“真菌”或“放線菌”）。

（3）W基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈?zhǔn)牵ㄟx填“甲鏈”或“乙鏈”）。利用PCR技術(shù)對(duì)W基因進(jìn)

行擴(kuò)增的原理是,子鏈的延伸方向是o

（4）研究人員欲對(duì)W基因的mRNA進(jìn)行RT-PCR,已知其mRNA的序列為5，一

UGAACGCUA...（中間序列）…GUCGACUCG-31為了便于將擴(kuò)增后的基因和載體成功構(gòu)

建成重組質(zhì)粒，用于PCR擴(kuò)增的引物應(yīng)為=

A.5-TGAACGCTA…

B.5-CCAGTCGAC…

C.5-GAATTCTGA…

D.5-AAGCTTCGA…

答案：（1）原核生物MfeI、7/zMdIIIEcoRI、H加dill（2）RNA聚合酶放線菌（3）

乙鏈DNA半保留復(fù)制57（4）A

解析：（1）限制酶主要是從原核生物分離純化出來(lái)的。根據(jù)題圖信息“圖中W基因轉(zhuǎn)錄方

向是從左往右”“質(zhì)粒啟動(dòng)子到終止子方向?yàn)轫槙r(shí)針”，故重組質(zhì)粒的啟動(dòng)子應(yīng)在W基因左側(cè)，

終止子應(yīng)在W基因右側(cè)，W基因右側(cè)只能用以“dill切割，W基因左側(cè)有2a%HI、Kp”I、

EcoRI三種酶切位點(diǎn)，結(jié)合質(zhì)粒情況及切割位點(diǎn)識(shí)別序列，應(yīng)使用限制酶順I(yè)、/“dill切

割圖中質(zhì)粒，使用限制酶EcoRI（切割出的黏性末端與順I(yè)相同）、切割圖中含W

基因的DNA片段，以獲得能正確表達(dá)W基因的重組質(zhì)粒，因?yàn)橄拗泼疙?xiàng)I和限制酶

EcoRI切割露出相同的黏性末端。

（2）啟動(dòng)子啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄，故與質(zhì)粒中啟動(dòng)子結(jié)合的酶是RNA聚合酶；根據(jù)題干信息

“啟動(dòng)子通常具有物種特異性”，目標(biāo)是使放線菌產(chǎn)生高效降解纖維素的酶，故應(yīng)選擇放線菌

的質(zhì)粒，在質(zhì)粒中插入W基因，其上游啟動(dòng)子應(yīng)選擇放線菌啟動(dòng)子。

（3）W基因轉(zhuǎn)錄方向是從左向右，mRNA鏈的合成方向?yàn)橄?3,與乙鏈從左向右

互補(bǔ)，故W基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈?zhǔn)且益?。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的原理是DNA半保留

復(fù)制，子鏈延伸方向?yàn)橄?31

（4）引物與模板鏈的3,端結(jié)合，mRNA也與模板鏈結(jié)合，因此引物與mRNA序列相似，

不同的是引物是一段DNA,因此將mRNA中的U替換成T即是引物序列，即5，一UGAAC

-CCUA...（中間序歹?。荩?..GUCCACUCG—3,=>5,—TGAACCCTA...（中間序

歹（J）…GTCCACTCG—3、與A相同。故選A。

B組

一、選擇題

1.（2025?高中生物北師大版同步訓(xùn)練）如表為幾種限制酶的切割位點(diǎn)，相關(guān)敘述不正確

的是（）

限制酶BamHIBelISau3AI

5/18

識(shí)別序列及G1GATCCTlGATCA1GATC

切割位點(diǎn)CCTAGfGACTAGtTCTAGr

A.限制酶能夠水解DNA上特定的磷酸二酯鍵

B.BamHI切割的序列一定能被Saw3AI切割

C.Bell切割的序列一定能被Sau3AI切割

D.以上信息說(shuō)明限制酶沒(méi)有特異性和專一性

答案：D

解析：限制酶能夠水解DNA上特定的磷酸二酯鍵，形成黏性末端或平末端，A正確；

Sau3AI識(shí)別的序列為JGATC,BamHI識(shí)別的序列為G，GATCC,后者識(shí)別序列中包含前者,

因此BamHI切割的序列一定能被Sau3AI切割，B正確;BelI識(shí)別序列包含Sau3AI的識(shí)

別序列，因此341切割的序列一定能被Sa“3Al切割，C正確；限制酶需要識(shí)別特定的序

列后進(jìn)行切割，以上信息說(shuō)明限制酶有特異性和專一性，D錯(cuò)誤。

2.（2024?沈陽(yáng)二中三模）將熒光蛋白基因與目的基因連接后導(dǎo)入植物體細(xì)胞中，其表達(dá)

產(chǎn)物既具有熒光蛋白的特性，又保持了目的基因表達(dá)產(chǎn)物的活性，因此可以通過(guò)檢測(cè)熒光強(qiáng)

度來(lái)檢測(cè)目的基因的表達(dá)水平。下列有關(guān)該技術(shù)的說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）

A.可使用同種限制酶切割熒光蛋白基因和目的基因以便連接

B.需要將熒光蛋白基因和目的基因分別連接在不同的啟動(dòng)子后面

C.熒光強(qiáng)度高的細(xì)胞，目的基因的表達(dá)水平一般也高

D.熒光蛋白還可用于檢測(cè)目的基因表達(dá)產(chǎn)物的轉(zhuǎn)移和分布情況

答案：B

解析：使用同種限制酶切割熒光蛋白基因和目的基因，可以形成相同的末端，以便連接,

A正確；需要將熒光蛋白基因和目的基因連接在相同的啟動(dòng)子后面，B錯(cuò)誤；熒光蛋白基因

進(jìn)入受體細(xì)胞后會(huì)表達(dá)出熒光蛋白，熒光強(qiáng)度高的細(xì)胞，目的基因的表達(dá)水平一般也高，C

正確;熒光蛋白基因與目的基因連接后導(dǎo)入植物體細(xì)胞中，其表達(dá)產(chǎn)物具有熒光蛋白的特性,

可以通過(guò)檢測(cè)熒光強(qiáng)度來(lái)檢測(cè)目的基因表達(dá)產(chǎn)物的轉(zhuǎn)移和分布情況，D正確。

3.（2024?大連市高三二模）將棉花的酶D基因與擬南芥的轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因相連，導(dǎo)入雙子葉

植物油菜的葉片細(xì)胞，可培育出高產(chǎn)轉(zhuǎn)基因油菜品種。下圖是需要用到的Ti質(zhì)粒。下列敘

述錯(cuò)誤的是（）

T-DNA

復(fù)制起點(diǎn)

A.必須用相同的限制酶對(duì)目的基因和T—DNA進(jìn)行切割

B.四環(huán)素抗性基因不可檢測(cè)目的基因是否表達(dá)成功

6/18

C.將重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌后，再用其侵染油菜葉片細(xì)胞

D.兩個(gè)基因的表達(dá)產(chǎn)物不能影響油菜葉片細(xì)胞的存活

答案：A

解析：對(duì)目的基因和T-DNA進(jìn)行切割需要形成相同的黏性末端，除用相同的限制酶

外，也可用同尾酶（不同的限制酶，卻能形成相同的黏性末端）切割，A錯(cuò)誤；四環(huán)素抗性基

因?qū)儆跇?biāo)記基因，可用于重組質(zhì)粒的初步篩選，但不能用于檢測(cè)目的基因是否表達(dá)成功，B

正確；將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，將重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌后，再用其

侵染油菜葉片細(xì)胞，C正確；目的基因不能影響植物正常的生長(zhǎng)，故兩個(gè)基因的表達(dá)產(chǎn)物不

能影響油菜葉片細(xì)胞的存活，D正確。

4.（2024?沈陽(yáng)市五模）下圖為基因工程部分操作步驟，質(zhì)粒的外側(cè)鏈為a鏈，內(nèi)側(cè)鏈為

b鏈。基因/電，轉(zhuǎn)錄的模板鏈屬于a鏈的片段。ALDH2基因編碼區(qū)首端到末端（其中一條鏈）

的序列為5，-ATCCATGCGCTC...（中間核甘酸序列）...CAGTGAGTAGCG—3，。四種限制酶

的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)見(jiàn)下表。以下說(shuō)法不正確的是（）

注：/如「為氨苦青霉素抗性基因，嶷，為四環(huán)素抗性基因

限制酶BamHIPstIXhoIXbaI

識(shí)別序列和切

G1GATCCOTGCAGOTCGAGT^CTAGA

割位點(diǎn)（5—3）

A.質(zhì)粒復(fù)制的模板鏈?zhǔn)恰癮和b”，基因嶷，轉(zhuǎn)錄的模板鏈?zhǔn)莃鏈的片段

B.過(guò)程②是基因工程的核心步驟，過(guò)程④的培養(yǎng)基具有鑒定作用

C.為擴(kuò)增目的基因，需選擇的引物對(duì)為：5，-TCTAGACGCTACTCACTG-3^D5，一

GGATCCATCCATGCGCTC—3'

D.根據(jù)選定的引物，經(jīng)過(guò)5次循環(huán)，即可獲得32個(gè)符合要求的目的基因

答案：D

解析：質(zhì)粒的a和b兩條鏈都作為模板進(jìn)行復(fù)制，定/的轉(zhuǎn)錄方向與/加”的轉(zhuǎn)錄方向相

反，說(shuō)明Tfe/的轉(zhuǎn)錄模板和/加吠轉(zhuǎn)錄模板不在一條鏈上，轉(zhuǎn)錄的模板鏈屬于a鏈的片

7/18

段，則作，的轉(zhuǎn)錄模板鏈屬于b鏈的片段，A正確；過(guò)程②表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，是基

因工程的核心步驟，過(guò)程④表示目的基因的檢測(cè)與鑒定，所以該培養(yǎng)基具有鑒定作用，B正

確；擴(kuò)增目的基因需要兩種引物，能分別與目的基因兩條鏈的3,端通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合。

根據(jù)4LD//2基因編碼區(qū)首端到末端的序列為5-ATCCATGCGGCTC...(中間核昔酸序

歹!J)…CAGTGAGTAGCG—3，，且引物5端需要添加瓦?HI、亂。I的識(shí)別序列，可推測(cè)引

物鏈為51-TCTAGACGCTACTCACTG-3f,5r-GGATCCATCCATGCGCTC-3f,C正確；

利用PCR技術(shù)可以擴(kuò)增目的基因，根據(jù)DNA半保留復(fù)制的特點(diǎn)，根據(jù)PCR反應(yīng)原理，前

兩次循環(huán)無(wú)法得到符合要求的目的基因，第3次循環(huán)可以得到等長(zhǎng)雙鏈，這樣的雙鏈DNA

分子的兩端兩條鏈均有限制酶識(shí)別序列。3次循環(huán)可以得到2個(gè)，4次循環(huán)后有8個(gè)符合要

求的目的基因，以此類推，可推知，經(jīng)過(guò)6次循環(huán)，可獲得32個(gè)符合要求的目的基因，D

錯(cuò)誤。

5.(多選X2025?山東棗莊三中模擬)某線性DNA分子含有5000個(gè)堿基對(duì)(bp),先用限

制酶a切割，再把得到的產(chǎn)物用限制酶b切割，得到的DNA片段大小如表。限制酶a和b

的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)如圖所示。下列敘述正確的是()

a酶切割產(chǎn)物(bp)b酶再次切割產(chǎn)物(bp)

2100；1400；1900；200；800；

1000；500600；1000；500

a酶b酶

II

-AGATCT--GGATCC-

-TCTAGA--CCTAGG-

小f

A.a酶與b酶切斷的化學(xué)鍵相同

B.a酶與b酶切出的黏性末端能相互連接

C.僅用b酶切割，則得到2個(gè)DNA分子產(chǎn)物

D.限制酶將一個(gè)DNA分子片段切成兩個(gè)片段需消耗兩個(gè)水分子

答案：ABD

解析：限制酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵，A正確；由圖可以看出，a酶和b酶切割

后產(chǎn)生的黏性末端互補(bǔ)，它們之間能相互連接,B正確；由表格可以看出，b酶把大小為2100

bp的DNA片段切成大小分別為1900bp和200bp的兩個(gè)DNA片段，把大小為1400bp的

DNA片段切成大小分別為800bp和600bp的兩個(gè)DNA片段，說(shuō)明b酶在該DNA分子上

有2個(gè)切割位點(diǎn)，因此僅用b酶切割，可得到3個(gè)DNA分子產(chǎn)物，C錯(cuò)誤；限制酶切一個(gè)

DNA為兩個(gè)片段時(shí)需水解2個(gè)磷酸二酯鍵，因此該過(guò)程消耗2個(gè)H2O,D正確。

8/18

6.（多選）如圖是培育轉(zhuǎn)基因大腸桿菌的相關(guān)圖示，圖中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的切割位點(diǎn)。

下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（)

四環(huán)素抗性基因

BamUI引物甲ffindlH

I1=^!

*/_I

Be"1目的基因引物丙引物乙Sa"3AI

乙

A.若通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增該目的基因，應(yīng)該選用引物甲和引物乙

B.圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)選用Bell和HRdlll切斷氫鍵

C.檢測(cè)目的基因在受體細(xì)胞中是否轉(zhuǎn)錄出mRNA,可以通過(guò)PCR等技術(shù)

D.質(zhì)粒上的抗性基因有利于篩選含目的基因的細(xì)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)

答案：ABD

解析：PCR技術(shù)要求兩種引物分別和目的基因的兩條單鏈結(jié)合，沿相反的方向合成子

鏈，故所用的引物應(yīng)為圖2中引物甲和引物丙，A錯(cuò)誤；根據(jù)質(zhì)粒上限制酶識(shí)別序列的分布

位點(diǎn)可知，構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，不能選用限制酶汨I,否則會(huì)導(dǎo)致兩種抗性基因都被破壞，

因此應(yīng)該選擇BelI和這兩種限制酶以及DNA連接酶，限制酶斷裂磷酸二酯鍵，B

錯(cuò)誤;檢測(cè)目的基因在受體細(xì)胞中是否轉(zhuǎn)錄出mRNA,先逆轉(zhuǎn)錄得到eDNA,再通過(guò)PCR

等技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，C正確；質(zhì)粒上的抗性基因有利于篩選含目的基因的細(xì)胞，但不能促進(jìn)目

的基因的表達(dá)，D錯(cuò)誤。

7.（多選）（2025?遼寧沈陽(yáng)高三質(zhì)量監(jiān)測(cè)）科研人員通過(guò)PCR技術(shù)獲得白蛋白啟動(dòng)子，將

該啟動(dòng)子與Cre重組酶基因結(jié)合構(gòu)建基因表達(dá)載體，培育出在肝細(xì)胞中特異性表達(dá)Cre重組

酶的轉(zhuǎn)基因小鼠。下列相關(guān)敘述正確的是（）

A.將基因表達(dá)載體導(dǎo)入肝細(xì)胞經(jīng)培育獲得轉(zhuǎn)基因小鼠

B.利用PCR技術(shù)獲得白蛋白啟動(dòng)子需要兩種引物

C.通過(guò)抗原一抗體雜交技術(shù)可檢測(cè)基因是否完成表達(dá)

D.將發(fā)育到原腸胚時(shí)期的重構(gòu)胚向受體進(jìn)行移植

答案：BC

9/18

解析：將該表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵以獲得轉(zhuǎn)基因小鼠，A錯(cuò)誤；DNA聚合酶不能從頭開(kāi)

始合成DNA,只能從引物的3端（子鏈的3端）開(kāi)始延伸DNA,因此PCR過(guò)程中需要添加引

物才能完成復(fù)制過(guò)程，要合成兩條子鏈，需要兩種引物，B正確；Cre基因完成表達(dá)的產(chǎn)物

是蛋白質(zhì)，故可通過(guò)抗原一抗體雜交技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，C正確；胚胎移植需要胚胎發(fā)育至桑甚

胚或囊胚階段，D錯(cuò)誤。

二、非選擇題

8.（2025?湖南九校聯(lián)盟）在未斷奶的小牛胃中存在一種凝乳酶，被廣泛應(yīng)用于奶酪和酸

奶的生產(chǎn)。科學(xué)家將編碼牛凝乳酶的基因（長(zhǎng)度L5kb）導(dǎo)入大腸桿菌獲得工程菌，再通過(guò)工

業(yè)發(fā)酵批量生產(chǎn)凝乳酶。

⑴提取小牛胃黏膜組織中的mRNA,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA,選擇合適的引物進(jìn)行PCR

擴(kuò)增，PCR引物堿基數(shù)一般在20?30個(gè)之間，過(guò)短則導(dǎo)致。

（2）如表為操作過(guò)程中可能用到的限制酶，圖1為獲得的目的基因及末端（除黏性末端序

列外，其他堿基序列省略），圖2為要使用的質(zhì)粒，其中的嶷心/加"分別為四環(huán)素抗性基

因和氨葦青霉素抗性基因。對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行切割時(shí)，選用的兩種限制酶為。目的基

因和質(zhì)粒能連接成重組質(zhì)粒的原因是,導(dǎo)入的目的基因在受體

細(xì)胞中能成功表達(dá)的理論基礎(chǔ)是=

限制酶BamHIBelISmaISau3AI

識(shí)別位點(diǎn)及

—GiGATCC——TiGATCA—CCOGGG—1GATC—

切割位點(diǎn)

（3）將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，隨機(jī)挑取菌落（分別編

號(hào)為1、2、3、4）培養(yǎng)并提取質(zhì)粒，用（2）中選用的兩種限制酶進(jìn)行酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)電泳分

離，結(jié)果如下圖，號(hào)菌落的質(zhì)粒很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒。

10/18

注：M為指示分子大小的標(biāo)準(zhǔn)參照物；小于0.2kb的DNA分子條帶未出現(xiàn)在圖中

(4)已知凝乳酶第20、24位氨基酸變成半胱氨酸，其活性可顯著提高。科研人員希望運(yùn)

用蛋白質(zhì)工程技術(shù)獲得活性更強(qiáng)的凝乳酶，請(qǐng)選用合適的措施編號(hào)并排序：

________________o(用箭頭表不)

①重組DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌

②隨機(jī)改變凝乳酶基因的序列

③分析突變蛋白功能，設(shè)計(jì)結(jié)構(gòu)

④改變凝乳酶基因的特定序列

⑤培養(yǎng)細(xì)胞后提純突變蛋白

⑥將改變后的凝乳酶基因與質(zhì)粒重組

答案：(1)特異性降低(2*41和即。1有相同的黏性末端可發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)遺

傳信息的傳遞都遵循中心法則或生物界共用一套遺傳密碼

(3)四環(huán)素2(4)③一④一⑥一①一⑤

解析：(1)引物與模板之間遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，若引物太短則特異性降低。

(2)基因表達(dá)載體構(gòu)建時(shí)，需要將目的基因和載體切出相同的黏性末端，圖示及7MHi會(huì)

破壞目的基因，故對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行切割時(shí)，選用的兩種酶為和I。目的基因和質(zhì)粒能

連接成重組質(zhì)粒的原因是有相同的黏性末端可發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)，導(dǎo)入的目的基因在受體細(xì)

胞中能成功表達(dá)的理論基礎(chǔ)是遺傳信息的傳遞都遵循中心法則或生物界共用一套遺傳密碼。

(3)圖中構(gòu)建目的基因表達(dá)載體時(shí)，氨葦青霉素抗性基因被限制酶破壞，故將轉(zhuǎn)化后的

大腸桿菌接種在四環(huán)素的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)及篩選；如果用BelI和SmaI兩種酶切割重組

質(zhì)粒，電泳后將獲得分別含有質(zhì)粒和目的基因的兩條條帶，2、3含有兩條條帶，2中其中一

條條帶為1.5kb,3中其中一條條帶為1kb,由于牛凝乳酶的基因大小為1.5kb,所以對(duì)應(yīng)電

泳圖是菌落2很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒。

(4)蛋白質(zhì)工程的過(guò)程為：預(yù)期蛋白質(zhì)功能一設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)一推測(cè)應(yīng)有氨基酸

序列一找到對(duì)應(yīng)的脫氧核甘酸序列(基因)，其前提是基因工程，故運(yùn)用蛋白質(zhì)工程技術(shù)從大

腸桿菌中獲得活性更強(qiáng)的凝乳酶，具體過(guò)程為：③分析突變蛋白功能，設(shè)計(jì)結(jié)構(gòu)一④改變凝

乳酶基因的特定序列一⑥將改變后的凝乳酶基因與質(zhì)粒重組一①重組DNA分子導(dǎo)入大腸桿

菌一⑤培養(yǎng)細(xì)胞后提純突變蛋白。

C組

一、選擇題

1.(2025?北師大附中模擬)限制性內(nèi)切酶介導(dǎo)的整合技術(shù)(REMI)是一種研究基因的新方

法。用限制酶切得到的線性質(zhì)粒與該酶組成的轉(zhuǎn)化混合物進(jìn)入并轉(zhuǎn)化細(xì)胞時(shí)，會(huì)切割受體細(xì)

胞基因組，產(chǎn)生與線性質(zhì)?；パa(bǔ)的黏性末端，線性質(zhì)粒通過(guò)堿基配對(duì)插入基因組。如果插入

發(fā)生在一個(gè)已知基因的內(nèi)部，則該基因的功能可能改變或喪失，即發(fā)生了基因突變。下列相

11/18

關(guān)敘述，不正確的是（）

A.當(dāng)外源質(zhì)粒帶有抗性基因時(shí)，可根據(jù)其在受體細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞

B.REMI技術(shù)使基因突變具有隨機(jī)性，且限制酶識(shí)別序列越長(zhǎng)，隨機(jī)性越大

C.所有的限制酶都具有專一性

D.限制酶、DNA連接酶、載體是REMI技術(shù)的三種分子工具

答案：B

解析：抗性基因?qū)儆跇?biāo)記基因，標(biāo)記基因可將含有目的基因的重組質(zhì)粒篩選出來(lái)，故當(dāng)

外源質(zhì)粒帶有抗性基因時(shí)，可根據(jù)其在受體細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞，A正確；分析

題意可知，REMI技術(shù)是一種切割基因的方法，其本質(zhì)是基因工程，該技術(shù)可引發(fā)基因突變;

由于限制酶能夠識(shí)別特定序列，并在特定位點(diǎn)進(jìn)行切割，故限制酶識(shí)別序列越長(zhǎng)，隨機(jī)性越

小，B錯(cuò)誤；限制酶能識(shí)別特定的核昔酸序列，并在特定位點(diǎn)進(jìn)行切割，即所有的限制酶都

具有專一性，C正確；結(jié)合題意可知，REMI技術(shù)需要用限制酶切割質(zhì)粒，且需要進(jìn)入受體

細(xì)胞發(fā)揮作用，則其本質(zhì)是基因工程技術(shù)，基因工程中需要用到限制酶、DNA連接酶、載

體三種工具，D正確。

2.CRISPR-Cas9是近年來(lái)生物學(xué)科研的熱門技術(shù)，該技術(shù)是細(xì)菌的一種防御機(jī)制。

如圖所示，當(dāng)細(xì)菌感知到噬菌體侵入時(shí)，會(huì)通過(guò)gRNA識(shí)別噬菌體DNA,并通過(guò)Cas9蛋白

切斷目標(biāo)DNA,從而起到防御作用。下列關(guān)于該機(jī)制的敘述正確的是（）

A.噬菌體DNA的變化體現(xiàn)了基因突變的不定向性

B.gRNA與目標(biāo)DNA結(jié)合片段中最多含有5種核甘酸

C.Cas9蛋白可破壞DNA分子的磷酸二酯鍵

D.高倍光學(xué)顯微鏡可觀察到該現(xiàn)象

答案：C

解析：噬菌體被細(xì)菌gRNA識(shí)別并被Cas9蛋白切割屬于特定位點(diǎn)的切割，不是基因突

變，不能體現(xiàn)基因突變的不定向性，A錯(cuò)誤；gRNA為RNA,最多含有4種核糖核甘酸，

DNA含有4種脫氧核甘酸，故gRNA與目標(biāo)DNA結(jié)合片段中最多含有8種核昔酸，B錯(cuò)

誤；Cas9蛋白可切斷目標(biāo)DNA,該過(guò)程破壞的是DNA分子的磷酸二酯鍵，C正確；該過(guò)

程屬于分子水平的改變，光學(xué)顯微鏡下無(wú)法觀察到該現(xiàn)象，D錯(cuò)誤。

3.（2025?山東濰坊安丘一中模擬）大腸桿菌經(jīng)溶菌酶和洗滌劑處理后，擬核DNA就會(huì)

纏繞在細(xì)胞壁碎片上，靜置一段時(shí)間，質(zhì)粒分布在上清液中，利用上述原理可初步獲得質(zhì)粒

DNAo用三種限制酶處理提取的產(chǎn)物，電泳結(jié)果如圖所示。下列關(guān)于質(zhì)粒的粗提取和鑒定

12I18

的敘述錯(cuò)誤的是（）

1限制酶I

2限制酶II

3限制酶m

123

A.提取DNA時(shí)可加入酒精，使溶于酒精的蛋白質(zhì)等物質(zhì)溶解

B.將提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液后可用二苯胺試劑進(jìn)行鑒定

C.電泳鑒定DNA利用了DNA在電場(chǎng)中會(huì)向著它所帶電荷相反的電極移動(dòng)的原理

D.根據(jù)電泳結(jié)果，質(zhì)粒上一定沒(méi)有限制酶［和II的切割位點(diǎn)，而有限制酶III的切割位

點(diǎn)

答案：D

解析：由于蛋白質(zhì)可溶于酒精，而DNA在冷酒精中溶解度很低，所以在提取DNA時(shí)

加入酒精，使溶于酒精的蛋白質(zhì)等物質(zhì)溶解，而讓DNA析出，A正確；由于DNA在2moi/L

NaCl溶液中溶解度較大，DNA遇二苯胺試劑會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色，所以將提取的DNA溶于2moi/L

NaCl溶液后，可用二苯胺試劑在沸水浴條件下進(jìn)行鑒定，B正確；DNA帶負(fù)電，電泳鑒定

DNA利用了DNA在電場(chǎng)中會(huì)向著它所帶電荷相反的電極移動(dòng)的原理，C正確；因?yàn)橘|(zhì)粒的

本質(zhì)是環(huán)狀的DNA,限制酶I和II處理后電泳只有一條條帶，可能是該質(zhì)粒上有一個(gè)切割

位點(diǎn)，也可能沒(méi)有切割位點(diǎn)，D錯(cuò)誤。

4.（2024?沈陽(yáng)第120中學(xué)第十次質(zhì)量監(jiān)測(cè)）菊花是兩性花，CFY基因是控制植物花分生

組織形成的基因。過(guò)量表達(dá)LFY導(dǎo)致植物提早開(kāi)花。為使菊花花期提前，科學(xué)家制備了含

有過(guò)量表達(dá)的工FY基因的轉(zhuǎn)基因菊花。重組Ti質(zhì)粒的部分信息及實(shí)驗(yàn)流程如下圖所示，其

中啟動(dòng)子均為真核細(xì)胞啟動(dòng)子。下列敘述正確的是（）

A.在含潮霉素的培養(yǎng)基上存活的農(nóng)桿菌才可用于侵染菊花葉片

B.過(guò)程①②③所使用的培養(yǎng)基中植物激素的濃度和配比可以相同

C.I是一團(tuán)具有一定組織結(jié)構(gòu)松散的薄壁細(xì)胞團(tuán)，具有較強(qiáng)的分裂和分化能力

D.誘導(dǎo)出芽和根的試管苗要先煉苗以適應(yīng)外界的低濕強(qiáng)光環(huán)境才可進(jìn)行移栽

13I18

答案：D

解析：重組質(zhì)粒中含有潮霉素抗性基因，能表達(dá)出潮霉素抗性物質(zhì)，在含潮霉素的培養(yǎng)

基上存活的農(nóng)桿菌不一定是導(dǎo)入LFY基因的農(nóng)桿菌，還有可能是只導(dǎo)入質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，因

此只有在含潮霉素的培養(yǎng)基上存活并導(dǎo)入/尸Y基因的農(nóng)桿菌才可用于侵染菊花葉片，A錯(cuò)

誤;植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的含量和比例會(huì)影響愈傷組織的生長(zhǎng)和

分化，在脫分化形成愈傷組織的過(guò)程中要求生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比例相當(dāng)，而在再分化過(guò)

程中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素比例高有利于根的分化，比例低有利于芽的分化，B錯(cuò)誤；愈傷組

織是一團(tuán)排列疏松而無(wú)規(guī)則、高度液泡化的、呈無(wú)定形狀態(tài)的、具有分生能力的薄壁細(xì)胞，

不具有特定的結(jié)構(gòu)和功能，C錯(cuò)誤；誘導(dǎo)出芽和根的試管苗要先煉苗有助于試管苗逐漸適應(yīng)

室外環(huán)境，并減少在移栽后因氣候和土壤變化而造成的傷害，適應(yīng)外界的低濕強(qiáng)光環(huán)境才可

進(jìn)行移栽，D正確。

5.（多選）（2025?邯鄲三校聯(lián)考）某研究小組擬用限制酶和DNA連接酶為基本工具，對(duì)目

的基因和質(zhì)粒進(jìn)行切割、連接，以構(gòu)建含目的基因的重組表達(dá)載體。該小組前期研究獲得如

下2個(gè)信息：①4種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)、目的基因所在的外源DNA片段中各種

酶識(shí)別位置以及質(zhì)粒上4種酶的識(shí)別位置（如下圖）；②有些不同種類的酶能識(shí)別DNA分子

中不同核昔酸序列，但切割產(chǎn)生相同黏性末端，這樣的限制酶稱為同尾酶。下列有關(guān)敘述錯(cuò)

誤的是（）

5'-A：TAGT-3'5,-AGCTT-3,5,-T^TAGA-3,5'-GATKTC-3'

3'—TGATCA—5'3,-TTCGAA-5/3'—AGATCT—5'3,-CTATAG-5,

tfff

酶1酶2酶3酶4

酶1酶2酶3酶1酶1酶2酶3

A.構(gòu)建重組表達(dá)載體時(shí)，目的基因和質(zhì)粒均用酶3切割，用Eco〃DNA連接酶連接成

功率最高

B.構(gòu)建重組表達(dá)載體時(shí)，目的基因用酶2切割，質(zhì)粒用酶4切割，用T4DNA連接酶

連接成功率最高

C.目的基因和質(zhì)粒均用酶1切割，用T4DNA連接酶連接構(gòu)建重組表達(dá)載體既方便操

14/18

作又容易成功

D.酶1和酶3屬于同尾酶，切割產(chǎn)生相同的黏性末端，但不適宜使用二者來(lái)構(gòu)建重組

表達(dá)載體

答案：ABC

解析：構(gòu)建重組表達(dá)載體時(shí)，使用同一種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，容易造成二者自

身環(huán)化，也容易造成目的基因和質(zhì)粒反向連接，成功率不高，A錯(cuò)誤；酶2和酶4切割產(chǎn)生

的末端不相同，無(wú)法連接成新的片段，B錯(cuò)誤；酶1的切割位點(diǎn)在目的基因序列中間，會(huì)破

壞目的基因，C錯(cuò)誤；酶1和酶3屬于同尾酶，二者切割產(chǎn)生相同的黏性末端，但酶1會(huì)破

壞目的基因，不適宜使用二者來(lái)構(gòu)建重組表達(dá)載體，D正確。

6.（多選）（2025?山東省日照市聯(lián)考）下圖為構(gòu)建茴麻抗除草劑基因/重組質(zhì)粒的技術(shù)流

程，其中他HI是卡那霉素抗性基因，GLAS基因僅在真核細(xì)胞中表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物可催化底物

呈藍(lán)色。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）

A

“2PstI]XhoIEcoRIHindHIBamHIEcoRI

-QTBHpo/yA昌—TH昌GUSg

I,

HindIffBamY{IPstIXhoIEcoRI

Npin.加匕a

n啟動(dòng)子日終止于

A.構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)需要的限制酶有PstI、MoI和EcoRI

B.在培養(yǎng)基中添加卡那霉素初步篩選導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌

C.用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化植物愈傷組織選擇呈現(xiàn)藍(lán)色的組織進(jìn)行培養(yǎng)

D.為進(jìn)一步改良品種，可將啟動(dòng)子替換為除草劑誘導(dǎo)型啟動(dòng)子

答案：AC

解析：由圖可知，首先，O和po僅N之間原本是8f基因，構(gòu)建過(guò)程中需要將史基因切

除，重新將/基因連接到a和〃。僅4之間，因此需要限制酶尸stI和耳。I,再將“啟動(dòng)子一

O一/基因一/。僅N—終止子”連接到含他山基因的質(zhì)粒上時(shí)，需要限制酶發(fā)“dill（或8即HI）

和EcoRI,因此構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)需要的限制酶有Psfl.Xho\（或2研HI）和

EcoRI,A錯(cuò)誤；由圖可知，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，質(zhì)粒中的他"I基因保留下來(lái)作為標(biāo)

記基因，基因被切除，因此在培養(yǎng)基中添加卡那霉素初步篩選導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，

B正確；構(gòu)建成功的含有/基因的基因表達(dá)載體因構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)GLAV基因被切除，

使細(xì)胞中無(wú)藍(lán)色，因此呈現(xiàn)藍(lán)色的組織說(shuō)明細(xì)胞中含有GU5基因，則該細(xì)胞中導(dǎo)入的是不

含目的基因的空白質(zhì)粒，因此不能選擇呈藍(lán)色的組織進(jìn)一步培養(yǎng)，C錯(cuò)誤；啟動(dòng)子若為除草

15I18

劑誘導(dǎo)啟動(dòng)子，則在無(wú)除草劑環(huán)境中該基因不表達(dá)，在有除草劑的環(huán)境中可表達(dá)，表達(dá)后具

有了抗除草劑的功能，將減少細(xì)胞物質(zhì)和能量浪費(fèi)，D正確。

7.（多選）（2025?江蘇淮安高三模擬）下圖表示pBR322質(zhì)粒和人生長(zhǎng)激素基因所在片段的

結(jié)構(gòu)信息，將二者構(gòu)建的重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體菌并進(jìn)行篩選。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

PBR322質(zhì)粒人生長(zhǎng)激素基因

注：Amp^：氨葦青霉素抗性基因；定凡四環(huán)素抗性基因。

A.應(yīng)選擇的限制酶組合是酶F和酶G

B.所選用的受體菌含有/〃?0R和嶷產(chǎn)基因

C.用含氨茶青霉素的培養(yǎng)基篩選出的是含重組質(zhì)粒的受體菌

D.同時(shí)用三種限制酶處理圖中質(zhì)粒，電泳后可得到4個(gè)條帶

答案：BC

解析：為避免切割后DNA片段的自身環(huán)化，又保留質(zhì)粒上的標(biāo)記基因，切割時(shí)應(yīng)選擇

的限制酶組合是酶F和酶G,A正確；所選用的受體菌不能含有/叩R和嶷/R基因，以便于

對(duì)含有目的基因的受體菌進(jìn)行選擇，B錯(cuò)誤；用含氨年青霉素的培養(yǎng)基篩選出的有導(dǎo)入重組

質(zhì)粒的受體菌和導(dǎo)入原質(zhì)粒的受體菌，C錯(cuò)誤；據(jù)題圖分析可知，同時(shí)用三種限制酶處理圖

中質(zhì)粒，因酶E有兩個(gè)作用位點(diǎn)，故將質(zhì)粒切割成了4個(gè)DNA片段，電泳后可得到4個(gè)條

帶，D正確。

二、非選擇題

8.（2025?山東師大附中適應(yīng)性測(cè)試）P-pastoris（某種能以甲醇為唯一碳源的酵母菌河作為

生產(chǎn)抗原蛋白的工程菌。研究人員以圖1所示質(zhì)粒為載體，構(gòu)建含乙型肝炎病毒表面抗原蛋

白