糖鏈結(jié)構(gòu)測定及糖的提取分離第一頁，共18頁。優(yōu)選糖鏈結(jié)構(gòu)測定及糖的提取分離第二頁，共18頁。組成苷的苷元和單糖的鑒定將苷用稀酸或酶進行水解，使生成苷元和各種單糖苷元的結(jié)構(gòu)鑒定在有關(guān)章節(jié)中逐一介紹。組成苷中糖的種類鑒定通常采用PC、TLC等方法對水解液進行鑒定。

糖類的PC常用的展開劑大多為含水的溶劑系統(tǒng)，如正丁醇-醋酸-水(4:1:5)，EtOAc-吡啶-水(2:1:2)等，其Rf值與溶劑的含水量有關(guān)。七、糖鏈結(jié)構(gòu)的測定第三頁，共18頁。苷中糖的數(shù)目的測定質(zhì)譜：苷分子量-苷元分子量，求出糖的數(shù)目。核磁：氫譜中端基質(zhì)子信號數(shù)(5ppm左右)，碳譜中端基碳信號的數(shù)目(90-112ppm)。七、結(jié)構(gòu)的測定第四頁，共18頁。

苷元和糖之間連接位置的確定13C-NMR：苷化位移規(guī)律，將苷和苷元的碳譜相比較。成苷后，α-C約+8ppm,β-C約-4ppm

二維核磁共振譜(如HMQCCOSY及HMBC譜)等技術(shù)廣泛用于確定連糖位置。七、結(jié)構(gòu)的測定第五頁，共18頁。糖與糖的連接位置的確定全甲基化物進行甲醇解，分析其甲醇解產(chǎn)物。七、糖鏈結(jié)構(gòu)的測定第六頁，共18頁。采用的方法通常是將這些甲醚化的單糖進行了TLC鑒定，并與標準品對照。近來亦有用GC-MS聯(lián)用儀對其進行鑒定的報道。全甲基化甲醇解：七、糖鏈結(jié)構(gòu)的測定第七頁，共18頁。

七、糖鏈結(jié)構(gòu)的測定

如：已知某二糖甲醇解后得到下列產(chǎn)物，請推測該二糖的結(jié)構(gòu)（連接位置）全甲基化甲醇解第八頁，共18頁。

甲基化反應

(1)Haworth法：用硫酸二甲酯和氫氧化鈉(或碳酸鈉、碳酸鉀)，可使醇羥基甲基化。其缺點是甲基化能力較弱，如果欲進行全甲基化反應，必須進行多次反應才能達到目的，

(2)Purdie法：用碘甲烷和氧化銀為試劑(一般可在丙酮或四氫呋喃中進行)，可使醇羥基甲基化，但因氧化銀具有氧化作用，只能用于苷的甲基化．而不能用于還原糖的甲基化。

七、糖鏈結(jié)構(gòu)的測定第九頁，共18頁。(3)Kuhn改良法：在二甲基甲酰胺(DMF)溶液中，加入碘甲烷和氧化銀或硫酸二甲酯及氫氧比鋇(或氧化鋇)，在攪拌下進行甲基化。本法的缺點是反應較緩慢。(4)Hakomari法(箱守法)：二甲基亞砜(DMSO)，氫化鈉，碘甲烷七、糖鏈結(jié)構(gòu)的測定第十頁，共18頁。

此法反應迅速、完全、無需特殊裝置、可在室溫下連續(xù)反應，是目前最常用的全甲基化方法。但因在反應中，所用二甲亞砜和NaH均呈強堿性，故分子中有酯鍵的苷類不宜用本法。七、糖鏈結(jié)構(gòu)的測定第十一頁，共18頁。酶水解轉(zhuǎn)化糖酶--------水解β-果糖苷鍵麥芽糖酶--------水解α-葡萄糖苷鍵杏仁苷酶--------水解β-葡萄糖苷鍵,專屬性較低纖維素酶--------水解β-葡萄糖苷鍵NMR譜法測定利用端基質(zhì)子的偶合常數(shù)如：5ppm(1H,d,J=7Hz)為下面哪個結(jié)構(gòu)？七、糖鏈結(jié)構(gòu)的測定-苷鍵構(gòu)型的確定第十二頁，共18頁。一、提取植物體內(nèi)，苷類常與水解該苷的酶共存。提原生苷：先殺酶。

常用的方法是在中藥中加入CaCO3,或用甲醇、乙醇或沸水提取，同時提取過程中要盡量勿與酸或堿接觸，以免苷類分解。提苷原：可利用酶活性

八、糖及苷類的提取和分離第十三頁，共18頁。八、糖及苷類的提取和分離化合物的極性功能基的種類：(-COOH)>(-OH)>(–C=O)>(-COOR)>-O->(-CnHm)極性功能個數(shù)分子內(nèi)氫鍵降低極性化合物大小

小分子的極性大于大分子的極性常用溶劑極性：水>甲醇>乙醇>丙酮>乙酸乙酯>氯仿>乙醚>己烷H2O>MeOH>EtOH>CH3COCH3>EtOAc>CHCl3>EtOEt>CH3(CH2)4CH3第十四頁，共18頁。流程圖八、苷類的提取和分離第十五頁，共18頁。糖和苷的提取分離藥材水水提液3倍量以上乙醇醇水溶液沉淀（苷）（多糖）第十六頁，共18頁。多糖提取分離

（一）提取

水提得到的粗多糖水溶液，加入95%乙醇使含醇量達80%，4攝氏度靜置過夜，多糖析出。減壓抽濾，用95%乙醇洗至溶液無色。沉淀（多糖）揮干醇。

（二）除蛋白

這是至關(guān)重要的一步，由于蛋白是大分子，它的存在會干擾多糖的純化。一般選用sevage法萃取或離心，多糖濃度為1mg/ml,氯仿-正丁醇比例通常在3:1-5:1之間，變性的蛋白質(zhì)一般在兩相交界處產(chǎn)生一條白色的帶。

（三）檢測

除蛋白