臨床基因擴(kuò)增考試試題及答案2025版一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共40分）1.下列關(guān)于PCR技術(shù)的敘述，錯(cuò)誤的是（）A.PCR是一種體外迅速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)B.PCR技術(shù)的原理是DNA雙鏈復(fù)制C.PCR過程中只需要兩種引物D.PCR的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列答案：C解析：PCR過程中需要兩種引物，分別與兩條模板鏈結(jié)合，但在實(shí)際反應(yīng)體系中，引物的量通常是過量的，且對于一個(gè)完整的PCR擴(kuò)增，需要根據(jù)擴(kuò)增的目的基因設(shè)計(jì)合適的上下游引物，而不是說只需要兩種引物這種簡單表述，A、B、D選項(xiàng)關(guān)于PCR技術(shù)的描述均正確。2.TaqDNA聚合酶的特點(diǎn)是（）A.耐低溫B.耐高溫C.具有3'→5'外切酶活性D.不具有5'→3'聚合酶活性答案：B解析：TaqDNA聚合酶是從嗜熱水生菌中分離出來的，其特點(diǎn)是耐高溫，能在較高溫度下保持活性進(jìn)行DNA合成，它不具有3'→5'外切酶活性，但具有5'→3'聚合酶活性，所以A、C、D錯(cuò)誤，B正確。3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)中，熒光信號的產(chǎn)生與下列哪項(xiàng)無關(guān)（）A.熒光染料B.引物C.探針D.模板DNA答案：B解析：實(shí)時(shí)熒光定量PCR中，熒光信號的產(chǎn)生可以通過熒光染料結(jié)合到雙鏈DNA上發(fā)出熒光（如SYBRGreen法），也可以通過特異性的探針與目標(biāo)序列結(jié)合后在核酸酶作用下釋放熒光（如TaqMan探針法），模板DNA是擴(kuò)增的對象，其擴(kuò)增過程中會(huì)伴隨著熒光信號的變化。而引物的主要作用是引導(dǎo)DNA聚合酶進(jìn)行DNA合成，本身不直接參與熒光信號的產(chǎn)生，所以選B。4.在基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的分區(qū)中，以下哪個(gè)區(qū)域應(yīng)保持相對負(fù)壓（）A.試劑準(zhǔn)備區(qū)B.標(biāo)本制備區(qū)C.擴(kuò)增區(qū)D.產(chǎn)物分析區(qū)答案：D解析：產(chǎn)物分析區(qū)是對擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行分析的區(qū)域，擴(kuò)增產(chǎn)物含有大量的目標(biāo)DNA片段，為了防止擴(kuò)增產(chǎn)物污染其他區(qū)域，該區(qū)域應(yīng)保持相對負(fù)壓，避免擴(kuò)增產(chǎn)物擴(kuò)散到其他區(qū)域。試劑準(zhǔn)備區(qū)要求環(huán)境潔凈，應(yīng)保持相對正壓，防止外界污染；標(biāo)本制備區(qū)和擴(kuò)增區(qū)也有相應(yīng)的環(huán)境要求，但產(chǎn)物分析區(qū)的負(fù)壓設(shè)置更為關(guān)鍵，所以選D。5.下列關(guān)于核酸提取的說法，錯(cuò)誤的是（）A.核酸提取的目的是獲得純凈的核酸B.常用的核酸提取方法有酚-氯仿抽提法、硅膠膜吸附法等C.提取的核酸濃度越高越好D.提取的核酸應(yīng)避免反復(fù)凍融答案：C解析：核酸提取的目的是從生物樣本中獲得純凈的核酸，常用的方法有酚-氯仿抽提法、硅膠膜吸附法等，提取的核酸應(yīng)避免反復(fù)凍融，因?yàn)榉磸?fù)凍融會(huì)導(dǎo)致核酸斷裂等情況影響其質(zhì)量。但提取的核酸并非濃度越高越好，過高的濃度可能會(huì)含有較多的雜質(zhì)，而且在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中可能會(huì)因?yàn)闈舛冗^高而影響反應(yīng)體系的平衡等，所以C選項(xiàng)錯(cuò)誤。6.在PCR反應(yīng)體系中，dNTP的作用是（）A.提供反應(yīng)的能量B.作為DNA合成的原料C.激活TaqDNA聚合酶D.穩(wěn)定反應(yīng)體系的pH值答案：B解析：dNTP（脫氧核苷三磷酸）是由三種磷酸基團(tuán)、脫氧核糖和堿基組成，在PCR反應(yīng)中，dNTP作為DNA合成的原料，在TaqDNA聚合酶的作用下，按照堿基互補(bǔ)配對原則依次連接到引物延伸鏈上，形成新的DNA鏈。它不是提供反應(yīng)能量的物質(zhì)，也不能激活TaqDNA聚合酶，穩(wěn)定反應(yīng)體系pH值一般是靠緩沖液，所以選B。7.以下哪種物質(zhì)可以抑制PCR反應(yīng)（）A.蛋白酶KB.乙二胺四乙酸（EDTA）C.二甲基亞砜（DMSO）D.甘油答案：B解析：乙二胺四乙酸（EDTA）是一種金屬離子螯合劑，它可以螯合PCR反應(yīng)體系中TaqDNA聚合酶發(fā)揮活性所必需的鎂離子等金屬離子，從而抑制PCR反應(yīng)。蛋白酶K在核酸提取過程中用于消化蛋白質(zhì)，對PCR反應(yīng)本身沒有抑制作用；二甲基亞砜（DMSO）和甘油在一定濃度下可以提高PCR反應(yīng)的效率，而不是抑制反應(yīng)，所以選B。8.實(shí)時(shí)熒光定量PCR中，Ct值的含義是（）A.達(dá)到熒光閾值所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)B.熒光信號達(dá)到最大值時(shí)的循環(huán)數(shù)C.擴(kuò)增產(chǎn)物的濃度D.模板DNA的起始濃度答案：A解析：在實(shí)時(shí)熒光定量PCR中，Ct值（Cyclethreshold）是指熒光信號達(dá)到設(shè)定的熒光閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。它與模板DNA的起始濃度呈負(fù)相關(guān)，通過Ct值可以對模板DNA進(jìn)行相對定量或絕對定量分析。熒光信號達(dá)到最大值時(shí)的循環(huán)數(shù)沒有實(shí)際的定量意義；Ct值不是擴(kuò)增產(chǎn)物的濃度，也不是模板DNA的起始濃度，所以選A。9.在基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)中，防止污染的措施不包括（）A.嚴(yán)格分區(qū)操作B.使用一次性耗材C.定期對實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行清潔和消毒D.加大引物的用量答案：D解析：嚴(yán)格分區(qū)操作可以避免不同區(qū)域之間的交叉污染；使用一次性耗材可以防止樣本之間的污染；定期對實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行清潔和消毒可以去除實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中的核酸污染。而加大引物的用量主要是影響PCR反應(yīng)的效率和特異性等，與防止污染沒有直接關(guān)系，所以選D。10.下列關(guān)于引物設(shè)計(jì)的原則，錯(cuò)誤的是（）A.引物長度一般為18-25個(gè)核苷酸B.引物的GC含量應(yīng)在40%-60%之間C.引物應(yīng)避免形成二級結(jié)構(gòu)D.引物的3'端可以有多個(gè)連續(xù)的G或C答案：D解析：引物長度一般為18-25個(gè)核苷酸，這樣可以保證引物與模板的特異性結(jié)合；引物的GC含量在40%-60%之間有助于維持引物與模板結(jié)合的穩(wěn)定性；引物應(yīng)避免形成二級結(jié)構(gòu)，否則會(huì)影響引物與模板的結(jié)合效率。而引物的3'端如果有多個(gè)連續(xù)的G或C，可能會(huì)導(dǎo)致引物與模板非特異性結(jié)合，引發(fā)非特異性擴(kuò)增，所以D選項(xiàng)錯(cuò)誤。11.基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制包括（）A.人員培訓(xùn)B.儀器設(shè)備的校準(zhǔn)和維護(hù)C.室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評價(jià)D.以上都是答案：D解析：基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制是一個(gè)全面的體系，人員培訓(xùn)可以確保操作人員具備專業(yè)的技能和知識，正確進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作；儀器設(shè)備的校準(zhǔn)和維護(hù)可以保證儀器的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，從而保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性；室內(nèi)質(zhì)量控制可以監(jiān)控實(shí)驗(yàn)過程的穩(wěn)定性，室間質(zhì)量評價(jià)可以與其他實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行比對，評估實(shí)驗(yàn)室的檢測水平，所以A、B、C選項(xiàng)都屬于基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的內(nèi)容，選D。12.在核酸定量時(shí)，常用的方法是（）A.紫外分光光度法B.熒光定量法C.凝膠電泳法D.以上都是答案：D解析：紫外分光光度法可以通過測量核酸在260nm波長處的吸光度來定量核酸的濃度；熒光定量法利用熒光染料與核酸結(jié)合后發(fā)出的熒光信號來定量核酸；凝膠電泳法可以通過與已知濃度的核酸標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對比，大致估算核酸的濃度，所以這三種方法都是常用的核酸定量方法，選D。13.以下哪種熒光探針適用于SNP檢測（）A.TaqMan探針B.MolecularBeacon探針C.Scorpion探針D.以上都是答案：D解析：TaqMan探針、MolecularBeacon探針和Scorpion探針都可以用于SNP（單核苷酸多態(tài)性）檢測。TaqMan探針通過核酸酶切割作用釋放熒光信號，根據(jù)不同的堿基互補(bǔ)情況產(chǎn)生不同的熒光信號變化來檢測SNP；MolecularBeacon探針具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)，與目標(biāo)序列結(jié)合后熒光信號發(fā)生改變，可用于區(qū)分不同的SNP位點(diǎn)；Scorpion探針結(jié)合了引物和探針的功能，也能有效檢測SNP，所以選D。14.在PCR反應(yīng)中，退火溫度的設(shè)定主要取決于（）A.引物的長度B.引物的GC含量C.模板DNA的濃度D.TaqDNA聚合酶的活性答案：B解析：退火溫度是PCR反應(yīng)中引物與模板結(jié)合的溫度，引物的GC含量對引物與模板的結(jié)合穩(wěn)定性影響較大，一般來說，GC含量越高，引物與模板結(jié)合的穩(wěn)定性越強(qiáng)，退火溫度可以適當(dāng)提高。引物長度也會(huì)對退火溫度有一定影響，但不是主要因素；模板DNA的濃度和TaqDNA聚合酶的活性與退火溫度的設(shè)定沒有直接關(guān)系，所以選B。15.基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)級別一般為（）A.一級B.二級C.三級D.四級答案：B解析：基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室主要處理一般的臨床樣本，所涉及的生物因子危害程度相對較低，通常生物安全防護(hù)級別為二級。一級生物安全防護(hù)適用于對健康成年人無致病作用的微生物；三級和四級生物安全防護(hù)適用于處理高致病性、高傳染性的生物因子，基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室一般不涉及這類情況，所以選B。16.在核酸提取過程中，加入RNase抑制劑的目的是（）A.防止RNA被降解B.促進(jìn)RNA的提取C.提高DNA的純度D.抑制TaqDNA聚合酶的活性答案：A解析：RNase（核糖核酸酶）廣泛存在，容易降解RNA，在核酸提取過程中加入RNase抑制劑可以抑制RNase的活性，防止提取的RNA被降解。它不是促進(jìn)RNA提取的物質(zhì)，也不能提高DNA的純度，更不會(huì)抑制TaqDNA聚合酶的活性，所以選A。17.以下哪種情況可能導(dǎo)致PCR擴(kuò)增出現(xiàn)非特異性條帶（）A.引物設(shè)計(jì)不合理B.退火溫度過低C.模板DNA中含有雜質(zhì)D.以上都是答案：D解析：引物設(shè)計(jì)不合理，如引物與非目標(biāo)序列有一定的互補(bǔ)性，就會(huì)導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增；退火溫度過低，引物與模板的結(jié)合特異性降低，容易與非目標(biāo)序列結(jié)合進(jìn)行擴(kuò)增；模板DNA中含有雜質(zhì)，可能會(huì)影響PCR反應(yīng)的特異性，引發(fā)非特異性擴(kuò)增，所以A、B、C選項(xiàng)的情況都可能導(dǎo)致PCR擴(kuò)增出現(xiàn)非特異性條帶，選D。18.實(shí)時(shí)熒光定量PCR中，標(biāo)準(zhǔn)曲線的作用是（）A.確定擴(kuò)增效率B.對未知樣本進(jìn)行定量分析C.評估實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性D.以上都是答案：D解析：通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的Ct值和已知濃度計(jì)算出擴(kuò)增效率；利用標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系，可以將未知樣本的Ct值代入，對未知樣本進(jìn)行定量分析；同時(shí)，多次實(shí)驗(yàn)得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線的穩(wěn)定性可以評估實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性，所以選D。19.在基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)中，陽性對照的作用是（）A.驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)體系的有效性B.檢測是否存在污染C.確定模板DNA的起始濃度D.評估TaqDNA聚合酶的活性答案：A解析：陽性對照是含有已知目標(biāo)核酸的樣本，在基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)中加入陽性對照，如果陽性對照能夠正常擴(kuò)增出目標(biāo)條帶或產(chǎn)生預(yù)期的熒光信號，說明實(shí)驗(yàn)體系（包括試劑、儀器、操作等）是有效的。檢測污染一般用陰性對照；陽性對照不能確定模板DNA的起始濃度，也不能評估TaqDNA聚合酶的活性，所以選A。20.以下關(guān)于基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室記錄的說法，錯(cuò)誤的是（）A.記錄應(yīng)及時(shí)、準(zhǔn)確、完整B.記錄可以隨意涂改C.記錄應(yīng)妥善保存D.記錄應(yīng)包括實(shí)驗(yàn)的各個(gè)環(huán)節(jié)答案：B解析：基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的記錄應(yīng)及時(shí)、準(zhǔn)確、完整，包括實(shí)驗(yàn)的各個(gè)環(huán)節(jié)，如樣本信息、試劑使用情況、儀器參數(shù)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果等，并且要妥善保存，以備后續(xù)查詢和追溯。記錄不可以隨意涂改，如需修改應(yīng)采用規(guī)范的修改方式，如劃改并簽名注明修改日期等，所以B選項(xiàng)錯(cuò)誤。二、多項(xiàng)選擇題（每題3分，共30分）1.以下屬于PCR反應(yīng)體系組成成分的有（）A.模板DNAB.引物C.TaqDNA聚合酶D.dNTPE.緩沖液答案：ABCDE解析：PCR反應(yīng)體系包括模板DNA，它是擴(kuò)增的對象；引物用于引導(dǎo)DNA合成；TaqDNA聚合酶負(fù)責(zé)催化dNTP形成新的DNA鏈；dNTP是DNA合成的原料；緩沖液用于維持反應(yīng)體系的pH值和離子強(qiáng)度等，保證反應(yīng)的順利進(jìn)行，所以A、B、C、D、E選項(xiàng)均正確。2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR的優(yōu)點(diǎn)包括（）A.靈敏度高B.特異性強(qiáng)C.可進(jìn)行定量分析D.無需電泳檢測E.快速簡便答案：ABCDE解析：實(shí)時(shí)熒光定量PCR具有靈敏度高的特點(diǎn)，能夠檢測到低濃度的目標(biāo)核酸；特異性強(qiáng)，通過引物和探針的設(shè)計(jì)可以精準(zhǔn)識別目標(biāo)序列；可以根據(jù)Ct值對樣本進(jìn)行定量分析；反應(yīng)過程中實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號，無需電泳檢測，節(jié)省了時(shí)間和操作步驟；整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程相對快速簡便，所以A、B、C、D、E選項(xiàng)都是其優(yōu)點(diǎn)。3.基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的分區(qū)應(yīng)包括（）A.試劑準(zhǔn)備區(qū)B.標(biāo)本制備區(qū)C.擴(kuò)增區(qū)D.產(chǎn)物分析區(qū)E.休息區(qū)答案：ABCD解析：基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室一般分為試劑準(zhǔn)備區(qū)，用于準(zhǔn)備PCR反應(yīng)所需的試劑；標(biāo)本制備區(qū)，對臨床樣本進(jìn)行處理提取核酸；擴(kuò)增區(qū)，進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)；產(chǎn)物分析區(qū)，對擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行分析。休息區(qū)不屬于基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)操作的功能分區(qū)，所以選A、B、C、D。4.核酸提取過程中可能用到的試劑有（）A.蛋白酶KB.酚-氯仿C.異丙醇D.乙醇E.硅膠膜吸附柱答案：ABCDE解析：蛋白酶K用于消化樣本中的蛋白質(zhì)；酚-氯仿用于抽提核酸，去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)；異丙醇和乙醇用于沉淀核酸；硅膠膜吸附柱是硅膠膜吸附法提取核酸時(shí)的關(guān)鍵器材，利用硅膠膜對核酸的特異性吸附作用來分離核酸，所以A、B、C、D、E選項(xiàng)的試劑和器材在核酸提取過程中都可能會(huì)用到。5.影響PCR擴(kuò)增效率的因素有（）A.引物設(shè)計(jì)B.退火溫度C.模板DNA的質(zhì)量和濃度D.TaqDNA聚合酶的活性E.dNTP的濃度答案：ABCDE解析：引物設(shè)計(jì)不合理會(huì)影響引物與模板的結(jié)合效率，從而影響擴(kuò)增效率；退火溫度不合適會(huì)導(dǎo)致引物與模板結(jié)合不穩(wěn)定或非特異性結(jié)合，影響擴(kuò)增效果；模板DNA的質(zhì)量差或濃度過低可能會(huì)使擴(kuò)增反應(yīng)難以有效進(jìn)行；TaqDNA聚合酶的活性不足會(huì)影響DNA合成的速度和效率；dNTP濃度過高或過低也會(huì)對擴(kuò)增效率產(chǎn)生影響，所以A、B、C、D、E選項(xiàng)都是影響PCR擴(kuò)增效率的因素。6.以下關(guān)于基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境要求，正確的有（）A.保持清潔衛(wèi)生B.控制溫度和濕度C.避免光線直射D.定期進(jìn)行空氣消毒E.防止昆蟲和鼠類進(jìn)入答案：ABCDE解析：基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室需要保持清潔衛(wèi)生，以防止污染；控制合適的溫度和濕度有利于試劑的穩(wěn)定性和儀器的正常運(yùn)行；避免光線直射可以防止某些試劑因光照而發(fā)生變化；定期進(jìn)行空氣消毒可以減少空氣中的微生物和核酸污染；防止昆蟲和鼠類進(jìn)入可以避免它們攜帶的污染物對實(shí)驗(yàn)造成影響，所以A、B、C、D、E選項(xiàng)的環(huán)境要求都是正確的。7.在實(shí)時(shí)熒光定量PCR中，常見的熒光定量方法有（）A.SYBRGreen法B.TaqMan探針法C.MolecularBeacon探針法D.Scorpion探針法E.化學(xué)發(fā)光法答案：ABCD解析：SYBRGreen法是通過SYBRGreen熒光染料與雙鏈DNA結(jié)合發(fā)出熒光來進(jìn)行定量；TaqMan探針法、MolecularBeacon探針法和Scorpion探針法都是基于特異性探針與目標(biāo)序列結(jié)合后產(chǎn)生熒光信號變化進(jìn)行定量?；瘜W(xué)發(fā)光法一般不屬于實(shí)時(shí)熒光定量PCR的熒光定量方法，所以選A、B、C、D。8.基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制措施包括（）A.室內(nèi)質(zhì)量控制B.室間質(zhì)量評價(jià)C.人員培訓(xùn)和考核D.儀器設(shè)備的校準(zhǔn)和維護(hù)E.實(shí)驗(yàn)記錄的規(guī)范管理答案：ABCDE解析：室內(nèi)質(zhì)量控制可以監(jiān)控實(shí)驗(yàn)過程的穩(wěn)定性，及時(shí)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)中的問題；室間質(zhì)量評價(jià)可以與其他實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行比對，評估實(shí)驗(yàn)室的檢測水平；人員培訓(xùn)和考核可以保證操作人員具備專業(yè)能力；儀器設(shè)備的校準(zhǔn)和維護(hù)可以確保儀器的準(zhǔn)確性和可靠性；實(shí)驗(yàn)記錄的規(guī)范管理有助于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的追溯和質(zhì)量評估，所以A、B、C、D、E選項(xiàng)都是基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制措施。9.核酸提取的方法有（）A.酚-氯仿抽提法B.硅膠膜吸附法C.磁珠法D.離子交換法E.沉淀法答案：ABCDE解析：酚-氯仿抽提法是經(jīng)典的核酸提取方法，通過有機(jī)溶劑抽提去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)；硅膠膜吸附法利用硅膠膜對核酸的特異性吸附作用分離核酸；磁珠法通過磁珠與核酸的結(jié)合和分離來提取核酸；離子交換法利用離子交換樹脂與核酸的相互作用進(jìn)行分離；沉淀法通過加入沉淀劑使核酸沉淀下來，所以A、B、C、D、E選項(xiàng)都是常見的核酸提取方法。10.在基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)中，可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果的原因有（）A.實(shí)驗(yàn)室污染B.引物特異性差C.模板交叉污染D.擴(kuò)增產(chǎn)物殘留污染E.試劑質(zhì)量問題答案：ABCDE解析：實(shí)驗(yàn)室污染，如空氣中的核酸污染、實(shí)驗(yàn)臺面的污染等可能會(huì)導(dǎo)致非目標(biāo)核酸進(jìn)入反應(yīng)體系，產(chǎn)生假陽性；引物特異性差會(huì)使引物與非目標(biāo)序列結(jié)合進(jìn)行擴(kuò)增；模板交叉污染會(huì)使樣本之間相互污染導(dǎo)致錯(cuò)誤的擴(kuò)增結(jié)果；擴(kuò)增產(chǎn)物殘留污染，如擴(kuò)增后的產(chǎn)物擴(kuò)散到其他區(qū)域污染新的反應(yīng)體系；試劑質(zhì)量問題，如試劑中含有雜質(zhì)核酸等都可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果，所以A、B、C、D、E選項(xiàng)都是可能的原因。三、簡答題（每題10分，共20分）1.簡述PCR技術(shù)的基本原理和主要步驟。答：PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)的基本原理是模擬體內(nèi)DNA半保留復(fù)制的過程，在體外通過酶促反應(yīng)有選擇地大量擴(kuò)增特定的DNA片段。它利用DNA雙鏈在高溫下解鏈成為單鏈，然后在低溫下引物與單鏈模板DNA互補(bǔ)結(jié)合，在DNA聚合酶的作用下，以dNTP為原料，按照堿基互補(bǔ)配對原則合成新的DNA鏈，如此反復(fù)循環(huán)，使目標(biāo)DNA片段得到大量擴(kuò)增。主要步驟包括：（1）變性：將反應(yīng)體系加熱至90-95℃，使雙鏈DNA解旋成為單鏈，為引物與模板的結(jié)合提供條件。（2）退火：將溫度降低至50-65℃（具體溫度根據(jù)引物的GC含量等確定），引物與單鏈模板DNA互補(bǔ)結(jié)合。（3）延伸：將溫度升高至72℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為原料，從引物的3'端開始，按照堿基互補(bǔ)配對原則合成新的DNA鏈。這三個(gè)步驟為一個(gè)循環(huán)，經(jīng)過多次循環(huán)后，目標(biāo)DNA片段的數(shù)量呈指數(shù)級增長。2.闡述基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室防止污染的主要措施。答：基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室防止污染的主要措施包括以下幾個(gè)方面：（1）實(shí)驗(yàn)室分區(qū)：將實(shí)驗(yàn)室分為試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)，各區(qū)域獨(dú)立設(shè)置，并有明確的標(biāo)識和走向，避免人員和物品的交叉流動(dòng)。試劑準(zhǔn)備區(qū)應(yīng)保持相對正壓，防止外界污染；產(chǎn)物分析區(qū)應(yīng)保持相對負(fù)壓，防止擴(kuò)增產(chǎn)物擴(kuò)散。（2）人員管理：操作人員應(yīng)接受專業(yè)培訓(xùn)，嚴(yán)格遵守操作規(guī)程。進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室應(yīng)更換工作服、鞋套，戴口罩、手套等。在不同區(qū)域操作時(shí)，應(yīng)更換手套和工作服，避免將污染物帶到其他區(qū)域。（3）耗材使用：使用一次性耗材，如移液器吸頭、離心管等，避免交叉污染。吸頭應(yīng)帶有濾芯，防止氣溶膠污染。（4）儀器設(shè)備：定期對儀器設(shè)備進(jìn)行清潔和消毒，如移液器、離心機(jī)、PCR儀等。不同區(qū)域的儀器設(shè)備應(yīng)專用，不得交叉使用。（5）實(shí)驗(yàn)操作：在標(biāo)本處理和核酸提取過程中，應(yīng)注意避免樣本的飛濺和交叉污染。加樣時(shí)應(yīng)小心操作，避免移液器吸頭接觸到其他物品。（6）環(huán)境清潔和消毒：定期對實(shí)驗(yàn)室的地面、臺面、空氣等進(jìn)行清潔和消毒。可以使用含氯消毒劑、75%乙醇等進(jìn)行擦拭消毒，使用紫外線燈進(jìn)行空氣消毒。（7）陽性對照和陰性對照設(shè)置：在每次實(shí)驗(yàn)中設(shè)置陽性對照和陰性對照，通過陰性對照可以監(jiān)測是否存在污染情況。如果陰性對照出現(xiàn)陽性結(jié)果，應(yīng)及時(shí)查找原因并采取措施。（8）廢棄物處理：實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生的廢棄物應(yīng)分類收集，進(jìn)行妥善處理。如含核酸的廢棄物應(yīng)進(jìn)行高壓滅菌或化學(xué)處理后再丟棄。四、論述題（10分）論述實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)在臨床診斷中的應(yīng)用及優(yōu)勢。答：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)在臨床診斷中具有廣泛的應(yīng)用和顯著的優(yōu)勢，具體如下：應(yīng)用（1）感染性疾病診斷：可用于檢測各種病原體，如病毒（如乙肝病毒、丙肝病毒、艾滋病病毒、新冠病毒等）、細(xì)菌（如結(jié)核桿菌等）、支原體、衣原體等。通過檢測病原體的核酸，能夠快速、準(zhǔn)確地判斷患者是否感染以及感染的病原體種類和數(shù)量，為臨床治療提供依據(jù)。例如，在新冠疫情期間，實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是診斷新冠病毒