ICSBT/CALAS107-實(shí)驗(yàn)動物鉤端螺旋體PCRLaboratoryanimal—PCRmethodforLeptospira2022-01- 2022-01- 實(shí)中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)會 本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草實(shí)驗(yàn)動物PCRPCRDNA提取、PCR反應(yīng)和結(jié)果判定。（包括所有的修改單）GB19489 GB/T35823 《實(shí)驗(yàn)動物動物實(shí)驗(yàn)通用要求》GB/T 《實(shí)驗(yàn)動物福利倫理審查指南NY/T NY/T DNA《生物安全法 中華人民共和國主席令（第五十六號令16S16SRNA（rRNA）的序中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)會團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)匯編及實(shí)施指南（第六卷中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)會團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)匯編及實(shí)施指南（第六卷PCRGB/TGB/T35892c）小鼠可通過尾靜脈或頜下靜脈采集，采血過程符合GB/T35892的規(guī)定。d）0.25mL5%檸檬酸鈉溶液41mL出現(xiàn)黃疸、發(fā)熱體溫升高后恢復(fù)正常、嘔吐等疑似感染鉤端螺旋體的動物，或者05L～5L為宜。采取膀胱穿刺法對犬和豬取尿時，將動物取仰臥位保定，手觸摸確定膀胱位置，/T41的規(guī)定進(jìn)行表皮消毒，將一次性注射器針頭垂直刺入皮膚進(jìn)入膀胱，抽取取尿。NY/T541的操作執(zhí)行。NY/T5412h內(nèi)提取核苷酸，否則應(yīng)置于80μL滅菌水再懸浮，9610min800×g10min，除去膀胱上皮細(xì)胞和尿結(jié)晶等大顆粒。上清液4℃下13000×g10min100μL滅菌水再懸浮，9610min100μL滅菌水再懸浮，9610min后備用。100mg1mL磷酸鹽緩沖液（PBS），研磨成組織勻漿。將勻漿液100μL滅菌水再懸浮，9610min后備用。DNAPCR331bpDNA1.5μLF（10μmol/L）1μLR（10μmol/L）1μL，Taqmix12.5μL，ddH2O9μL25μL94℃3min；63℃1.5min，72℃2min；94℃1min，63℃1.5min，72℃229個循環(huán)；7210minA）16SrDNA的數(shù)據(jù)庫進(jìn)行序列同源性比對。b）331bp處出現(xiàn)唯一清晰條帶，結(jié)果判為陽性。c）331bp16SrDNA序列（A）的同源100%