公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法

第3部分：空氣微生物指標(biāo)

編制說(shuō)明

一、工作簡(jiǎn)況，包括任務(wù)來(lái)源、協(xié)作單位、主要工作過(guò)程、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)主要起草人及其所做的

工作等

（一）任務(wù)來(lái)源

2021年11月1日，中國(guó)疾病預(yù)防控制中心根據(jù)《國(guó)家衛(wèi)生健康委法規(guī)司關(guān)于下達(dá)衛(wèi)生

健康標(biāo)準(zhǔn)體系升級(jí)改造項(xiàng)目計(jì)劃的通知》和《中國(guó)疾病預(yù)防控制中心關(guān)于落實(shí)衛(wèi)生健康標(biāo)準(zhǔn)

體系升級(jí)改造相關(guān)工作的通知》要求，下達(dá)了公共衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)體系升級(jí)改造項(xiàng)目中17項(xiàng)環(huán)境

健康標(biāo)準(zhǔn)修訂項(xiàng)目計(jì)劃，其中包括本標(biāo)準(zhǔn)。

GB/T18204.3《公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法第3部分：空氣微生物指標(biāo)》是公共場(chǎng)所衛(wèi)生

檢驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)的一個(gè)組成部分，本文件為第二次修訂

（二）起草單位和起草人

本標(biāo)準(zhǔn)由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心環(huán)境與健康相關(guān)產(chǎn)品安全所負(fù)責(zé)，參加起草單位江蘇省

疾病預(yù)防控制中心、深圳市疾病預(yù)防控制中心、常州市衛(wèi)生監(jiān)督所(見(jiàn)表1)。

表1GB/T18204.3主要起草單位和起草人

姓名工作單位

姚孝元中國(guó)疾病預(yù)防控制中心環(huán)境所

唐宋中國(guó)疾病預(yù)防控制中心環(huán)境所

李霞中國(guó)疾病預(yù)防控制中心環(huán)境所

丁珵中國(guó)疾病預(yù)防控制中心環(huán)境所

丁震江蘇省疾病預(yù)防控制中心

周連江蘇省疾病預(yù)防控制中心

余淑苑深圳市疾病預(yù)防控制中心

丁培中國(guó)疾病預(yù)防控制中心環(huán)境所

毛怡心中國(guó)疾病預(yù)防控制中心環(huán)境所

石曉路深圳市疾病預(yù)防控制中心

談立峰常州市衛(wèi)生監(jiān)督所

馬愷江蘇省疾病預(yù)防控制中心

（三）主要工作過(guò)程

2021年11月1日，中國(guó)疾病預(yù)防控制中心下發(fā)關(guān)于2021年度國(guó)家衛(wèi)生健康標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境

健康專業(yè)修訂項(xiàng)目的通知，確定公共衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)體系升級(jí)改造項(xiàng)目中17項(xiàng)環(huán)境健康標(biāo)準(zhǔn)修訂

項(xiàng)目，本文件涵蓋其中。

11月10日，環(huán)境健康標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委員會(huì)召開(kāi)2021年度國(guó)家衛(wèi)生健康標(biāo)準(zhǔn)修訂啟動(dòng)會(huì)。

唐宋主任匯報(bào)了本項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)的修訂計(jì)劃及相關(guān)事宜。

11月19日，標(biāo)準(zhǔn)起草組組織召開(kāi)本標(biāo)準(zhǔn)修訂起草組第一次會(huì)議，確定修訂原則，討論

原標(biāo)準(zhǔn)主要問(wèn)題、修訂內(nèi)容、任務(wù)分工、工作進(jìn)度等問(wèn)題。

2021年11月，在全國(guó)范圍內(nèi)組織開(kāi)展GB/T18204.3—2013《公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法第

3部分：空氣微生物指標(biāo)》使用情況調(diào)查工作，開(kāi)展追蹤評(píng)價(jià)；同時(shí)通過(guò)資料查詢，了解國(guó)

內(nèi)外空氣中細(xì)菌總數(shù)、真菌總數(shù)、β-溶血性鏈球菌、嗜肺軍團(tuán)菌指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法，綜合

考慮我國(guó)經(jīng)濟(jì)技術(shù)可行性、標(biāo)準(zhǔn)的先進(jìn)性及與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的可比性，起草組成員各自確定方法

研制的技術(shù)路線。

2021年12月上旬，召開(kāi)GB/T18204.3《公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法第3部分：空氣微生

物指標(biāo)》修訂工作專家研討會(huì)，研討修訂的主要工作方向。

2021年12月下旬，進(jìn)行方法驗(yàn)證。在全國(guó)范圍內(nèi)組織3個(gè)單位進(jìn)行方法驗(yàn)證，形成征

求意見(jiàn)稿。

2022年1月，標(biāo)準(zhǔn)起草組召開(kāi)第二次討論會(huì)議，起草組成員對(duì)各自負(fù)責(zé)修訂的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)

容進(jìn)行了介紹并與參會(huì)專家討論，形成第二稿標(biāo)準(zhǔn)文本及編制說(shuō)明

2022年2月，征求意見(jiàn)稿在全國(guó)范圍內(nèi)廣泛征求了標(biāo)準(zhǔn)主管部門、各級(jí)衛(wèi)生行政部門、

各級(jí)疾控機(jī)構(gòu)、科研院所、衛(wèi)生監(jiān)督執(zhí)法機(jī)構(gòu)、檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)、行業(yè)協(xié)會(huì)等23家相關(guān)單位的意

見(jiàn)。收到反饋意見(jiàn)共計(jì)148條，采納了105條合理科學(xué)的意見(jiàn)，對(duì)10條意見(jiàn)部分采納，對(duì)

33條涉及法律法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容理解有偏差的意見(jiàn)未采納。標(biāo)準(zhǔn)起草組按照反饋意見(jiàn)匯總處

理表對(duì)GB/T18204.3《公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法第3部分：空氣微生物指標(biāo)》征求意見(jiàn)稿進(jìn)

行修改和進(jìn)一步完善，形成送審稿，并起草編制說(shuō)明。

2022年3月，標(biāo)準(zhǔn)起草組組織召開(kāi)預(yù)評(píng)審會(huì)議對(duì)送審稿、編制說(shuō)明等相關(guān)資料進(jìn)行預(yù)

審核，共提出17條意見(jiàn)，采納15條，部分采納1條，不采納1條理解偏差的意見(jiàn)；標(biāo)準(zhǔn)起

草組根據(jù)預(yù)評(píng)審專家意見(jiàn)修改相關(guān)資料，形成《公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法第3部分：空氣微

生物指標(biāo)》（報(bào)批稿）、編制說(shuō)明（報(bào)批稿）及相關(guān)資料，通過(guò)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心協(xié)同

辦公系統(tǒng)將相關(guān)資料上報(bào)環(huán)境健康標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委員會(huì)秘書處。環(huán)境健康標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委員會(huì)秘書處

于2022年7月8日組織召開(kāi)會(huì)審會(huì)議，對(duì)《公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法第3部分：空氣微生物

指標(biāo)》進(jìn)行評(píng)審，專家一致同意《公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法第3部分：空氣微生物指標(biāo)》通

過(guò)評(píng)審。

（四）國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)主要起草人及其所做的工作（見(jiàn)表2）

表2主要起草人及其承擔(dān)的工作

主要起草人（單位）承擔(dān)的工作

項(xiàng)目負(fù)責(zé)人，負(fù)責(zé)項(xiàng)目立項(xiàng)、整體構(gòu)思、編制思路

姚孝元、唐宋（中國(guó)疾病預(yù)防控制中心環(huán)境所）及整體定位、項(xiàng)目技術(shù)把控、項(xiàng)目的整體組織和推

進(jìn)等。

用SET2020軟件對(duì)GB/T18204.3文檔進(jìn)行編輯；

按GB/T1.1—2020要求對(duì)GB/T18204.3進(jìn)行修改

李霞、丁培（中國(guó)疾病預(yù)防控制中心環(huán)境所）與撰寫；按專家提出的意見(jiàn)修改標(biāo)準(zhǔn)文本；匯總和

撰寫編制說(shuō)明，匯總征求意見(jiàn)，撰寫標(biāo)準(zhǔn)解讀、上

報(bào)函等技術(shù)資料

負(fù)責(zé)GB/T18204.3中第4章“細(xì)菌總數(shù)”的實(shí)驗(yàn)方

李霞、毛怡心（中國(guó)疾病預(yù)防控制中心環(huán)境所）法評(píng)價(jià)以及方法文本、編制說(shuō)明的撰寫并征集意見(jiàn)

等工作

負(fù)責(zé)GB/T18204.3中第5章“真菌總數(shù)”的實(shí)驗(yàn)方

丁珵、丁培（中國(guó)疾病預(yù)防控制中心環(huán)境所）法評(píng)價(jià)以及方法文本、編制說(shuō)明的撰寫并征集意見(jiàn)

等工作

負(fù)責(zé)GB/T18204.3中第6章“β-溶血性鏈球菌”的實(shí)

余淑苑、石曉路（深圳市疾病預(yù)防控制中心）驗(yàn)方法評(píng)價(jià)、補(bǔ)充、方法驗(yàn)證以及方法文本、編制

說(shuō)明的撰寫等工作

丁震、周連、馬愷（江蘇省疾病預(yù)防控制中心）；負(fù)責(zé)GB/T18204.3中第7章“嗜肺軍團(tuán)菌”的實(shí)驗(yàn)方

談立峰（常州市衛(wèi)生監(jiān)督所）法評(píng)價(jià)以及方法文本、編制說(shuō)明的撰寫等工作

二、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)編制原則和確定國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容（如技術(shù)指標(biāo)、參數(shù)、公式、性能要求、試

驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則等）的論據(jù)（包括試驗(yàn)、統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)），修訂國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)增列新舊國(guó)家

標(biāo)準(zhǔn)水平的對(duì)比

（一）國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)編制原則

1.貫徹國(guó)家的有關(guān)方針、政策、法律、法規(guī)

2.積極采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)

3.堅(jiān)持技術(shù)先進(jìn)性原則

推動(dòng)公共場(chǎng)所檢驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)發(fā)展，增加了一些公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢測(cè)必需的先進(jìn)技術(shù)方法

（如嗜肺軍團(tuán)菌檢測(cè)新增熒光PCR法）。

4.系統(tǒng)性原則

公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)方法應(yīng)便于公共場(chǎng)所衛(wèi)生監(jiān)督和檢驗(yàn)人員使用，并以物理性

指標(biāo)、化學(xué)性指標(biāo)、空氣微生物指標(biāo)、公共用品用具微生物指標(biāo)、集中空調(diào)、衛(wèi)生監(jiān)測(cè)構(gòu)成

檢驗(yàn)方法體系。

5.配套性原則

檢驗(yàn)方法應(yīng)與衛(wèi)生要求指標(biāo)配套，增加了空氣中β-溶血性鏈球菌的生化鑒定試驗(yàn)步驟，

并將先進(jìn)與傳統(tǒng)方法、實(shí)驗(yàn)室與現(xiàn)場(chǎng)方法相結(jié)合，適應(yīng)不同衛(wèi)生監(jiān)督和衛(wèi)生檢驗(yàn)部門的需求。

6.實(shí)用性原則

同一指標(biāo)保留多種檢驗(yàn)方法，如空氣中細(xì)菌總數(shù)、真菌總數(shù)檢測(cè)有撞擊法和自然沉降法。

（二）標(biāo)準(zhǔn)體系

本次修訂的公共場(chǎng)所衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)系列仍然包括《公共場(chǎng)所衛(wèi)生指標(biāo)及限值要求》、《公共

場(chǎng)所設(shè)計(jì)衛(wèi)生規(guī)范》、《公共場(chǎng)所衛(wèi)生管理規(guī)范》、《公共場(chǎng)所衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)規(guī)范》和《公共

場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法》五個(gè)系列。

其中GB/T18204《公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法》分為如下6個(gè)部分：

第1部分：物理性指標(biāo)；

第2部分：化學(xué)性指標(biāo)；

第3部分：空氣微生物指標(biāo)；

第4部分：公共用品用具微生物指標(biāo)；

第5部分：集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)；

第6部分：衛(wèi)生監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范。

本文件為GB/T18204《公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法》的第3部分。

（三）確定國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容的論據(jù)

本文件依據(jù)現(xiàn)行的GB/T18204.3《公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法第3部分：室內(nèi)空氣微生物》

標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法進(jìn)行修訂，以2014年以來(lái)國(guó)內(nèi)外發(fā)布的相關(guān)空氣指標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法、發(fā)表的

文獻(xiàn)資料空氣微生物指標(biāo)檢驗(yàn)領(lǐng)域的新技術(shù)、新方法為基礎(chǔ)，確定技術(shù)路線，從樣品采集和

保存要求、試劑配制和使用要求、實(shí)驗(yàn)條件的選擇、儀器參數(shù)的優(yōu)化、實(shí)際樣品測(cè)定以及干

擾去除等方面開(kāi)展實(shí)驗(yàn)研究，建立檢驗(yàn)方法。同時(shí)在全國(guó)范圍內(nèi)選擇3個(gè)單位開(kāi)展方法驗(yàn)

證，進(jìn)一步確認(rèn)方法的有效性和適用性。

本次修訂了原有四項(xiàng)指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法，補(bǔ)充了β-溶血性鏈球菌的生化鑒定試驗(yàn)部

分，補(bǔ)充了嗜肺軍團(tuán)菌的定量檢測(cè)方法和熒光PCR快速篩查方法，現(xiàn)將修改技術(shù)內(nèi)容的依

據(jù)分述如下：

1.范圍

本文件適用于公共場(chǎng)所空氣中細(xì)菌總數(shù)、真菌總數(shù)、β-溶血性鏈球菌和嗜肺軍團(tuán)菌的測(cè)

定，適用范圍與現(xiàn)行GB/T18204.3—2013《公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法第3部分：空氣微生物

指標(biāo)》保持一致（以下簡(jiǎn)稱GB/T18204.3—2013），其它場(chǎng)所可參照?qǐng)?zhí)行。補(bǔ)充了第一法為

仲裁法。

2.規(guī)范性引用文件

本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)

則》給出的規(guī)則補(bǔ)充了規(guī)范性引用文件，所列規(guī)范性引用文件構(gòu)成本標(biāo)準(zhǔn)必不可少的條款，

規(guī)范性引用文件主要為微生物指標(biāo)檢測(cè)所需培養(yǎng)基、試劑和實(shí)驗(yàn)室用水質(zhì)量要求的我國(guó)現(xiàn)行

國(guó)標(biāo)，以及實(shí)驗(yàn)室生物安全的國(guó)標(biāo)要求，具體引用文件為：

GB4789.28食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

3.術(shù)語(yǔ)和定義

本文件依據(jù)《伯杰細(xì)菌手冊(cè)》中定義將β-溶血性鏈球菌的英文表述修改為β-hemolytic

Streptococcus，根據(jù)GB4789.11—2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)β型溶血性鏈

球菌檢驗(yàn)》修改其定義；根據(jù)《人間傳染的病原微生物名錄》修改嗜肺軍團(tuán)菌的英文表述為

Legionellapneumophila。

GB/T18204.3—2013“撞擊法”定義有誤，因空氣中微生物可以采集到的介質(zhì)不僅限于

營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，也可以是濾膜、液體等，所以將“撞擊法”定義修改為：“采用撞擊式空氣

微生物采樣器，使空氣通過(guò)慣性撞擊，從而將懸浮在空氣中的微生物采集到采樣介質(zhì)上的采

樣方法”。

GB/T18204.3—2013“自然沉降法”定義有誤，因空氣中微生物通過(guò)重力作用，不僅僅

沉降營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，還有沙氏培養(yǎng)基平板，所以將“自然沉降法”定義修改為：“將培養(yǎng)

基平板暴露在空氣中，微生物依靠重力作用自然沉降到平板上的采樣方法”。

4.細(xì)菌總數(shù)

細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)的采樣方法為撞擊法和自然沉降法。撞擊法是采用撞擊式空氣微生物樣

器，通過(guò)抽氣動(dòng)力作用，使空氣通過(guò)狹縫或小孔產(chǎn)生高速氣流，使懸浮在空氣中的帶菌粒

子撞擊到營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，經(jīng)37℃，48h培養(yǎng)后，計(jì)算出每立方米空氣中所含的細(xì)菌菌落

數(shù)。依室內(nèi)空氣微生物污染程度確定采樣體積。固體撞擊法普遍適用于各級(jí)微生物實(shí)驗(yàn)

室，通過(guò)抽樣泵主動(dòng)抽入空氣，可獲得準(zhǔn)確空氣采樣量評(píng)估室內(nèi)菌落總數(shù)濃度，該方法現(xiàn)

為使用范圍最廣的方法，GB15982—2012《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》、GB/T18883—2002《室

內(nèi)空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》、GB/T34012—2017《通風(fēng)系統(tǒng)用空氣凈化裝置》、GB/T38517—2020

《顆粒生物氣溶膠采樣和分析通則》、T/CECS873—2021《室內(nèi)空氣微生物污染控制技

術(shù)規(guī)程》等均采用此方法來(lái)檢測(cè)空氣中細(xì)菌總數(shù)。

自然沉降法是將營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板暴露在自然環(huán)境下，通過(guò)室內(nèi)空氣自然流動(dòng)，采集沉降

在平板上的微生物顆粒，經(jīng)37℃，48h培養(yǎng)后，計(jì)算出每皿所含的細(xì)菌菌落數(shù)。該方法適

用于室內(nèi)空氣微生物較少、室內(nèi)環(huán)境較潔凈的場(chǎng)所，GB50333—2013《醫(yī)院潔凈手術(shù)部建

筑技術(shù)規(guī)范》、GB15982—2012《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》等均采用此方法來(lái)檢測(cè)空氣中細(xì)菌

總數(shù)。

本次修訂無(wú)新增方法，仍沿用原標(biāo)準(zhǔn)中撞擊法和自然沉降法，但補(bǔ)充了撞擊法中計(jì)算

公式和結(jié)果的報(bào)告方式、采樣環(huán)境條件要求和質(zhì)量控制內(nèi)容。

（1）撞擊法結(jié)果計(jì)算公式

室內(nèi)空氣中細(xì)菌總數(shù)濃度按下式計(jì)算。

6

1000

Ni

C=i1

vt

式中：

C——細(xì)菌總數(shù)，單位為菌落形成單位每立方米（CFU/m3）；

Ni——每級(jí)平板菌落數(shù)，單位為菌落形成單位（CFU）；

v——采樣流量，單位為升每分鐘（L/min）；

t——采樣時(shí)間，單位為分鐘（min）；

i——平板數(shù)量。

（2）計(jì)算結(jié)果的科學(xué)表達(dá)

撞擊法和自然沉降法計(jì)算得出的細(xì)菌總數(shù)的值均應(yīng)四舍五入到整數(shù)。

（3）采樣環(huán)境條件

在相對(duì)封閉的公共場(chǎng)所（如賓館、旅店、招待所等）采樣時(shí)，應(yīng)關(guān)閉門窗、空氣凈化

設(shè)備及新風(fēng)系統(tǒng)，若采樣前空調(diào)處于使用狀態(tài)，則采樣時(shí)應(yīng)仍保持空調(diào)正常運(yùn)轉(zhuǎn)。在相對(duì)

敞開(kāi)的公共場(chǎng)所（如商場(chǎng)、候車室等）采樣時(shí)，應(yīng)保持當(dāng)時(shí)的環(huán)境狀態(tài)。所以修改采樣條

件為：采樣時(shí)關(guān)閉門窗15min～30min，在難以關(guān)閉門窗的公共場(chǎng)所（如商場(chǎng)、候車室

等）采樣時(shí)，應(yīng)保持當(dāng)時(shí)的環(huán)境狀態(tài)。記錄室內(nèi)空調(diào)等設(shè)備運(yùn)行狀況、門窗狀況、人員數(shù)

量、溫濕度及天氣狀況等。

（4）質(zhì)量控制

每批培養(yǎng)基平板配置后需做無(wú)菌檢查，可每批選定3塊平板培養(yǎng)觀察，結(jié)果應(yīng)無(wú)菌落

生長(zhǎng)。

采樣器需定期在負(fù)載條件下用檢定合格的流量計(jì)進(jìn)行校準(zhǔn)，相對(duì)偏差不得超過(guò)5％；

在采樣前應(yīng)對(duì)采樣系統(tǒng)的氣密性進(jìn)行檢查，不得漏氣；采樣前需用酒精棉擦拭采樣頭，待

酒精揮發(fā)后采樣。

在采樣開(kāi)始前，確保所用試劑和材料為無(wú)菌狀態(tài)，操作過(guò)程和樣品運(yùn)輸中應(yīng)無(wú)菌操

作，避免人為污染。

為避免運(yùn)輸和保存過(guò)程中的污染，需同時(shí)進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)空白對(duì)照試驗(yàn)，每次或每個(gè)區(qū)域取

一個(gè)對(duì)照平板，與采樣平板同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的平板一起放入培養(yǎng)

箱培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無(wú)菌落生長(zhǎng)。如空白對(duì)照有菌生長(zhǎng)，則本批次樣品作廢，需重新采樣檢

測(cè)。

補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)人員個(gè)體防護(hù)和檢測(cè)廢棄物的處理應(yīng)依據(jù)GB19489進(jìn)行

5.真菌總數(shù)

室內(nèi)空氣中真菌的檢測(cè)是一種應(yīng)用廣泛且技術(shù)成熟的方法，衛(wèi)生部2006年頒布實(shí)施的

WS394—2012《公共場(chǎng)所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)范》中就包括真菌總數(shù)的檢測(cè)方法，在全

國(guó)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)中已推廣應(yīng)用近5年，本次公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法修訂等同采標(biāo)并更

新為現(xiàn)行有效版本。

（1）采樣方法選擇

增加檢驗(yàn)方法的選擇原則。室內(nèi)空氣中微生物有多個(gè)方法的，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況

選擇合適的檢驗(yàn)方法，第一法為仲裁法。

空氣微生物采樣方法有主動(dòng)采樣的慣性撞擊類【射流撞擊式采樣器（固體撞擊式采樣器

和液體撞擊式采樣器）、離心撞擊式采樣器】、過(guò)濾阻留類、靜電沉著類、溫差迫降類、生

物類；被動(dòng)式采樣的自然沉降法。其優(yōu)缺點(diǎn)見(jiàn)表3。

自然沉降法——利用空氣微生物粒子的重力作用，在一定的時(shí)間內(nèi)，讓所處區(qū)域的空氣

中微生物顆粒逐步沉降到帶有培養(yǎng)介質(zhì)的平皿內(nèi)的一種采樣方法。本法雖然古老，但由于其

所需設(shè)備簡(jiǎn)單，方法易行，能對(duì)空氣污染情況作初步了解，因此在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)期內(nèi)是空氣微

生物指標(biāo)檢測(cè)的一種最常用的方法，該方法多用于因現(xiàn)場(chǎng)條件所限的某些特定場(chǎng)所，在我國(guó)

廣大基層醫(yī)療衛(wèi)生部門仍被廣泛利用。

固體撞擊式采樣器——是當(dāng)今微生物采樣器中應(yīng)用最廣泛、品種最多的一類采樣器。它

是利用各種抽氣裝置，以每分鐘恒定氣流量，使空氣通過(guò)狹小噴嘴，以便空氣和懸浮于其中

的微生物粒子形成高速氣流，在離開(kāi)噴嘴時(shí)氣流射向采集面，氣體沿采集面拐彎而去，而顆

粒則按慣性繼續(xù)直線前進(jìn)，撞擊并粘附于采集面上，從而被捕獲。目前用于該方法的固體撞

擊式采樣器在國(guó)內(nèi)外已有很多成熟的相關(guān)產(chǎn)品，并被廣泛使用。撞擊法由于受環(huán)境因素影響

小，準(zhǔn)確可靠，且其計(jì)數(shù)結(jié)果的變異系數(shù)較小，平行樣相對(duì)離散程度較低，重復(fù)試驗(yàn)的結(jié)果

較穩(wěn)定，故被作為一種國(guó)際通用的空氣采樣法被廣泛使用。GB18204.3—2013采用的六級(jí)

篩孔式采樣器采樣，該檢驗(yàn)方法是采集空氣中可培養(yǎng)微生物的經(jīng)典方法。撞擊器由六層有微

小孔眼的鋁合金圓盤組成，圓盤下放采樣平板，每圓盤間有密封膠圈，在通過(guò)三個(gè)彈簧掛鉤

把圓盤牢固地聯(lián)在一起。每個(gè)圓盤上有400個(gè)成環(huán)行排列、逐層減小、尺寸精確的小孔，標(biāo)

準(zhǔn)采樣流量為1m3（28.3L/min）。當(dāng)含有微生物粒子的氣流進(jìn)入最上層的采樣口后，由于

氣流的逐層增高，不同大小的微生物粒子按空氣動(dòng)力學(xué)特征分別撞擊在相應(yīng)的培養(yǎng)基表面

上。捕獲在各級(jí)上的粒子大小范圍是由該級(jí)孔眼的氣流速度和上一級(jí)的粒子截阻率而決定

的。捕獲率≥98%。

液體撞擊式采樣器——同固體撞擊式采樣器一樣，是利用噴射氣流的方式將空氣中的微

生物粒子收集在小體積的液體中。

離心撞擊式采樣器——是利用氣體在旋轉(zhuǎn)徑路中運(yùn)動(dòng)時(shí)所產(chǎn)生的離心力，使粒子獲得一

定動(dòng)量，并因其慣性而偏離氣體流線，撞擊沉著在附近的采集面上。

過(guò)濾阻留類——過(guò)濾采樣即是利用抽氣裝置，使空氣通過(guò)濾材而使微生物粒子阻留在濾

材上，供進(jìn)一步分析。

靜電沉著類——利用高壓靜電場(chǎng)，使空氣中的微生物粒子帶上一定量的電荷后，被帶相

反電荷的采集面所吸著，而將空氣中微生物采集下來(lái)。其基本結(jié)構(gòu)包括高壓電源、放電電極、

采集電極（即采集面）和抽氣裝置醫(yī)學(xué)。

溫差迫降類——基于粒子的熱泳原理，使空氣中的微生物粒子沉著于采集面上。粒子從

溫度高的區(qū)帶向溫度低的區(qū)帶運(yùn)動(dòng)叫熱泳。采樣器結(jié)構(gòu)包括加熱面、冷卻面和狹窄的空氣通

道。

生物類——用敏感的動(dòng)物和植物來(lái)進(jìn)行空氣微生物的檢測(cè)。

表3各種采樣法優(yōu)缺點(diǎn)比較

采樣法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)

自然沉降法設(shè)備簡(jiǎn)單，方法易行，能對(duì)空氣污染(1)由于地心吸引弱，小粒子很難在短時(shí)

情況作初步了解間內(nèi)采集到，特別是對(duì)呼吸道感染有重要

意義的微粒，在空氣中沉降速度慢、懸浮

時(shí)間長(zhǎng)，沉降法對(duì)其捕獲率低。(2)容易受

外界氣流影響。(3)奧姆斯基公式未考慮沉

降量與顆粒的大小的關(guān)系，因此菌落計(jì)數(shù)

不能用體積單位表示，數(shù)據(jù)是半定量的

固體撞擊式采樣(1)采樣粒徑譜的范圍廣。(2)采樣效率污染嚴(yán)重時(shí)采樣時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，可發(fā)生菌落重

高，對(duì)呼吸道最易沉著的粒子大小逃疊生長(zhǎng)。存在壁損失造成的粒子從采集面

失少。(3)微生物存活率高。(4)敏感性滑脫和粒子被打碎等所致的采樣結(jié)果誤

高。(5)操作簡(jiǎn)便。（6）受環(huán)境因素影差。采樣時(shí)菌落有時(shí)會(huì)相互融合和產(chǎn)生靜

響小，計(jì)數(shù)結(jié)果的變異系數(shù)較小，平電，影響捕獲效率

行樣的相對(duì)離散程度較低，重復(fù)試驗(yàn)

的結(jié)果較穩(wěn)定

液體撞擊式采樣(1)適于高濃度的空氣微生物采樣。(2)(1)不適宜低溫或長(zhǎng)時(shí)間采樣。(2)采樣空

能將采集的樣品分別分析。(3)采樣時(shí)氣流量小，微生物濃度低時(shí)，難于檢測(cè)。

因氣流沖擊和采樣液攪動(dòng)，可將粒子(3)采樣液易污染。(4)由于是玻璃制品攜帶

中的微生物釋放并均勻分布于采樣不便，不適宜現(xiàn)場(chǎng)多次采樣

液，從而能測(cè)出空氣中活微生物數(shù)量。

(4)采樣液有保護(hù)作用，對(duì)脆弱的微生

物(如病毒、立克次氏體)也能采樣。(5)

使用方便、價(jià)格低廉、易消毒、可反

復(fù)使用。

離心撞擊式采樣結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、體積小、重量輕、噪音小、無(wú)法判斷采氣量和有效采氣量，有效采氣

使用方便靈活，對(duì)空氣微生物粒子捕量不恒定，對(duì)于呼吸道感染有重要意義的

獲率較高，除能采到空氣中的細(xì)菌，5pm以下的微生物粒子采樣效率低，由于

還可采集到真菌、病毒及霉菌毒素問(wèn)一部分細(xì)菌粒子會(huì)損耗于抽氣葉輪的葉片

題上，而導(dǎo)致結(jié)果誤差，采樣片及外套難以

滅菌

過(guò)濾式采樣器法在低溫條件下采樣，對(duì)微生物粒子的易使耐干燥能力低的微生物被氣流吹干致

捕獲率要高。死，且濾膜孔徑易堵塞，難以保持穩(wěn)定的

采氣量。后續(xù)的洗脫過(guò)程會(huì)影響微生物的

活性，且濾膜容易堵塞，難以保持穩(wěn)定的

采氣量

靜電沉著類采集空氣標(biāo)本容量大，濃縮空氣倍數(shù)在電暈放電過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生紫外線、臭氧和

高，對(duì)小粒子的捕獲率高，實(shí)用性強(qiáng)氧化氮，這對(duì)微生物的存活不利；其次，

(適于空氣中微生物濃度很低條件下空氣的相對(duì)濕度≥85％時(shí)易漏電，采樣效

的采樣，尤其是空氣中致病微生物的率低；另外設(shè)備大、結(jié)構(gòu)復(fù)雜，使用維護(hù)

采集)和消毒均不便

溫差迫降類采樣器采集的樣品可直接培養(yǎng),采氣量小,采樣時(shí)間只能維持5min；采集

對(duì)低濃度氣溶膠快速、簡(jiǎn)單、粒子損面需要冷水冷卻，使用不便利，難以在現(xiàn)

傷小場(chǎng)中應(yīng)用

生物類采樣器具有一般空氣微生物采樣器所具有的由于動(dòng)物的呼吸量較小，需要暴露的時(shí)間

功能外,還能為進(jìn)入呼吸道的微生物長(zhǎng)，所用動(dòng)物量較多，攜帶管理不便，所

粒子提供生長(zhǎng)繁殖場(chǎng)所,以實(shí)際無(wú)法推廣應(yīng)用。

（2）實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法選擇

針對(duì)培養(yǎng)法，目前還沒(méi)有一種統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)方法用于室內(nèi)環(huán)境中真菌的檢測(cè)和計(jì)數(shù)，經(jīng)過(guò)

濾膜法或撞擊法采集空氣樣本后進(jìn)行人工計(jì)數(shù)是常見(jiàn)流程。培養(yǎng)和計(jì)數(shù)法受到多種因素的影

響，在定量分析中有一定的局限性。而非培養(yǎng)方法不受微生物生存活力的影響，通常通過(guò)濾

膜法或液體撞擊法對(duì)空氣樣本進(jìn)行采集。常用方法還包括使用玻璃載玻片狹縫嵌塞法和乳酚

藍(lán)染色法對(duì)真菌孢子總濃度進(jìn)行顯微測(cè)定，但很難實(shí)現(xiàn)對(duì)樣本中的微生物進(jìn)行分類。應(yīng)用電

子顯微鏡或掃描電子顯微鏡可以較好進(jìn)行觀察。此外，也可對(duì)微生物成分或代謝物（如真菌

毒素、內(nèi)毒素等）進(jìn)行測(cè)量以估計(jì)其暴露情況。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，應(yīng)用基于聚合

酶鏈反應(yīng)的PCR方法、免疫分析法以及測(cè)序法等也為真菌的檢測(cè)和鑒定開(kāi)辟了新的途徑。

PCR法和測(cè)序法能夠不受微生物是否可培養(yǎng)的特性影響，對(duì)空氣樣本中的所有真菌進(jìn)行檢

測(cè)。還有針對(duì)真菌生物量評(píng)估的標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)的方法，如用氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定麥角固

醇、特異酶免疫法測(cè)定真菌胞外多糖等，各種方法優(yōu)缺點(diǎn)見(jiàn)表4。

表4各種實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)方法優(yōu)缺點(diǎn)比較

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)

顯微鏡直接觀察可以直接進(jìn)行觀察很難實(shí)現(xiàn)對(duì)樣本中的微生物進(jìn)行

分類

培養(yǎng)方法可確定活性時(shí)間長(zhǎng)，受多種因素的影響，在

定量分析中有一定的局限性

生化檢測(cè)檢測(cè)抗原、麥角固醇、β-（1,3）-無(wú)法確定微生物活性

D-葡聚糖等

分子遺傳學(xué)方法如PCR法和測(cè)序不受微生物是否可培養(yǎng)的特性影無(wú)法確定微生物活性

法響，對(duì)空氣樣本中的所有真菌進(jìn)

行檢測(cè)。

綜上所述，本次修訂等效采用GB/T18204.3，即撞擊法測(cè)定空氣中真菌總數(shù)的方法是使

用六級(jí)篩孔撞擊式微生物采樣器和沙氏瓊脂培養(yǎng)基平皿，采樣流量為28.3L/min，依室內(nèi)空

氣微生物污染程度確定采樣時(shí)間為5min～15min；然后將采集真菌后的沙氏瓊脂培養(yǎng)基平

皿置28℃培養(yǎng)觀察并報(bào)告結(jié)果。

自然沉降法測(cè)定空氣中真菌總數(shù)的方法是使用沙氏瓊脂培養(yǎng)基平皿，在采樣點(diǎn)位置暴露

5min；然后將采集真菌后的沙氏瓊脂培養(yǎng)基平皿置28℃培養(yǎng)觀察并報(bào)告結(jié)果。

（3）沙氏瓊脂培養(yǎng)基

補(bǔ)充可采用符合GB4789.28要求的成品培養(yǎng)基；

補(bǔ)充沙氏瓊脂平板制備方法。

（4）儀器設(shè)備

補(bǔ)充所需主要儀器設(shè)備的技術(shù)參數(shù)，自然沉降法補(bǔ)充采樣支架。

（5）試驗(yàn)步驟

a)采樣點(diǎn)

等同采用GB18204.3—2013表達(dá)形式，在規(guī)范性附錄A中做出相應(yīng)規(guī)定。

b)采樣環(huán)境要求

同細(xì)菌總數(shù)。

c)采樣方法

GB18204.3—2013頒布實(shí)施以來(lái)，在全國(guó)公共場(chǎng)所監(jiān)測(cè)項(xiàng)目中應(yīng)用，收集2018年至今

的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，在公共場(chǎng)所空氣真菌總數(shù)監(jiān)測(cè)中，使用六級(jí)篩孔撞擊式微生物采樣器，以28.3

L/min流量采集5min～10min，所得真菌總數(shù)在每級(jí)平皿上菌落數(shù)在可計(jì)數(shù)范圍之內(nèi)，采

樣流量和采樣時(shí)間切實(shí)可行，所以本次修訂等同采用GB18204.3—2013的方法，即以無(wú)菌

操作，將沙氏瓊脂平板逐級(jí)裝入六級(jí)篩孔撞擊式微生物采樣器，以28.3L/min流量采集5

min～10min，采樣器使用按照說(shuō)明書要求進(jìn)行。

d)樣品運(yùn)輸和保存

補(bǔ)充樣品運(yùn)輸和保存要求，即采集后的沙氏瓊脂平板需儲(chǔ)存于4℃，并于4h內(nèi)返回實(shí)

驗(yàn)室進(jìn)行培養(yǎng)。

e)實(shí)驗(yàn)室分析

GB/T18204.3—2013未明確采樣后平板培養(yǎng)時(shí)正置還是倒置，且要求逐日觀察，容易造

成次生菌生長(zhǎng)，影響檢測(cè)結(jié)果，所以本次修行規(guī)定：采集真菌后的沙氏瓊脂平板倒置于28℃

±1℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第3天開(kāi)始觀察真菌生長(zhǎng)情況，若真菌數(shù)量過(guò)多，可于第3天

計(jì)數(shù)結(jié)果并記錄培養(yǎng)時(shí)間，否則于第5天記錄結(jié)果。

f)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

按照細(xì)菌總數(shù)結(jié)果計(jì)算方式進(jìn)行。

根據(jù)GB/T18204.3—2013使用情況調(diào)查意見(jiàn)，保證報(bào)告結(jié)果的統(tǒng)一性，特做補(bǔ)充說(shuō)明，

在所有平板均無(wú)菌生長(zhǎng)時(shí)應(yīng)檢查儀器設(shè)備是否正常，在均無(wú)異常的情況下報(bào)告（未檢出/m3）；

在有菌生長(zhǎng)時(shí)，按照公式計(jì)算結(jié)果，小數(shù)點(diǎn)后的數(shù)字四舍五入并保留到整數(shù)位。

（6）補(bǔ)充質(zhì)量控制部分

GB/T18204.3—2013無(wú)質(zhì)量控制要求，本次修訂，針對(duì)培養(yǎng)基平板配制、撞擊法使用的

儀器設(shè)備、采樣過(guò)程、檢測(cè)過(guò)程提出質(zhì)量控制措施，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

撞擊法質(zhì)量控制要求：

a)每批沙氏瓊脂平板配置后需做無(wú)菌檢查，可每批選定3塊平板培養(yǎng)觀察，結(jié)果應(yīng)無(wú)

菌落生長(zhǎng)。

b)采樣器需定期在負(fù)載條件下用檢定合格的流量計(jì)進(jìn)行校準(zhǔn)，相對(duì)偏差不得超過(guò)5％；

在采樣前應(yīng)對(duì)采樣系統(tǒng)的氣密性進(jìn)行檢查，不得漏氣；采樣前需用酒精棉擦拭采樣

頭。

c)在采樣開(kāi)始前，確保所用試劑和材料為無(wú)菌狀態(tài)，操作過(guò)程中避免人為污染。

d)為避免運(yùn)輸和保存過(guò)程中的污染，需同時(shí)進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)空白對(duì)照試驗(yàn)，每次或每個(gè)區(qū)域

取一個(gè)對(duì)照平板，與采樣平板同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的平板一起

放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無(wú)菌落生長(zhǎng)。

e)實(shí)驗(yàn)人員個(gè)體防護(hù)和檢測(cè)廢棄物的處理應(yīng)依據(jù)GB19489進(jìn)行。

（7）自然沉降法質(zhì)量控制要求：

a)每批沙氏瓊脂平板配置后需做無(wú)菌檢查，可每批選定3塊平板培養(yǎng)觀察，結(jié)果應(yīng)無(wú)

菌落生長(zhǎng)。

b)在采樣開(kāi)始前，確保所用試劑和材料為無(wú)菌狀態(tài)，操作過(guò)程中避免人為污染。

c)為避免運(yùn)輸和保存過(guò)程中的污染，需同時(shí)進(jìn)行陰性對(duì)照試驗(yàn)，每次或每個(gè)區(qū)域取一

個(gè)對(duì)照平板，與采樣平板同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的平板一起放入

培養(yǎng)箱培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無(wú)菌落生長(zhǎng)。

6.β-溶血性鏈球菌

本次修訂增加觸酶試驗(yàn)等生化鑒定試驗(yàn)，相應(yīng)地增加了儀器和設(shè)備、培養(yǎng)基和試劑，原

培養(yǎng)基和試劑中具體列出血瓊脂平板、革蘭氏染色液和3%過(guò)氧化氫（H2O2）溶液的成分和

制法。

觸酶試驗(yàn)是鑒定β-溶血性鏈球菌常用的生化鑒定方法，國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)

2015年實(shí)施的食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB4789.11—2014《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)β型溶血性鏈球菌

檢驗(yàn)》中就將觸酶試驗(yàn)作為鑒定β-溶血性鏈球菌的生化方法。本次公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法

修訂將其納入。另外補(bǔ)充6.1.5.5其他檢驗(yàn)使用生化鑒定試劑盒或生化鑒定卡對(duì)可疑菌落

進(jìn)行鑒定。增加此條可以更加準(zhǔn)確的鑒定β-溶血性鏈球菌。

其他修改

（1）“6.1.2.1血瓊脂平板”原文中血瓊脂平板配制的pH7.4～7.6改為pH7.5±0.1，高

壓滅菌121℃20min改成121℃15min。血瓊脂平板制法增加了“6.1.2.1.2.1脫纖維羊血”

的配制方法。

（2）“6.1.3儀器和設(shè)備”中，“6.1.3.3普通培養(yǎng)箱”修改為CO2培養(yǎng)箱，增加了“6.1.3.4

普通顯微鏡：10倍～100倍”，用于革蘭氏染色鏡檢；增加了“6.1.3.5電子天平”用于培養(yǎng)

基的配制。刪除了“平皿：?90mm”，因?yàn)槠矫蟛粚儆趦x器設(shè)備。

（3）“6.1.5.1培養(yǎng)方法”中的培養(yǎng)溫度由35℃～37℃改為36℃±1℃，5%CO2培養(yǎng)

24h～48h。

（4）“6.1.5.3革蘭氏染色鏡檢”中原文有“受培養(yǎng)與操作條件影響，鏈的長(zhǎng)度在4個(gè)～

8個(gè)細(xì)胞至幾十個(gè)細(xì)胞之間”，此句多余，刪除。

（5）試劑的重量、體積為小數(shù)點(diǎn)后面保留一位有效數(shù)字，原來(lái)的未保留一位有效數(shù)字，

現(xiàn)統(tǒng)一增加。

7.嗜肺軍團(tuán)菌

本次修訂保留培養(yǎng)法，同時(shí)新增熒光PCR法對(duì)嗜肺軍團(tuán)菌進(jìn)行快速檢測(cè)。原標(biāo)準(zhǔn)中的

檢測(cè)方法—培養(yǎng)法被認(rèn)為是檢驗(yàn)嗜肺軍團(tuán)菌的金標(biāo)準(zhǔn)，在全國(guó)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)中已推廣

應(yīng)用近8年，可以檢測(cè)出所有軍團(tuán)菌，且特異性高，但存在檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)、效率低、對(duì)試驗(yàn)

人員技術(shù)要求高、無(wú)法定量檢測(cè)的局限性。

近年來(lái)，常用于空氣中嗜肺軍團(tuán)菌的檢測(cè)方法還有分子生物學(xué)檢測(cè)，因其具有簡(jiǎn)便、快

速、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，在實(shí)時(shí)監(jiān)控和及時(shí)預(yù)警上具有很大的優(yōu)勢(shì)，如常規(guī)PCR法、熒光PCR法、

EMA+qPCR法等。常規(guī)PCR法操作簡(jiǎn)便、快速，但敏感性較差，并且只能對(duì)軍團(tuán)菌進(jìn)行定性

檢測(cè)。熒光PCR法（qPCR）是在常規(guī)PCR法的反應(yīng)體系中加入熒光基因，具有定性和定量的

優(yōu)點(diǎn)，速度快耗時(shí)短，且特異度高，提高了軍團(tuán)菌的檢出率，該方法也是除了細(xì)菌培養(yǎng)法外

唯一一項(xiàng)寫入ISO技術(shù)規(guī)范的軍團(tuán)菌屬和/或嗜肺軍團(tuán)菌檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。但是，該方法通過(guò)檢測(cè)

DNA來(lái)檢測(cè)軍團(tuán)菌，包括無(wú)致病性的死菌，可能導(dǎo)致假陽(yáng)性的出現(xiàn)。EMA+qPCR法是用于定量

檢測(cè)軍團(tuán)菌活菌的檢測(cè)方法，EMA可以抑制死菌的PCR擴(kuò)增，從而定量檢測(cè)樣品中軍團(tuán)菌活

菌濃度，但該方法在國(guó)內(nèi)外均未標(biāo)準(zhǔn)化，方法技術(shù)尚不成熟。各種方法優(yōu)缺點(diǎn)見(jiàn)表5。

軍團(tuán)菌檢測(cè)的具有一定復(fù)雜性，分子檢測(cè)法并不能完全取代傳統(tǒng)的檢測(cè)手段。根據(jù)需

要選擇相應(yīng)的檢測(cè)方法，或聯(lián)合使用多種檢測(cè)手段，才能正確評(píng)估軍團(tuán)菌病暴發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)因

素，對(duì)及時(shí)采取預(yù)防控制措施，預(yù)防軍團(tuán)病的發(fā)生具有重要意義。因此，本次修訂保留培

養(yǎng)法并補(bǔ)充定量檢測(cè)方法，同時(shí)新增熒光PCR法作為嗜肺軍團(tuán)菌快速檢測(cè)方法。

表5各種實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)方法優(yōu)缺點(diǎn)比較

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)

培養(yǎng)法可以檢測(cè)出所有軍團(tuán)菌，且特異性敏感性低；培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)；對(duì)實(shí)驗(yàn)人員技

高，結(jié)果可靠。對(duì)于獲得軍團(tuán)菌完整術(shù)要求較高；無(wú)法對(duì)樣品中的嗜肺軍團(tuán)

信息，如研究其基因背景,耐藥性或分菌進(jìn)行定量測(cè)定

子分型十分必要

常規(guī)PCR法操作簡(jiǎn)便、快速，檢出率相對(duì)較高敏感性較差，并且只能對(duì)軍團(tuán)菌進(jìn)行定

性檢測(cè)

熒光PCR法具有定性和定量的優(yōu)點(diǎn)，特異性強(qiáng)，耗無(wú)法區(qū)分活菌和死菌，可能導(dǎo)致假陽(yáng)性

時(shí)短，特異度高，提高了軍團(tuán)菌的檢出

率

EMA+qPCR法具有定性和定量的優(yōu)點(diǎn)，特異性強(qiáng)，速方法技術(shù)未標(biāo)準(zhǔn)化，尚不成熟

度快耗時(shí)短，提高了對(duì)有致病潛力的菌

株檢測(cè)的準(zhǔn)確性

（1）儀器設(shè)備

液體沖擊式采樣器是利用噴射氣流的方式捕獲空氣中的微生物粒子。這是WHO和美

國(guó)CDC目前推薦的空氣微生物采樣方法，也是目前大量國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道中采用的空氣微生

物采樣方法；目前已有的流量達(dá)到100L/min的氣溶膠采樣器可以避免固體撞擊式采樣器

的重疊效應(yīng)，可以將一次采集的樣品采用不同的方法進(jìn)行分析，捕集效率高，可捕獲0.5μ

m的小粒子，采樣液對(duì)脆弱微生物有保護(hù)作用，使用方便，可反復(fù)消毒使用，適用于空氣

中濃度較低的嗜肺軍團(tuán)菌的采集，尚無(wú)其他可替代的方法。故仍嗜肺軍團(tuán)菌的采集方法。

a)原標(biāo)準(zhǔn)中6.2.4平皿改為無(wú)菌平皿，90mm改為直徑9cm。

b)為了格式標(biāo)準(zhǔn)，CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)溫度35℃-37℃改為36℃±1℃

c)原標(biāo)準(zhǔn)中6.2.5紫外燈改為紫外線燈

d)因?qū)嶒?yàn)過(guò)程中需要使用無(wú)菌接種環(huán)，故增加無(wú)菌接種環(huán)：直徑3mm。

e)因?qū)嶒?yàn)過(guò)程中需要使用微量移液器，故增加微量移液器：100μL、200μL。

（2）試劑和培養(yǎng)基

a)增加革蘭氏染色液的成分和革蘭氏染色法的操作步驟。

b)因?yàn)閷?shí)驗(yàn)過(guò)程中有氧化酶實(shí)驗(yàn)、硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn)、尿素酶實(shí)驗(yàn)、明膠液化實(shí)驗(yàn)和

水解馬尿酸實(shí)驗(yàn)，而原標(biāo)準(zhǔn)試劑和培養(yǎng)基中沒(méi)有這些生化試劑，故需加上生化試

劑和成分。

c)因原標(biāo)準(zhǔn)6.3.9軍團(tuán)菌分型血清試劑和6.5.6中嗜肺軍團(tuán)菌診斷血清名稱不一致，

故名稱統(tǒng)一為嗜肺軍團(tuán)菌診斷血清。

（3）檢驗(yàn)步驟

a)為了格式標(biāo)準(zhǔn)，原標(biāo)準(zhǔn)6.5.3，6.5.5中溫度35℃-37℃改為36℃±1℃，孵育改為培

養(yǎng)。

b)為了表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)，原標(biāo)準(zhǔn)6.5.4中菌落整齊改為菌落邊緣整齊。

c)因原標(biāo)準(zhǔn)6.5.4中對(duì)紫外線燈觀察菌落描述不詳細(xì)，參考GB/T40392-2021《循環(huán)

冷卻水中軍團(tuán)菌的檢測(cè)》，在原標(biāo)準(zhǔn)6.5.4中增加熒光的顏色有助于區(qū)分樣品中

軍團(tuán)菌的不同種類。為了避免軍團(tuán)菌的死亡，不能將平板長(zhǎng)時(shí)間暴露在紫外燈

下，宜在數(shù)秒內(nèi)完成。

d)因?yàn)榕囵B(yǎng)基上2天之內(nèi)生長(zhǎng)的均不是軍團(tuán)菌，參考GB/T40392-2021《循環(huán)冷卻

水中軍團(tuán)菌的檢測(cè)》，故需在原標(biāo)準(zhǔn)6.5.5加上在GVPC培養(yǎng)基上2d內(nèi)生長(zhǎng)的菌

落均不是軍團(tuán)菌。

e)因?yàn)檐妶F(tuán)菌的顏色形態(tài)各異，培養(yǎng)基上每種顏色形態(tài)均有可能是軍團(tuán)菌，參考

GB/T40392-2021《循環(huán)冷卻水中軍團(tuán)菌的檢測(cè)》，故需在原標(biāo)準(zhǔn)6.5.5加上如果

有不同類型的疑似軍團(tuán)菌菌落，則每種類型應(yīng)至少選擇3個(gè)疑似菌落進(jìn)行培養(yǎng)驗(yàn)

證。

f)原標(biāo)準(zhǔn)6.5.5中L-半光氨酸缺失的BCYE瓊脂平板與6.3.6的BCYE-Cys瓊脂平板

名稱不一致，故名稱統(tǒng)一為BCYE-Cys瓊脂平板。

g)原標(biāo)準(zhǔn)6.5.6中缺少革蘭染色形態(tài)觀察，參考GB/T40392—2021《循環(huán)冷卻水中

軍團(tuán)菌的檢測(cè)》，故需加上革蘭染色形態(tài)觀察。

h)原標(biāo)準(zhǔn)6.5.6中生化實(shí)驗(yàn)沒(méi)有具體操作步驟和結(jié)果觀察，參考GB/T40392-2021

《循環(huán)冷卻水中軍團(tuán)菌的檢測(cè)》，故需加上生化實(shí)驗(yàn)具體步驟和結(jié)果觀察。

i)原標(biāo)準(zhǔn)6.5.6中缺少嗜肺軍團(tuán)菌革蘭染色判定結(jié)果，故需在文字修訂6.5.6.7加上

染色鏡檢為革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌。

j)原標(biāo)準(zhǔn)6.5.6中血清學(xué)實(shí)驗(yàn)缺少相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)步驟，已補(bǔ)充。

k)本次新增熒光PCR法對(duì)嗜肺軍團(tuán)菌進(jìn)行快速檢測(cè)的相關(guān)內(nèi)容。

（4）補(bǔ)充質(zhì)量控制部分

GB/T18204.3—2013無(wú)質(zhì)量控制要求，本次修訂，針對(duì)原料選擇，配制方法，質(zhì)量檢

查、生物安全提出控制措施，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

要求如下：

a)原料選擇

培養(yǎng)基和試劑需符合GB4789.28的質(zhì)量要求，采用國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的成品培養(yǎng)基需有FSDA

（中國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局）批準(zhǔn)的生產(chǎn)文號(hào)。

b)配制方法

每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法與劑量配制，滅菌，并且要記

錄配制量與操作者、日期，并于包裝上標(biāo)明使用期限。

c)質(zhì)量檢查

用嗜肺軍團(tuán)菌和非嗜肺軍團(tuán)菌標(biāo)準(zhǔn)菌株接種BCYE和BCYE-CYE瓊脂平板進(jìn)行質(zhì)控

試驗(yàn)，看其長(zhǎng)勢(shì)，以保證各種培養(yǎng)基能培養(yǎng)分離出相應(yīng)致病菌。

d)生物安全

嗜肺軍團(tuán)菌是致病菌，實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)有二級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室工作的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，

實(shí)驗(yàn)人員在處理或檢測(cè)可疑致病菌時(shí)應(yīng)采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施，減少職業(yè)暴露，并保證符合

國(guó)家有關(guān)法規(guī)規(guī)定的條件。

8.附錄A

以附錄形式列出現(xiàn)場(chǎng)采樣布點(diǎn)要求，具體技術(shù)內(nèi)容如下：

（1）范圍

本附錄規(guī)定了公共場(chǎng)所空氣中微生物撞擊法和自然沉降法現(xiàn)場(chǎng)采樣點(diǎn)布置的基本要求。

（2）采樣點(diǎn)數(shù)量

依據(jù)GB/T18204.6進(jìn)行布點(diǎn)。

（3）布點(diǎn)方式

為體現(xiàn)公共場(chǎng)所內(nèi)空氣微生物濃度，使采樣檢測(cè)結(jié)果接近真實(shí)情況，采用均勻布點(diǎn)原則。

同時(shí)強(qiáng)調(diào)采樣點(diǎn)應(yīng)避開(kāi)通風(fēng)口、通風(fēng)道和熱源，離墻壁距離應(yīng)大于0.5m，離門窗距離應(yīng)大

于1m，如同時(shí)采集其他空氣樣品，與其它采樣器距離應(yīng)大于1m。

（4）采樣點(diǎn)高度

室內(nèi)空氣采樣點(diǎn)高度和人呼吸帶的高度保持一致。

三、主要試驗(yàn)（或驗(yàn)證）的分析、綜述報(bào)告，技術(shù)經(jīng)濟(jì)論證，預(yù)期的經(jīng)濟(jì)效果

本次修訂新增方法主要驗(yàn)證數(shù)據(jù)及報(bào)告見(jiàn)驗(yàn)證報(bào)告附件。

本次制修訂的過(guò)程中，考慮我國(guó)目前國(guó)情，部分地區(qū)經(jīng)濟(jì)條件以及技術(shù)條件有所差異，

對(duì)方法的可行性和適用性均進(jìn)行了充分考慮。通過(guò)本次修訂，希望能夠更好地滿足各級(jí)檢驗(yàn)

機(jī)構(gòu)的實(shí)際應(yīng)用需求，切實(shí)保障新版GB37488《公共場(chǎng)所衛(wèi)生指標(biāo)及限值要求》、GB37487

《公共場(chǎng)所衛(wèi)生管理規(guī)范》、GB37678《公共場(chǎng)所衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)規(guī)范》的實(shí)施。

本次修訂補(bǔ)充了β-溶血性了鏈球菌的生化鑒定步驟，為此在三家單位進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室比對(duì)

實(shí)驗(yàn)，選取17株β-溶血性鏈球菌的臨床分離株，β-溶血性鏈球菌的標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC21059

作為陰性對(duì)照，金黃色葡萄球菌ATCC25923作為陽(yáng)性對(duì)照，于2021年11月25日～30日，

分別在三家單位（深圳市疾病預(yù)防控制中心、寶安區(qū)疾病預(yù)防控制中心和龍華區(qū)疾病預(yù)防控

制中心）開(kāi)展β-溶血性鏈球菌的觸酶試驗(yàn)的比對(duì)。比對(duì)結(jié)果見(jiàn)表6，實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合預(yù)期。

表6β-溶血性鏈球菌觸酶試驗(yàn)三家臨床單位比對(duì)結(jié)果

單位菌株數(shù)（株）陰性（株）陽(yáng)性（株）

深圳市CDC17170

寶安區(qū)CDC17170

龍華區(qū)CDC17170

中國(guó)疾病預(yù)防控制中心環(huán)境與健康相關(guān)產(chǎn)品安全所受國(guó)家衛(wèi)健委委托起草《公共場(chǎng)所環(huán)

境樣品嗜肺軍團(tuán)菌定量檢驗(yàn)方法》標(biāo)準(zhǔn)，項(xiàng)目編號(hào)20140901。該項(xiàng)目建立熒光定量PCR方

法檢測(cè)軍團(tuán)菌，于2014年11月分別在遼寧省疾病預(yù)防控制中心、杭州市疾病預(yù)防控制中

心、無(wú)錫市疾病預(yù)防控制中心開(kāi)展方法驗(yàn)證。三家疾控中心的驗(yàn)證結(jié)果均符合預(yù)期。因?qū)嶒?yàn)

中用到的熒光定量PCR方法不僅能夠定量，其最基本的功能就是定性。本標(biāo)準(zhǔn)的制定引用

該項(xiàng)目中熒光PCR的引物和探針及擴(kuò)增體系，只需要定性判讀結(jié)果即可，對(duì)于判斷空氣中

是否存在軍團(tuán)菌的污染，具有初篩和快速確認(rèn)的功能。因此這三家單位的驗(yàn)證試驗(yàn)適用于本

標(biāo)準(zhǔn)的方法驗(yàn)證。

四、采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)的程度，以及與國(guó)際、國(guó)外同類標(biāo)準(zhǔn)水平的對(duì)比情況，或

與測(cè)試的國(guó)外樣品、樣機(jī)的有關(guān)數(shù)據(jù)對(duì)比情況

(一)細(xì)菌總數(shù)

韓國(guó)《公用設(shè)施室內(nèi)空氣質(zhì)量控制法》規(guī)定了醫(yī)療機(jī)構(gòu)，培育機(jī)構(gòu)，老人福利機(jī)構(gòu)，商

業(yè)教育機(jī)構(gòu)內(nèi)空氣中細(xì)菌總數(shù)的限值，為強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)。使用的安德森級(jí)聯(lián)采樣器，采樣體積

為200L～1000L。

WHO、美國(guó)、日本、澳大利亞、加拿大、芬蘭、德國(guó)室內(nèi)空氣標(biāo)準(zhǔn)中都沒(méi)有細(xì)菌總數(shù)指

標(biāo)規(guī)定。

(二)真菌總數(shù)

本次修訂廣泛收集了以來(lái)國(guó)內(nèi)外發(fā)布的空氣中真菌總數(shù)的檢驗(yàn)方法及發(fā)表的文獻(xiàn)資料，

包括但不限于WHO的《WHOGuidelinesforIndoorAirQuality:DampnessandMold》、國(guó)際

標(biāo)準(zhǔn)化組織ISO發(fā)布的空氣真菌檢驗(yàn)方法、新加坡空氣質(zhì)量指引等檢驗(yàn)方法以及文獻(xiàn)資料

中報(bào)道或使用的空氣中真菌檢驗(yàn)方法。

WHO

WHO在2009年發(fā)布了《WHOGuidelinesforIndoorAirQuality:DampnessandMold》。

2010年發(fā)布了《WHOguidelinesforindoorairquality:selectedpollutants》以及2014年發(fā)布了

《WHOguidelinesforindoorairquality:householdfuelcombustion》。

WHO曾在1990年提出的真菌總數(shù)限值1500CFU/m3，2009年WHO在《WHOGuidelines

forIndoorAirQuality:DampnessandMold》中沒(méi)有提出真菌的限值，只提出了一些預(yù)防室內(nèi)

真菌污染的建議。

針對(duì)真菌的檢測(cè)方法，提出如下建議：

1.環(huán)境采樣的方法主要分為兩類：通過(guò)空氣采樣直接監(jiān)測(cè)空氣中真菌顆粒數(shù)量；直接在培

養(yǎng)材料上通過(guò)真菌生長(zhǎng)特征進(jìn)行識(shí)別。

2.影響生物氣溶膠分散、沉積、收集和回收的因素主要包括：空氣動(dòng)力學(xué)、潮濕、靜電效

應(yīng)以及電磁輻射。

3.空氣采樣方法主要包括：

（1）體積空氣采樣（Volumetricairsampling）：空氣采樣儀將生物顆粒從空氣中分離出

來(lái)，收集并濃縮顆粒物并對(duì)其進(jìn)行測(cè)量，收集方法分為撞擊法、過(guò)濾法，常用儀器為撞

擊式采樣器；

a)慣性采樣器（Inertialsamplers）：大多數(shù)采樣儀器基于撞擊原理，最常見(jiàn)的撞擊法

采樣器是指直接撞擊至瓊脂（培養(yǎng)基）的采樣器，空氣通過(guò)狹縫或圓形吸入節(jié)流孔

進(jìn)入并撞擊至瓊脂平面，其他類型采樣器還包括離心撞擊采樣器和液體撞擊采樣器；

b)過(guò)濾采樣器（Filtrationsamplers）：使用濾膜捕獲和收集生物氣溶膠的方法，膜具

有多種成分和特性，從而影響收集效率，濾膜樣品可結(jié)合培養(yǎng)基觀察或培養(yǎng)基方法

進(jìn)行分析，也可結(jié)合生化、免疫化學(xué)、分子遺傳或光譜分析，該方法在常規(guī)空氣采

樣中并未得到廣泛應(yīng)用；

（2）被動(dòng)空氣采樣（Passiveairsampling）：

a)沉降法（Settleplates）：將培養(yǎng)皿中的瓊脂培養(yǎng)基暴露于環(huán)境空氣中一段時(shí)間，通

常為0.5-1小時(shí)，孵育平板，計(jì)數(shù)并識(shí)別生物群落，該方法無(wú)法確定采樣空氣的有

效體積，因此菌落計(jì)數(shù)不能用體積單位表示，數(shù)據(jù)是半定量的；

b)粉塵采樣（Dusts）：研究表面沉降粉塵是生物顆粒的主要來(lái)源，因此可對(duì)室內(nèi)灰塵

進(jìn)行分析，與空氣采樣的暴露測(cè)量值相比，該測(cè)量值更少受到時(shí)間和空間變化的影

響，此外常見(jiàn)的分析污染物（如過(guò)敏原、內(nèi)毒素和葡聚糖）可在灰塵中長(zhǎng)期保持穩(wěn)

定，并可重復(fù)測(cè)量。

4.分析方法主要包括：

a)顯微鏡直接觀察（Directmicroscopicmethods）；

b)基于培養(yǎng)的方法（Culture-basedmethods）；

c)生化檢測(cè)（Biochemicaldetectionoffungalextrolites），檢測(cè)物質(zhì)包括抗原、麥角固

醇（Ergosterol）、β-（1,3）-D-葡聚糖（Beta-(1,3)-D-glucan）等；

d)分子遺傳學(xué)方法（Moleculargeneticmethods），如基于PCR技術(shù)的方法。

國(guó)際組織

ISO16000-20—2017《Обнаружениеиподсчетплесневыхгрибков.Определениеобщего

количестваспор》《霉菌的檢測(cè)和計(jì)數(shù)。孢子總數(shù)的測(cè)定》中用孢子總數(shù)反應(yīng)空氣中真菌污

染程度。采樣時(shí)采用撞擊式微生物采樣器，如帶有可拆卸載玻片、空氣流速約為30cm3/min

的采樣器，例如PS301和MBASS302；帶有可更換載玻片、空氣流速約為15cm3/min的

采樣器，例如AllergencoMKZ3，采樣量依據(jù)污染程度采集50cm3、100cm3或200cm3空

氣，空氣中孢子因慣性作用撞擊到采樣器內(nèi)的粘性玻片上，經(jīng)乳酚藍(lán)或棉籽藍(lán)的乳酸溶液染

色，并在顯微鏡下以400倍或1000倍的放大倍數(shù)進(jìn)行檢查計(jì)數(shù)。

美國(guó)：美國(guó)政府工業(yè)衛(wèi)生工作者協(xié)會(huì)于1985年提出室內(nèi)空氣中的真菌的限值為1000

CFU/m3，參考由美國(guó)工業(yè)衛(wèi)生學(xué)會(huì)于1996年出版的《實(shí)地測(cè)定環(huán)境樣本的生物污染物指

引》（FieldGuidefortheDeterminationofBiologicalContaminantsinEnvironmentalSamples），

采用Andersen多孔采樣器、Reuter離心采樣器（RCS）、SurfaceAirSystem（SAS）氣溶膠

采樣器和氣旋粗梳機(jī)旋風(fēng)洗滌等的采樣儀器進(jìn)行采樣檢測(cè)。

澳大利亞：澳大利亞于2002年提出室內(nèi)霉菌及真菌是已知的空氣污染物，具有潛在危

害，會(huì)降低室內(nèi)空氣質(zhì)量。然而，許多生物物種的準(zhǔn)確建模、采樣、測(cè)試和測(cè)量的方法并未

得到普遍認(rèn)同。包括屋塵螨、霉菌和真菌、過(guò)敏原、細(xì)菌和病毒污染物在內(nèi)的生物污染物均

不在IAQ驗(yàn)證方法范圍內(nèi)（注意：隨著該領(lǐng)域知識(shí)的增加，未來(lái)版本的NCC可能會(huì)考慮

包含生物污染物和將驗(yàn)證方法擴(kuò)展到性能要求）。因此在合理范圍內(nèi)，建議借鑒WHO的規(guī)

定。

加拿大：環(huán)境部于1989年提出室內(nèi)空氣中的真菌指標(biāo)的限值為500CFU/m3。

新加坡：1996年《辦公室內(nèi)良好空氣質(zhì)量指引》中規(guī)定可接受的室內(nèi)空氣質(zhì)量中真菌

總數(shù)限值為500CFU/m3，所采用的采樣裝置為旋風(fēng)分離器或撞擊式采樣器，平均切割尺寸

為4μm，后續(xù)同樣采取培養(yǎng)方法進(jìn)行計(jì)數(shù)。

韓國(guó)：在《?????????????????》（2010）中對(duì)教室和醫(yī)療機(jī)

構(gòu)、托兒機(jī)構(gòu)、養(yǎng)老機(jī)構(gòu)、辦公場(chǎng)所給出總懸浮菌的限值（800CFU/m3），但對(duì)真菌無(wú)限值

及檢驗(yàn)方法。

其他國(guó)家暫無(wú)其他室內(nèi)空氣中真菌檢驗(yàn)方法。

(三)β-溶血性鏈球菌

本次修訂廣泛收集了以來(lái)國(guó)外發(fā)布的空氣中微生物指標(biāo)的檢驗(yàn)方法及發(fā)表的文獻(xiàn)資料，

還包括食品中的β-溶血性鏈球菌的檢驗(yàn)方法和標(biāo)準(zhǔn)。

新加坡:1996年《辦公室內(nèi)良好空氣質(zhì)量指引》對(duì)室內(nèi)空氣質(zhì)量評(píng)價(jià)參數(shù)中涉及細(xì)菌