第2節(jié)微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用(第2課時)

【學習目標】

1.概述培養(yǎng)基的配制方法和微生物純培養(yǎng)的基本操作要求，進行酵母菌的純培養(yǎng)。

2.闡明微生物選擇培養(yǎng)的原理。

3.進行土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)。

【知識梳理】

1.概念：將接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含有特定種類微生物的群體稱為培養(yǎng)物。

由單一個體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物,獲得純培養(yǎng)物的過程就是純培養(yǎng)。

2.微生物的純培養(yǎng)步驟(以酵母菌的純培養(yǎng)為例)

(1)微生物的純培養(yǎng)包括配制培養(yǎng)基、滅菌、接種、分離和培養(yǎng)等步驟。

(2)菌落的概念：分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成囪坦亙見的、

有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體。

(3)接種方法：最常用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。

(4)平板劃線法

①原理：通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連幽線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)

基的表面。經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得到單個菌落。

②操作

a.將接種環(huán)放在史上灼燒.立到接種環(huán)

的金M紇燒紅,

將試管口通過火焰,并塞1:棉塞

b.在火焰旁冷卻接種環(huán)同時,拔出奘有

醉璟曲培養(yǎng)液的試管的柏塞

在火焰附近將皿盅打開二.用接

種壞在培養(yǎng)基表面迅速劃三至五條平行

C.將試管口通過火焰線.諼上皿或

g-灼燒接種環(huán),待凡冷卻后,從第二次則線

的末端開始作第二次劃線質(zhì)更以上操

在火焰附近用接種環(huán)髓取?環(huán)菌液

d.作.作第三、四、五次劃級。注意不要

特般后一次的劃線與笫一次的則戰(zhàn)相連,

(5)方法步驟

f配制培養(yǎng)基：馬鈴膏、葡萄餓、瓊脂等

①制備培養(yǎng)基天菌」-培養(yǎng)若一濕熱滅菌

一培養(yǎng)m—干熱滅菌

L倒平板：冷卻至50t：左右時.在酒精燈

火焰附近倒平板

②髓髓一出維

③培養(yǎng)肝理苗一倒置、放入型七左右的恒溫培養(yǎng)新中培養(yǎng)

24-48h

【課后訓練】

一、單選題

1.以氮源設(shè)計選擇培養(yǎng)基，下列敘述錯誤的是（）

A.培養(yǎng)基中以尿素為唯?氮源，分離的微生物-定是分解尿素的微生物

B.培養(yǎng)基中以NH3為唯一氮源可分離硝化細菌

C.培養(yǎng)基中無氮源，可分離固氮微牛物

D.以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)細菌后，指示劑變紅色，可判斷該

細菌能分解尿素

【答案】A

【分析】培養(yǎng)基按功能分:

種類制備方法特征用途

根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化

選擇培養(yǎng)基中

學、物理因素的抗性而設(shè)計的培養(yǎng)基使混合加入青霉素分離得到醉

培養(yǎng)加入某種

菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌母菌和霉菌

基化學成分

的篩選率

鑒別和區(qū)分菌落相似的

鑒別加入某種依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中

微生物，如伊紅和美藍

培養(yǎng)試劑或化特定試劑或化學藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征

培養(yǎng)基可以鑒別大揚桿

基學藥品變化而設(shè)計

菌

【詳解】A、在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中能夠生長繁殖的微生物不一定全是分解尿素的

微生物，因為自生固氮菌也可以在這種培養(yǎng)基上生存，A錯誤；

B、硝化細菌可利用NH3生成硝酸的過程中釋放的能量將CO2和出0合成糖類，故培養(yǎng)基中

以NH3為唯一氮源可以分離硝化細菌，B正確；

C、缺乏氮源的培養(yǎng)基能砂分離固氮微生物，C正確；

D、以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)細菌后，如果pH升高，指示劑變

紅，可判斷該細菌能分解尿素，D正確。

故選A.；

2.如圖為分離和純化分解甲醛的細菌的實驗過程，其中LB培養(yǎng)基能使菌種成倍擴增，以下

說法正確的是（）

活CcC挑取不同菌「懸1取樣測定

售2^10mtW10mL只接種爛二^別接種,曰_甲醛濃詈

①制￡②LB^③無H夜④無機固體區(qū)」

菌懸液養(yǎng)基，振體培養(yǎng)基培養(yǎng)基+甲⑤無機液體培養(yǎng)基

+甲醛，振醛，恒溫+甲醛，振蕩培養(yǎng)

A.需要對活性污泥作滅菌處理

B.②中LB培養(yǎng)基只能以甲醛為唯一碳源

C.目的菌種異化作用類型為厭氧型

D.經(jīng)⑤處理后，應(yīng)選擇瓶中甲醛濃度最低的一組進一步純化培養(yǎng)

【答案】D

【分析】據(jù)圖分析?：在分離和純化分解甲醛的細菌的過程中，通過①過程制取各種菌的懸

濁液，②過程用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)后，可以獲得大量微生物，從而增加目的菌的菌群數(shù)量；

③中的培養(yǎng)基中的碳源只含有甲醛，只有可以分解甲醛的細菌能夠存活，通過③過程可以

篩選出能分解甲醛的微生物；④過程可以獲得單個菌落，獲得單個菌落過程中常用的接種

方法是平板劃線法或者稀釋涂布平板法，為避免水滴污染培養(yǎng)基，在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)時,

培養(yǎng)皿須倒置；經(jīng)過⑤過程后，取樣測定甲醛濃度，選出甲醛濃度最低的培養(yǎng)瓶，再分離、

培養(yǎng)菌株。

【詳解】A、該實驗是從活性污泥中分離和純化能分解甲醛的細菌，故不需要對活性污泥作

滅菌處理，A錯誤；

B、②過程用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)后，可以獲得大量微生物，從而增加目的菌的菌群數(shù)量，故

②中LB培養(yǎng)基不是以甲醛為唯一碳源；③過程可以篩選出能分解甲醛的微生物，需要以

甲醛為唯一碳源的培養(yǎng)基，B錯誤；

C、圖示分解甲醛的細菌是在培養(yǎng)皿中進行的，故目的菌種異化作用類型屬于需氧型細菌，

C錯誤；

D、經(jīng)⑤處理后，瓶中甲陛濃度降低，甲醛濃度最低的一組中分解甲醛的細菌純度最高，可

進一步純化培養(yǎng)，D正確。

故選D。

3.某同學利用選擇培養(yǎng)基成功分離出了土壤中的自生固氮菌，得到了如圖所示的實驗結(jié)果，

以下說法正確的是（）

A.該實驗使用了劃線法接種

B.該實驗使用了液體培養(yǎng)基

C.該實驗使用了無碳培養(yǎng)基

D.該實驗使用了無氮培養(yǎng)基

【答案】D

【分析】自生固氮菌可以利用空氣中氮氣為氮源，所以培養(yǎng)基中不需要添加氮源，自生固氮

菌就能生長，而在沒有氮源的培養(yǎng)基上其它不能固氮的微生物不能生長，所以該培養(yǎng)基可用

于篩選自生固氮菌。

【詳解】A、稀釋涂布平板法是將菌液稀釋成不同濃度讓行涂布，而平板劃線法是挑取單個

菌落在平板上劃線，據(jù)此可判斷該實驗中將土壤浸出液接種到培養(yǎng)基的方法為稀釋涂布平板

法，A錯誤；

B、圖示中是將土壤浸出液接種到無氮培養(yǎng)基上選擇自生固氮菌的過程，該培養(yǎng)基屬于固體

培養(yǎng)基，B錯誤；

C、自生固氮微生物屬于異養(yǎng)微生物，沒有碳源不能生長，所以為了保證自生固氮菌的生長

培養(yǎng)基中應(yīng)添加碳源，C錯誤；

D、由于自生固氮菌可以利用空氣中氮氣為氮源，而其它不能固氮的微生物不能利用氮氣做

氮源，所以在無氮的培養(yǎng)基上可以篩選出自生固氮菌，故圖示中使用了無氮培養(yǎng)基，D正確。

故選Do

4.如表所示為某培養(yǎng)基的配方，下列敘述錯誤的是（）

成分NaNO3K2HPO4MgSO4-7H2O(CH2O)蒸儲水青霉素

含量3glg0.5g30g定容至1000mL0.1萬單位

A.根據(jù)物理性質(zhì)劃分，該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基

B.微生物無法在該培養(yǎng)基表面形成肉眼可見的菌落

C.根據(jù)培養(yǎng)基的配方可知，該培養(yǎng)基培養(yǎng)的微生物的同化作用類型是異養(yǎng)型

D.固體培養(yǎng)基中加入少量水即可形成液體培養(yǎng)基

【答案】D

【分析】分析表格：該培養(yǎng)基沒有凝固劑，屬于液體培養(yǎng)基；該培養(yǎng)基中含有有機碳源（CKO）,

所培養(yǎng)的微生物是異養(yǎng)型的；該培養(yǎng)基中含有青霉素，屬于選擇培養(yǎng)基。

【詳解】AD、液體培養(yǎng)基中加入凝固劑（如瓊脂）可形成固體培養(yǎng)基，題表所示的培養(yǎng)基

配方中沒有加凝固劑，因此屬于液體培養(yǎng)基，A正確；

B、微生物在固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長，形成肉眼可見的菌落，B正確；

C、該培養(yǎng)基中的（CHzO）可作為有機碳源，因此其培養(yǎng)的微生物的同化作用類型是異養(yǎng)型，

C正確。

D、固體培養(yǎng)基中有凝固劑，加入少量水即不可b形成液體培養(yǎng)基，D錯誤。

故選D。

【點睛】

5.下列有關(guān)培養(yǎng)基的敘述，錯誤的是（）

A.培養(yǎng)基是為微生物的生長繁殖提供營養(yǎng)的基質(zhì)

B.培養(yǎng)基只有兩類：液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基

C.培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基中必須添加有機碳源

D.微生物在固體培養(yǎng)基表面生長可形成肉眼可見的菌落

【答案】B

【分析】培養(yǎng)基的概念、種類及營養(yǎng)構(gòu)成：

（1）概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出的供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。

（2）種類：固體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基。

（3）營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生

長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。

【詳解】A、培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求而配制出的供微生物生長繁殖

的營養(yǎng)基質(zhì)，A正確；

B、按物理性質(zhì)不同，培養(yǎng)基可分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，B錯誤；

C、大腸桿菌屬于異養(yǎng)型微生物，培養(yǎng)異養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基中必須添加有機碳源，C正確；

D、微生物在固體培養(yǎng)基上生長時。，可以形成由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體,

即菌落，D正確。

故選Bo

6.下表中是某種微生物的培養(yǎng)基配方，下列敘述錯誤的是（）

成分葡萄糖水青霉素

KNO3NaH2Po4FeSO4MgSO4-7H2O

含量4g3g0.01g0.48g30g1000mL萬單位

A.該培養(yǎng)基的碳源是葡萄糖，氮源是KNO3

B.該培養(yǎng)基可采用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌

C.該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，可用于微生物的分離

D.該培養(yǎng)基可用來篩選抗青霉素的微生物

【答案】C

【分析】微生物的營養(yǎng)物質(zhì)主要包括碳源、氮源、水和無機鹽等。有些微生物還需要特殊的

營養(yǎng)物質(zhì)，如維生素、生長因子等。培養(yǎng)基中含有瓊脂的一般為固體培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是

指通過培養(yǎng)混合的微生物，僅得到或篩選出所需要的微生物，其他不需要的種類在這種培養(yǎng)

基上是不能生存的。細菌對青霉素敏感，含青霉素的培養(yǎng)基不能培養(yǎng)細菌。

【詳解】A、分析表格中的成分可知，該培養(yǎng)基的碳源是葡萄糖，氮源是KNO3,A正確；

B、培養(yǎng)基一般采用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌，B正確；

C、該培養(yǎng)基不含瓊脂，屬于液體培養(yǎng)基，不能用于微生物的分離，C錯誤；

D、該培養(yǎng)基中加入了青霉素，具有抑制細菌生長的作用，可用來篩選抗青霉素的微生物,

D正確。

故選C。

7.下列關(guān)于微生物培養(yǎng)和利用的敘述，錯誤的是（）

A.接種前要了解固體培養(yǎng)基是否被污染可接種蒸餡水來培育檢測

B.接種時連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌體逐步稀釋獲得單個菌落

C.以尿素為唯?氮源且含酚紅的培養(yǎng)基可選擇和鑒別尿素分解菌

D.利用剛果紅培養(yǎng)基上是否形成透明圈可篩選纖維素分解菌

【答案】A

【分析】微生物接種的方法中最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法，前者是指通過接種

環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種，逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面,

后者是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基

的表面，進行培養(yǎng)。

【詳解】A、檢測培養(yǎng)基被污染的方法是：將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時

間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生，A錯誤；

B、接種換上的菌液經(jīng)過連續(xù)劃線，菌液中的菌體越來越少，最后容易形成單菌落，B正確；

C、鑒定尿素分解菌培養(yǎng)基不是無氮.有唯一氮源尿素,尿素分解菌分解尿素形成了氨氣.

氨氣會使培養(yǎng)基的堿性增強，用酚紅試劑即可鑒定出，C正確；

D、當纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅-纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖

維素分解菌為中心的透明圈，可通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌，D正確。

故選Ao

【點睛】

8.某實驗小組探究大蒜汁對枯草芽抱桿菌的抑制作用，與實驗操作有關(guān)的敘述不可砸的是

()

A.稱量、溶化和倒平板都必須進行無菌操作

B.吸取適當稀釋度的菌懸液滴在平板上并涂布均勻

C.分別將浸于大蒜汁和無菌水的濾紙片貼在平板不同位置

D.將平板倒置放入適宜溫度的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

【答案】A

【分析】防止雜菌污染，獲得純凈的微生物培養(yǎng)物是研究和應(yīng)用微生物的前提，也是發(fā)酵工

程的重要基礎(chǔ)。在實驗室培養(yǎng)微生物，一方面要為人們需要的微生物提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境

條件；另一方面要確保其他微生物無法混入，并將需要的微生物分離出來。培養(yǎng)基配制過程

不需要進行無菌操作，配制好的培養(yǎng)基需要進行滅菌，后續(xù)需要無菌操作。

【詳解】A、稱量、溶化是進行配置培養(yǎng)基的過程，培養(yǎng)基配制后需要滅菌，稱量和溶化不

需要無菌操作，倒平板過程需要進行無菌操作，A錯誤；

B、可用稀釋涂布平板法進行接種，吸取適當稀釋度的菌懸液滴在平板上并涂布均勻，B正

確；

C、可分別將浸于大蒜汁和無菌水的濾紙片貼在平板不同位置，加入大蒜汁的是實驗組，無

菌水作為對照組，C正確；

D、平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，

既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，乂可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染,

D正確。

故選Ao

9.微生物培養(yǎng)時常用到無菌技術(shù)避免雜菌污染，相關(guān)敘述正確的是（）

A.無菌技術(shù)包括對操作者的衣著和手進行滅菌

B.倒平板時應(yīng)該把培養(yǎng)ILL蓋完全打開，以免培養(yǎng)基濺到培養(yǎng)皿蓋上

C.配置好的培養(yǎng)某應(yīng)放入干熱滅菌箱中進行滅菌

D.接種前后接種環(huán)都必須灼燒滅菌

【答案】D

【分析1獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵。無菌技術(shù)圍繞著如何避免雜的的污

染展開，主要包括以下幾個方面：

1、對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒；

2、將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌；

3、為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進行；

4、實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。

【詳解】A、對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒，A錯誤；

B、為防止空氣中的雜菌落入培養(yǎng)皿中，倒平板時不能把培養(yǎng)皿蓋完全打開，正確的操作是

將培養(yǎng)皿打開一條稍大于錐形瓶瓶口的縫隙，B錯誤；

C、配置好的培養(yǎng)基應(yīng)放入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)進行滅菌，C錯誤；

D、接種前灼燒是為了保證接種時不會污染培養(yǎng)物，接種后再灼燒是防止菌種污染接種室或

者超凈臺，D正確。

故選Do

10.如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序為132玲3玲4玲5,下列說法正確的是（）

A.操作前要將接種環(huán)用酒精消毒

B.劃線操作須在酒精燈火焰附近進行

C.只有在5區(qū)才可以得到所需菌落

D.在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都不需要對接種環(huán)滅菌

【答案】B

【分析】平板劃線法通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步

稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。

【詳解】A、進行平板劃線操作之前，以及每次劃線前后都要對接種環(huán)進行滅菌，接種環(huán)的

滅菌方法應(yīng)是在酒精燈火焰上灼燒，不能用酒精消毒，A錯誤；

B、為防止雜菌污染，劃線操作須在酒精燈火焰附近進行，B正確；

C、由題圖可知，5區(qū)域是最后一個區(qū)域，有可能在5區(qū)域獲得所需要的菌落，但在4區(qū)域

也有可能得到所需要的菌落，C錯誤；

D、每次劃線前后都要灼燒接種環(huán)，目的是殺死接種環(huán)上原有的微生物(第一次劃線前)和

上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使每次劃線的菌種都來自上一次劃線的末端，劃線結(jié)

束后灼燒接種環(huán)以防止污染環(huán)境和感染操作者，D錯誤。

故選Bo

二、填空題

11.具體操作

⑴對實驗操作的、操作者的衣著和手進行清潔和。

(2)將用丁微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行o

⑶實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與接觸。

⑷為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在并在

____________________________附近進行.

【答案】空間消毒滅菌周圍的物品超凈工作臺酒精燈火焰

【解析】略

12.消毒和火苗

消毒滅菌

使用較為____的物理、化學或生物等

使用__________的理化方法殺死物體內(nèi)外

概念方法殺死物體_____或內(nèi)部一部分微

_____的微生物，包括________________

生物

常用______消毒法、巴氏消毒法、一消

____滅菌、干熱滅菌、____滅菌

方法毒法、紫外線消毒法

適用

操作空間、雙手等接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等

對象

【答案】溫和表面煮沸化學藥物強烈的所有芽抱和抱子濕熱灼

燒

【解析】略

三、綜合題

、

13.有一培養(yǎng)基配方如下：甘露醇（CHQG）MgSO.,xK2HPO4XCuSO八Na。、CaSO八

蒸馀水.據(jù)此問答以下相關(guān)問題：

（1）該培養(yǎng)基屬于（填固體或液體）培養(yǎng)基

（2）該培養(yǎng)基的碳源是,能源是.

（3）該培養(yǎng)基缺少的成分是,適合培養(yǎng)的微生物是,從同化作用上

看，該微生物屬于.

【答案】液體甘露醉甘露醉氮源固氮微生物異養(yǎng)型

【分析】1.微生物培養(yǎng)基的基本成分包括水、無機鹽、碳源、氮源及特殊生長因子。培養(yǎng)基

按物理性質(zhì)分為固體、半固體、液體培養(yǎng)基；按用途分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。

2.無菌操作包括滅菌和消毒兩種方式，消毒的方法有巴氏消毒法、酒精消毒、煮沸消毒法;

滅菌的方法有干熱滅菌、灼燒滅菌和高壓蒸汽滅菌。

3.微生物的接利”微生物接種的方法很多，最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法，常用

來統(tǒng)計樣品活菌數(shù)目的方法是稀釋涂布平板法。

【詳解】（1）從培養(yǎng)基成分看，沒有瓊脂等凝固劑，屬于液體培養(yǎng)基。

（2）從培養(yǎng)基的配方中可以發(fā)現(xiàn)，該培養(yǎng)基的碳源為甘露酸；甘露靜為含碳有機物，可以

作為微生物的能源物質(zhì)。

（3）培養(yǎng)基的配方中必須含有碳源，氮源水和無機鹽等，而題中所給的培養(yǎng)基的配方中沒

有氮源，因此，在這樣的培養(yǎng)基中生長的微生物，一定是具有固氮作用的微生物；該培養(yǎng)基

中甘露醉，可以為微生物提供碳源，因此，其培養(yǎng)的微生物同化作用類型為異養(yǎng)型。

【點睛】本題考查的知識點是微生物的實驗室培養(yǎng)、培養(yǎng)基的成分和制備，主要考查運