ICS13.060

C51

DB37

山東省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB37/T4163—2020

水質(zhì)藻類計(jì)數(shù)視野計(jì)數(shù)法

Waterquality—Algaecount—Fieldcountmethod

2020-09-25發(fā)布2020-10-25實(shí)施

山東省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB37/T4163—2020

目次

前言................................................................................II

1范圍..............................................................................1

2規(guī)范性引用文件....................................................................1

3原理..............................................................................1

4試劑和材料........................................................................1

5儀器和設(shè)備........................................................................1

6樣品..............................................................................2

7分析步驟..........................................................................3

8結(jié)果計(jì)算與報(bào)告....................................................................4

9精密度............................................................................5

10質(zhì)量保證和質(zhì)量控制...............................................................5

附錄A（資料性附錄）常見藻類圖譜....................................................6

參考文獻(xiàn)............................................................................20

I

DB37/T4163—2020

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由山東省住房和城鄉(xiāng)建設(shè)廳提出并組織實(shí)施。

本標(biāo)準(zhǔn)由山東省城鎮(zhèn)給水排水標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：山東省城市供排水水質(zhì)監(jiān)測(cè)中心、國家城市供水水質(zhì)監(jiān)測(cè)網(wǎng)福州監(jiān)測(cè)站、東營市

自來水公司水質(zhì)檢測(cè)中心、國家城市供水水質(zhì)監(jiān)測(cè)網(wǎng)武漢監(jiān)測(cè)站、濰坊市公用事業(yè)產(chǎn)品服務(wù)質(zhì)量監(jiān)測(cè)中

心、山東省濟(jì)南生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)中心。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：賈瑞寶、孫韶華、王明泉、趙清華、石近淼、劉軻、逯南南、朱光進(jìn)、李令春、

張昊天、田立平、鄭琳琳、王輝、王曉波、錢君麗、吳錦鈴。

II

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水質(zhì)藻類計(jì)數(shù)視野計(jì)數(shù)法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測(cè)定水中藻類計(jì)數(shù)的視野計(jì)數(shù)法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于生活飲用水及其水源水中藻類計(jì)數(shù)的測(cè)定。

取樣1L，濃縮至50mL時(shí)，本方法檢測(cè)限為0.1萬個(gè)/L。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T5750.2—2006生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法水樣的采集與保存

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

《水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法》（第四版增補(bǔ)版）中國環(huán)境科學(xué)出版社

3原理

藻類漂浮在水體中，難以進(jìn)行活體顯微觀察、計(jì)數(shù)。利用魯哥氏液固定藻類，并使藻類的鞭毛、纖

毛、細(xì)胞核及細(xì)胞內(nèi)淀粉染色，通過計(jì)數(shù)藻類細(xì)胞或個(gè)體數(shù)目，反映水體中藻類的分布情況。

4試劑和材料

除非另有說明，分析時(shí)均使用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的分析純?cè)噭?，?shí)驗(yàn)用水為純水。

4.1純水：符合GB/T6682二級(jí)及以上分析實(shí)驗(yàn)室用水要求。

4.2碘：分析純。

4.3碘化鉀：分析純。

4.4甲醛：分析純，含量37%～40%。

4.5魯哥氏液：碘（4.2）50g；碘化鉀（4.3）100g；純水（4.1）1000mL。稱取100.0g碘化鉀，

溶于800mL蒸餾水中，待完全溶解后充分搖動(dòng)，再加入50.0g碘。待碘完全溶解后定容至1000mL，

儲(chǔ)存于磨口棕色試劑瓶?jī)?nèi)。

4.640%甲醛溶液：甲醛（4.4）40mL；純水（4.1）60mL。量取40mL甲醛，倒入100mL燒杯中，再

量取60mL純水，倒入燒杯中攪拌均勻，儲(chǔ)存于磨口棕色試劑瓶?jī)?nèi)。

5儀器和設(shè)備

5.1顯微鏡：具10倍目鏡，具20倍、40倍、100倍物鏡，測(cè)微尺。

5.2豎式采水器：不銹鋼2L。

5.3樣品瓶：棕色玻璃瓶，4L。

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5.4筒形分液漏斗：1000mL。

5.5虹吸管：管內(nèi)直徑3mm～5mm，一端使用孔徑64μm篩絹扎緊。

5.6錐形離心管：塑料，具蓋50mL。

5.7量筒：50mL和100mL。

5.8滴管：1mL。

5.9浮游生物計(jì)數(shù)框：體積100μL，面積20mm×20mm，橫豎劃分為10×10行，共100個(gè)計(jì)數(shù)小格，

每個(gè)計(jì)數(shù)小格面積為2mm×2mm。

5.10浮游生物計(jì)數(shù)器。

5.11燒杯：500mL。

5.12容量瓶：1L。

6樣品

6.1樣品的采集

6.1.1采樣點(diǎn)位的設(shè)置

采樣點(diǎn)的設(shè)置要有代表性，采集的藻類能夠代表一個(gè)水體或者一個(gè)水體不同區(qū)域的實(shí)際狀況。根據(jù)

水體和周圍環(huán)境的自然生態(tài)類型、人類干擾的空間特性，布設(shè)有代表性的采樣點(diǎn)位（斷面），與長期定

位觀測(cè)及水化學(xué)監(jiān)測(cè)點(diǎn)位（斷面）盡可能保持一致，同時(shí)考慮采樣點(diǎn)位（斷面）布設(shè)的經(jīng)濟(jì)性。

6.1.2采樣頻次

采樣頻率一般全年至少四次（每季度一次），條件允許時(shí)，每個(gè)月一次。當(dāng)出現(xiàn)水華風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，要隨

時(shí)增加采樣次數(shù)?？紤]到浮游藻類的日變化，監(jiān)測(cè)時(shí)間盡量選擇在一天的相近時(shí)間，比如上午的8～10

時(shí)，如果無法做到，則需記錄下每次實(shí)際的監(jiān)測(cè)時(shí)間。

6.1.3采樣要求

生活飲用水的采集，參照GB/T5750.2—2006，取樣時(shí)應(yīng)打開龍頭放水?dāng)?shù)分鐘，排出沉積物，采集

水樣。

地表水的采集，需根據(jù)采樣點(diǎn)位的水深設(shè)置采樣層次。水深＜2m時(shí)，不分層，在表層下0.5m采集；

水深為2m～5m時(shí)，分別在表層下0.5m、底層上0.5m各采集一次；水深＞5m時(shí)，則在表層下0.5m處、

中層以及底層上0.5m處各采集一次。不同層次采集的樣品作等比例混合樣處理。

地下水的采集，對(duì)于自噴的泉水，可在涌口處直接采集；對(duì)于不自噴的泉水，應(yīng)將停滯在抽水管中

的水汲出，新水更替后再進(jìn)行采集；從井水采集水樣，應(yīng)在充分抽汲后進(jìn)行，以保證水樣的代表性。

采樣量根據(jù)浮游藻類的密度而定。一般原則使用豎式采水器（5.2）采集不少于2L水樣。

6.1.4樣品標(biāo)識(shí)和記錄

在樣品瓶外側(cè)標(biāo)注樣品編號(hào)，在現(xiàn)場(chǎng)采樣記錄表上記錄采樣日期、天氣狀況、水體名稱、采樣地點(diǎn)、

采樣方法等信息。

6.2樣品的固定和保存

按照《水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法》（第四版增補(bǔ)版），取混勻水樣1L倒入筒形分液漏斗（5.4），

加入10mL魯哥氏液（4.5）混勻，靜置24h。

未固定的水樣在4℃～10℃條件下避光保存不得超過4h。

2

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7分析步驟

7.1濃縮

將虹吸管（5.5）帶有篩絹的一端放入水樣中，將上層清液緩慢吸出（不可攪動(dòng)溶液底部，如被攪

動(dòng)則需重新靜置沉淀24h），虹吸管使用時(shí)隨液面緩慢向下移動(dòng)并接近上液面，最后將剩余30mL～40mL

樣品轉(zhuǎn)入50mL量筒（5.7）中。為減少藻類損失，用少許純水沖洗筒形分液漏斗1～2次并轉(zhuǎn)入50mL量筒

中，最終定容至50mL，移入錐形離心管（5.6），室溫下避光保存，待檢。濃縮液在14d內(nèi)鏡檢計(jì)數(shù)。

如需長期保存（＞14d），補(bǔ)加1mL～2mL40%甲醛溶液（4.6）。

7.2制片

7.2.1新購買的浮游生物計(jì)數(shù)框（5.9）應(yīng)對(duì)其體積進(jìn)行校準(zhǔn)：吸取100μL純水注入計(jì)數(shù)框內(nèi)，制片

后應(yīng)達(dá)到無氣泡、無溢出的要求。

7.2.2將濃縮液緩慢多次搖勻后，將蓋玻片斜蓋在計(jì)數(shù)框上，用滴管（5.8）吸取0.1mL濃縮液移入

計(jì)數(shù)框，在計(jì)數(shù)框中一邊進(jìn)樣，另一邊出氣，避免氣泡產(chǎn)生。注滿后把蓋玻片移正，蓋上蓋玻片，蓋玻

片下不能存有氣泡。將計(jì)數(shù)框放置于潮濕、暗室內(nèi)靜置15min～30min，使具有氣囊類藻類沉降至計(jì)數(shù)

框底層，便于計(jì)數(shù)。

7.3鏡檢

7.3.1預(yù)觀察

在10倍目鏡、20倍物鏡下定性觀察，在10倍目鏡、40倍物鏡下計(jì)數(shù)，每個(gè)視野以十幾個(gè)藻體為宜。

若計(jì)數(shù)框中藻類分布不均勻或雜質(zhì)粘附無法分辨清楚，再次混勻濃縮液重新制片；若視野中藻類過多難

以計(jì)數(shù)時(shí)，將濃縮液用純水（4.1）稀釋后重新制片。

7.3.2分類鑒定

按照藻類形態(tài)，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)圖譜進(jìn)行分類。藻類形態(tài)學(xué)鑒定到屬。常見藻類圖譜見附錄A。

7.3.3計(jì)數(shù)面積選擇

計(jì)數(shù)時(shí)，對(duì)計(jì)數(shù)框中的第2、5、8行共30個(gè)計(jì)數(shù)小格進(jìn)行計(jì)數(shù)，視野數(shù)可按浮游藻類多少而酌情增

減，以優(yōu)勢(shì)種類超過300個(gè)細(xì)胞為宜。若每個(gè)視野中只有1～2個(gè)藻體，則全片計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)面積選擇見圖1。

12345678910

2

3

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5

6

7

8

9

10

圖1計(jì)數(shù)面積選擇

3

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7.3.4計(jì)數(shù)

7.3.4.1當(dāng)藻體一半以上處于計(jì)數(shù)視野內(nèi)則計(jì)數(shù)；當(dāng)藻體的一半在計(jì)數(shù)視野內(nèi)而另一半在計(jì)數(shù)視野外，

計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右，計(jì)數(shù)規(guī)則見圖2。

7.3.4.2單一細(xì)胞個(gè)體，按照細(xì)胞計(jì)數(shù)，例如針桿藻、小環(huán)藻、曲殼藻、衣藻等。

7.3.4.3不規(guī)則團(tuán)塊藻體，例如微囊藻、團(tuán)藻等，按照估計(jì)細(xì)胞計(jì)數(shù)。

7.3.4.4規(guī)則團(tuán)塊、膠被囊類藻體，根據(jù)其細(xì)胞數(shù)量的偶數(shù)倍數(shù)特性計(jì)數(shù)。例如：色球藻等以兩個(gè)細(xì)

胞計(jì)為一個(gè)藻體，卵囊藻、平裂藻、柵藻等以四個(gè)細(xì)胞計(jì)為一個(gè)藻體。

7.3.4.5絲狀藻體，以20μm為一個(gè)計(jì)數(shù)單位進(jìn)行計(jì)數(shù)。例如：偽魚腥藻、浮絲藻、澤絲藻、束絲藻、

魚腥藻、顫藻、席藻、直鏈藻、水綿等。絲狀藻體斷裂形成藻殖段，不足20μm時(shí)，與視野中觀察到

的下一個(gè)藻殖段相加后計(jì)數(shù)。

7.3.4.6藻體細(xì)胞殘?bào)w不計(jì)數(shù)，未完成分裂的按一個(gè)細(xì)胞計(jì)。

圖2計(jì)數(shù)規(guī)則

8結(jié)果計(jì)算與報(bào)告

8.1結(jié)果計(jì)算

按照公式（1）計(jì)算每升水中藻類的數(shù)量：

AV

Nn=w104.................................(1)

AcbVV

式中：

N——每升水中藻類的數(shù)量（萬個(gè)/L）；

A——計(jì)數(shù)框面積，即100個(gè)計(jì)數(shù)小格；

Ac——計(jì)數(shù)面積，當(dāng)計(jì)數(shù)第2、5、8行時(shí)，計(jì)數(shù)面積為30個(gè)計(jì)數(shù)小格；

Vw——水樣經(jīng)沉淀濃縮后的樣品體積（mL）；

Vb——計(jì)數(shù)框體積（mL），0.1mL；

V——水樣體積（L）；

n——計(jì)數(shù)所得的藻體的個(gè)體數(shù)或細(xì)胞數(shù)。

8.2結(jié)果報(bào)告

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測(cè)定結(jié)果小數(shù)點(diǎn)后位數(shù)的保留與檢測(cè)限一致，最多保留三位有效數(shù)字。

9精密度

9.1陽性純?cè)宸N精密度

6家實(shí)驗(yàn)室對(duì)陽性純?cè)宸N進(jìn)行測(cè)定，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.2%～20.4%。

9.2實(shí)際水樣精密度

6家實(shí)驗(yàn)室對(duì)藻類總數(shù)100萬個(gè)/L～500萬個(gè)/L的地表水進(jìn)行測(cè)定，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為

7.1%～15.0%；對(duì)藻類總數(shù)500萬個(gè)/L～2000萬個(gè)/L的地表水進(jìn)行測(cè)定，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為

1.7%～14.5%。

10質(zhì)量保證和質(zhì)量控制

每批次樣品，取其中一個(gè)樣品的濃縮液，計(jì)數(shù)兩片取其平均值。若兩片計(jì)數(shù)結(jié)果相對(duì)偏差大于15%，

則進(jìn)行第三片計(jì)數(shù)，結(jié)果取其中相近兩片的平均值。

5

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AA

附錄A

（資料性附錄）

常見藻類圖譜

A.1硅藻門

圖A.1脆桿藻

圖A.2脆桿藻

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圖A.3菱形藻

圖A.4平板藻

圖A.5曲殼藻

7

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圖A.6曲殼藻（側(cè)面觀）

圖A.7雙壁藻

圖A.8小環(huán)藻

8

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圖A.9星桿藻

圖A.10針桿藻

圖A.11直鏈藻

9

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圖A.12舟形藻

A.2藍(lán)藻門

圖A.13顫藻

圖A.14浮絲藻

10

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圖A.15鞘絲藻

圖A.16束絲藻

圖A.17微囊藻

11

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圖A.18偽魚腥藻

圖A.19魚腥藻

12

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圖A.20澤絲藻

A.3綠藻門

圖A.21柵藻

圖A.22剛毛藻

13

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圖A.23膠網(wǎng)藻

圖A.24空球藻

圖A.25空星藻

14

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圖A.26卵囊藻

圖A.27盤星藻

15

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圖A.28水綿屬

圖A.29衣藻

16

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圖A.30實(shí)球藻

A.4甲藻門

圖A.31多甲藻

17

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圖A.32飛燕角甲藻

A.5隱藻門