湖北pcr題庫及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)的基本步驟不包括（）A.變性B.復(fù)性C.延伸D.轉(zhuǎn)錄2.Taq酶的特點(diǎn)是（）A.耐高溫B.耐低溫C.催化DNA合成方向3'→5'D.來源于哺乳動(dòng)物3.PCR反應(yīng)體系中不需要的成分是（）A.dNTPB.引物C.模板DNAD.核糖體4.引物設(shè)計(jì)時(shí)，其長度一般為（）A.5-10bpB.15-30bpC.35-40bpD.45-50bp5.提高PCR特異性的方法不包括（）A.優(yōu)化引物設(shè)計(jì)B.提高退火溫度C.增加模板量D.使用熱啟動(dòng)Taq酶6.PCR技術(shù)的發(fā)明人是（）A.克里克B.穆利斯C.沃森D.桑格7.進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，一般使用的緩沖液是（）A.Tris-HClB.PBSC.檸檬酸鈉D.硼酸8.在PCR反應(yīng)中，循環(huán)次數(shù)一般為（）A.10-15次B.15-20次C.25-35次D.40-45次9.下列哪種物質(zhì)可作為PCR的模板（）A.mRNAB.tRNAC.rRNAD.DNA10.PCR產(chǎn)物的特異性取決于（）A.Taq酶B.引物C.dNTPD.緩沖液二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域包括（）A.基因診斷B.基因克隆C.法醫(yī)鑒定D.疾病治療2.影響PCR反應(yīng)的因素有（）A.模板濃度B.引物質(zhì)量C.Taq酶活性D.反應(yīng)溫度和時(shí)間3.以下關(guān)于引物設(shè)計(jì)正確的是（）A.避免引物自身互補(bǔ)B.引物GC含量在40%-60%C.引物3'端不能有連續(xù)的G或CD.引物長度越長越好4.PCR反應(yīng)體系的基本成分包括（）A.模板DNAB.引物C.Taq酶D.dNTP5.熱啟動(dòng)PCR的優(yōu)點(diǎn)有（）A.提高特異性B.減少非特異性擴(kuò)增C.增加擴(kuò)增效率D.降低引物二聚體形成6.實(shí)時(shí)熒光定量PCR可用于（）A.基因表達(dá)定量分析B.病原體核酸定量檢測C.單核苷酸多態(tài)性分析D.甲基化分析7.巢式PCR的特點(diǎn)是（）A.提高靈敏度B.提高特異性C.操作簡單D.對模板要求低8.多重PCR可同時(shí)擴(kuò)增多個(gè)靶序列，其應(yīng)用包括（）A.病毒分型B.基因缺失檢測C.遺傳疾病診斷D.微生物鑒定9.逆轉(zhuǎn)錄PCR可用于（）A.從mRNA合成cDNAB.分析基因表達(dá)水平C.克隆基因D.檢測病毒RNA10.以下屬于PCR相關(guān)技術(shù)的有（）A.不對稱PCRB.原位PCRC.錨定PCRD.降落PCR三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)中，變性溫度越高越好。（）2.引物的特異性決定了PCR產(chǎn)物的特異性。（）3.Taq酶具有3'→5'外切酶活性。（）4.提高dNTP的濃度可以無限提高PCR擴(kuò)增效率。（）5.循環(huán)次數(shù)越多，PCR產(chǎn)物量一定越多。（）6.實(shí)時(shí)熒光定量PCR能對核酸進(jìn)行絕對定量。（）7.逆轉(zhuǎn)錄PCR不需要引物。（）8.多重PCR可以同時(shí)擴(kuò)增多個(gè)不同大小的片段。（）9.熱啟動(dòng)PCR可以在室溫下配置反應(yīng)體系。（）10.引物二聚體的形成不影響PCR反應(yīng)結(jié)果。（）四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR反應(yīng)的基本原理。答案：PCR基于DNA半保留復(fù)制原理，以目的DNA為模板，在引物、dNTP、Taq酶等作用下，經(jīng)高溫變性使雙鏈DNA解鏈，低溫復(fù)性引物與模板結(jié)合，適溫延伸由Taq酶催化合成新的DNA鏈，多次循環(huán)實(shí)現(xiàn)特定DNA片段大量擴(kuò)增。2.引物設(shè)計(jì)的基本原則有哪些？答案：長度15-30bp；GC含量40%-60%；避免自身互補(bǔ)及引物二聚體形成；3'端不能有連續(xù)的G或C；堿基分布應(yīng)隨機(jī)；與模板結(jié)合特異性高。3.簡述實(shí)時(shí)熒光定量PCR的原理。答案：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，隨著PCR擴(kuò)增，熒光信號(hào)強(qiáng)度與PCR產(chǎn)物量成正比。通過監(jiān)測熒光信號(hào)，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對起始模板量進(jìn)行定量分析。4.與常規(guī)PCR相比，熱啟動(dòng)PCR的優(yōu)勢是什么？答案：熱啟動(dòng)PCR能減少非特異性擴(kuò)增。在常溫下酶無活性，避免引物與模板非特異結(jié)合及引物二聚體形成，提高反應(yīng)特異性，在PCR起始階段對反應(yīng)條件嚴(yán)格控制，提升擴(kuò)增效果。五、討論題（每題5分，共4題）1.在進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增條帶，可能的原因及解決方法有哪些？答案：原因可能是引物特異性差、退火溫度低、模板雜質(zhì)多、酶量過多等。解決方法：重新設(shè)計(jì)引物；提高退火溫度；純化模板；優(yōu)化酶量；采用熱啟動(dòng)PCR等。2.舉例說明PCR技術(shù)在臨床診斷中的應(yīng)用及意義。答案：如用于病毒感染診斷，像新冠病毒核酸檢測。通過擴(kuò)增病毒核酸，快速準(zhǔn)確判斷是否感染。意義在于能早期診斷疾病，為及時(shí)治療提供依據(jù)，提高治愈率，在傳染病防控等方面發(fā)揮重要作用。3.談?wù)勀銓CR技術(shù)未來發(fā)展趨勢的看法。答案：未來可能朝著更高效、更精準(zhǔn)、更便捷方向發(fā)展。如開發(fā)新型酶提高擴(kuò)增效率和特異性；結(jié)合其他技術(shù)實(shí)現(xiàn)多功能檢測；儀器小型化、自動(dòng)化，便于基層應(yīng)用；拓展在更多領(lǐng)域如個(gè)性化醫(yī)療的應(yīng)用。4.比較不同PCR衍生技術(shù)（如實(shí)時(shí)熒光定量PCR、巢式PCR、多重PCR等）的特點(diǎn)及適用場景。答案：實(shí)時(shí)熒光定量PCR能定量核酸，適用于基因表達(dá)定量等；巢式PCR提高靈敏度和特異性，用于低豐度模板檢測；多重PCR可同時(shí)擴(kuò)增多個(gè)靶序列，用于病毒分型等。各技術(shù)特點(diǎn)不同，根據(jù)檢測目的和樣本情況選擇適用場景。答案一、單項(xiàng)選擇題1.D2.A3.D4.B5.C6.B7.A8.C9.D10.B二、多項(xiàng)選擇題1.ABC