基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜鑒別微生物方法通則-編制說明_第1頁
基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜鑒別微生物方法通則-編制說明_第2頁
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文檔簡介

(一)工作簡況,包括任務(wù)來源、協(xié)作單位、主要工作過程、國家標(biāo)準(zhǔn)主要起草人及其所

做的工作等;

1、任務(wù)來源

本標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)國標(biāo)委公布的2023年第一批國家標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃項(xiàng)目(國標(biāo)委綜合

號),本項(xiàng)目計(jì)劃編號為20233862-T-469,名稱為基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時

間質(zhì)譜鑒別微生物方法通則。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國生化檢測標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(SAC/TC387)提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)由河北省食品檢驗(yàn)研究院等聯(lián)合起草。

2、目的和意義

基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜(以下簡稱MALDI-TOFMS)是近年來發(fā)展的一種

新型的分析技術(shù),可以實(shí)現(xiàn)對未知微生物的快速鑒定、分型、溯源等,廣泛的用于食品、

藥品、醫(yī)療、農(nóng)業(yè)等各個微生物鑒定領(lǐng)域。

微生物快速、可靠地鑒定是加強(qiáng)各項(xiàng)產(chǎn)品質(zhì)量安全和質(zhì)量管理的關(guān)鍵步驟。樣品的不

同的處理方法、可疑菌落的選擇、儀器參數(shù)設(shè)置、同批校準(zhǔn)質(zhì)控的設(shè)置、結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)

對檢測結(jié)果具有一定的影響。同時,MALDI-TOFMS使用過程中質(zhì)控菌株存在對進(jìn)口菌株的

依賴,會給實(shí)際使用帶來困擾。所以對上述參數(shù)優(yōu)化,完善基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時

間質(zhì)譜鑒別微生物方法就成為了必要解決的任務(wù)。

通過研究數(shù)據(jù)結(jié)合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、文獻(xiàn)報道,規(guī)范利用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)

譜鑒別微生物方法,為微生物快速鑒定提供技術(shù)保障。通過本項(xiàng)目的實(shí)施能夠解決

MALDI-TOFMS在我國微生物檢驗(yàn)領(lǐng)域應(yīng)用少、缺乏具體操作參數(shù)的問題,進(jìn)而提高微生物

鑒定的準(zhǔn)確性,促進(jìn)我國微生物質(zhì)譜檢測技術(shù)的發(fā)展。

3、協(xié)作單位

4、標(biāo)準(zhǔn)編制過程和主要工作過程

(1)2024年1月收到全國生化檢測標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會生檢標(biāo)[2023]41號文件

以及該標(biāo)委會轉(zhuǎn)發(fā)的國標(biāo)委發(fā)[2023]64號《國家標(biāo)準(zhǔn)委關(guān)于下達(dá)2023年國家標(biāo)準(zhǔn)復(fù)審修訂

計(jì)劃的通知》立項(xiàng)文件,計(jì)劃編號:20233862-T-469。

(2)2024年1月至2024年8月,進(jìn)行《基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜鑒別

微生物方法通則》標(biāo)準(zhǔn)的起草研制工作。完成了《基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜鑒

2

別微生物方法通則》標(biāo)準(zhǔn)的編制說明,并對全國生化檢測標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會匯報了《基質(zhì)

輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜鑒別微生物方法通則》標(biāo)準(zhǔn)(草案)進(jìn)一步完善和修改情

況,向全國生化檢測標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提交了《基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜鑒別

微生物方法通則》標(biāo)準(zhǔn)(征求意見稿)和編制說明。

(二)國家標(biāo)準(zhǔn)編制原則和確定國家標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容(如技術(shù)指標(biāo)、參數(shù)、公式、性能要求、

試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則等)的論據(jù)(包括試驗(yàn)、統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)),修訂國家標(biāo)準(zhǔn)時,應(yīng)增列新舊

國家標(biāo)準(zhǔn)水平的對比;

1、標(biāo)準(zhǔn)編制原則

本標(biāo)準(zhǔn)的編制依據(jù)GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起

草規(guī)則》,并參照GB/T6379.1-2004《測量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度(正確度與精密度)第1部

分總則與定義》和GB/T6379.2-2004《測量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度(正確度與精密度)第2

部分確定標(biāo)準(zhǔn)測量方法重復(fù)性與再現(xiàn)性的基本方法》。

2、確定國家標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容(如技術(shù)指標(biāo)、參數(shù)、公式、性能要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)

則等)的論據(jù)(包括試驗(yàn)、統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù))

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜鑒別微生物的方法通則。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類從事微生物相關(guān)檢驗(yàn)工作實(shí)驗(yàn)室對樣品中的微生物進(jìn)行快速鑒定

以及研究,可鑒定微生物種屬。

(三)主要試驗(yàn)(或驗(yàn)證)的分析、綜述報告,技術(shù)經(jīng)濟(jì)論證,預(yù)期的經(jīng)濟(jì)效果;

1實(shí)驗(yàn)材料及儀器

1.1試劑

甲酸(HCOOH)、乙腈(CH3CN)、乙醇(CH3CH2OH)、三氟乙酸(CF3COOH)、

a-氰基-4羥基肉桂酸(C10H7NO3),光譜純、2,5-二羥基苯甲酸(C7H6O4),光譜純、

血瓊脂培養(yǎng)基、沙氏瓊脂培養(yǎng)基。

1.2溶液

磷酸鹽緩沖液

1.3儀器

MALDI-TOF質(zhì)譜儀、MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜儀、二級生物安全柜、恒溫培養(yǎng)箱:

36℃±1℃、25℃±1℃、離心機(jī):12000r/min、旋渦混合器、顯微鏡、微量移液器及槍頭、

3

一次性或重復(fù)使用靶板、1μL接種環(huán)。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1微生物的前處理

2.1.1樣品處理

痰、血、體液、拭子等臨床樣本經(jīng)采集后直接接種。其他固體樣品需粉碎,加入無菌

磷酸鹽稀釋液溶解,液體樣品可不經(jīng)過溶解。

2.1.2樣品培養(yǎng)方式

根據(jù)不同的微生物特性,劃線培養(yǎng)于血瓊脂培養(yǎng)基上,36℃培養(yǎng)24±2h,或參照對應(yīng)

標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行培養(yǎng)。

2.1.3可疑菌落的選擇

根據(jù)對應(yīng)的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn),挑選出具有可疑特征的菌落進(jìn)行培養(yǎng)。至少應(yīng)挑取5個可疑菌

落,若少于5個則全部挑取。

2.1.4微生物培養(yǎng)

一般細(xì)菌劃線接種血瓊脂培養(yǎng)基,36℃±1℃培養(yǎng)24h±2h;酵母劃線接種沙氏瓊

脂培養(yǎng)基,25℃±1℃培養(yǎng)2d~3d;其它類型微生物,如霉菌、分枝桿菌和諾卡氏菌

等,可參照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法執(zhí)行。

2.2樣品上機(jī)(點(diǎn)靶)

2.2.1一般細(xì)菌

直接涂抹法:鑒定細(xì)菌時,直接使用1μL接種環(huán)挑取單個菌落,點(diǎn)在樣品靶板孔中,

涂抹均勻并在室溫自然晾干。

2.2.2酵母樣真菌

原位甲酸提取法:鑒定酵母時,直接涂抹后用相應(yīng)濃度的FA溶液處理,再用微量移液

器吸取1μL基質(zhì)溶液,與樣品混合,自然晾干,形成結(jié)晶?;蛳扔梦⒘恳埔浩饕迫∠鄳?yīng)

濃度的FA溶液(破壞細(xì)胞壁,使蛋白溶出),再添加基質(zhì)液。不同型號儀器系統(tǒng)使用的

甲酸濃度需遵照說明書信息。

2.2.3絲狀真菌

乙醇滅活+甲酸、乙腈提取法:將無菌棉拭子在去離子水中沾濕后,從培養(yǎng)基上刮取1

cm2~2cm2絲狀真菌菌落,轉(zhuǎn)移至裝有300μL超純水的2mL離心管中。向離心管中

加入900μL乙醇,用漩渦混合器混勻3s~5s。混合后用離心機(jī)在10000r/min下離

心2min后去除上清液,置于室溫干燥。加入40μL70%甲酸漩渦混合3s~5s,之

4

后再加入40μL乙腈漩渦混合3s~5s,用離心機(jī)在10000r/min離心2min后,用

微量移液器吸取1μL樣品加在樣品靶板孔中,待室溫干燥后再加入1μL基質(zhì)溶液,在室

溫下自然晾干。

2.2.4分枝桿菌/諾卡菌

硅珠破壁+甲酸、乙腈提取法:將無菌棉拭子在去離子水中沾濕后,從培養(yǎng)基上刮取1

cm2~2cm2絲狀真菌分枝桿菌/諾卡菌菌落,轉(zhuǎn)移至裝有300μL超純水的2mL離心管

中。向離心管中加入900μL乙醇并輔以0.5mm直徑的硅珠震蕩破壁。用離心機(jī)在10000

r/min下離心2min后去除上清液,置于室溫干燥。加入40μL70%甲酸漩渦混合3s~

5s,之后再加入40μL乙腈漩渦混合3s~5s,用離心機(jī)在10000r/min離心2min后,

用微量移液器吸取1μL樣品加在樣品靶板孔中,待室溫干燥后再加入1μL基質(zhì)溶液,在

室溫下自然晾干。

2.2.5分枝桿菌(液體培養(yǎng))

液體培養(yǎng)直接提取法:液體培養(yǎng)報陽后,繼續(xù)培養(yǎng)24~72h,經(jīng)離心后去上清,對沉

淀物使用硅珠破壁+甲酸乙腈提取法進(jìn)行提取。

2.3儀器條件

2.3.1儀器設(shè)置

MALDI-TOFMS:線性操作模式,正離子模式;檢測范圍:2000Da-20000Da,激光點(diǎn)擊

數(shù):每圖譜40次(6次激光累積);激光頻率:60.0Hz;離子源加速電壓:20kv。

MALDI-TOF-TOFMS:固態(tài)UV激光光源,檢測范圍為0~3000Da,激光點(diǎn)擊數(shù):每圖

譜100次(100次激光累積),最大激光重復(fù)頻率2000Hz。

2.3.2激光能量

每激光束能量100μJ,激光能量可從0%~100%范圍調(diào)節(jié)。

2.4微生物蛋白指紋圖譜數(shù)據(jù)庫建庫原則與方法

自建庫每株菌需由不少于10株菌種進(jìn)行構(gòu)建,經(jīng)圖譜數(shù)據(jù)采集、聚類分析、矩陣挖掘

特征譜峰等步驟,構(gòu)建自建庫。

2.4.1自建庫原則:每株菌需由不少于10株菌種進(jìn)行構(gòu)建;優(yōu)先挑選標(biāo)準(zhǔn)菌株,如ATCC、

CICC、CMCC菌株;優(yōu)先挑選遺傳背景清晰(如已有基因組測序數(shù)據(jù))的菌株;優(yōu)先挑選血

清型明確的菌株;優(yōu)先挑選實(shí)驗(yàn)室確定的、來源明確的菌株。

2.4.2自建庫方法:①挑取新鮮二代培養(yǎng)物,經(jīng)過適當(dāng)處理后作為樣品;②在靶板上加BTS

或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對質(zhì)譜儀進(jìn)行峰的校準(zhǔn);③建立程序,點(diǎn)靶板,采集峰圖;④分析峰圖,嚴(yán)格

5

按照公式(M右-M左)/M標(biāo)≤500ppm分析每一個峰,其中M左和M右為蛋白譜圖中每一個有

峰處最左側(cè)峰和最右側(cè)峰的峰值,M標(biāo)為峰處的中間峰值,且對于不滿足公式的峰圖進(jìn)行

刪除,并且刪除的峰圖≤4,否則從4重新開始;⑤對于滿足(M右-M左)/M標(biāo)≤500ppm且

有效峰圖≥20張的菌株,建立MSP,進(jìn)行編輯匯總,整合到一個項(xiàng)目文件下。

2.4.3數(shù)據(jù)庫比對:利用系統(tǒng)數(shù)據(jù)庫或自建數(shù)據(jù)庫進(jìn)行樣品比對。

3、經(jīng)濟(jì)與社會效益

飛行質(zhì)譜具有快速、便捷、價格低廉受到廣泛應(yīng)用,已成為微生物學(xué)和分類學(xué)的重要

工具。如今,MALDI-TOF-MS已被成功用于鑒定完整的細(xì)菌、酵母菌和真菌等。由于酵母

菌和真菌常規(guī)鑒定方法耗時較長,MALDI-TOFMS也開始被用于替代檢測方法的研究。它

可彌補(bǔ)常規(guī)實(shí)驗(yàn)室條件下無法靠形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)鑒定菌株的劣勢。通過本項(xiàng)目的實(shí)施能夠解決

MALDI-TOFMS在我國微生物檢驗(yàn)領(lǐng)域應(yīng)用少、缺乏具體操作參數(shù)的問題,進(jìn)而提高微生

物鑒定的準(zhǔn)確性,促進(jìn)我國微生物質(zhì)譜檢測技術(shù)的發(fā)展。

本標(biāo)準(zhǔn)可以進(jìn)一步縮短可疑菌種的檢測周期,提高檢測效率,檢測結(jié)果將更加準(zhǔn)確、

全面。實(shí)現(xiàn)了對于不同菌屬的快速鑒定,大大節(jié)約了檢測時間,減少了各種細(xì)菌鑒定試劑

以及試劑盒的使用,節(jié)約了檢測成本。

(四)采用國際標(biāo)準(zhǔn)和國外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)的程度,以及與國際、國外同類標(biāo)準(zhǔn)水平的對比情況,

或與測試的國外樣品、樣機(jī)的有關(guān)數(shù)據(jù)對比情況;

目前關(guān)于基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜鑒別微生物暫無國外標(biāo)準(zhǔn),國內(nèi)有

SN/T5228出口食品中病原微生物快速篩選方法MALDI-TOFMS系列,還有《基質(zhì)輔助激光解

析電離飛行時間質(zhì)譜鑒別微生物方法通則》于2017年實(shí)施,其中GB/T33682-2017包含的

樣品處理方法較為簡單,經(jīng)前期實(shí)驗(yàn)研究和部分文獻(xiàn)可知,上樣處理方法對實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確

性有較大的影響,且對于可疑上樣數(shù)目、每批次質(zhì)控設(shè)置陽性樣品的判定方法沒有具體要

求,與實(shí)際檢驗(yàn)需要有所偏離,本此修訂對上述條件進(jìn)行優(yōu)化,更滿足實(shí)際檢驗(yàn)需求。

(五)與有關(guān)的現(xiàn)行法律、法規(guī)和強(qiáng)制性國家標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系;

本標(biāo)準(zhǔn)不得與現(xiàn)有法律、法規(guī)和強(qiáng)制性國家標(biāo)準(zhǔn)相抵觸

(六)重大分歧意見的處理經(jīng)過和依據(jù);

(七)國家標(biāo)準(zhǔn)作為強(qiáng)制性國家標(biāo)準(zhǔn)或推薦性國家標(biāo)準(zhǔn)的建議;

6

(八)貫徹國家標(biāo)準(zhǔn)的要求和措施建議(包括組織措施、技術(shù)措施、過渡辦法等內(nèi)容);

(九)廢止現(xiàn)行有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的建議;

本標(biāo)準(zhǔn)將代替GB/T33682-2017《基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜鑒別微生物方

法通則》。建議標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施之日,GB/T33682-2017《基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜

鑒別微生物方法通則》廢止。

(十)其他應(yīng)予說明的事項(xiàng)。

7

國家標(biāo)準(zhǔn)《基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜鑒別微生物方法通則》

(征求意見稿)

編制說明

《基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜鑒別微生物方法通則》標(biāo)準(zhǔn)起草組

2024年8月

1

(一)工作簡況,包括任務(wù)來源、協(xié)作單位、主要工作過程、國家標(biāo)準(zhǔn)主要起草人及其所

做的工作等;

1、任務(wù)來源

本標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)國標(biāo)委公布的2023年第一批國家標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃項(xiàng)目(國標(biāo)委綜合

號),本項(xiàng)目計(jì)劃編號為20233862-T-469,名稱為基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時

間質(zhì)譜鑒別微生物方法通則。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國生化檢測標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(SAC/TC387)提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)由河北省食品檢驗(yàn)研究院等聯(lián)合起草。

2、目的和意義

基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜(以下簡稱MALDI-TOFMS)是近年來發(fā)展的一種

新型的分析技術(shù),可以實(shí)現(xiàn)對未知微生物的快速鑒定、分型、溯源等,廣泛的用于食品、

藥品、醫(yī)療、農(nóng)業(yè)等各個微生物鑒定領(lǐng)域。

微生物快速、可靠地鑒定是加強(qiáng)各項(xiàng)產(chǎn)品質(zhì)量安全和質(zhì)量管理的關(guān)鍵步驟。樣品的不

同的處理方法、可疑菌落的選擇、儀器參數(shù)設(shè)置、同批校準(zhǔn)質(zhì)控的設(shè)置、結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)

對檢測結(jié)果具有一定的影響。同時,MALDI-TOFMS使用過程中質(zhì)控菌株存在對進(jìn)口菌株的

依賴,會給實(shí)際使用帶來困擾。所以對上述參數(shù)優(yōu)化,完善基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時

間質(zhì)譜鑒別微生物方法就成為了必要解決的任務(wù)。

通過研究數(shù)據(jù)結(jié)合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、文獻(xiàn)報道,規(guī)范利用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)

譜鑒別微生物方法,為微生物快速鑒定提供技術(shù)保障。通過本項(xiàng)目的實(shí)施能夠解決

MALDI-TOFMS在我國微生物檢驗(yàn)領(lǐng)域應(yīng)用少、缺乏具體操作參數(shù)的問題,進(jìn)而提高微生物

鑒定的準(zhǔn)確性,促進(jìn)我國微生物質(zhì)譜檢測技術(shù)的發(fā)展。

3、協(xié)作單位

4、標(biāo)準(zhǔn)編制過程和主要工作過程

(1)2024年1月收到全國生化檢測標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會生檢標(biāo)[2023]41號文件

以及該標(biāo)委會轉(zhuǎn)發(fā)的國標(biāo)委發(fā)[2023]64號《國家標(biāo)準(zhǔn)委關(guān)于下達(dá)2023年國家標(biāo)準(zhǔn)復(fù)審修訂

計(jì)劃的通知》立項(xiàng)文件,計(jì)劃編號:20233862-T-469。

(2)2024年1月至2024年8月,進(jìn)行《基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜鑒別

微生物方法通則》標(biāo)準(zhǔn)的起草研制工作。完成了《基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜鑒

2

別微生物方法通則》標(biāo)準(zhǔn)的編制說明,并對全國生化檢測標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會匯報了《基質(zhì)

輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜鑒別微生物方法通則》標(biāo)準(zhǔn)(草案)進(jìn)一步完善和修改情

況,向全國生化檢測標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提交了《基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜鑒別

微生物方法通則》標(biāo)準(zhǔn)(征求意見稿)和編制說明。

(二)國家標(biāo)準(zhǔn)編制原則和確定國家標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容(如技術(shù)指標(biāo)、參數(shù)、公式、性能要求、

試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則等)的論據(jù)(包括試驗(yàn)、統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)),修訂國家標(biāo)準(zhǔn)時,應(yīng)增列新舊

國家標(biāo)準(zhǔn)水平的對比;

1、標(biāo)準(zhǔn)編制原則

本標(biāo)準(zhǔn)的編制依據(jù)GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起

草規(guī)則》,并參照GB/T6379.1-2004《測量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度(正確度與精密度)第1部

分總則與定義》和GB/T6379.2-2004《測量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度(正確度與精密度)第2

部分確定標(biāo)準(zhǔn)測量方法重復(fù)性與再現(xiàn)性的基本方法》。

2、確定國家標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容(如技術(shù)指標(biāo)、參數(shù)、公式、性能要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)

則等)的論據(jù)(包括試驗(yàn)、統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù))

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜鑒別微生物的方法通則。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類從事微生物相關(guān)檢驗(yàn)工作實(shí)驗(yàn)室對樣品中的微生物進(jìn)行快速鑒定

以及研究,可鑒定微生物種屬。

(三)主要試驗(yàn)(或驗(yàn)證)的分析、綜述報告,技術(shù)經(jīng)濟(jì)論證,預(yù)期的經(jīng)濟(jì)效果;

1實(shí)驗(yàn)材料及儀器

1.1試劑

甲酸(HCOOH)、乙腈(CH3CN)、乙醇(CH3CH2OH)、三氟乙酸(CF3COOH)、

a-氰基-4羥基肉桂酸(C10H7NO3),光譜純、2,5-二羥基苯甲酸(C7H6O4),光譜純、

血瓊脂培養(yǎng)基、沙氏瓊脂培養(yǎng)基。

1.2溶液

磷酸鹽緩沖液

1.3儀器

MALDI-TOF質(zhì)譜儀、MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜儀、二級生物安全柜、恒溫培養(yǎng)箱:

36℃±1℃、25℃±1℃、離心機(jī):12000r/min、旋渦混合器、顯微鏡、微量移液器及槍頭、

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