1T/WSWXH—巴爾喀什蘑菇子實體多糖提取技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了巴爾喀什蘑菇子實體多糖（Agaricusbalchaschensispolysaccharide）提取的術(shù)語和定義、技術(shù)要求、純化工藝、含量測定方法及貯藏條件等內(nèi)容。文件適用于以新疆野生巴爾喀什蘑菇子實體為原料，采用水提醇沉法提取巴爾喀什蘑菇子實體多糖。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB5009.3食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中水分的測定GB5749生活飲用水衛(wèi)生要求GB7096食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食用菌及其制品GB31640食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食用酒精GB/T12728食用菌術(shù)語NY/T1676食用菌中粗多糖的測定3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1巴爾喀什蘑菇（Agaricusbalchaschensis）巴爾喀什蘑菇（Agaricusbalchaschensis），一種分布于中亞地區(qū)的珍稀食用菌，主要生長在新疆博斯騰湖周邊蘆葦灘上，具有較高的營養(yǎng)價值和藥用價值。3.2巴爾喀什蘑菇多糖（Agaricusbalchaschensispolysaccharide）巴爾喀什蘑菇多糖是從新疆巴爾喀什湖周邊采集的子實體中提取的一種高分子化合物。它由10個以上的單糖通過糖苷鍵連接而成，通常包含數(shù)百至數(shù)千個單糖單元，并具備多種生物活性。T/WSWXH—24技術(shù)要求4.1原料要求4.1.1巴爾喀什蘑菇應(yīng)符合GB7096食用菌及其制品要求。4.1.2工藝用水應(yīng)符合GB5749生活飲用水衛(wèi)生要求。4.1.395%食用酒精應(yīng)符合GB31640要求。4.2巴爾喀什蘑菇提取工藝流程原料處理→粉碎→水提→過濾→濃縮→醇沉→脫蛋白→脫色→純化→干燥→成品→貯存。4.2.1原料處理選擇新鮮、無霉變、無蟲子的巴爾喀什蘑菇子實體，用清水洗干凈，去除子實體上面的泥沙等雜質(zhì)，切片，瀝干水分。4.2.2原料粉碎將預(yù)處理后的巴爾喀什蘑菇子實體用粉碎機適當(dāng)粉碎，過80目篩子。4.2.3水提醇沉法4.2.3.1浸泡稱取一定量的巴爾喀什蘑菇子實體粉末，按照料液比1:15加入蒸餾水，于室溫下浸泡4h。浸泡過程中適當(dāng)進(jìn)行攪拌，以確保粉末充分與水接觸，促進(jìn)有效成分的溶出。4.2.3.2一次提取采用熱水浸提法，置于60℃恒溫條件下水浴6小時，并持續(xù)攪拌以確保提取充分。浸提結(jié)束后，將所得混合液用8層紗布過濾，轉(zhuǎn)移至離心管中，在4℃,8000rpm/min，離心10min，收集上清液，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?.2.3.3二次提取取4.2.3.2步驟中剩余的的蘑菇殘渣，加入15倍量的蒸餾水（確保水質(zhì)純凈），將混合物置于60℃恒溫水浴中，持續(xù)攪拌2h，8000rpm/min離心10min，小心收集上清液，避免吸入沉淀物，置于4℃冰箱中保存待用。4.2.3.4合并提取液將4.2.3.2和4.2.3.3中收集的上清液合并，確保充分混勻。4.2.4濃縮T/WSWXH—3取4.2.3.4項中的濾液，首先進(jìn)行經(jīng)減壓濃縮，將其體積減少至原濾液體積的1/5后，以8000rpm/min離心10min，并收集上清液。將所得上清液進(jìn)一步減壓濃縮，直至相對比重達(dá)到1.15~1.20（濃縮溫度控制在60℃~70℃),最終獲得濃縮液。4.2.5醇沉向濃縮液中緩慢加入3倍體積的95%乙醇（食用酒精持續(xù)攪拌至多糖完全沉淀，4℃~10℃靜置4h~6h。4.2.6離心將醇沉后的沉淀物在8000rpm/min條件下離心10min，收集沉淀物。4.2.7脫蛋白4.2.7.1Sevage試劑配制用氯仿（CHCl?)-正丁醇（C?H?OH）體積按4:1混合，充分搖勻。4.2.7.2混合多糖與試劑將多糖溶液與Sevage試劑按4:1比例混合，震蕩器中震蕩30min混合均勻，3000rpm/min離心3min，取上清液，重復(fù)操作多次，直至無沉淀產(chǎn)生。4.2.8多糖脫色工藝4.2.8.1活性炭脫色按照活性炭添加量25%，脫色溫度60℃,脫色時間45min，pH=3的條件加入活性炭對多糖溶液進(jìn)行初步脫色。4.2.8.2過氧化氫脫色按照過氧化氫（H2O2）添加量10%、脫色溫度60℃、脫色時間3h、pH=9的條件加入H2O2對多糖溶液進(jìn)行二次脫色。4.2.9冷凍干燥多糖溶液50℃減壓濃縮后冷凍干燥進(jìn)行真空干燥處理，即得巴爾喀什蘑菇多糖的粗品。4.2.10離子交換色譜純化工藝粗多糖復(fù)溶后配置成20mg/mL多糖母液，8000rpm/min離心后取上清過DEAEseplifeFF離子交換柱，NaCl溶液等梯度洗脫，每15mL收集一管，其中洗脫條件為：0-10管H2O；11-40管0.1mmoL/LNaCI；41-54管0.2mmoL/LNaCI；55-61管0.3mmoL/LNaCI。最終收集合并30-40管多糖溶液，減壓濃縮冷凍干燥后制得純化多糖1；收集41-50管多糖溶液，減壓濃縮冷凍干燥后制得純化多糖2。T/WSWXH—45質(zhì)量要求表1檢測質(zhì)量要求表檢測項目標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法性狀不規(guī)則塊狀或粉末狀物；