pcr上崗證考試題及答案湖南省單選題1.PCR技術(shù)中，引物的作用是（）A.打開DNA雙鏈B.催化合成DNA子鏈C.提供模板D.使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始延伸DNA鏈答案：D。引物能與模板DNA結(jié)合，為DNA聚合酶提供起始點，使其從引物3'端開始延伸DNA鏈。2.下列關(guān)于TaqDNA聚合酶的說法，錯誤的是（）A.具有熱穩(wěn)定性B.催化5'→3'的DNA合成反應(yīng)C.具有3'→5'外切酶活性D.可用于PCR反應(yīng)答案：C。TaqDNA聚合酶有熱穩(wěn)定性，催化5'→3'的DNA合成，用于PCR反應(yīng)，但不具有3'→5'外切酶活性。3.PCR反應(yīng)中，變性溫度一般為（）A.55℃B.72℃C.9495℃D.60℃答案：C。PCR變性步驟是使雙鏈DNA解旋為單鏈，溫度在9495℃。4.實時熒光定量PCR技術(shù)中，SYBRGreen熒光染料的作用是（）A.特異性結(jié)合引物B.特異性結(jié)合模板DNAC.嵌入雙鏈DNA中發(fā)出熒光D.標記探針答案：C。SYBRGreen能嵌入雙鏈DNA中，DNA擴增時熒光信號增強來監(jiān)測擴增過程。5.在PCR實驗室中，以下哪種操作是錯誤的（）A.不同區(qū)域的工作服分開使用B.實驗前后對實驗臺面進行消毒C.試劑和標本可以在同一區(qū)域操作D.嚴格按照操作規(guī)程進行實驗答案：C。試劑和標本應(yīng)在不同區(qū)域操作，防止交叉污染。6.以下哪種物質(zhì)可以抑制PCR反應(yīng)（）A.核酸酶B.蛋白酶C.肝素D.以上都是答案：D。核酸酶可降解核酸，蛋白酶可能破壞酶活性，肝素能結(jié)合DNA聚合酶抑制PCR反應(yīng)。7.PCR產(chǎn)物的檢測方法不包括（）A.凝膠電泳B.測序C.免疫印跡法D.熒光定量檢測答案：C。免疫印跡法主要用于蛋白質(zhì)檢測，不是PCR產(chǎn)物檢測方法。8.反轉(zhuǎn)錄PCR（RTPCR）中，反轉(zhuǎn)錄的模板是（）A.DNAB.mRNAC.tRNAD.rRNA答案：B。RTPCR是將mRNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA后進行PCR擴增。9.多重PCR是指（）A.同時擴增多個不同的靶序列B.多次進行PCR反應(yīng)C.使用多種引物進行PCRD.以上都不對答案：A。多重PCR能在同一反應(yīng)體系中同時擴增多個不同靶序列。10.PCR反應(yīng)體系中，dNTP的作用是（）A.提供能量B.作為DNA合成的原料C.調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的pH值D.激活DNA聚合酶答案：B。dNTP是合成DNA的原料。11.在PCR實驗中，為了防止氣溶膠污染，應(yīng)使用（）A.帶濾芯的吸頭B.普通吸頭C.玻璃吸管D.塑料滴管答案：A。帶濾芯吸頭可有效防止氣溶膠污染。12.以下關(guān)于PCR引物設(shè)計的原則，錯誤的是（）A.引物長度一般為1825bpB.引物的GC含量應(yīng)在40%60%C.引物之間不應(yīng)形成互補序列D.引物的5'端必須與模板嚴格配對答案：D。引物3'端必須與模板嚴格配對，5'端可添加一些額外序列。13.熒光定量PCR中，Ct值的含義是（）A.達到熒光閾值時的循環(huán)數(shù)B.熒光強度達到最大值時的循環(huán)數(shù)C.熒光信號開始出現(xiàn)時的循環(huán)數(shù)D.以上都不對答案：A。Ct值是熒光信號達到設(shè)定閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。14.PCR反應(yīng)中，延伸時間的確定主要取決于（）A.模板的長度B.引物的長度C.反應(yīng)體系的體積D.循環(huán)次數(shù)答案：A。延伸時間根據(jù)模板長度確定，一般每1kb延伸1分鐘。15.以下哪種疾病可以用PCR技術(shù)進行診斷（）A.艾滋病B.高血壓C.糖尿病D.冠心病答案：A。PCR可檢測艾滋病病毒核酸進行診斷，高血壓、糖尿病、冠心病主要不是用PCR診斷。16.從臨床標本中提取核酸時，常用的方法不包括（）A.酚氯仿抽提法B.硅膠膜吸附法C.堿裂解法D.磁珠法答案：C。堿裂解法常用于質(zhì)粒提取，不是臨床標本核酸提取常用方法。17.PCR實驗室的空氣凈化要求一般為（）A.十萬級B.萬級C.千級D.百級答案：B。PCR實驗室空氣凈化一般要求達到萬級。18.在PCR反應(yīng)中，若引物二聚體過多，可能的原因是（）A.引物濃度過高B.退火溫度過低C.引物設(shè)計不合理D.以上都是答案：D。引物濃度高、退火溫度低、設(shè)計不合理都可能導(dǎo)致引物二聚體過多。19.以下關(guān)于PCR技術(shù)的應(yīng)用，錯誤的是（）A.基因克隆B.基因突變檢測C.蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析D.病原體檢測答案：C。PCR用于核酸相關(guān)操作，不能用于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析。20.實時熒光定量PCR結(jié)果分析中，標準曲線的斜率反映了（）A.擴增效率B.檢測靈敏度C.線性范圍D.特異性答案：A。標準曲線斜率可反映PCR擴增效率。多選題1.PCR技術(shù)的基本反應(yīng)步驟包括（）A.變性B.退火C.延伸D.終止答案：ABC。PCR基本步驟是變性、退火、延伸。2.PCR實驗室的分區(qū)一般包括（）A.試劑準備區(qū)B.標本處理區(qū)C.PCR擴增區(qū)D.產(chǎn)物分析區(qū)答案：ABCD。PCR實驗室通常分為這四個區(qū)。3.影響PCR反應(yīng)特異性的因素有（）A.引物的特異性B.退火溫度C.鎂離子濃度D.模板的純度答案：ABCD。引物特異性、退火溫度、鎂離子濃度、模板純度都會影響PCR反應(yīng)特異性。4.實時熒光定量PCR的優(yōu)點包括（）A.靈敏度高B.特異性強C.可進行定量分析D.無需電泳檢測答案：ABCD。實時熒光定量PCR具有靈敏度高、特異性強、可定量、無需電泳檢測等優(yōu)點。5.核酸提取過程中，需要注意的事項有（）A.防止核酸酶污染B.避免反復(fù)凍融C.控制提取時間D.選擇合適的提取方法答案：ABCD。核酸提取要防核酸酶污染、避免反復(fù)凍融、控制時間、選合適方法。6.PCR反應(yīng)體系中，可能包含的成分有（）A.模板DNAB.引物C.TaqDNA聚合酶D.dNTP答案：ABCD。PCR反應(yīng)體系含模板DNA、引物、TaqDNA聚合酶、dNTP等。7.以下關(guān)于多重PCR的描述，正確的有（）A.可提高檢測效率B.引物設(shè)計要求更高C.易出現(xiàn)非特異性擴增D.可同時檢測多種病原體答案：ABCD。多重PCR能提高效率、同時檢測多種病原體，但引物設(shè)計要求高，易出現(xiàn)非特異性擴增。8.PCR產(chǎn)物的凝膠電泳檢測中，影響條帶遷移率的因素有（）A.DNA分子大小B.凝膠濃度C.電場強度D.緩沖液離子強度答案：ABCD。DNA大小、凝膠濃度、電場強度、緩沖液離子強度都會影響條帶遷移率。9.反轉(zhuǎn)錄PCR可用于（）A.基因表達分析B.病毒RNA檢測C.構(gòu)建cDNA文庫D.線粒體DNA檢測答案：ABC。反轉(zhuǎn)錄PCR用于基因表達分析、病毒RNA檢測、構(gòu)建cDNA文庫，線粒體DNA是DNA不是反轉(zhuǎn)錄PCR主要用途。10.PCR技術(shù)在法醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用包括（）A.親子鑒定B.個體識別C.犯罪現(xiàn)場物證鑒定D.疾病診斷答案：ABC。PCR用于法醫(yī)學(xué)親子鑒定、個體識別、犯罪現(xiàn)場物證鑒定，疾病診斷不屬于法醫(yī)學(xué)應(yīng)用。判斷題1.PCR技術(shù)只能擴增已知序列的DNA片段。（）答案：錯誤。PCR也可用于擴增未知序列，如RACE技術(shù)。2.實時熒光定量PCR可以絕對定量檢測核酸的拷貝數(shù)。（）答案：正確。通過標準曲線等方法可進行絕對定量。3.在PCR實驗室中，不同區(qū)域的儀器設(shè)備可以混用。（）答案：錯誤。不同區(qū)域儀器設(shè)備應(yīng)專用，防止交叉污染。4.核酸提取過程中，離心速度和時間對提取效果沒有影響。（）答案：錯誤。離心速度和時間會影響核酸沉淀和分離效果。5.PCR反應(yīng)中，循環(huán)次數(shù)越多，擴增產(chǎn)物的量就越多。（）答案：錯誤。循環(huán)次數(shù)過多會出現(xiàn)平臺期，產(chǎn)物量不再增加。6.引物二聚體的形成不會影響PCR反應(yīng)的結(jié)果。（）答案：錯誤。引物二聚體過多會與靶序列競爭引物和酶等，影響結(jié)果。7.反轉(zhuǎn)錄PCR只能用于RNA病毒的檢測。（）答案：錯誤。還可用于細胞內(nèi)mRNA表達分析等。8.PCR實驗室的空氣消毒可以使用紫外線燈照射。（）答案：正確。紫外線燈可用于空氣消毒。9.熒光定量PCR中，SYBRGreen法的特異性比TaqMan探針法高。（）答案：錯誤。TaqMan探針法特異性更高。10.核酸提取的純度越高，PCR反應(yīng)的效果就越好。（）答案：正確。高純度核酸利于PCR反應(yīng)。簡答題1.簡述PCR技術(shù)的基本原理。答案：PCR是一種體外擴增DNA的技術(shù)。基本原理是在模板DNA、引物、dNTP、TaqDNA聚合酶等存在的條件下，通過變性、退火、延伸三個基本反應(yīng)步驟循環(huán)進行。變性是在高溫（9495℃）下使雙鏈DNA解旋為單鏈；退火是降溫（一般5560℃）使引物與單鏈模板DNA互補結(jié)合；延伸是在適宜溫度（72℃）下，TaqDNA聚合酶以dNTP為原料，從引物3'端開始延伸合成新的DNA鏈。每經(jīng)過一個循環(huán)，DNA量就增加一倍，經(jīng)過多次循環(huán)可獲得大量特定的DNA片段。2.簡述PCR實驗室分區(qū)的意義及各區(qū)域的主要功能。答案：分區(qū)意義是防止交叉污染，保證實驗結(jié)果的準確性和可靠性。試劑準備區(qū)：主要進行PCR反應(yīng)所需試劑的配制、分裝和保存，要求環(huán)境清潔，防止外來核酸污染。標本處理區(qū)：對臨床標本進行處理，如核酸提取等，該區(qū)域可能存在大量核酸，需嚴格防護。PCR擴增區(qū)：進行PCR反應(yīng)，需要保持相對穩(wěn)定的溫度和環(huán)境。產(chǎn)物分析區(qū)：對PCR產(chǎn)物進行檢測和分析，如凝膠電泳、測序等，此區(qū)域有大量擴增產(chǎn)物，要防止產(chǎn)物污染其他區(qū)域。3.簡述實時熒光定量PCR技術(shù)的原理及應(yīng)用。答案：原理：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析。常用的熒光化學(xué)物質(zhì)有SYBRGreen和TaqMan探針等。SYBRGreen能嵌入雙鏈DNA發(fā)出熒光，DNA擴增時熒光信號增強；TaqMan探針與靶序列特異性結(jié)合，在擴增過程中被酶切割釋放熒光信號。應(yīng)用：基因表達分析，可檢測不同組織或細胞中基因的表達水平；病原體定量檢測，如檢測病毒載量；腫瘤相關(guān)基因的定量檢測，輔助腫瘤的診斷和治療監(jiān)測；遺傳病的基因診斷和產(chǎn)前診斷等。4.簡述核酸提取的基本步驟及注意事項。答案：基本步驟：首先破碎細胞或病毒顆粒，釋放核酸，可采用機械法、化學(xué)法或酶法等。然后去除蛋白質(zhì)、多糖等雜質(zhì)，常用酚氯仿抽提、硅膠膜吸附、磁珠法等。最后沉淀核酸，一般用乙醇或異丙醇沉淀，再用70%乙醇洗滌后干燥，最后溶解于適量緩沖液中。注意事項：防止核酸酶污染，操作過程應(yīng)戴手套、口罩，使用無核酸酶的耗材和試劑；避免反復(fù)凍融，以免核酸斷裂；控制提取時間，