（掌握）臨床檢驗儀器的常用性能指標：靈敏性，誤差，噪聲，最小檢測量，精確度，可靠性，重復性，分辨率，測量范圍和示值范圍，線性范圍，響應時間，頻率響應范圍。（熟悉）誤差：兩種表示方法。一是絕對誤差，二是相對誤差。（熟悉）離心機的工作原理：離心機就是利用離心機轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的強大的離心力，迫使液體中的微?？朔U散，加快沉降速度，把樣品中具有不同沉降系數(shù)和浮力密度的物質(zhì)分離開。（熟悉）相對離心力：通常顆粒在離心過程中的離心力是相對于顆粒本身所受的重力而言，因此把這種離心（熟悉）離心機的分類：按轉(zhuǎn)速分可分為低速、高速、超速離心機等；按用途可分為制備型、分析（熟悉）離心機的主要技術參數(shù)：3、最大容量離心機一次可分離樣品的最大體積，通常表示（掌握）差速離心法：差速離心法又稱為分步離心法。根據(jù)被分離物的沉降速度不同，采用不同的離心速度和時間進行分步離心的方法，稱為差速離心法。該方法主要用于分離大小和密度差異較大的顆粒。優(yōu)點：操作簡單，離心后用傾倒法即可將上清液與沉淀分開，并可使用容量較大的角式轉(zhuǎn)子；分離時間短、重復性高；樣品處理量大。缺點：分辨率有限、分離效果差，沉淀系數(shù)在同一個數(shù)量級內(nèi)的各種粒子不容易分開，不能一次得到純（掌握）密度梯度離心法：密度梯度離心法又稱區(qū)帶離心法，該方法主要用于沉降速度差別不大的微粒，將樣品放在一定惰性梯度介質(zhì)中進行離心沉淀或沉降平衡，在一定離心力下把顆粒分配到梯度液中某些特定位置上，形成不同區(qū)帶的分離方法。優(yōu)點：具有很好的分辨率、分離效果好，可一次獲得較純的顆粒；適用范圍廣，既能分離沉淀系數(shù)差的顆粒，又能分離有一定浮力密度的顆粒；顆粒不會積壓變形、能保持顆粒活性，并防止已形成的區(qū)帶由于對缺點：離心時間較長；需要制備梯度液；操作嚴格、不易掌握。（掌握）光學顯微鏡的工作原理：光學顯微鏡是利用光學原理，把人眼所不能分辨的微小物體放大成像，供人們提取物質(zhì)微小結(jié)構(gòu)信息的光學儀器。光學顯微鏡由兩組會聚透鏡組成光學折射成像系統(tǒng)。把焦距較短、靠近觀察物、成實像的透鏡組稱為物鏡；焦距較長，靠近眼睛、成虛像的透鏡組稱為目鏡。被觀察物體位于物鏡的前方，被物鏡做一級放大后成一倒立的實像，然后此實像再被目鏡作第二次放大，得到最大放大效果的倒立的虛像，位于人眼的明視距離處。相對于物鏡的成像條件及最后二次成像于觀察者的明視距離等條件的滿足，是通過儀器的機械調(diào)焦系統(tǒng)來實現(xiàn)的。光學系統(tǒng)：物鏡、目鏡、聚光鏡、反光鏡。機械系統(tǒng)：聚光鏡升降、調(diào)焦系統(tǒng)、載物臺和物鏡轉(zhuǎn)換器等運動夾持部件以及底座、鏡臂、鏡筒等支持光源：顯微鏡的光源有自然光源和電光源兩大類。濾光器：即濾光片，作用主要是改變?nèi)肷涔獾墓庾V成分和光的強度，便于顯微鏡觀察和顯微攝影。最常使用的濾光片是有色玻璃濾光片。必須了解濾光片的光譜特性并正確選用，才能獲得最佳效果。聚光鏡：對于大孔徑物鏡，不可能使用大尺寸光源，只有使用光學系統(tǒng)把光源的像放大，并把光源的聚焦于被觀察物體附近，這個聚光系統(tǒng)就是聚光鏡。玻片：大多數(shù)生物顯微鏡的標本是夾在兩片薄玻璃片中進行觀測的。上面一片稱蓋玻片，下面一片稱載玻片。由于它們處于觀察光路之中，它們的光學性質(zhì)對照明系統(tǒng)有較大的影響，因此應對玻片的參數(shù)做統(tǒng)一（熟悉）光學顯微鏡的機械系統(tǒng)包括底座、鏡臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺、調(diào)焦結(jié)構(gòu)和聚光鏡升降（掌握）紫外-可見分光光度計的工作原理：光照射到物質(zhì)可發(fā)生吸收。光被吸收后，其能量常以熱的形式釋放出來，這種能量一般覺察不到，但可以利用測量物質(zhì)對某些波長光的吸收來了解物質(zhì)的特性。不同的物質(zhì)會吸收不同波長的光。改變?nèi)肷涔獾牟ㄩL，并依次記錄物質(zhì)對不同波長光的吸收程度，就得到該物質(zhì)的吸收光譜。每一種物質(zhì)都有其特定的吸收光譜，因此可根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜來分析物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、含量和純度，這就是吸收光譜分析法的理論基礎。（掌握）光的吸收定律：即郎伯-比爾定律，是比色分析的基本定律。表達了物質(zhì)對單色光吸收程度與溶液濃度和液層厚度之間的函數(shù)關系。濃度為c、液層厚度為b的溶液，k為比例常數(shù)。A=kbc當一束單色光照射吸收溶液時，其吸光度與液層厚度及溶液濃度的乘積成正比。此即朗伯-比爾定律。（掌握）紫外—可見分光光度計的基本結(jié)構(gòu)：光源、單色器、吸收池、檢測器、信號顯示系光源：提供入射光的裝置；常用的光源有鎢燈或鹵鎢燈、氫燈或氘燈、汞燈等多種。吸收池：又稱為比色皿、比色杯、樣品池或液槽等，是用來盛放被測溶液的器件，同時也決定著透光液層厚度、特定波長光的透光度等多種參數(shù)，應具有良好的透光性和較強的耐腐蝕性。在可見光范圍內(nèi)，常用無色光學玻璃或塑料制作；在紫外區(qū)，需用能透紫外線的石英玻璃或藍寶石制作。（P53）檢測器：把光信號轉(zhuǎn)換為電信號的裝置。又稱為光電轉(zhuǎn)換器。通常使用光電管、光電倍增管或光電二極信號顯示系統(tǒng)：是把放大的信號以適當?shù)姆绞斤@示或記錄下來的裝置析儀（AHA）等，是對一定體積全血內(nèi)血細胞數(shù)量和異質(zhì)性進行自動分析的常規(guī)檢驗儀器。其主要功能是血細胞計數(shù)、白細胞分類、血紅蛋白測定、相關參數(shù)計算等。體，其電阻值比稀釋液大。當血細胞通過檢測器的微孔的孔徑感受區(qū)時，其內(nèi)外電極的恒流電路上的電阻值瞬間增大，產(chǎn)生電壓脈沖信號。脈沖信號數(shù)等于通過的細胞數(shù)，脈沖信號幅度大小與細胞體積成正比。根據(jù)歐姆定律，在恒電流電路上，電壓變化與電阻變化成正比，電阻值又同細胞體積成正比，血細胞體積越大，電壓越高，產(chǎn)生信號的脈沖幅度就越大。各種大小不同的細胞產(chǎn)生的脈沖信號分別被送入儀器的檢測通道，經(jīng)計算機處理后，以體積直方圖顯示出特定細胞群中的細胞體積和細胞分布情況。最后得出白細胞（WBC）、激光、射頻、電導、電阻抗、細胞化學染色等多項技術進行細胞分析，并綜合分析檢測數(shù)據(jù)，從而得出較為準確的“五分類”結(jié)果。其共有特點是均使用了流式細胞計數(shù)，形成流體動力聚焦的流式通道，使單細胞流在鞘液的包裹下通過流式通道，將重疊限制到最低限度。（掌握）網(wǎng)織紅細胞計數(shù)分析基本原理：采用激光流式細胞分析技術與細胞化學熒光染色技術聯(lián)合對網(wǎng)織紅細胞進行分析，即利用網(wǎng)織紅細胞中殘存的嗜堿性物質(zhì)—RNA，在活體狀態(tài)下與特殊熒光染料（新亞甲藍、氧氮雜芑750、堿性槐黃O等）結(jié)合，激光激發(fā)產(chǎn)生熒光，熒光強度與RNA含量成正比；用流式細胞技術檢測單個的網(wǎng)織紅細胞的大小和細胞內(nèi)RNA含量及血紅蛋白含量。由計算機數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)綜合分（掌握）血細胞分析儀測定血紅蛋白的原理：除干式離心分層型、無創(chuàng)型外，各種BCA對血紅蛋白測定都采用光電比色原理。血細胞懸液中加入溶血劑后，紅細胞溶解釋放出血紅蛋白，后者與溶血劑形成血紅蛋白衍生物也不同，吸收光譜也有差異，但最大吸收峰都接近540nm，因為國際血液學標準化委員會（ICSH）推薦的氰化高鐵（HiCN）法的最大吸收峰在540nm，儀器血紅蛋白的校正必須以HiCN值為標準。（熟悉）血液凝固分析儀的定義：血液凝固分析儀（ACA）是采用一定分析技術，對血栓與止血有關成分進行自動檢測分析的臨床常規(guī)檢驗儀器。在血栓/止血實驗室中最基本的設備就是血液凝固分析儀。（P74）（熟悉）血凝儀的常用檢測方法：凝固法是血栓/止血實驗中最基本、最常用的方法。半自動血凝儀以凝固法測定為主,檢測項目較少,而全自動血凝儀可使用多種方法進行凝血、抗凝、纖維蛋白溶解系統(tǒng)功能、用藥的監(jiān)測等多個項目的測定。1、凝血系統(tǒng)的檢測常規(guī)篩選實驗：如PT、APTT、TT測定;凝物質(zhì)（LAC）等測定。D-二聚體（D-Dimer）等。4、臨床用藥的監(jiān)測當臨床應用普通肝素（UFH）、低分子肝素（LMWH）及口服抗凝劑如華法林時，常用血凝儀進行監(jiān)測以保證用藥安全。（熟悉）血液黏度計的分類：按工作原理，可分為毛細管黏度計和旋轉(zhuǎn)式黏度計。（熟悉定義）紅細胞沉降率：是指紅細胞在一定條件下沉降的速度，簡稱血沉。（熟悉）自動血沉儀的工作原理：所有自動血沉儀的原理和方法都是建立在魏氏法的基礎上（掌握）影響紅細胞沉降的因素：紅細胞的大小和形態(tài)；紅細胞的變形性；紅細胞聚集性，紅細胞間的相互作用；血細胞比容；血漿介質(zhì)和沉降管的傾斜度等。（熟悉）光源：采用紅外光源；（掌握）紅細胞沉降曲線：分為紅細胞不下沉的懸浮期、紅細胞緡線狀形成的聚集期、紅細胞等快速下降的快速沉降期、紅細胞開始積壓的緩慢沉降期。（熟悉）樣本的采集與抗凝：靜脈采血要求在30秒內(nèi)完成1ml左右的采血且不能淤血和溶血。（熟悉）質(zhì)控物的選擇：質(zhì)控物的質(zhì)量是質(zhì)控的關鍵，標準按參考方法進行校驗，95%的差值應在5mm以下。一般采取低值、中值和高值三個新鮮血樣，要求這三個血樣的血沉值應為1-99mm之間。（掌握）尿液分析臨床意義：是臨床診斷泌尿系統(tǒng)疾病的重要措施之一，通過對尿液的物理學檢查和化學檢查，可觀察尿液物理性狀和化學成分的變化。在尿沉渣檢查中能夠看到的有形成分為紅細胞、白細（熟悉）尿液分析儀的分類：按工作方式分類：可分為濕式尿液分析儀和干式尿液分析儀。按測試項目分類：可分為8項尿液分析儀、9項尿液分析儀、10項尿液分析儀、11項尿液分析儀、12項尿液分析儀和13項尿液分析儀。檢測項目包括尿蛋白、尿葡萄糖、尿pH、尿酮體、尿膽紅質(zhì)、尿膽原、尿潛血、亞硝酸鹽、尿白細胞、尿比重、維生素C、尿液顏色和濁度。按自動化程度分類：可分為半自動尿液分析儀和全自動尿液分析儀。（熟悉）試劑帶的反應原理1）pH測定：采用pH指示劑原理（2）尿蛋白質(zhì)測定：利用pH指示劑尿酮體測定：采用亞硝基鐵氰化鈉反應測量酮體。（5）尿隱血測定：利用游離血紅蛋白、溶解紅細胞或肌紅蛋白中的血紅素具有過氧化物酶樣作用，能催化過氧化氫釋放出新生態(tài)氧，使色原氧化而顯色，其顏色深淺或重氮反應原理。（8）尿亞硝酸鹽測定：尿亞硝酸鹽試驗的化學基礎是利用某些細菌能將尿中硝酸鹽還原成顏色變化與細菌數(shù)量不成比例，但陽性結(jié)果表明尿中細菌數(shù)量在105/ml以上。（9）尿白細胞測定：利用中性粒細胞的酯酶能水解吲哚酚生成吲哚酚和有機酸，吲哚酚可進一步氧化成靛藍的原理；或吲哚酚和重氮鹽反應，生成重氮色素而顯色的原理進行測定，顏色深淺與粒細胞量的多少有關。（10）尿比重測定：基于某種預處理的多聚電解質(zhì)在一定離子濃度溶液中pKa變化來測量比重。（11）尿維生素C測定：采用磷鉬酸緩沖液或甲基綠與尿中維生素C進行反應，形成鉬藍，顏色由藍色變成紫色，顏色深淺與尿中維生素C含量有關。（12）尿液顏色測定：采用反射法，不同類型的儀器采用不同的（掌握）尿液分析儀的檢測原理：把試劑帶浸入尿液以后，除了空白塊外，其余的試劑塊都因和尿液發(fā)生了化學反應而產(chǎn)生了顏色的變化，試劑塊的顏色深淺與光的吸收和反射程度有關，顏色越深，相應某種成分濃度越高，吸收光量值越大，反射光量值越?。悍粗瓷渎试酱?。因為顏色的深淺與光的反射率成反比關系，而顏色的深淺又與尿液中各種成分的濃度成比例關系，所以只要測得光的反射率及可以求得尿液是被測試劑塊的敏感特征波長；另一種為參比波長，是被測試劑塊不敏感的波長，用于消除背景光和其他雜（熟悉）尿液分析儀一-般由機械系統(tǒng)、光學檢測系統(tǒng)、電路系統(tǒng)三部分組成。1、保持儀器的清潔，才能維持良好的運行3、不同類型的尿液分析儀使用不同的試劑帶，在試劑帶從冷藏溫度變成室溫時，不要打開盛裝試劑帶的瓶蓋。每次取用后應立即蓋上瓶蓋，防止試劑帶受潮變質(zhì)；4、試劑帶浸入尿樣的時間為2秒，過多的尿液應用濾紙吸走，所有試劑塊包括空白在內(nèi)都要全部浸入尿液5、儀器使用最佳溫度應在20-25℃,尿液標本和試劑帶最好也在這個溫度范圍內(nèi)；6、在報告檢測結(jié)果時，由于各類尿液分析儀設計的結(jié)果檔次差異較大，不能單獨以符號代碼結(jié)果來解釋，要結(jié)合半定量值進行分析，以免因定性結(jié)果的報告方式不夠妥當，給臨床解釋帶來混亂。（P100）（熟悉）尿液分析儀的質(zhì)量控制：檢測前的質(zhì)量控制：包括正確的尿液收集方法、有效的標本標記與識別、適宜的防腐劑或冷藏裝置、在規(guī)定時間內(nèi)完成檢測等，同時應了解患者可能影響尿化學檢測的進食和藥物使用情況等；檢測中的質(zhì)量控制：包括嚴格、規(guī)范、正確的實驗操作和合理的應用尿液質(zhì)控物來監(jiān)控、判斷尿液分析儀是否處于最佳或正常的工作狀態(tài)。質(zhì)控尿液可購買商品化產(chǎn)品，也可人工配制。在尿液分析儀全面鑒定和定期校準的基礎上，每日對儀器和試劑帶按規(guī)范化質(zhì)控程序進行操作。每次使用“正?！被颉爱惓！眱煞N濃度的質(zhì)控尿液。任何一個試劑模塊的測定結(jié)果與質(zhì)控尿液期望“靶值”允許有1個定性等級的差異，超過此范圍或結(jié)果在“正?！焙汀爱惓！敝g跳躍，均應視為失控。檢測后的質(zhì)量控制：主要體現(xiàn)在對檢驗報告單的審核和簽發(fā)。除了注意檢驗報告的文字書寫或計算機錄入有無錯誤外，更應分析檢測結(jié)果之間的關聯(lián)性，即尿液分析的結(jié)果與顯微鏡鏡檢結(jié)果的相互關系。另外，應注意維生素C含量對其他檢測結(jié)果的影響，注意臨床診斷和檢驗結(jié)果的符合性。（P101）（熟悉）尿有形成分分析儀大致有兩類，一類是流式全自動尿有形成分分析儀，另一類是影像型尿有形成分定是應用流式細胞術和電阻抗的原理進行的。一個尿液標本被稀釋并經(jīng)染色液染色后，靠液壓作用通過鞘液流動池。反應樣品從樣品噴嘴出口進入鞘液流動室時，被一種無粒子顆粒的鞘液包圍，使每個細胞以單個縱列的形成通過流動池的中心（豎直）軸線，在這里每個尿液細胞被氬激光光束照射。每個細胞有不同程度的前向散射光強度（Fsc它成比例地反映細胞的大小和電阻抗的大小（電阻抗電信號與細胞的體積成正比）。儀器將這種熒光、散射光等光信號轉(zhuǎn)變成電信號，并對各種信號進行分析，最后得到每個尿液標本產(chǎn)生出的直方圖和散射圖。通過分析這些圖形，即可區(qū)分每個細胞并得出有關細胞的形態(tài)。作代替手工操作，用加樣探針將樣品加入各自的反應杯中，試劑探針按一定時間自動定量加入試劑，經(jīng)攪拌器充分混勻后，在一定條件下反應。反應杯同時作為比色杯進行比色測定。各環(huán)節(jié)用傳送帶連接，按順序依檢測系統(tǒng)：光源：氙燈（掌握）后分光技術優(yōu)點：使用后分光技術，可以在同一體系中測定多種成分。如果比色池中有多種吸收特征不同的組成物質(zhì)，當復色光通過后，各物質(zhì)分別對各自的特征性光波產(chǎn)生吸收，之后再分成光譜對不同的波長進行測定，可以在同一體系中同時得到多組分結(jié)果，無需移動儀器的任何部分，穩(wěn)定性好，速度快，噪聲低，分析精確度和準確度高，故障少。光柵使用壽命長，無需任何保養(yǎng)，采用340nm波長的酶類測定結(jié)果穩(wěn)定可靠，可分為全息反射式光柵和蝕刻式凹面光柵，前者是在玻璃.上覆蓋一種金屬膜后制得，有一定相差，易被腐蝕；后者是將所選波長固定刻在凹面玻璃上，無相差，抗腐蝕，耐磨損，是目前最先進的全息光柵。（熟悉）分立式自動生化分析儀的優(yōu)點是樣品在檢測系統(tǒng)中是各自獨立的，能夠減小交叉污染。（熟悉）自動生化分析儀的性能指標：檢測準確度（檢測準確度包含正確度和精密度）自動化程度、分析效率、應用范圍、其他性能。檢測準確度是自動生化儀最重要的性能指標（掌握）自動生化分析儀的分析方法分為：1.終點分析法：又稱平衡法，是通過測定反應開始至反應達到平衡時的產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來求出待測物濃度或活性的方法?？煞譃棰伲阂稽c法：指樣品和試劑混合后，反應一定時間到達終點時，通過吸光度的檢測計算待測物濃度。該法簡便，但易受樣品、試劑顏色、血清濁度及干擾物的影響。單試劑型的生化檢測項目需選用一點法，如鈣、磷、鎂的測定②兩點法：常應用于具有雙試劑的檢測項目。加入樣品后分別讀取試劑I、II吸光度值，即樣品空白值和實際呈色反應值，計算待測物濃度。該法可在一定程度上消除樣品、試劑顏色、血清濁度及干擾物的影響。目前大多數(shù)生化檢測項目都可使用雙試劑，如血清總蛋白、白蛋白、總膽紅素、結(jié)合膽紅素、葡萄糖、總膽固醇、甘油三酯等的測定。③固定時間法：是終點分析法的一種情況，可減少非特異性反應，指樣品和試劑混合后分別讀取延滯期后和反應一定時間后的吸光度，計算待測物濃度。如2.連續(xù)監(jiān)測法：又稱速率法，是通過連續(xù)測定酶促反應過程中某一反應產(chǎn)物或底物的吸光度，根據(jù)吸光度隨時間的變化求出待測物濃度或活性的方法。主要適用于酶活性及其代謝產(chǎn)物的測定，可將多點測定結(jié)果連成線，自動選擇線性反應期計算酶活性或濃度，使分析準確度和速度大大提高。3.免疫透射比濁法：用于測定產(chǎn)生抗原抗體特異性濁度反應的項目，在光源的光路方向測量透射光強度來測定物質(zhì)濃度，常采用終點法，主要用于血清特種蛋白的測定，如載脂蛋白、微量蛋白、急性時相反應蛋白、免疫球蛋白以及某些藥物監(jiān)測等。4.雙試劑法：在反應過程中試劑分開配制和加入反應系統(tǒng)，可消除干擾和非特異性反應，穩(wěn)定試劑，使之間；須防塵防腐蝕；：須防振防電磁干擾；自動生化分析儀應設置專用線路，防止電磁干擾及漂移對測定每測試完一個項目，必須徹底清洗。如果清洗不干凈，測試結(jié)果會有誤差，而且會影響儀器的自檢，一旦自檢不通過，儀器不能正常工作。3、單色器和檢測器：須注意防潮和絕緣，因此應及時更換儀器內(nèi)部的干燥劑。4、儀器管道系統(tǒng)：嚴格遵循操作手冊中清洗維護程序，必須注意樣品中不能混有纖維蛋白、灰塵等不溶性物質(zhì)，以免管道堵塞。5、日常維護與保養(yǎng)：嚴格按照操作手冊，并根據(jù)實際使用情況，進行儀器日維護、周維護、月維護、（熟悉）電化學分析法的定義：將被測物質(zhì)的濃度轉(zhuǎn)變成電學參數(shù)進行測量的方法。（熟悉）電解質(zhì)分析儀的參比電極一般是銀/氯化銀電極。和氧分壓（PO2）進行測定的儀器。（掌握哪兩類）目前微生物鑒定的自動化系統(tǒng)大致分為2類：一類是自動血培養(yǎng)檢測和分析系統(tǒng)，另一類是（熟悉）自動血培養(yǎng)系統(tǒng)的工作原理：自動血培養(yǎng)系統(tǒng)主要由培養(yǎng)系統(tǒng)和檢測系統(tǒng)組成。（掌握）微生物自動鑒定及藥敏分析系統(tǒng)的工作原理：采用微生物數(shù)碼鑒定原理，數(shù)碼鑒定是指通過數(shù)學的編碼技術將細菌的生化反應模式轉(zhuǎn)換成數(shù)學模式，給每種細菌的反應模式賦予一組數(shù)碼，建立數(shù)據(jù)庫或編成檢索本。通過對未知菌進行有關生化試驗并將生化反應結(jié)果轉(zhuǎn)換成數(shù)字（編碼查閱檢索本或數(shù)據(jù)庫，得到細菌名稱。其基本原理是計算并比較數(shù)據(jù)庫內(nèi)每個細菌條目對系統(tǒng)中每個生化反應出現(xiàn)的（掌握原理）藥敏測試板：藥敏測試板也分為常規(guī)測試板和快速熒光測試板兩種。常規(guī)測試板的檢測原理為比濁法，如Vitek系統(tǒng)，在含有抗菌藥物的培養(yǎng)基中，濁度的增加提示細菌生長，根據(jù)判斷標準解釋敏感或耐藥；快速熒光測試板的檢測原理為熒光法，如Sensititre系統(tǒng)，在每一反應孔內(nèi)參與熒光底物，若細菌生長，表面特異酶系統(tǒng)水解熒光底物，激發(fā)熒光，反之無熒光。以最低藥物濃度仍無熒光產(chǎn)生的濃度為最低抑菌濃（掌握）酶免疫分析儀的分類：酶免疫分析技術EIA分類：可分為非均相（或異相）酶免疫測定和均相酶免疫測定兩種。均相酶免疫分析法：以激素、藥物等小分子抗原或半抗原為主，測定過程中無需分離結(jié)合的和游離的酶標記物，實驗在液相中進行，可直接用自動生化分析儀進行測定。均相酶免疫分析有酶擴大免疫測定技術和克隆酶供體免疫測定兩種方法。非均相酶免疫分析法：非均相酶免疫分析法是在抗原抗體反應達平衡后，將游離的與抗原或抗體結(jié)合的酶標記物加以分離，再通過底物顯色進行測定（P154）根據(jù)試驗中是否使用固相支持物作為吸附免疫試劑的臨床上最常用的免疫分析方法，目前臨床常用的酶免疫分析儀都是基于ELISA技術。（p154）微孔板式ELISA使用的載體為96孔板。1.酶標儀比色液的容器不是比色皿，而是塑料微孔板；2.光束進入方式不同，酶標儀以垂直光束通過微孔板中的待測液。3.結(jié)果表示方法不同，酶標儀是用OD值，比色計是用吸光度A,1、濾光片波長精度檢查及其峰值測定：用高精度紫外可見分光光度計（波長精度±0.3nm）對不同波長的濾光片進行光譜掃描，檢測值與標定值之差即為濾光片波長精度，其差值越接近0且峰值越大表示濾光片2、靈敏度和準確度：靈敏度：其吸光度應≥0.01A；準確度：其吸光度應在0.4A左右；3、通道差與孔間差檢測：通道差檢測：連續(xù)測三次，觀察其不同通道之間測量結(jié)果的一致性，可用極差值來表示其通道差?？组g差的測量：選擇同一廠家、同一批號酶標板條（8條共96孔）分別加入200μl甲基橙溶液（吸光度調(diào)至0.065-0.070A先后置于同一通道，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長檢測，其誤差大小用4、零點漂移：取8只小孔杯，置于8個通道的相應位置，加入200μl蒸餾水并調(diào)零，采用雙波長或單波長（490nm）每隔30分鐘測定一次，觀察8個通道4小時內(nèi)的吸光度變化，其與零點的差值即稱為零點飄移。觀察各個通道4小時內(nèi)的吸光度變化；5、精密度評價：每個通道3只小杯，分別加入200μl高、中、低三種不同濃度的甲基橙溶液，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長作雙份平等測定，每日測2次，連續(xù)測定20天。分別計算其批內(nèi)精密度、日內(nèi)批間精密度、日間精密度和總精密度及相應的變異系數(shù)6、線性測定：采用雙波長平行檢測8次，求其均值。計算回歸方程、相關系數(shù)r及標準評估誤差Sy，x，7、雙波長評估：取同一廠家、同一批號酶標板條進行檢測，計算單波長和雙波長測定結(jié)果的均值、離散度，比較各組之間是否有統(tǒng)計學差異以考察雙波長清除干擾因素的效果。（P156）（熟悉）免疫比濁分析儀方法分類：臨床上測定微量蛋白（如Ig等）的自動化檢測方法主要為免疫比濁法。根據(jù)檢測原理的不同，又分為透射比濁法（包括濁度測定法和膠乳濁度測定法）和散射比濁法（包括終點法當免疫反應發(fā)生后，根據(jù)稀土離子螯合物的熒光光譜的特點（特異性強、巨大Stokes位移、熒光壽命長用時間分辨熒光分析儀延緩測量時間，排除標本中非特異性熒光的干擾，所得信號完全是稀土元素螯合物發(fā)射的特異熒光，測定免疫反應最后產(chǎn)物的特異熒光信號。根據(jù)熒光強度判斷反應特點：特異性強、敏感度高、標記物穩(wěn)定、熒光信號強。時間分辨熒光免疫檢測動態(tài)范圍寬，可達4~5個數(shù)量級；標記物制備簡單，穩(wěn)定性好，有效使用時間長，多數(shù)可達6個月；標記蛋白時反應條件溫和，免疫活性很少受損；測量快速，每秒鐘測一個樣品；易于自動化；已開發(fā)出性能優(yōu)良的數(shù)據(jù)處理軟件，以及多標記物的使用等都是其突出的特點。用途：目前時間分辨熒光免疫分析儀已廣泛用于蛋白質(zhì)和多肽激素、半抗原、病原體抗原/抗體、腫瘤標志物、干血斑樣品、核酸等的分析，并可用于測定天然殺傷細胞的活力。（P164）式儀器快速分析患者標本并準確獲取結(jié)果的分析技術，或者說測試不在主實驗室而在一個可移動的系統(tǒng)內(nèi)進可監(jiān)控儀器和試劑的工作狀態(tài)；⑥儀器檢驗項目具備臨床價值和社會學意義；⑦儀器的檢測費用合理；⑧儀器試劑的應用不會造成對患者和工作人員的健康損害或?qū)Νh(huán)境的污染等。流與被測血樣中的葡萄糖濃度呈現(xiàn)線性關系來計算血標本中的葡萄糖濃度值。當被測血樣滴在電極的測試區(qū)后，由于電極施加有一定的恒定電壓，電極上固定的酶與血液中的葡萄糖發(fā)生酶反應，血糖儀顯示葡萄糖濃）：后復性。由于引物長度遠小于模板，而且摩爾濃度高，因此在退火溫度下引物更容易按堿基序列互補配對原在Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下，按堿基配對原則與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的新鏈。上述三個步驟稱為一個循環(huán)，約需2-4分鐘，每一循環(huán)新合成的DNA片斷繼續(xù)作為下一輪反應的檢測器，現(xiàn)在的主流是多色多通道檢測，激發(fā)通道越多，適用的熒光素種類越多，儀器適用范圍就越寬。（熟悉）多色熒光標記法：多色熒光標記法的熒光染料摻入方式有兩種。第一種方式是將熒光染料預先標記在測序反應所用引物的5，端，稱為熒光標記引物法。第二種摻入方式是將熒光染料標記在作為終止底物的雙脫氧單核苷酸上，稱為熒光標記終止底物法。（熟悉）目前使用的全自動DNA測序儀都是通過凝膠電泳技術進行DNA片段的分離。（掌握）流式細胞儀（FCM）的分析原理：將特異熒光染料染色的單細胞懸液放入體壓力作用下，懸浮在樣品管中的單細胞經(jīng)管道進入FCM的流動室，沿流動室的軸心向下流動形成樣品流。流動室軸心至外壁的鞘液也向下流動，形成包繞樣品流的鞘液流。鞘液流和樣品流在噴嘴附近組成一個圓柱流束，自噴嘴的圓形孔噴出，與水平方向的激光束垂直相交，相交點稱為測量區(qū)。染色的細胞受激光照射后發(fā)出熒光，同時產(chǎn)生光散射。這些信號分別被光電倍增管和光電二極管接收，并轉(zhuǎn)換為電子信號，再經(jīng)過模數(shù)轉(zhuǎn)換器輸入計算機。計算機通過相應的軟件儲存、計算、分析這些數(shù)字化信息，就可得到細胞的大小、核酸含量、酶和抗原的性質(zhì)等信息。生同頻率的機械振動，流動室也隨之振動，于是通過測量區(qū)的液柱斷裂成一連串均勻的液滴。由于各類細胞的特性信息在細胞形成液滴以前在測量區(qū)已被測定，并儲存在計算機中，因此，當要分選某類細胞時，F(xiàn)CM就將在這類細胞形成液滴時給含有這類細胞的液滴充以特定的電荷，而不符合分選條件的含細胞液滴和不含細胞的空白液滴不被充電，即不帶電荷。帶有電荷的液滴向下落入偏轉(zhuǎn)板間的靜電場時，依所帶電荷的不同分別向左偏轉(zhuǎn)或向右偏轉(zhuǎn)，落入指定的收集器內(nèi)。不帶電的液滴不發(fā)生偏轉(zhuǎn)，垂直落入廢液槽中被排出，從而達到細胞分類收集的目的，分選出的細胞可以進一步分析、培養(yǎng)和研究。（P199）（熟悉）電泳：電泳（EP）指帶電荷的溶質(zhì)或粒子在電場中向著與其本身所帶電荷相反的電極移動的現(xiàn)帶電性。但是在一定的物理作用或化學反應條件下，某些物質(zhì)分子會成為帶電的離子（或粒子不同的物質(zhì)，由于其帶電性質(zhì)、顆粒性狀和大小不同，他們在一定的電場中移動的方向和速度也不同，因此就可以將（掌握）影響電泳的外界因素：1、電場強度2、溶液的pH值3、溶液的離子強度4、電滲作用5、粒子的遷移率6、吸附作用。（掌握）免疫電泳技術的兩大優(yōu)點：一是加快了沉淀反應的速度；二是將某些蛋白組分根據(jù)其帶電荷的不同而分開，再與抗體起反應，從而使此方法更為微量化、多樣化。（掌握）免疫電泳可用于的研究：抗原和抗體的相對應性，測定樣品的各成分及他們的電泳遷移率，根據(jù)蛋（掌握）電泳儀的臨床應用：血清蛋白電泳、尿蛋白電泳、血紅蛋白及糖化血紅蛋白電泳、免疫固定電泳、（熟悉）色