高效液相色譜儀（HPLC）作為一種高精度的分析儀器，在科研、醫(yī)藥、化工、環(huán)境監(jiān)測等領域發(fā)揮著至關重要的作用。其操作的規(guī)范性與嚴謹性直接關系到分析結果的準確性、重復性以及儀器的使用壽命。本文旨在結合實踐經驗，系統(tǒng)闡述HPLC操作過程中的核心注意事項與標準流程，為實驗室操作人員提供一份具有實際指導意義的參考。一、操作流程與注意事項（一）實驗前準備實驗開始前的充分準備是確保分析順利進行的基礎。首先，應確認實驗室環(huán)境條件，溫度和濕度需控制在儀器要求范圍內，避免劇烈波動，以保證儀器穩(wěn)定性和色譜柱性能。樣品準備是關鍵環(huán)節(jié)。需根據樣品特性選擇合適的前處理方法，確保樣品溶液澄清、無顆粒物，必要時進行過濾或離心處理，避免堵塞色譜柱。溶解樣品的溶劑應與流動相互溶，且盡可能選用初始流動相組成，以減少溶劑效應對峰形的影響。試劑與流動相準備需嚴格把關。所用溶劑應具有足夠的純度，通常為色譜純級別；水應為超純水。固體試劑需準確稱量，并用合適溶劑溶解、混合均勻。流動相在使用前必須進行脫氣處理，以去除溶解的氣體（尤其是氧氣和二氧化碳），防止在色譜柱和檢測器中產生氣泡，影響泵的正常工作和檢測信號的穩(wěn)定性。常用的脫氣方法有超聲脫氣、真空脫氣或在線脫氣。對于混合流動相，應注意各組分的混合順序和比例準確性，必要時進行過濾。若流動相為緩沖鹽溶液，需注意其pH值的調節(jié)，并確保鹽完全溶解。開機前，應檢查儀器各部件連接是否正常，電源線、數(shù)據線是否牢固。色譜柱的選擇應與分析方法匹配，安裝時注意流向標識，確保正確連接。（二）開機與系統(tǒng)準備按照儀器操作規(guī)程開啟設備。通常先開啟計算機，進入色譜工作站軟件，然后再依次開啟輸液泵、檢測器等模塊的電源。待儀器自檢完成后，在工作站軟件中進行相關方法參數(shù)的設置，包括流動相組成及比例（或梯度程序）、流速、柱溫箱溫度、檢測器波長（或其他檢測參數(shù)）、進樣量等。將已脫氣的流動相置于溶劑瓶中，確保輸液泵的吸濾頭完全浸沒在流動相中。打開輸液泵排氣閥，啟動泵進行排氣操作，觀察出口管路，直至無氣泡連續(xù)排出后關閉排氣閥。此過程需耐心操作，避免氣泡進入色譜柱。若使用多元泵，需對每個通道分別進行排氣。（三）系統(tǒng)平衡與基線檢查設置好流速后，啟動輸液泵，讓流動相按設定流速流經色譜柱和檢測器。同時開啟柱溫箱（若使用）和檢測器。系統(tǒng)平衡是一個重要過程，需要足夠的時間，直至基線穩(wěn)定?；€穩(wěn)定性通常以一段時間內（如十分鐘）基線的漂移和噪聲水平來判斷，需達到方法要求或可接受范圍。在平衡過程中，可觀察檢測器基線變化，確保無異常波動。（四）樣品分析系統(tǒng)平衡后，即可進行樣品分析。若為自動進樣器，需將處理好的樣品溶液按順序放入樣品盤，并在軟件中設置好樣品信息和序列。手動進樣時，需嚴格按照手動進樣器操作規(guī)程進行，注意進樣量的準確性和操作的規(guī)范性，避免交叉污染。進樣完成后，工作站軟件將自動采集和記錄色譜圖及相關數(shù)據。在分析過程中，應密切關注儀器運行狀態(tài)，包括壓力是否穩(wěn)定、基線是否正常、譜峰出峰情況等。如發(fā)現(xiàn)異常，應及時停止分析并排查原因。（五）實驗后處理樣品序列分析完畢后，不應立即關機。首先，需用適當?shù)娜軇_洗色譜柱和系統(tǒng)。若流動相含有緩沖鹽，應先用與流動相比例相同的水相-有機相混合液（不含鹽）沖洗，再用純有機相（如甲醇或乙腈）沖洗，以徹底清除色譜柱內殘留的鹽，防止鹽析出損壞色譜柱。沖洗時間和流速應根據色譜柱類型和使用情況確定。沖洗完成后，依次關閉檢測器、柱溫箱、輸液泵等儀器模塊電源，最后關閉計算機。及時整理實驗數(shù)據，進行結果計算和報告撰寫。同時，清理實驗臺面，妥善保管色譜柱（如兩端用堵頭密封，置于合適環(huán)境存放）、樣品瓶及其他實驗用品。二、通用注意事項色譜柱是HPLC系統(tǒng)的核心部件，價格昂貴，必須精心維護。避免使用極端pH值的流動相，避免柱壓急劇變化，避免將不溶性微粒、強保留物質帶入色譜柱。長期不用的色譜柱應充分沖洗并妥善保存。實驗過程中，應密切關注系統(tǒng)壓力。壓力過高可能提示管路堵塞、色譜柱污染或流速設置不當；壓力過低或波動可能提示有泄漏或氣泡。發(fā)現(xiàn)壓力異常應立即停機檢查。保持良好的實驗室習慣，實驗臺面整潔，儀器周圍無雜物。使用過的溶劑廢液應分類倒入指定容器，不得隨意傾倒。操作人員應熟悉所使用的HPLC儀器型號及各部件功能，嚴格遵守操作規(guī)程。遇到儀器故障時，不要擅自拆卸，應及時聯(lián)系儀器管理員或專業(yè)維修人員。定期對儀器進行維護保養(yǎng)，如更換密封圈、清洗進樣閥、檢查氘燈能量等，是保證儀器長期穩(wěn)定運行的關鍵。三、結語高效液相色譜儀的操作是一項技術性強、要求嚴謹?shù)墓ぷ?。每一個操作環(huán)節(jié)都可能影響最終的分析結果。操作人員不僅要熟悉標準操作流程，更要深刻理解每個步驟背后的原理和潛在風險，培