PCR實驗室知識及新冠檢測生物安全培訓考試(試題與答案)一、單項選擇題（每題2分，共20題，40分）1.以下關于PCR實驗室分區(qū)的描述，正確的是（）A.試劑準備區(qū)與樣本處理區(qū)可共用同一臺生物安全柜B.擴增區(qū)與產物分析區(qū)需設置為正壓環(huán)境C.樣本處理區(qū)（核酸提取區(qū)）應配備生物安全柜和低溫離心機D.四個功能區(qū)可通過普通走廊連接，無需緩沖間答案：C2.新冠病毒核酸檢測中，防止擴增產物污染的關鍵措施是（）A.在樣本處理區(qū)使用帶濾芯的移液器B.擴增區(qū)與產物分析區(qū)合并為一個區(qū)域C.所有區(qū)域使用同一套實驗服D.每日實驗結束后僅用75%酒精擦拭臺面答案：A3.生物安全二級實驗室（BSL2）處理新冠病毒樣本時，以下操作錯誤的是（）A.樣本離心時使用帶蓋的離心桶B.開啟樣本管前用75%酒精噴灑表面C.實驗過程中佩戴N95口罩和雙層手套D.實驗結束后立即將廢棄物投入黃色醫(yī)療廢物袋答案：D（需先高壓滅菌再處理）4.PCR實驗室空氣流向應遵循（）A.試劑準備區(qū)→樣本處理區(qū)→擴增區(qū)→產物分析區(qū)（正壓到負壓）B.產物分析區(qū)→擴增區(qū)→樣本處理區(qū)→試劑準備區(qū)（負壓到正壓）C.樣本處理區(qū)→試劑準備區(qū)→擴增區(qū)→產物分析區(qū)（等壓）D.試劑準備區(qū)→擴增區(qū)→樣本處理區(qū)→產物分析區(qū)（隨機）答案：A5.新冠病毒屬于（）A.單股正鏈RNA病毒B.雙股DNA病毒C.單股負鏈RNA病毒D.雙鏈RNA病毒答案：A6.以下哪類物品不屬于感染性醫(yī)療廢物（）A.核酸提取使用的離心管B.檢測后剩余的樣本管C.實驗人員使用的一次性鞋套D.被樣本污染的吸頭盒答案：C（鞋套未被樣本污染時屬于一般醫(yī)療廢物）7.PCR實驗室各功能區(qū)壓差應控制在（）A.試劑準備區(qū)相對于樣本處理區(qū)正壓510PaB.樣本處理區(qū)相對于擴增區(qū)正壓510PaC.擴增區(qū)相對于產物分析區(qū)負壓510PaD.所有區(qū)域保持0Pa壓差答案：A8.新冠檢測中，若發(fā)現(xiàn)某份樣本Ct值為18，提示（）A.樣本中病毒載量極低，需復檢B.樣本中病毒載量較高，具有傳染性C.檢測結果為陰性D.可能存在擴增抑制答案：B（Ct值越小，病毒載量越高）9.生物安全柜使用時，正確的操作是（）A.雙臂快速進出安全柜開口B.安全柜內同時放置過多物品，不影響氣流C.操作結束后立即關閉安全柜電源D.操作前需運行安全柜至少5分鐘答案：D10.新冠病毒樣本運輸時，應使用（）A.單層密封袋+普通快遞箱B.三層包裝（樣本管→防漏次級容器→運輸箱）C.普通離心管+泡沫箱D.冷凍管直接放入冰袋中答案：B11.PCR反應體系中，Taq酶的主要作用是（）A.解旋DNA雙鏈B.連接DNA片段C.催化dNTP合成DNA鏈D.標記熒光探針答案：C12.實驗室發(fā)生樣本泄漏時，首先應（）A.立即用紙巾擦拭B.疏散人員并關閉實驗室門C.噴灑含氯消毒液（有效氯≥2000mg/L）D.報告實驗室負責人答案：B（防止氣溶膠擴散）13.新冠檢測質量控制中，陰性對照出現(xiàn)擴增曲線，可能的原因是（）A.引物設計錯誤B.樣本核酸提取效率低C.擴增區(qū)對試劑準備區(qū)的交叉污染D.熒光探針濃度過低答案：C14.實驗人員進入樣本處理區(qū)前，個人防護裝備（PPE）的穿戴順序是（）A.戴口罩→穿防護服→戴手套→穿鞋套B.穿鞋套→穿防護服→戴口罩→戴手套C.戴手套→穿防護服→戴口罩→穿鞋套D.穿防護服→戴口罩→穿鞋套→戴手套答案：B15.以下關于醫(yī)療廢物處理的描述，錯誤的是（）A.感染性廢物需使用黃色雙層醫(yī)療廢物袋B.銳器（如吸頭）應投入專用銳器盒C.高壓滅菌時需確保溫度121℃、時間≥30分鐘D.滅菌后的廢物可與生活垃圾混放答案：D16.PCR實驗室“三不原則”不包括（）A.不同區(qū)域的物品不混用B.不同區(qū)域的人員不串崗C.不同檢測項目的試劑不共用D.不同批次的樣本不混檢答案：D17.新冠病毒對以下哪種消毒劑不敏感（）A.75%乙醇B.含氯消毒劑（有效氯500mg/L）C.氯己定（洗必泰）D.過氧乙酸答案：C18.樣本處理時，若離心管未完全蓋緊導致液體外溢，應（）A.立即用75%酒精擦拭離心桶B.關閉離心機電源，靜置30分鐘后處理C.直接用含氯消毒液噴灑D.用紙巾吸干后繼續(xù)實驗答案：B（靜置使氣溶膠沉降）19.以下哪項不是PCR實驗室的核心設備（）A.實時熒光定量PCR儀B.核酸提取儀C.超凈工作臺D.低溫高速離心機答案：C（生物安全柜更關鍵）20.新冠檢測報告中，“N基因和ORF1ab基因均未檢出”應表述為（）A.陽性B.弱陽性C.陰性D.無效答案：C二、判斷題（每題1分，共10題，10分）1.PCR實驗室可僅設置三個功能區(qū)（試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴增區(qū)）。（）答案：×（需至少四個區(qū)或三區(qū)兩緩沖）2.實驗人員在樣本處理區(qū)操作時，可佩戴普通外科口罩。（）答案：×（需N95/KN95口罩）3.醫(yī)療廢物高壓滅菌后，標簽需標注“已滅菌”和處理時間。（）答案：√4.擴增區(qū)可以使用與樣本處理區(qū)相同的移液器。（）答案：×（需專用）5.新冠病毒樣本保存應使用含胍鹽的病毒保存液（如滅活型）。（）答案：√6.實驗過程中若手套被污染，可直接翻轉手套外層后繼續(xù)使用。（）答案：×（需更換）7.PCR反應的退火溫度應高于引物的解鏈溫度（Tm值）。（）答案：×（退火溫度低于Tm值）8.實驗室生物安全培訓記錄需保存至少3年。（）答案：√9.樣本處理區(qū)的地面消毒可使用500mg/L含氯消毒液。（）答案：×（需≥1000mg/L）10.新冠檢測結果審核時，只需核對樣本編號與報告一致，無需檢查質控數(shù)據(jù)。（）答案：×（需同時審核質控）三、填空題（每空1分，共10空，10分）1.PCR的中文全稱為__________，其基本步驟包括變性、退火和__________。答案：聚合酶鏈式反應；延伸2.新冠病毒核酸檢測的靶基因通常選擇__________和__________。答案：N基因；ORF1ab基因（或E基因）3.生物安全柜根據(jù)防護等級分為Ⅰ級、Ⅱ級和Ⅲ級，新冠檢測應使用__________生物安全柜。答案：Ⅱ級4.實驗室人員暴露于新冠病毒樣本后，應立即用__________沖洗暴露部位，并在__________小時內進行核酸檢測。答案：0.5%碘伏（或流動清水）；245.PCR實驗室空氣消毒可采用__________照射（時間≥30分鐘）或__________熏蒸。答案：紫外線；過氧乙酸四、簡答題（每題5分，共4題，20分）1.簡述PCR實驗室“四區(qū)兩緩沖”的具體分區(qū)及功能。答案：四區(qū)：試劑準備區(qū)（配制和分裝PCR反應體系，避免外源DNA污染）、樣本處理區(qū)（樣本接收、核酸提取，需生物安全柜）、擴增區(qū)（PCR擴增反應，防擴增產物污染）、產物分析區(qū)（電泳或熒光讀取，處理擴增后產物）。兩緩沖：試劑準備區(qū)與樣本處理區(qū)之間的緩沖間（換鞋、穿防護服），樣本處理區(qū)與擴增區(qū)之間的緩沖間（脫外層手套、消毒）。2.列舉新冠檢測中生物安全操作的5項關鍵要求。答案：①樣本處理在生物安全柜內進行，避免氣溶膠擴散；②使用帶濾芯的吸頭，防止交叉污染；③所有操作后立即對臺面、儀器表面用1000mg/L含氯消毒液擦拭；④醫(yī)療廢物分類收集，高壓滅菌后交接；⑤實驗人員穿防護服、戴N95口罩、雙層手套，操作前后手消毒。3.若實驗中發(fā)現(xiàn)某份樣本核酸提取后濃度極低（<1ng/μL），可能的原因及解決措施有哪些？答案：可能原因：樣本采集量不足、保存液失效、提取試劑過期、操作失誤（如離心時間不夠）、樣本中存在抑制物（如血紅蛋白）。解決措施：重新核對樣本采集記錄，更換有效保存液；檢查提取試劑效期；延長離心時間或調整轉速；增加核酸純化步驟（如磁珠法重復洗滌）；對高抑制樣本使用含抑制物去除成分的提取試劑盒。4.簡述實驗人員脫卸個人防護裝備（PPE）的正確順序及注意事項。答案：順序：①外層手套→手消毒→脫防護服（從頸部、腰部向下卷脫，避免接觸外層）→手消毒→脫鞋套→手消毒→摘護目鏡（閉眼，從后向前摘）→手消毒→摘N95口罩（先摘下方系帶，再摘上方系帶，避免觸碰外表面）→最后手消毒。注意事項：脫卸過程中避免接觸PPE外表面；每一步脫卸后立即手消毒；脫卸區(qū)域需設置在緩沖間或清潔區(qū)，與穿戴區(qū)分開。五、案例分析題（每題10分，共2題，20分）案例1：某PCR實驗室在進行新冠檢測時，擴增區(qū)的熒光定量PCR儀顯示所有樣本的Ct值均大于38（陽性判斷值為≤35），且陰性對照無擴增，陽性對照Ct值為30。分析可能原因及處理措施。答案：可能原因：①樣本中病毒載量極低（如恢復期患者）；②核酸提取效率低（試劑失效、操作失誤）；③PCR反應體系配置錯誤（引物/探針濃度不足、Taq酶失活）；④擴增程序設置錯誤（退火溫度過高、延伸時間過短）。處理措施：①復檢原樣本，使用同一提取試劑重新提取；②檢查PCR反應體系配制記錄，確認各組分添加量；③驗證擴增程序（如通過陽性標準品測試）；④若復檢仍為Ct>38，結合臨床癥狀判斷為陰性或“未檢出”。案例2：實驗員在樣本處理區(qū)操作時，不慎將新冠病毒樣本管打翻，液體濺到生物安全柜內壁和實驗服上。請描述應急處理流程。答案：應急處理流程：①立即停止操作，關閉生物安全柜風機（避免氣溶膠擴散），標記污染區(qū)域；②