五年（2021-2025）高考真題分類匯編PAGEPAGE1專題09生物技術(shù)與工程考點(diǎn)五年考情（2021-2025）命題趨勢(shì)考點(diǎn)1發(fā)酵工程2021-2025從近五年重慶市高考試題來(lái)看，常出現(xiàn)的考點(diǎn)是發(fā)酵工程和細(xì)胞工程、基因工程，難度適中。三個(gè)考點(diǎn)均是高頻考點(diǎn)，每年選擇非選擇都有考察，發(fā)酵工程近三年都已選擇題形式出現(xiàn)，基因工程多以非選擇的形式結(jié)合其他考點(diǎn)考察。考點(diǎn)2細(xì)胞工程和胚胎工程2021-2025考點(diǎn)3基因工程2021-2025考點(diǎn)01發(fā)酵工程1．（2025·重慶·高考真題）豆瓣醬是我國(guó)地方特色調(diào)味品，生產(chǎn)豆瓣醬時(shí)要將蠶豆瓣制作成豆瓣曲，再添加調(diào)料進(jìn)一步發(fā)酵，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（

）A．沸水浸泡能殺死蠶豆細(xì)胞，減少有機(jī)物消耗B．面粉可為菌種的快速繁殖和生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)C．菌種中含有產(chǎn)蛋白酶和淀粉酶的微生物D．豆瓣醬的制備主要是利用厭氧微生物發(fā)酵【答案】D【詳析】A、沸水浸泡能使蠶豆細(xì)胞死亡，從而減少細(xì)胞呼吸等對(duì)有機(jī)物的消耗，A正確；B、面粉中含有淀粉等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，可為菌種的快速繁殖和生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)，B正確；C、在發(fā)酵過(guò)程中需要將蛋白質(zhì)和淀粉等分解，所以菌種中含有產(chǎn)蛋白酶和淀粉酶的微生物，C正確；D、從圖中可以看出，在制作豆瓣曲過(guò)程中有翻拌操作，且整個(gè)過(guò)程不是完全密封的，說(shuō)明主要利用的是好氧微生物發(fā)酵，而不是厭氧微生物發(fā)酵，D錯(cuò)誤。2．（2024·重慶·高考真題）養(yǎng)殖場(chǎng)糞便是農(nóng)家肥的重要來(lái)源，其中某些微生物可使氨氮化合物轉(zhuǎn)化為尿素進(jìn)而產(chǎn)生NH3，影響畜禽健康。為篩選糞便中能利用氨氮化合物且減少NH3產(chǎn)生的微生物。興趣小組按圖進(jìn)行實(shí)驗(yàn)獲得目的菌株，正確的是（

）A．①通常在等比稀釋后用平板劃線法獲取單個(gè)菌落B．②挑取在2種培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)的用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)C．③可通過(guò)添加脲酶并檢測(cè)活性，篩選得到甲、乙D．糞便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的減少【答案】C〖祥解〗由圖可知，所篩選出的菌株之所以不能利用尿素，可能是由于不產(chǎn)生脲酶或分泌脲酶抑制劑。圖中②篩選的是不能在尿素唯一氮源培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，而能在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌株用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)?！驹斘觥緼、平板劃線法無(wú)需稀釋，A錯(cuò)誤；B、由圖可知，②篩選不能在尿素唯一氮源培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，而能在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌株用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)，B錯(cuò)誤；C、所篩選出的菌株之所以不能利用尿素，可能是由于不產(chǎn)生脲酶或分泌脲酶抑制劑，所以③可通過(guò)添加脲酶并檢測(cè)活性，篩選得到甲、乙，C正確；D、由圖可知，甲不產(chǎn)生脲酶而乙可以產(chǎn)生脲酶，且乙同時(shí)分泌脲酶抑制劑，糞便中可能還含有其他能產(chǎn)生脲酶的菌株使甲能夠產(chǎn)生NH3，所以糞便中添加菌株乙比甲更有利于NH3的減少，D錯(cuò)誤。3．（2023·重慶·高考真題）垃圾分類有利于變廢為寶，減少環(huán)境污染。如圖為分類后餐廚垃圾資源化處理的流程設(shè)計(jì)。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．壓榨出的油水混合物可再加工，生產(chǎn)出多種產(chǎn)品B．添加的木屑有利于堆肥體通氣，還可作為某些微生物的碳源C．X中需要添加合適的菌種，才能產(chǎn)生沼氣D．為保證堆肥體中微生物的活性，不宜對(duì)堆肥體進(jìn)行翻動(dòng)【答案】D〖祥解〗生態(tài)系統(tǒng)的功能包括能量流動(dòng)、物質(zhì)循環(huán)和信息傳遞，三者缺一不可；物質(zhì)循環(huán)是生態(tài)系統(tǒng)的基礎(chǔ)，能量流動(dòng)是生態(tài)系統(tǒng)的動(dòng)力，信息傳遞則決定著能量流動(dòng)和物質(zhì)循環(huán)的方向和狀態(tài)；信息傳遞是雙向的，能量流動(dòng)是單向的，物質(zhì)循環(huán)具有全球性?！驹斘觥緼、壓榨出的油水混合物可再加工，生產(chǎn)出多種產(chǎn)品，有利于實(shí)現(xiàn)物質(zhì)的循環(huán)再生和能量的多級(jí)利用，A正確；B、添加的木屑有利于堆肥體通氣，木屑也可作為某些微生物的碳源，B正確；C、X中需要添加合適的菌種，通過(guò)分解有機(jī)物才能產(chǎn)生沼氣，C正確；D、為保證堆肥體中微生物的活性，可以對(duì)堆肥體進(jìn)行翻動(dòng)，D錯(cuò)誤。4．（2022·重慶·高考真題）研究發(fā)現(xiàn)柑橘精油可抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)。某興趣小組采用水蒸氣蒸餾法和壓榨法提取了某種橘皮的精油（分別簡(jiǎn)稱為HDO和CPO），并研究其抑菌效果的差異。(1)為便于精油的提取，壓榨前需用浸泡橘皮一段時(shí)間。在兩種方法收集的油水混合物中均加入NaCl，其作用是；為除去油層中的水分，需加入。(2)無(wú)菌條件下，該小組制備了兩個(gè)大腸桿菌平板，用兩片大小相同的無(wú)菌濾紙分別蘸取HDO和CPO貼于含菌平板上，37℃培養(yǎng)24h，抑菌效果見如圖。有同學(xué)提出該實(shí)驗(yàn)存在明顯不足：①未設(shè)置對(duì)照，設(shè)置本實(shí)驗(yàn)對(duì)照的做法是，其作用是；②不足之處還有（答兩點(diǎn)）。(3)若HDO的抑菌效果低于CPO，從提取方法的角度分析，主要原因是。【答案】(1)石灰水增加鹽的濃度，利于水油分層無(wú)水硫酸鈉(2)用一片大小相同的無(wú)菌濾紙蘸取等量的蒸餾水貼于含菌平板上排除無(wú)關(guān)變量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度違背平行重復(fù)原則，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組中的樣本太少；實(shí)驗(yàn)組精油的含量沒有遵循等量原則(3)橘皮精油的有效成分在用水蒸氣蒸餾時(shí)會(huì)發(fā)生部分水解〖祥解〗1、玫瑰精油的提?。核魵庹麴s→油水混合物→（加入NaCl）分離油層→（加入無(wú)水Na2SO4）除水→（過(guò)濾）得到植物精油。2、提取橘皮精油：石灰水浸泡→漂洗→壓榨→過(guò)濾→靜置→再次過(guò)濾→橘皮油?！驹斘觥浚?）新鮮柑橘皮中含有大量的果蠟、果膠和水分，如果直接壓榨，出油率較低，為了提高出油率，需要將柑橘皮干燥去水，并用石灰水浸泡。為了將水油分層，只需加入氯化鈉，增加鹽濃度，就會(huì)出現(xiàn)明顯的分層，再用分液漏斗將這兩層分開。分離的油層還會(huì)含有一定的水分，一般可以加入一些無(wú)水硫酸鈉吸水。（2）本實(shí)驗(yàn)缺乏對(duì)照組，無(wú)法排除其他無(wú)關(guān)變量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，可用一片大小相同的無(wú)菌濾紙蘸取等量的蒸餾水貼于含菌平板上作為對(duì)照組。另外，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組中只利用了一張無(wú)菌濾紙，樣本太少，容易出現(xiàn)偶然性誤差；而且兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組蘸取的精油沒有遵循等量原則。（3）橘皮精油的有效成分在用水蒸氣蒸餾時(shí)會(huì)發(fā)生部分水解，所以HDO的抑菌效果低于CPO。5．（2021·重慶·高考真題）人類很早就能制作果酒，并用果酒進(jìn)一步發(fā)酵生產(chǎn)果醋。(1)人們利用水果及附著在果皮上的菌，在18～25℃、無(wú)氧條件下釀造果酒；在利用醋酸菌在條件下，將酒精轉(zhuǎn)化成醋酸釀得果醋。釀造果醋時(shí)，得到了醋酸產(chǎn)率較高的醋酸菌群，為進(jìn)一步純化獲得優(yōu)良醋酸菌菌種，采用的接種方法是。(2)先釀制果酒再生產(chǎn)果醋的優(yōu)勢(shì)有（填編號(hào)）。①先釀制果酒，發(fā)酵液能抑制雜菌的生長(zhǎng)，有利于提高果醋的產(chǎn)率②釀制果酒時(shí)形成的醋酸菌膜，有利于提高果醋的產(chǎn)率③果酒有利于溶出水果中的風(fēng)味物質(zhì)并保留在果醋中(3)果酒中的酒精含量對(duì)果醋的醋酸產(chǎn)率會(huì)產(chǎn)生一定的影響。某技術(shù)組配制發(fā)酵液研究了初始酒精濃度對(duì)醋酸含量的影響，結(jié)果見圖。該技術(shù)組使用的發(fā)酵液中，除酒精外還包括的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有（填寫兩種）。據(jù)圖可知，醋酸發(fā)酵的最適初始酒精濃度是；酒精濃度為10%時(shí)醋酸含量最低，此時(shí)，若要盡快提高醋酸含量，可采取的措施有（填寫兩個(gè)方面）。【答案】(1)酵母菌30～35℃，有氧#稀釋涂布平板法/平板劃線法#(2)①③(3)氮源、無(wú)機(jī)鹽、水6%適當(dāng)降低初始酒精濃度，增加氧氣供應(yīng)，適當(dāng)提高溫度等〖祥解〗1、在葡萄酒的自然發(fā)酵過(guò)程中，起主要作用的是附著在葡萄皮上的野生型酵母菌。醋酸菌是好氧菌，最是生長(zhǎng)溫度為30～35℃。微生物最常用的接種方法是稀釋涂布平板法和平板劃線法。2、釀制果酒，發(fā)酵液中產(chǎn)生的酒精能抑制雜菌的生長(zhǎng)。3、培養(yǎng)基的成分，四大基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)分別是碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽。【詳析】（1）在葡萄酒的自然發(fā)酵過(guò)程中，起主要作用的是附著在葡萄皮上的野生型酵母菌。醋酸菌是好氧菌，最適生長(zhǎng)溫度為30～35℃。微生物最常用的接種方法是稀釋涂布平板法和平板劃線法。（2）①先釀制果酒，發(fā)酵液能抑制雜菌的生長(zhǎng)，有利于提高果醋的產(chǎn)率，①正確；②釀制果酒時(shí)形成的醋酸菌膜會(huì)造成局部缺氧，導(dǎo)致果醋產(chǎn)率不高，②錯(cuò)誤；③果酒有利于溶出水果中的風(fēng)味物質(zhì)并保留在果醋中，增加果醋風(fēng)味，③正確。故選①③。（3）微生物生長(zhǎng)基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：氮源，碳源，水，無(wú)機(jī)鹽等，題中酒精作為碳源。酒精濃度為6%時(shí)，醋酸含量最高，是發(fā)酵的最適濃度。提高醋酸含量，可采取的措施有適當(dāng)降低初始酒精濃度，增加氧氣供應(yīng)，適當(dāng)提高溫度等。考點(diǎn)02細(xì)胞工程和胚胎工程1．（2025·重慶·高考真題）為保護(hù)瀕危哺乳動(dòng)物甲，科研工作者將甲的近親物種乙（種群數(shù)量多）進(jìn)行了如圖所示的研究，下列敘述正確的是（

）A．克隆動(dòng)物的核基因組來(lái)源于甲、乙B．體外受精需用獲能的精子與MI期的卵母細(xì)胞受精C．囊胚①的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)可發(fā)育為胎盤、個(gè)體D．滋養(yǎng)層可影響內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的發(fā)育【答案】D【詳析】A、克隆動(dòng)物的核基因組來(lái)源于甲，細(xì)胞質(zhì)中的基因來(lái)源于乙，A錯(cuò)誤；B、體外受精需用獲能的精子與MⅡ期的卵母細(xì)胞受精，而不是MI期，B錯(cuò)誤；C、囊胚①的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)可發(fā)育為個(gè)體，滋養(yǎng)層細(xì)胞發(fā)育為胎膜和胎盤，C錯(cuò)誤；D、滋養(yǎng)層可影響內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的發(fā)育，如滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的某些物質(zhì)可能會(huì)影響內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞的分化等，D正確。2．（2024·重慶·高考真題）自然條件下，甲、乙兩種魚均通過(guò)體外受精繁殖后代，甲屬于國(guó)家保護(hù)的稀有物種，乙的種群數(shù)量多且繁殖速度較甲快。我國(guó)科學(xué)家通過(guò)下圖所示流程進(jìn)行相關(guān)研究，以期用于瀕危魚類的保護(hù)。下列敘述正確的是（

）A．誘導(dǎo)后的iPGCs具有胚胎干細(xì)胞的特性B．移植的iPGCs最終產(chǎn)生的配子具有相同的遺傳信息C．該實(shí)驗(yàn)中，子一代的遺傳物質(zhì)來(lái)源于物種甲D．通過(guò)該實(shí)驗(yàn)可以獲得甲的克隆【答案】C〖祥解〗胚胎移植的基本程序主要包括：①對(duì)供、受體的選擇和處理。②配種或人工授精。③對(duì)胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存。④對(duì)胚胎進(jìn)行移植。⑤移植后的檢查。體外受精主要包括：卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng)、精子的采集和獲能、受精。【詳析】A、胚胎干細(xì)胞具有發(fā)育的全能性，iPGCs是誘導(dǎo)型原始生殖細(xì)胞，具有成為卵原細(xì)胞或精原細(xì)胞的潛能，誘導(dǎo)后的iPGCs不具有胚胎干細(xì)胞的特性，A錯(cuò)誤；B、移植的iPGCs分化形成卵原細(xì)胞或精原細(xì)胞后，通過(guò)減數(shù)分裂形成配子，在減數(shù)分裂過(guò)程中基因會(huì)發(fā)生重組，最終產(chǎn)生的配子的遺傳信息不一定相同，B錯(cuò)誤；C、由圖可知，將物種甲的囊胚期的iPGCs移植到阻止PGCs形成的乙魚的胚胎中，培育出的乙魚的生殖腺中的細(xì)胞由甲魚的iPGCs增值分化而來(lái)，該乙魚再與物種甲雜交，配子均是由物種甲的生殖腺細(xì)胞產(chǎn)生，故子一代的遺傳物質(zhì)來(lái)源于物種甲，C正確；D、克隆屬于無(wú)性繁殖，該實(shí)驗(yàn)過(guò)程中涉及到有性生殖，D錯(cuò)誤。3．（2023·重慶·高考真題）妊娠與子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的功能密切相關(guān)。某研究小組通過(guò)如圖所示的實(shí)驗(yàn)流程獲得了子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞，以期用于妊娠相關(guān)疾病的研究。(1)手術(shù)獲得的皮膚組織需在低溫下運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室，低溫對(duì)細(xì)胞中各種蛋白質(zhì)的作用為。(2)過(guò)程①中，誘導(dǎo)形成PS細(xì)胞時(shí)，需提高成纖維細(xì)胞中4個(gè)基因的表達(dá)量，可采用技術(shù)將這些基因?qū)朐摷?xì)胞。這4個(gè)基因的主要作用為：M基因促進(jìn)增殖，S基因和C基因控制干細(xì)胞特性，K基因抑制凋亡和衰老。若成纖維細(xì)胞形成腫瘤細(xì)胞，最有可能的原因是基因過(guò)量表達(dá)。(3)培養(yǎng)iPS細(xì)胞時(shí)，應(yīng)對(duì)所處環(huán)境定期消毒以降低細(xì)胞被污染風(fēng)險(xiǎn)。可用紫外線進(jìn)行消毒的是_____（多選）。A．培養(yǎng)基 B．培養(yǎng)瓶 C．細(xì)胞培養(yǎng)室 D．CO2培養(yǎng)箱(4)過(guò)程②中，iPS細(xì)胞經(jīng)歷的生命歷程為。PCR技術(shù)可用于檢測(cè)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞關(guān)鍵基因的mRNA水平，mRNA需經(jīng)過(guò)才能作為PCR擴(kuò)增的模板?！敬鸢浮?1)抑制酶的活性（降低蛋白質(zhì)或酶的活性），防止蛋白質(zhì)變性(2)轉(zhuǎn)基因M(3)CD(4)增殖分化逆轉(zhuǎn)錄/反轉(zhuǎn)錄〖祥解〗1、構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并且可以遺傳給下一代并表達(dá)和發(fā)揮作用。基因表達(dá)載體的組成：復(fù)制原點(diǎn)+目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因。2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：（1）無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物。（2）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)。（3）溫度和pH：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4。（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO2（維持培養(yǎng)液的pH）?！驹斘觥浚?）低溫可以抑制酶的活性，防止蛋白質(zhì)變性，使細(xì)胞中的蛋白質(zhì)維持正常的生理功能。（2）將外源基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)，通常需要轉(zhuǎn)基因技術(shù)。即過(guò)程①中，誘導(dǎo)形成PS細(xì)胞時(shí)，需提高成纖維細(xì)胞中4個(gè)基因的表達(dá)量，可采用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將這些基因?qū)朐摷?xì)胞。M基因促進(jìn)增殖，S基因和C基因控制干細(xì)胞特性，K基因抑制凋亡和衰老。腫瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）具有無(wú)限增殖的能力，因此若成纖維細(xì)胞形成腫瘤細(xì)胞，最有可能的原因是M基因過(guò)量表達(dá)造成的。（3）培養(yǎng)iPS細(xì)胞時(shí)，應(yīng)對(duì)所處環(huán)境定期消毒以降低細(xì)胞被污染風(fēng)險(xiǎn)?？捎米贤饩€對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)室和CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消毒處理，而對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)瓶需要進(jìn)行滅菌處理，因此AB錯(cuò)誤，CD正確。故選CD。（4）由圖可知，過(guò)程②中，iPS細(xì)胞經(jīng)過(guò)細(xì)胞的分裂分化，即增殖分化，形成了體腔上皮。PCR擴(kuò)增的模板為DNA，因此若想利用PCR技術(shù)檢測(cè)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞關(guān)鍵基因的mRNA水平，mRNA需經(jīng)過(guò)逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程形成DNA，才可作為PCR的模板。4．（2022·重慶·高考真題）植物體細(xì)胞通常被誘導(dǎo)為愈傷組織后才能表現(xiàn)全能性。研究發(fā)現(xiàn)，愈傷組織的中層細(xì)胞是根或芽再生的源頭干細(xì)胞，其在不同條件下，通過(guò)基因的特異性表達(dá)調(diào)控生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素的作用，表現(xiàn)出不同的效應(yīng)（見如表）。已知生長(zhǎng)素的生理作用大于細(xì)胞分裂素時(shí)有利于根的再生；反之，有利于芽的再生。下列推論不合理的是（

）條件基因表達(dá)產(chǎn)物和相互作用效應(yīng)①WOX5維持未分化狀態(tài)②WOX5+PLT誘導(dǎo)出根③WOX5+ARR2，抑制ARR5誘導(dǎo)出芽A．WOX5失活后，中層細(xì)胞會(huì)喪失干細(xì)胞特性B．WOX5+PLT可能有利于愈傷組織中生長(zhǎng)素的積累C．ARR5促進(jìn)細(xì)胞分裂素積累或提高細(xì)胞對(duì)細(xì)胞分裂素的敏感性D．體細(xì)胞中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的作用可能相互抑制【答案】C〖祥解〗植物細(xì)胞一般具有全能性。在一定的激素和營(yíng)養(yǎng)等條件的誘導(dǎo)下，已經(jīng)分化的細(xì)胞可以經(jīng)過(guò)脫分化，即失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能，轉(zhuǎn)變成未分化的細(xì)胞，進(jìn)而形成不定形的薄壁組織團(tuán)塊，這稱為愈傷組織。愈傷組織能重新分化成芽、根等器官，該過(guò)程稱為再分化。植物激素中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵激素。生長(zhǎng)素的用量比細(xì)胞分裂素用量，比值高時(shí)，有利于根的分化、抑制芽的形成；比值低時(shí)，有利于芽的分化、抑制根的形成。比值適中時(shí)，促進(jìn)愈傷組織的形成。【詳析】A、根據(jù)表格信息可知，WOX5能維持未分化狀態(tài)，使植物細(xì)胞保持分裂能力強(qiáng)、較大的全能性，若WOX5失活后，中層細(xì)胞會(huì)喪失干細(xì)胞分裂能力強(qiáng)、分化程度低的特性，A正確；B、由題干信息“生長(zhǎng)素的生理作用大于細(xì)胞分裂素時(shí)有利于根的再生”，再結(jié)合表格信息，WOX5+PLT可能誘導(dǎo)出根，可推測(cè)WOX5+PLT可能有利于愈傷組織中生長(zhǎng)素的積累，B正確；C、由題意可知，生長(zhǎng)素的生理作用小于細(xì)胞分裂素時(shí)有利于芽的再生，而抑制ARR5能誘導(dǎo)出芽，可知ARR5被抑制時(shí)細(xì)胞分裂素較多，故可推測(cè)ARR5抑制細(xì)胞分裂素積累或降低細(xì)胞對(duì)細(xì)胞分裂素的敏感性，C錯(cuò)誤；D、由題干信息可知，出芽或出根都是生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素含量不均衡時(shí)才會(huì)發(fā)生，故可推測(cè)體細(xì)胞中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的作用可能相互抑制，D正確。5．（2021·重慶·高考真題）為了研究PDCD4基因?qū)π∈笞訉m內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞凋亡的影響，進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。(1)取小鼠子宮時(shí)，為避免細(xì)菌污染，手術(shù)器具應(yīng)進(jìn)行處理；子宮取出剪碎后，用處理一定時(shí)間，可獲得分散的子宮內(nèi)膜組織細(xì)胞，再分離獲得基質(zhì)細(xì)胞用于培養(yǎng)。(2)培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)應(yīng)有（填寫兩種）；培養(yǎng)箱中CO2濃度為5%，其主要作用是。(3)在含PDCD4基因的表達(dá)載體中，啟動(dòng)子的作用是。為了證明PDCD4基因?qū)|(zhì)細(xì)胞凋亡的作用，以含PDCD4基因的表達(dá)載體和基質(zhì)細(xì)胞的混合培養(yǎng)為實(shí)驗(yàn)組，還應(yīng)設(shè)立兩個(gè)對(duì)照組，分別為。經(jīng)檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)組中PDCD4表達(dá)水平和細(xì)胞凋亡率顯著高于對(duì)照組，說(shuō)明該基因?qū)|(zhì)細(xì)胞凋亡具有（填“抑制”或“促進(jìn)”）作用?！敬鸢浮?1)滅菌胰蛋白酶或膠原蛋白酶(2)無(wú)機(jī)鹽、葡萄糖、氨基酸、微量元素、促生長(zhǎng)因子、血清或血漿（填寫兩種即可）維持培養(yǎng)液的pH值(3)RNA聚合酶的識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄出相應(yīng)的mRNA基質(zhì)細(xì)胞懸浮液、空載體和基質(zhì)細(xì)胞的混合培養(yǎng)液促進(jìn)〖祥解〗1、構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并且可以遺傳給下一代并表達(dá)和發(fā)揮作用。基因表達(dá)載體的組成：復(fù)制原點(diǎn)+目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因。2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：（1）無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物。（2）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)。（3）溫度和pH：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4。（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO2（維持培養(yǎng)液的pH）。【詳析】（1）為避免細(xì)菌污染，手術(shù)器具應(yīng)進(jìn)行滅菌處理；動(dòng)物組織取出剪碎后，用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理一定時(shí)間，可獲得分散的動(dòng)物組織細(xì)胞。（2）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)應(yīng)有無(wú)機(jī)鹽、葡萄糖、氨基酸、微量元素、促生長(zhǎng)因子、血清或血漿等；培養(yǎng)箱中為95%的空氣和5%的CO2，其中5%的CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH值。（3）啟動(dòng)子是RNA聚合酶的識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄出相應(yīng)的mRNA。為了證明PDCD4基因?qū)|(zhì)細(xì)胞凋亡的作用，以含PDCD4基因的表達(dá)載體和基質(zhì)細(xì)胞的混合培養(yǎng)為實(shí)驗(yàn)組，還應(yīng)設(shè)立兩個(gè)對(duì)照組，分別為基質(zhì)細(xì)胞懸浮液（空白對(duì)照）、空載體和基質(zhì)細(xì)胞的混合培養(yǎng)液（排除空載體的作用）。經(jīng)檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)組中PDCD4表達(dá)水平和細(xì)胞凋亡率顯著高于對(duì)照組，說(shuō)明該基因?qū)|(zhì)細(xì)胞凋亡具有促進(jìn)作用?？键c(diǎn)03基因工程1．（2025·重慶·高考真題）絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物生來(lái)怕辣，而小型哺乳動(dòng)物樹鼩先天不怕辣，喜食含辣椒素類物質(zhì)的植物。為探究其原因，我國(guó)研究人員進(jìn)行了系列研究。(1)研究發(fā)現(xiàn)，樹鼩的受體蛋白TR1對(duì)辣椒素的敏感性低于其他哺乳動(dòng)物。為研究樹鼩和其他哺乳動(dòng)物TR1蛋白的差異，可設(shè)計(jì)開展如下實(shí)驗(yàn)：①；②將分別進(jìn)行酶切并連接；③將重組DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌；④分離表達(dá)的TR1蛋白質(zhì)測(cè)定，明確蛋白之間的差異。(2)樹鼩及一些哺乳動(dòng)物的TR1蛋白存在差異，如圖所示。據(jù)分析，樹鼩對(duì)辣椒素的敏感性降低，很可能是由于TR1第579位氨基酸差異造成的，可證實(shí)該推測(cè)的實(shí)驗(yàn)思路是。(3)樹鼩與其喜食植物的地理分布基本一致，據(jù)此可推測(cè)樹鼩對(duì)含辣椒素類物質(zhì)植物的適應(yīng)形成的必要條件是?！敬鸢浮?1)克隆樹鼩和其他哺乳動(dòng)物的TR1基因目的基因與載體氨基酸序列(2)利用基因編輯技術(shù)改變樹鼩的TR1基因，使編碼的TR1蛋白的第579位氨基酸由M變?yōu)門，檢測(cè)樹鼩對(duì)辣椒素的敏感性是否提高。(3)樹鼩群體出現(xiàn)可遺傳的變異和含辣椒素類植物對(duì)樹鼩的定向選擇〖祥解〗基因工程的基本操作程序是目的基因的篩選與獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定。【詳析】（1）基因工程的基本操作程序是目的基因的篩選與獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定。據(jù)此分析①為克隆樹鼩和其他哺乳動(dòng)物TR1蛋白基因。②為將樹鼩、其他哺乳動(dòng)物TR1蛋白基因和載體分別進(jìn)行酶切并連接構(gòu)建基因表達(dá)載體。由(2)中展示的蛋白質(zhì)之間的差異推測(cè)④為檢測(cè)樹鼩和其他哺乳動(dòng)物TRI蛋白質(zhì)的氨基酸序列。（2）樹鼩TRI蛋白第579位氨基酸為M，人和小鼠TR1蛋白第579位氨基酸為T，利用基因編輯技術(shù)改變樹鼩的TR1基因，使編碼的TR1蛋白的第579位氨基酸由M變?yōu)門，若替換后樹鼩對(duì)辣椒素的敏感性升高，則可以證實(shí)樹鼩對(duì)辣椒素的敏感性降低是由TRI蛋白第579位氨基酸序列差異造成的。（3）適應(yīng)形成的必要條件是樹鼩群體出現(xiàn)可遺傳的變異，含辣椒素類物質(zhì)的植物可以拓寬樹嗣的食物來(lái)源，環(huán)境對(duì)樹鼩進(jìn)行定向選擇，使得樹鼩種群中對(duì)辣椒素敏感度低的基因頻率升高，讓樹鼩適應(yīng)含辣椒素類物質(zhì)的植物。2．（2024·重慶·高考真題）大豆是重要的糧油作物，提高大豆產(chǎn)量是我國(guó)農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的重要任務(wù)。我國(guó)研究人員發(fā)現(xiàn)，基因S在大豆品種DN（種子較大）中的表達(dá)量高于品種TL（種子較小），然后克隆了該基因（兩品種中基因S序列無(wú)差異）及其上游的啟動(dòng)子序列，并開展相關(guān)研究。(1)基因S啟動(dòng)子的基本組成單位是。(2)通過(guò)基因工程方法,將DN克隆的“啟動(dòng)子D+基因S”序列導(dǎo)入無(wú)基因S的優(yōu)質(zhì)大豆品種YZ。根據(jù)題19圖所示信息（不考慮未標(biāo)明序列）判斷構(gòu)建重組表達(dá)載體時(shí)，為保證目標(biāo)序列的完整性，不宜使用的限制酶是；此外，不宜同時(shí)選用酶SpeⅠ和XbaⅠ。原因是。(3)為驗(yàn)證“啟動(dòng)子D+基因S”是否連接在表達(dá)載體上，可用限制酶對(duì)重組表達(dá)載體酶切后進(jìn)行電泳。電泳時(shí)，對(duì)照樣品除指示分子大小的標(biāo)準(zhǔn)參照物外，還應(yīng)有。經(jīng)驗(yàn)證的重組表達(dá)載體需轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌，檢測(cè)轉(zhuǎn)入是否成功的技術(shù)是。(4)用檢測(cè)后的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化品種YZ所得再生植株YZ-1的種子變大。同時(shí)將從TL克隆的“啟動(dòng)子T+基因S”序列成功導(dǎo)入YZ，所得再生植株YZ-2的種子也變大，但小于YZ-1。綜合分析，大豆品種DN較TL種子大的原因是?！敬鸢浮?1)脫氧核糖核苷酸（脫氧核苷酸）(2)EcoRⅠ酶切后形成的片段黏性末端相同，易自我環(huán)化；不能保證目標(biāo)片段與載體定向鏈接（反向鏈接）(3)酶切后的空載體片段，啟動(dòng)子D+基因S片段

PCR(4)品種DN的基因S上游啟動(dòng)子效應(yīng)比TL強(qiáng)，使得基因S表達(dá)量更高，種子更大〖祥解〗【關(guān)鍵能力】（1）信息獲取與加工題干關(guān)鍵信息所學(xué)知識(shí)信息加工啟動(dòng)子的基本組成單位基因的結(jié)構(gòu)啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，用于啟動(dòng)DNA的轉(zhuǎn)錄，是一段DNA片段，其基本組成單位是四種脫氧核糖核苷酸電泳時(shí)，對(duì)照樣品除指示分子大小的標(biāo)準(zhǔn)參照物外，還應(yīng)有哪些成分PCR及瓊脂糖凝膠電泳電泳可以分離不同大小的DNA片段，用限制酶對(duì)重組表達(dá)載體酶切后的產(chǎn)物不僅有“啟動(dòng)子D+基因S”片段，還有酶切后的空載體片段，因此電泳時(shí)，對(duì)照樣品除指示分子大小的標(biāo)準(zhǔn)參照物外，還應(yīng)有酶切后的空載體片段和“啟動(dòng)子D+基因S”片段檢測(cè)轉(zhuǎn)入是否成功的技術(shù)檢測(cè)目的基因是都導(dǎo)入受體細(xì)胞的方法在分子水平上檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)入成功可通過(guò)PCR等技術(shù)檢測(cè)受體細(xì)胞的DNA上是否插入目的基因或目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA（2）邏輯推理與論證【詳析】（1）啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，用于啟動(dòng)DNA的轉(zhuǎn)錄，是一段DNA片段，其基本組成單位是四種脫氧核糖核苷酸。（2）①根據(jù)圖示信息可知，“啟動(dòng)子D＋基因S”的DNA序列上存在EcoRⅠ的識(shí)別序列，若使用限制酶EcoRⅠ，會(huì)使目的基因序列被破壞；②根據(jù)圖中限制酶的識(shí)別序列可知，酶SpeⅠ和XbaⅠ切割產(chǎn)生的黏性末端相同，若用這兩種限制酶切割，形成的DNA片段在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，容易出現(xiàn)自我環(huán)化，以及無(wú)法保證目的基因片段與載體片段單向連接，影響目的基因在受體細(xì)胞中的表達(dá)。（3）①DNA電泳可以分離不同大小的DNA片段，用限制酶對(duì)重組表達(dá)載體酶切后的產(chǎn)物不僅有“啟動(dòng)子D+基因S”片段，還有酶切后的空載體片段，因此電泳時(shí)，對(duì)照樣品除指示分子大小的標(biāo)準(zhǔn)參照物外，還應(yīng)有酶切后的空載體片段和“啟動(dòng)子D+基因S”片段；②在分子水平上檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)入成過(guò)可通過(guò)PCR等技術(shù)檢測(cè)受體細(xì)胞的DNA上是否插入目的基因或目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA。（4）根據(jù)（4）題目信息可知，再生植株YZ-1導(dǎo)入的目的基因?yàn)槿∽云贩NDN的“啟動(dòng)子D＋基因S”序列，再生植株YZ-2導(dǎo)入的目的基因?yàn)槿∽云贩NTL的“啟動(dòng)子T＋基因S”序列，結(jié)合題干信息“兩品種中基因S序列無(wú)差異”可推測(cè)：品種DN的基因S上游的啟動(dòng)子D的效應(yīng)強(qiáng)于品種TL的啟動(dòng)子T，啟動(dòng)子D使基因S表達(dá)量更高，因而種子更大。3．（2023·重慶·高考真題）某小組通過(guò)PCR（假設(shè)引物長(zhǎng)度為8個(gè)堿基短于實(shí)際長(zhǎng)度）獲得了含有目的基因的DNA片段，并用限制酶進(jìn)行酶切（下圖），再用所得片段成功構(gòu)建了基因表達(dá)載體。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．其中一個(gè)引物序列為5＇TGCGCAGT-3＇B．步驟①所用的酶是SpeI和CfoIC．用步驟①的酶對(duì)載體進(jìn)行酶切，至少獲得了2個(gè)片段D．酶切片段和載體連接時(shí)，可使用E．coli連接酶或T4連接酶【答案】B〖祥解〗E.coliDNA連接酶只能連接黏性末端；T4DNA連接酶既可連接平末端，又可連接黏性末端?！驹斘觥緼、由于引物只能引導(dǎo)子鏈從5＇到3＇，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，其中一個(gè)引物序列為5＇TGCGCAGT-3＇，A正確；B、根據(jù)三種酶的酶切位點(diǎn)，左側(cè)的黏性末端是使用NheI切割形成的，右邊的黏性末端是用CfoI切割形成的，B錯(cuò)誤；C、用步驟①的酶對(duì)載體進(jìn)行酶切，使用了NheI和CfoI進(jìn)行切割，根據(jù)他們的識(shí)別位點(diǎn)以及原本DNA的序列，切割之后至少獲得了2個(gè)片段，C正確；D、圖中形成的是黏性末端，而E.coliDNA連接酶能連接黏性末端；T4DNA連接酶既可連接平末端，又可連接黏性末端，D正確。4．（2022·重慶·高考真題）改良水稻的株高和產(chǎn)量性狀是實(shí)現(xiàn)袁隆平先生“禾下乘涼夢(mèng)”的一種可能途徑。研究人員克隆了可顯著增高和增產(chǎn)的eui基因，并開展了相關(guān)探索。步驟I：步驟II：(1)花藥培養(yǎng)能縮短育種年限，原因是。在步驟I的花藥培養(yǎng)過(guò)程中，可產(chǎn)生單倍體愈傷組織，將其培養(yǎng)于含的培養(yǎng)基上，可促進(jìn)產(chǎn)生二倍體愈傷組織。I中能用于制造人工種子的材料是。(2)步驟II中，eui基因克隆于cDNA文庫(kù)而不是基因組文庫(kù)，原因是；在構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒時(shí)使用的工具酶有。為篩選含重組Ti質(zhì)粒的菌株，需在培養(yǎng)基中添加。獲得的農(nóng)桿菌菌株經(jīng)鑒定后，應(yīng)侵染I中的，以獲得轉(zhuǎn)基因再生植株。再生植株是否含有eui基因的鑒定方法是，移栽后若發(fā)育為更高且豐產(chǎn)的稻株，則可望“禾下乘涼”。【答案】(1)單倍體經(jīng)秋水仙素處理后所得植株為純合子，后代不會(huì)發(fā)生性狀分離秋水仙素胚狀體(2)cDNA文庫(kù)是由編碼蛋白質(zhì)的mRNA逆轉(zhuǎn)錄來(lái)的基因?qū)胧荏w菌而形成的，基因工程中只需要轉(zhuǎn)錄出編碼蛋白質(zhì)的部分就可以，篩選比較簡(jiǎn)單易行限制酶和DNA連接酶抗生素愈傷組織DNA分子雜交技術(shù)〖祥解〗1、單倍體育種的原理是染色體變異，方法是用花藥離體培養(yǎng)獲得單倍體植株，再人工誘導(dǎo)染色體數(shù)目加倍；優(yōu)點(diǎn)是純合體自交后代不發(fā)生性狀分離，因而能明顯縮短育種年限。2、cDNA是指以mRNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下形成的互補(bǔ)DNA。以細(xì)胞的全部mRNA逆轉(zhuǎn)錄合成的cDNA組成的重組克隆群體稱為cDNA文庫(kù)，基因組文庫(kù)指的是將某種生物的基因組DNA切割成一定大小的片段，并與合適的載體重組后導(dǎo)入宿主細(xì)胞，進(jìn)行克隆得到的所有重組體內(nèi)的基因組DNA片段的集合，它包含了該生物的所有基因?！驹斘觥浚?）單倍體育種過(guò)程中，單倍體經(jīng)秋水仙素處理后所得植株為純合子，后代不會(huì)發(fā)生性狀分離，所以可以明顯縮短育種年限。將水稻花粉進(jìn)行脫分化處理，可產(chǎn)生單倍體的愈傷組織，秋水仙素能抑制紡錘體的形成，導(dǎo)致染色體不能移向細(xì)胞兩極，從而引起細(xì)胞內(nèi)染色體數(shù)目加倍，故將其培養(yǎng)于含秋水仙素的培養(yǎng)基上，可促進(jìn)產(chǎn)生二倍體愈傷組織。胚狀體可用于制造人工種子。（2）cDNA文庫(kù)又叫部分基因文庫(kù)，是由編碼蛋白質(zhì)的mRNA逆轉(zhuǎn)錄來(lái)的基因?qū)胧荏w菌而形成的，而基因組文庫(kù)包含了本物種全部基因，基因工程中只需轉(zhuǎn)錄出編碼蛋白質(zhì)的基因部分就即可，故選cDNA文庫(kù)。在構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒時(shí)，必須使用限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)切割質(zhì)粒使其具有與目的基因相同的黏性末端，之后再用DNA連接酶將目的基因和質(zhì)粒連接成重組質(zhì)粒。該重組的Ti質(zhì)粒中含有抗生素抗性基因，故應(yīng)在培養(yǎng)基中添加抗生素，以便對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行篩選和鑒定。將目的基因?qū)氲街参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，即用含eu基因的農(nóng)桿菌侵染愈傷組織，以便將eui基因?qū)胗鷤M織，獲得轉(zhuǎn)基因再生植株。檢測(cè)植株是否含有eui基因，可采取DNA分子雜交技術(shù)的方法。一、單選題1．（2025·重慶·模擬預(yù)測(cè)）物質(zhì)X是一種有害的難以降解的有機(jī)化合物。研究人員用含物質(zhì)X、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素溶液按照一定比例配制成培養(yǎng)基M,經(jīng)過(guò)一系列培養(yǎng)、篩選，成功得到能高效降解物質(zhì)X的目的菌株，主要步驟如圖所示。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）A．培養(yǎng)基M是選擇培養(yǎng)基，物質(zhì)X為目的菌株提供生長(zhǎng)所需的氮源和碳源B．振蕩培養(yǎng)有利于目的菌株充分利用培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)C．在④接種時(shí)，用平板劃線法純化目的菌株的效果比稀釋涂布平板法差D．在②接種培養(yǎng)后，用瓶中物質(zhì)X含量最低的候選菌作為③選擇接種對(duì)象【答案】C〖祥解〗接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。接種的目的是使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞并在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)細(xì)菌繁殖而成的子細(xì)胞群體--菌落?！驹斘觥緼、研究人員的目的是篩選能高效降解物質(zhì)X的目的菌株，因此培養(yǎng)基中加物質(zhì)X，培養(yǎng)基M是選擇培養(yǎng)基，在該培養(yǎng)基中還加了磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素溶液，沒有其它的碳源或氮源，說(shuō)明物質(zhì)X為目的菌株提供生長(zhǎng)所需的氮源和碳源，A正確；B、振蕩培養(yǎng)有利于目的菌株充分利用培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，加速高效降解物質(zhì)X菌株的生長(zhǎng)和繁殖，B正確；C、在④接種時(shí)，用平板劃線法和稀釋涂布平板法均能很好的分離形成單菌落，兩者效果相似，C錯(cuò)誤；D、在②接種培養(yǎng)后，用瓶中物質(zhì)X含量最低的候選菌作為③選擇接種對(duì)象，因?yàn)槲镔|(zhì)X含量低，說(shuō)明菌株降解能力強(qiáng)，D正確。2．（2025·重慶渝中·三模）啤酒工業(yè)釀造流程主要為：大麥種子發(fā)芽→麥芽糖化→加啤酒花、煮沸→麥汁發(fā)酵→灌裝保存，其中麥汁發(fā)酵是啤酒釀造的重要過(guò)程，可分為接種酵母→充氧→主發(fā)酵→封罐→后發(fā)酵等步驟。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．用赤霉素溶液浸泡大麥種子可提高生產(chǎn)效率B．煮沸可以終止麥芽汁糖化并殺滅其中的微生物C．主發(fā)酵過(guò)程中，酵母菌以大麥中的淀粉為主要碳源D．后發(fā)酵階段，酵母菌細(xì)胞中既有[H]的生成，又有[H]的消耗【答案】C〖祥解〗啤酒工業(yè)釀造發(fā)酵過(guò)程分為主發(fā)酵和后發(fā)酵兩個(gè)階段。酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代謝物的生成都在主發(fā)酵階段完成。主發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液還不適合飲用，要在低溫、密閉的環(huán)境下儲(chǔ)存一段時(shí)間進(jìn)行后發(fā)酵，這樣才能形成澄清、成熟的啤酒。發(fā)酵的溫度和發(fā)酵的時(shí)間隨啤酒品種和口味要求的不同而有所差異。【詳析】A、用赤霉素溶液浸泡大麥種子可提高生產(chǎn)效率，這是因?yàn)槌嗝顾乜梢源龠M(jìn)種子萌發(fā)，通過(guò)促進(jìn)淀粉酶的合成在種子沒有發(fā)芽的情況下促進(jìn)了淀粉的分解，因而提高了生產(chǎn)效率，A正確；B、麥汁制備時(shí)，煮沸利用高溫使淀粉酶失活，可以終止淀粉酶的作用，同時(shí)殺滅其中的微生物，B正確；C、酵母細(xì)胞呼吸的底物為葡萄糖，不能直接利用淀粉，需要淀粉酶等將淀粉轉(zhuǎn)化成酵母菌可利用的糖，C錯(cuò)誤；D、后發(fā)酵階段，酵母菌細(xì)胞中進(jìn)行的是無(wú)氧呼吸，該過(guò)程中既有[H]的生成，又有[H]的消耗，D正確。3．（2025·重慶九龍坡·二模）野生型大腸桿菌菌株在基本培養(yǎng)基和完全培養(yǎng)基上均可繁殖，而營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株只能在完全培養(yǎng)基上繁殖。某實(shí)驗(yàn)室期望用夾層培養(yǎng)法篩選到符合預(yù)期的營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株，進(jìn)行了如下具體操作：先在培養(yǎng)皿底部倒一薄層已滅菌的基本培養(yǎng)基，再添加一層內(nèi)含菌液（經(jīng)誘變劑處理）的基本培養(yǎng)基后，再加一薄層已滅菌的基本培養(yǎng)基。培養(yǎng)一段時(shí)間后，對(duì)出現(xiàn)的菌落做好標(biāo)記；然后再加一層完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)一段時(shí)間后會(huì)長(zhǎng)出大小不一的菌落。已知大腸桿菌可透過(guò)薄層培養(yǎng)基形成菌落，下列說(shuō)法正確的是（）A．營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株是由野生型染色體變異形成B．完全培養(yǎng)基應(yīng)在干熱滅菌后立即倒入培養(yǎng)皿C．該實(shí)驗(yàn)無(wú)需設(shè)置未接種的夾層平板作為對(duì)照D．最終應(yīng)選取右圖中較小的菌落作為目標(biāo)菌種【答案】D〖祥解〗由題意知，營(yíng)養(yǎng)缺陷型是指野生型菌株由于基因突變，致使細(xì)胞合成途徑出現(xiàn)某些缺陷，喪失合成某些物質(zhì)的能力，如氨基酸、維生素、堿基等的合成能力出現(xiàn)缺陷，必須在基本培養(yǎng)基（野生型菌株最低營(yíng)養(yǎng)要求）中添加缺陷的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（補(bǔ)充培養(yǎng)基）才能正常生長(zhǎng)的一類突變株?！驹斘觥緼、大腸桿菌是原核生物，沒有染色體，營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株是由野生型基因突變形成，而不是染色體變異，A錯(cuò)誤；B、完全培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌，干熱滅菌法針對(duì)耐高溫且需要保持干燥的物品，如玻璃器皿等，且滅菌后的培養(yǎng)基需冷卻到50℃左右時(shí)再倒入培養(yǎng)皿，而不是立即倒入，B錯(cuò)誤；C、該實(shí)驗(yàn)需要設(shè)置未接種的夾層平板作為對(duì)照，用來(lái)判斷培養(yǎng)基是否被雜菌污染，C錯(cuò)誤；D、野生型大腸桿菌菌株在基本培養(yǎng)基和完全培養(yǎng)基上均可繁殖，營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株只能在完全培養(yǎng)基上繁殖，在基本培養(yǎng)基上不能繁殖，在完全培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的菌落中，較小的菌落很可能是營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株形成的，應(yīng)選取較小的菌落作為目標(biāo)菌種，D正確。4．（2025·重慶·模擬預(yù)測(cè)）我國(guó)科學(xué)家利用如下圖所示的液態(tài)厭氧發(fā)酵工藝，實(shí)現(xiàn)了高效產(chǎn)出乙醇和乙醇梭菌蛋白。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．乙醇梭菌可利用CO、CO?、H?等物質(zhì)生成乙醇B．乙醇梭菌是自養(yǎng)厭氧型細(xì)菌，發(fā)酵過(guò)程應(yīng)設(shè)定合適的溫度和pH，并適度攪拌C．通過(guò)該工藝高效生產(chǎn)清潔能源乙醇，可以降低生態(tài)足跡D．發(fā)酵完成后，可通過(guò)離心、提取、分離、純化等方法從上清液中獲得單細(xì)胞蛋白【答案】D〖祥解〗生態(tài)足跡，又叫生態(tài)占用，是指在現(xiàn)有技術(shù)條件下，維持某一人口單位（一個(gè)人、一個(gè)城市、一個(gè)國(guó)家或全人類）生存所需要的生產(chǎn)資源和吸納廢物的土地及水域的面積。【詳析】A、由圖可知，乙醇梭菌是自養(yǎng)厭氧型細(xì)菌，可利用CO、CO2、H2、無(wú)機(jī)鹽等無(wú)機(jī)物生成乙醇，A正確；B、發(fā)酵過(guò)程中應(yīng)設(shè)定合適的溫度和pH，提供厭氧環(huán)境，適度攪拌可提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率，B正確；C、高效生產(chǎn)清潔能源乙醇，可以減少工業(yè)尾氣排放，增加能源來(lái)源，降低生態(tài)足跡，C正確；D、發(fā)酵完成后，采用過(guò)濾、沉淀等方法將菌體分離和干燥，即可得到單細(xì)胞蛋白，D錯(cuò)誤。5．（2025·重慶·三模）硝化細(xì)菌是一種好氧菌，可有效凈化水體中銨鹽，降低高濃度銨鹽引發(fā)的池塘養(yǎng)殖對(duì)蝦的死亡率?？蒲腥藛T擬從當(dāng)?shù)貙?duì)蝦養(yǎng)殖池塘中篩選出對(duì)銨鹽降解率高的硝化細(xì)菌菌株，操作流程如下圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．在配制選擇培養(yǎng)基篩選硝化細(xì)菌時(shí)，不需要添加氮源B．從對(duì)蝦死亡率低的養(yǎng)殖池塘中取樣，能提高篩選的成功率C．用圖示方法純化菌種時(shí)，不能將最后一次的劃線與第一次的劃線相連D．應(yīng)選擇銨鹽濃度減少最多的一組候選菌進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)【答案】A〖祥解〗1、微生物常見的接種的方法：（1）平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。（2）稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。2、振蕩培養(yǎng)：提供充足氧氣、并使細(xì)菌與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充分接觸，擴(kuò)大培養(yǎng)?！驹斘觥緼、在配制選擇培養(yǎng)基篩選硝化細(xì)菌時(shí)，要以銨鹽為唯一氮源，A錯(cuò)誤；B、本題想要篩選出對(duì)銨鹽降解率高且穩(wěn)定的硝化細(xì)菌菌株，那么從對(duì)蝦死亡率低的養(yǎng)殖池塘中取樣，能提高篩選的成功率，B正確；C、圖示是平板畫線法，在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落，不能將最后一次的劃線與第一次的劃線相連，C正確；D、對(duì)銨鹽降解率越高，培養(yǎng)基中銨鹽濃度減小得越多，所以可選擇銨鹽濃度減小得最多的一組候選菌進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)，D正確。6．（2025·重慶·三模）線粒體替代療法（MRT）是一種細(xì)胞質(zhì)替換技術(shù)，將目標(biāo)細(xì)胞核轉(zhuǎn)移到健康去核細(xì)胞中以預(yù)防細(xì)胞質(zhì)基因遺傳病，主要包括受精卵細(xì)胞核移植（PNT）和卵母細(xì)胞紡錘體—染色體復(fù)合物移植（ST）兩種方法。已知在卵母細(xì)胞中，紡錘體區(qū)域的線粒體數(shù)量較少，而受精卵中線粒體均勻分布。下列說(shuō)法正確的是（）A．與ST相比，PNT的操作時(shí)間較早，細(xì)胞較為脆弱，因此成功率比ST低B．與PNT相比，ST能夠更好地避免線粒體DNA的遺傳C．只有通過(guò)PNT獲得的胚胎才可能擁有三個(gè)個(gè)體的遺傳物質(zhì)D．ST沒有對(duì)胚胎進(jìn)行操作，因此ST結(jié)束后不需要對(duì)重構(gòu)胚進(jìn)行激活處理【答案】B〖祥解〗細(xì)胞質(zhì)基因存在于線粒體等細(xì)胞器中，具有母系遺傳的特點(diǎn)，即后代的細(xì)胞質(zhì)基因主要來(lái)自母方?！驹斘觥緼、PNT是受精卵細(xì)胞核移植，受精卵比卵母細(xì)胞發(fā)育程度高，操作時(shí)間較晚，A錯(cuò)誤；B、因?yàn)槁涯讣?xì)胞中紡錘體區(qū)域線粒體數(shù)量較少，ST將卵母細(xì)胞紡錘體—染色體復(fù)合物移植到去核卵母細(xì)胞中，能更好地避免線粒體DNA的遺傳，B正確；C、PNT是將受精卵的細(xì)胞核移植到去核的健康細(xì)胞中，ST是將卵母細(xì)胞的紡錘體—染色體復(fù)合物移植到去核卵母細(xì)胞中，這兩種方法獲得的胚胎都擁有供核方、供質(zhì)方以及精子來(lái)源方三個(gè)個(gè)體的遺傳物質(zhì)，C錯(cuò)誤；

D、不管是PNT還是ST，重構(gòu)胚都需要進(jìn)行激活處理才能正常發(fā)育，D錯(cuò)誤。7．（2025·重慶渝中·三模）埃博拉病毒（EBOV）是一種極其危險(xiǎn)且罕見的病毒，其NP蛋白在EBOV的復(fù)制中具有重要作用，也是檢測(cè)EBOV的重要靶蛋白。如圖為研究人員利用NP蛋白制備抗EBOV單克隆抗體的實(shí)驗(yàn)流程。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．抗EBOV單克隆抗體進(jìn)入人體有引發(fā)過(guò)敏反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)B．NP蛋白基因若發(fā)生突變，抗EBOV單克隆抗體可能失效C．篩選1去除未融合的細(xì)胞以及融合的具有同種核的細(xì)胞D．可將篩選2獲得的細(xì)胞注入小鼠血液中實(shí)現(xiàn)單克隆抗體的大規(guī)模生產(chǎn)【答案】D〖祥解〗單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測(cè)，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。【詳析】A、抗EBOV單克隆抗體進(jìn)入人體對(duì)于部分人而言可能成為致敏原，進(jìn)而可能引發(fā)過(guò)敏反應(yīng)，A正確；B、NP蛋白基因若發(fā)生突變，則表達(dá)的抗原發(fā)生改變，抗EBOV單克隆抗體無(wú)法特異性識(shí)別結(jié)合變異后的抗原，進(jìn)而可能造成抗EBOV單克隆抗體失效，B正確；C、篩選1是為了去除未融合的細(xì)胞以及融合的具有同種核的細(xì)胞，獲得雜交瘤細(xì)胞，C正確；D、可將雜交瘤細(xì)胞注入小鼠腹腔中，在小鼠腹腔中增殖進(jìn)入從腹水中提取單克隆抗體，實(shí)現(xiàn)單克隆抗體的大規(guī)模生產(chǎn)，D錯(cuò)誤。8．（2025·重慶·模擬預(yù)測(cè)）為治療會(huì)導(dǎo)致肝功能損壞的酪氨酸血癥，我國(guó)科學(xué)家研究出了如圖所示的新型療法，將基因編輯肝細(xì)胞移植入模型小鼠，小鼠的肝功能得到恢復(fù)，下列有關(guān)說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）A．分散肝組織可以用機(jī)械方法，或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理B．培養(yǎng)原代肝細(xì)胞需要放置在密閉培養(yǎng)瓶中以防止雜菌污染C．構(gòu)建重組腺病毒時(shí)需使用限制酶和DNA連接酶D．基因編輯自體肝細(xì)胞移植能夠降低免疫排斥反應(yīng)【答案】B〖祥解〗在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，首先要對(duì)新鮮取材的動(dòng)物組織進(jìn)行處理，或用機(jī)械的方法，或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理一段時(shí)間，將組織分散成單個(gè)細(xì)胞。然后，用培養(yǎng)液將細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，再將細(xì)胞懸液放入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)，置于適宜環(huán)境中培養(yǎng)?！驹斘觥緼、獲得肝細(xì)胞后，可以用機(jī)械方法，或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理，使細(xì)胞分散，再加入培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液，A正確；B、培養(yǎng)原代肝細(xì)胞需要放置在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，B錯(cuò)誤；C、構(gòu)建重組腺病毒時(shí)，需要用限制酶對(duì)目的基因和載體分別進(jìn)行切割，再用DNA連接酶連接，C正確；D、基因編輯自體肝細(xì)胞來(lái)自自身細(xì)胞，進(jìn)行肝細(xì)胞移植時(shí)，可以有效的降低免疫排斥反應(yīng)，D正確。9．（2025·重慶·三模）圖為利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖菊花的示意圖。相關(guān)敘述正確的是（

）A．只有培養(yǎng)脫毒菊花試管苗才需要對(duì)分離的外植體進(jìn)行消毒處理B．再分化階段提高培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比值，有利于誘導(dǎo)生根C．再分化過(guò)程，愈傷組織細(xì)胞分化時(shí)可能會(huì)發(fā)生基因突變或基因重組D．剛培育出的試管苗弱小，應(yīng)攜帶培養(yǎng)基煉苗后再移栽至花盆【答案】B〖祥解〗植物組織培養(yǎng)過(guò)程是：離體的植物器官、組織或細(xì)胞脫分化形成愈傷組織，然后再分化生成根、芽，最終形成植物體。植物組織培養(yǎng)依據(jù)的原理是植物細(xì)胞的全能性?！驹斘觥緼、植物組培過(guò)程均需無(wú)毒無(wú)菌，均要對(duì)分離的外植體進(jìn)行消毒處理，A錯(cuò)誤；B、再分化階段提高培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比值，有利于誘導(dǎo)生根，B正確；C、再分化過(guò)程，愈傷組織細(xì)胞分化時(shí)進(jìn)行有絲分裂，可能會(huì)發(fā)生基因突變，不會(huì)有基因重組，C錯(cuò)誤；D、剛培育出的試管苗弱小，抗病能力差，攜帶培養(yǎng)基煉苗易被微生物污染，需要用流水清洗掉根部的培養(yǎng)基，D錯(cuò)誤。10．（2025·重慶萬(wàn)州·模擬預(yù)測(cè)）某科研團(tuán)隊(duì)通過(guò)細(xì)胞工程技術(shù)成功構(gòu)建了一種人工微型器官——類器官。類器官是在體外模擬體內(nèi)微環(huán)境，讓干細(xì)胞或祖細(xì)胞自我組織、發(fā)育形成的具有一定結(jié)構(gòu)和功能的三維細(xì)胞聚集體。下列有關(guān)類器官的敘述，錯(cuò)誤的是（

）A．類器官可用于藥物篩選和疾病模型的建立B．類器官的構(gòu)建過(guò)程體現(xiàn)了細(xì)胞的全能性C．類器官的培養(yǎng)需要添加糖類、氨基酸、血清等D．不同類型的類器官其細(xì)胞的基因表達(dá)情況存在差異【答案】B〖祥解〗細(xì)胞的全能性是指細(xì)胞經(jīng)分裂和分化后，仍具有產(chǎn)生完整有機(jī)體或分化成其他各種細(xì)胞的潛能和特性?！驹斘觥緼、類器官可以模擬人體器官的結(jié)構(gòu)和功能，可用于藥物篩選，觀察藥物對(duì)類器官的作用效果，也能建立疾病模型，研究疾病的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，A正確；B、細(xì)胞全能性是指細(xì)胞具有發(fā)育成完整個(gè)體或其他各種細(xì)胞的潛能，類器官只是具有一定結(jié)構(gòu)和功能的三維細(xì)胞聚集體，其構(gòu)建過(guò)程不能體現(xiàn)細(xì)胞的全能性，B錯(cuò)誤；C、類器官的培養(yǎng)需要適宜的條件，添加適宜的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生長(zhǎng)因子可以滿足細(xì)胞生長(zhǎng)和發(fā)育的需求，如加入糖類、氨基酸、血清等，C正確；D、不同類型的類器官其功能不同，是基因選擇性表達(dá)的結(jié)果，所以細(xì)胞的基因表達(dá)情況存在差異，D正確。二、非選擇題11．（2025·重慶·二模）半紅樹植物是指既能在潮間帶生存，又能在陸地環(huán)境中自然繁殖的兩棲木本植物。為促進(jìn)生根，提高育苗效率，研究人員開展了半紅樹黃水皮幼苗的培養(yǎng)研究結(jié)果如表。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：表

黃水皮幼苗生長(zhǎng)情況組別培養(yǎng)基成分實(shí)驗(yàn)結(jié)果CaCl·2H2O（mg/L）MgSO，7H2O（mg/L）基質(zhì)種類平均根長(zhǎng)（cm）最長(zhǎng)根長(zhǎng)（cm）地徑（mm）移栽成活率（%）1110002000稻殼碳混合培養(yǎng)基13.4315.523.78100T29001750稻殼碳混合培養(yǎng)基9.5913.413.71100T38001500稻殼碳混合培養(yǎng)基8.7112.133.62100T411002250稻殼碳混合培養(yǎng)基15.1016.214.62100T512002500稻殼碳混合培養(yǎng)基16.5521.004.9898T610002000全蛭石培養(yǎng)基8.9913.223.7194CK440370含蔗糖的MS培養(yǎng)基7.329.623.020注：混合培養(yǎng)基由蛭石、稻殼碳和無(wú)糖MS培養(yǎng)基按照一定體積比例配制(1)Ca2+和Mg2+在根尖細(xì)胞中的作用。(2)T1-T6結(jié)果顯示，蛭石和稻殼碳混合培養(yǎng)基在培育紅樹幼苗生根方面具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，混合培養(yǎng)基的特點(diǎn)是，對(duì)照組幼苗移栽后30天內(nèi)全部死亡，主要原因是(3)黃水皮植株的根部形成了根瘤結(jié)構(gòu)，其中根瘤菌與黃水皮植株的種間關(guān)系是。將黃水皮與木麻黃進(jìn)行套種，該群落中的木麻黃生長(zhǎng)速度比黃水皮快，據(jù)此（填“能”或“不能”）判斷木麻黃是否屬于優(yōu)勢(shì)種。從群落結(jié)構(gòu)的角度分析，套種形成了復(fù)層混交林，其生物學(xué)意義是?！敬鸢浮?1)細(xì)胞結(jié)構(gòu)的重要組成部分；維持細(xì)胞內(nèi)滲透壓；維持細(xì)胞正常的生命活動(dòng)(2)保水、疏松，模擬原始生境移栽前后細(xì)胞滲透壓劇烈變化(3)互利共生不能提高群落對(duì)光照等環(huán)境資源的利用率〖祥解〗群落的空間結(jié)構(gòu)分為垂直結(jié)構(gòu)和水平結(jié)構(gòu)：（1）群落的垂直結(jié)構(gòu)：指群落在垂直方面的配置狀態(tài)，其最顯著的特征是分層現(xiàn)象，即在垂直方向上分成許多層次的現(xiàn)象。影響植物群落垂直分層的主要因素是光照，影響動(dòng)物群落垂直分層的主要因素為食物和棲息空間。（2）群落水平結(jié)構(gòu)：在水平方向上，由于地形的起伏、光照的陰暗、濕度的大小等因素的影響，不同地段往往分布著不同的種群，種群密度也有差別。群落水平結(jié)構(gòu)的特征是鑲嵌性。鑲嵌性即植物種類在水平方向不均勻配置，使群落在外形上表現(xiàn)為斑塊相間的現(xiàn)象?！驹斘觥浚?）Ca2+和Mg2+都屬于無(wú)機(jī)鹽離子，Ca2+和Mg2+在根尖細(xì)胞中的作用是細(xì)胞結(jié)構(gòu)的重要組成部分；維持細(xì)胞內(nèi)滲透壓；維持細(xì)胞正常的生命活動(dòng)。（2）分析題意可知，混合培養(yǎng)基由蛭石、稻殼碳和無(wú)糖MS培養(yǎng)基按照一定體積比例配制，該培養(yǎng)基結(jié)合了蛭石的保水性、稻殼碳的透氣性，即具有保水、疏松，模擬原始生境的優(yōu)點(diǎn)；對(duì)照組（CK）使用含蔗糖的MS培養(yǎng)基，蔗糖導(dǎo)致外界環(huán)境的滲透壓增大，故移栽前后細(xì)胞滲透壓劇烈變化，導(dǎo)致其全部死亡。（3）根瘤菌為黃水皮固氮提供NH??，黃水皮為根瘤菌提供有機(jī)物，屬于互利共生；優(yōu)勢(shì)種需綜合考慮數(shù)量、覆蓋度及生態(tài)功能，僅憑生長(zhǎng)速度無(wú)法判定；從群落垂直結(jié)構(gòu)的角度分析，套種形成了復(fù)層混交林，其生物學(xué)意義是提高群落對(duì)光照等環(huán)境資源的利用率。12．（2024·重慶九龍坡·三模）自然條件下哺乳動(dòng)物不發(fā)生孤雌生殖，云南農(nóng)大科研團(tuán)隊(duì)把豬卵母細(xì)胞進(jìn)行人為的孤雌激活處理，使其發(fā)育成胚胎，將胚胎移植到代孕母豬體內(nèi)，獲得世界上第一批成活的孤雌生殖克隆豬。這種克隆豬不同于核移植獲得的克隆豬，現(xiàn)將兩種技術(shù)進(jìn)行比較。(1)卵母細(xì)胞能夠發(fā)育成早期胚胎得到克隆豬，說(shuō)明卵母細(xì)胞具有；圖中①②③④是獲得孤雌生殖克隆豬的流程，那么獲得核移植克隆豬的流程是（填序號(hào)）。(2)在體細(xì)胞核移植技術(shù)中也會(huì)用到卵母細(xì)胞，使用處理，使良種母豬超數(shù)排卵，收集并選取期的卵母細(xì)胞，并用微型吸管吸出。(3)在胚胎移植前，需通過(guò)技術(shù)形成多個(gè)胚胎，以進(jìn)一步增加胚胎的數(shù)量。從免疫學(xué)角度分析，早期胚胎能夠在受體內(nèi)存活的主要生理基礎(chǔ)是。(4)可以從兩種不同的克隆豬中提取mRNA進(jìn)行研究，通過(guò)方法得到多種cDNA，并通過(guò)技術(shù)擴(kuò)增產(chǎn)物?！敬鸢浮?1)全能性⑤⑥③④(2)促性腺激素減數(shù)第二次分裂中細(xì)胞核和第一極體(3)胚胎分割受體對(duì)移入子宮的早期胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)(4)逆轉(zhuǎn)錄PCR〖祥解〗圖示為體細(xì)胞克隆豬的培育流程，其中①表示孤雌激活處理，②表示早期胚胎發(fā)育過(guò)程，③表示胚胎移植技術(shù)，④表示妊娠形成克隆豬，⑤表示核移植過(guò)程，⑥表示早期胚胎培養(yǎng)過(guò)程?！驹斘觥浚?）卵母細(xì)胞能夠發(fā)育成早期胚胎得到克隆豬，說(shuō)明卵母細(xì)胞具有全能性；圖示為體細(xì)胞克隆豬的培育流程，其中①表示孤雌激活處理，②表示早期胚胎發(fā)育過(guò)程，③表示胚胎移植技術(shù)，④表示妊娠形成克隆豬，⑤表示核移植過(guò)程，⑥表示早期胚胎培養(yǎng)過(guò)程，由圖可知，圖中①②③④過(guò)程是獲得孤雌生殖克隆豬的技術(shù)流程，而⑤⑥③④是獲得核移植克隆豬的技術(shù)流程。（2）在體細(xì)胞核移植技術(shù)中也會(huì)用到卵母細(xì)胞，使用促性腺激素處理，使良種母豬超數(shù)排卵，收集并選取減數(shù)第二次分裂中期的卵母細(xì)胞，并用微型吸管吸出細(xì)胞核和第一極體。（3）在胚胎移植前，需通過(guò)胚胎分割技術(shù)形成多個(gè)胚胎，以進(jìn)一步增加胚胎的數(shù)量。從免疫學(xué)角度分析，早期胚胎能夠在受體內(nèi)存活是因?yàn)槭荏w對(duì)移入子宮的早期胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)。（4）可以從兩種不同的克隆豬中提取mRNA，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄方法得到多種cDNA，并通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增產(chǎn)物。13．（2024·重慶·模擬預(yù)測(cè)）青霉菌產(chǎn)生青霉素需要持續(xù)性提供高氧環(huán)境?？紤]到血紅蛋白攜帶氧氣的能力很強(qiáng)，科學(xué)家們?cè)O(shè)想了以下兩種方案來(lái)得到含有血紅蛋白的青霉菌。方案一：提取血紅蛋白基因，轉(zhuǎn)入青霉菌細(xì)胞，血紅蛋白基因表達(dá)從而得到含血紅蛋白的青霉菌；方案二：將含有血紅蛋白的透明顫菌與青霉菌融合，得到含血紅蛋白的雜種青霉菌。方案二如圖所示：一些科學(xué)家嘗試采用方案一：(1)請(qǐng)補(bǔ)充完整具體的操作過(guò)程。第一步：篩選并獲??；第二步：將目的基因和質(zhì)粒用限制酶處理后，再利用將目的基因和質(zhì)粒連接在一起形成基因表達(dá)載體；第三步：將目的基因?qū)爰?xì)胞；第四步：檢測(cè)與鑒定。(2)通過(guò)檢測(cè)以下轉(zhuǎn)基因青霉菌的哪些項(xiàng)目可以確定方案一是否成功?。A．單位時(shí)間內(nèi)青霉素的產(chǎn)量 B．是否含有血紅蛋白基因C．是否含血紅蛋白基因的mRNA D．耗氧速率E．血紅蛋白含量另一部分科學(xué)家采用方案二：(3)現(xiàn)有蛋白酶、溶菌酶、纖維素酶、脂肪酶、淀粉酶可選，處理②應(yīng)選擇。(4)經(jīng)過(guò)處理③后會(huì)得到多種類型的細(xì)胞，請(qǐng)簡(jiǎn)述通過(guò)處理④篩選出雜種菌株的方法:。(5)如果處理③用于融合動(dòng)物細(xì)胞，則特有的方式是。有同學(xué)提出方案三：(6)利用青霉菌和透明顫菌作親本進(jìn)行雜交，篩選得到含有血紅蛋白的雜種菌。該方案是否可行?。原因是。【答案】(1)血紅蛋白基因DNA連接酶(2)ADE(3)溶菌酶(4)在缺乏甲硫氨酸和精氨酸的培養(yǎng)基培養(yǎng)融合細(xì)胞，能夠生長(zhǎng)的即為雜種菌株(5)滅活病毒誘導(dǎo)(6)不可行雜交育種應(yīng)用在同種生物不同品種的選育上，而青霉菌和透明顫菌為不同的物種，二者之間存在生殖隔離，且細(xì)菌的生殖方式為無(wú)性生殖，因而不可用雜交育種的方法進(jìn)行育種〖祥解〗植物體細(xì)胞雜交是指將不同種的植物體細(xì)胞，在一定條件下融合成雜種細(xì)胞，并把雜種細(xì)胞培育成新的植物體的技術(shù)。誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法：物理法（離心、振動(dòng)、電激等）和化學(xué)法（聚乙二醇等）。植物體細(xì)胞雜交的意義：克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，擴(kuò)大親本范圍，培育作物新品種?；蚬こ碳夹g(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定?！驹斘觥浚?）基因工程首先要獲取目的基因，目的基因在本題中是血紅蛋白基因；要連接目的基因和質(zhì)粒，需要用DNA連接酶。（2）題干中最終目的是要得到含有血紅蛋白的青霉菌，所以可以通過(guò)測(cè)量青霉菌的血紅蛋白含量或者單位時(shí)間內(nèi)青霉素的產(chǎn)量或者耗氧速率來(lái)確定方案一成功與否，故選ADE。（3）處理②是去掉細(xì)菌的細(xì)胞壁，溶菌酶可以去掉細(xì)菌的細(xì)胞壁，所以選溶菌酶。（4）圖中的雜種菌株是由甲硫氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型青霉菌和精氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型透明顫菌融合形成的，則雜種菌株應(yīng)該表現(xiàn)為在缺乏甲硫氨酸和精氨酸的培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)，而其他的兩種自融類型的菌株則不會(huì)在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，據(jù)此經(jīng)過(guò)處理④從融合細(xì)胞中篩選出目的菌株。（5）如果是動(dòng)物細(xì)胞融合，處理③特有的方式是用滅活病毒誘導(dǎo)法。（6）雜交育種用于同種生物的不同品種之間，而后篩選獲得符合要求的品種，而本題中的青霉菌和透明顫菌之間存在生殖隔離，即不是同一個(gè)物種，因而不可用雜交育種的方式培養(yǎng)出雜種菌株，且細(xì)菌的生殖方式一般為無(wú)性繁殖。14．（2025·重慶·三模）科研人員將綠色熒光蛋白（GFP）基因隨機(jī)插入到小麥旗葉的基因組中，發(fā)現(xiàn)小麥旗葉細(xì)胞除了有熒光信號(hào)外，整個(gè)旗葉也表現(xiàn)出黃化趨勢(shì)，推測(cè)GFP基因隨機(jī)插入時(shí)破壞了小麥旗葉色素合成的相關(guān)基因。為了驗(yàn)證這一猜想，科研人員利用YADE（Y形接頭依賴性延伸）法擴(kuò)增出插入位點(diǎn)附近的DNA片段，進(jìn)行測(cè)序、比對(duì)后發(fā)現(xiàn)GFP基因插入到了葉綠素合成關(guān)鍵基因的編碼區(qū)。YADE法具體操作流程如圖所示:接頭長(zhǎng)鏈序列:5′-TAGCAAGGTAGTGC-3′接頭短鏈序列:5′-AATTGCACTATGCA-3′EcoR

Ⅰ識(shí)別序列:5′-G↓AATTC-3′注:若PCR產(chǎn)物中存在非特異性單鏈DNA會(huì)導(dǎo)致測(cè)序結(jié)果可信度下降。(1)步驟①可以向含DNA的濾液中加入后進(jìn)行離心，取（填"上清液"或"沉淀物"）即可獲得粗提的旗葉總DNA。(2)"Y"形接頭的兩條鏈需要先通過(guò)（填原理）彼此結(jié)合，再根據(jù)DNA片段的黏性末端，讓（填"接頭長(zhǎng)鏈"或"接頭短鏈"）的對(duì)應(yīng)序列結(jié)合在DNA片段上，最后需要DNA連接酶將接頭穩(wěn)定連接在（填"含GFP的DNA"或"全部DNA"）片段的兩端。(3)根據(jù)兩次PCR的操作過(guò)程，接頭引物P1序列應(yīng)與（填"接頭長(zhǎng)鏈"或"接頭短鏈"）的部分序列一致。從接頭引物發(fā)揮作用的角度分析，兩條接頭鏈不完全互補(bǔ)的好處是。(4)引物S1是根據(jù)GFP基因序列設(shè)計(jì)的，其作用是擴(kuò)增出。在YADE法中，S1先介導(dǎo)線性擴(kuò)增，獲得一定數(shù)量的線性DNA（特異性單鏈DNA），再與P?共同介導(dǎo)指數(shù)擴(kuò)增，獲得大量雙鏈DNA，保證了擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性，提高了插入基因定位的可靠性。請(qǐng)根據(jù)S1和P1的作用順序回答YADE法能精準(zhǔn)測(cè)出GFP插入位點(diǎn)的原理?！敬鸢浮?1)預(yù)冷的酒精沉淀物(2)堿基互補(bǔ)配對(duì)接頭短鏈全部DNA(3)接頭長(zhǎng)鏈所有DNA片段都含有接頭，兩條接頭鏈不完全互補(bǔ)可以避免接頭引物與接頭短鏈在復(fù)性階段互補(bǔ)，導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)(4)GFP附近的未知序列和接頭長(zhǎng)鏈的互補(bǔ)序列只有在擴(kuò)增出線性DNA后才有模板可以結(jié)合，保證指數(shù)擴(kuò)增出的DNA片段含有GFP附近的未知序列，測(cè)序后可比對(duì)得出GFP插入位點(diǎn)〖祥解〗基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定?！驹斘觥浚?）提取DNA時(shí)需向含DNA的濾液中加入預(yù)冷的酒精溶液后進(jìn)行離心，取沉淀物，即可獲得粗提的旗葉總DNA。（2）通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)，接頭長(zhǎng)鏈可以與短鏈結(jié)合，形成穩(wěn)定的雙鏈結(jié)構(gòu)。接頭短鏈含有DNA片段黏性末端的互補(bǔ)序列，容易與DNA片段結(jié)合。最后，使用DNA連接酶將接頭穩(wěn)定連接在含GFP的DNA片段的兩端，確保連接的穩(wěn)定性。（3）接頭引物P1與接頭長(zhǎng)鏈的互補(bǔ)鏈結(jié)合，兩條接頭鏈不完全互補(bǔ)的設(shè)計(jì)可以防止接頭，引物在沒有引物S1引導(dǎo)合成的互補(bǔ)序列時(shí)與接頭短鏈結(jié)合，從而減少非特異性擴(kuò)增的背景干擾，提高擴(kuò)增的特異性。（4）引物S1根據(jù)GFP基因序列設(shè)計(jì)，用于擴(kuò)增與GFP基因相鄰的未知序列和接頭長(zhǎng)鏈的互補(bǔ)序列。P1只有在S1擴(kuò)增出線性DNA后才有模板可以結(jié)合，保證指數(shù)擴(kuò)增出的DNA片段含有GFP附近的未知序列，測(cè)序后可比對(duì)得出GFP插入位點(diǎn)。15．（2025·重慶·模擬預(yù)測(cè)）抗菌肽是生物體為了抵抗外來(lái)細(xì)菌而迅速誘導(dǎo)產(chǎn)生的一系列具有抗菌或殺菌活性的多肽類物質(zhì)，在醫(yī)學(xué)上具有重要應(yīng)用價(jià)值。研究人員根據(jù)天然抗菌肽A和抗菌肽D的部分氨基酸序列，以及酵母菌對(duì)密碼子的偏好，人工設(shè)計(jì)并合成了抗菌肽AD基因，然后利用酵母菌發(fā)酵生產(chǎn)活性更高的抗菌肽AD，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：注:K為賴氨酸，A為丙氨酸，M為甲硫氨酸（5’-AUG-3’），起始密碼子為5’-AUG-3’，終止密碼子為5’-UAA-3’。Leu?為控制亮氨酸合成的基因，Ampr為氨芐青霉素抗性基因，O為復(fù)制原點(diǎn)。(1)由抗菌肽AD的氨基酸序列可推出多種不同序列的AD基因，原因是。圖中丙氨酸A的反密碼子為5’--3’。(2)研究人員在人工合成AD基因后，為了使AD基因與pC穿梭質(zhì)粒正確連接，設(shè)計(jì)了引物P1（由12個(gè)脫氧核苷酸組成的正向引物，結(jié)合在AD基因的上游）和P2（由18個(gè)脫氧核苷酸組成的反向引物，結(jié)合在AD基因的下游），通過(guò)PCR擴(kuò)增AD基因，然后與pC穿梭質(zhì)粒連接形成重組質(zhì)粒。據(jù)圖推測(cè)引物P1的堿基序列為5’--3’。在引物P2中，除了構(gòu)建相應(yīng)限制酶的識(shí)別序列外，還構(gòu)建了2個(gè)終止密碼子的編碼序列，以保證翻譯過(guò)程的順利進(jìn)行，推測(cè)引物P2的堿基序列為：5’--3’(3)將AD基因重組質(zhì)粒導(dǎo)入酵母菌后，需用選擇培養(yǎng)基篩選并培養(yǎng)受體菌。從培養(yǎng)基的成分分析，該選擇培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基的不同之處是。(4)本研究采用的部分生物技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程，理由是?！敬鸢浮?1)密碼子具有簡(jiǎn)并性AGC(2)GGATCCATGAAAGTCGACTTATTACTTAGC(3)不含亮氨酸、加入氨芐青霉素(4)抗菌肽AD由天然抗菌肽A和抗菌肽D改造拼接而成，其氨基酸序列在自然界中并不存在（根據(jù)酵母菌對(duì)密碼子的偏好，人工設(shè)計(jì)并合成了抗菌肽AD基因，并不影響氨基酸序列，不能作為判斷的理由。）〖祥解〗基因工程是指按照人們的愿望，通過(guò)體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品的技術(shù)。蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過(guò)基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求?！驹斘觥浚?）因?yàn)槊艽a子具有簡(jiǎn)并性，即一種氨基酸可能由多種密碼子編碼，所以由抗菌肽AD的氨基酸序列可推出多種不同序列的AD基因。起始密碼子為5’-AUG-3’，可知以圖中下鏈作為轉(zhuǎn)錄的模板鏈，轉(zhuǎn)錄的模板鏈中丙氨酸對(duì)應(yīng)的堿基序列為3'-CGA-5'，故丙氨酸的密碼子為5'-GCU-3'，根據(jù)反密碼子與密碼子堿基互補(bǔ)配對(duì)（A-U、C-G）且方向相反，所以丙氨酸A的反密碼子為5'-AGC-3'。（2）要使AD基因與pC穿梭質(zhì)粒正確連接，觀察質(zhì)粒上的酶切位點(diǎn)，AD基因上游應(yīng)構(gòu)建BamHⅠ的識(shí)別序列5'-GGATCC-3'，引物與DNA鏈的3'互補(bǔ)配對(duì)，由于引物P1是12個(gè)脫氧核苷酸組成的正向引物且結(jié)合在AD基因的上游，所以引物P1的堿基序列為5'-GGATCCATGAAA-3'（取前12個(gè)堿基5'-GGATCC-3'）。AD基因下游應(yīng)構(gòu)建SalⅠ的識(shí)別序列5'-GTCGAC-3'，又因?yàn)橐獦?gòu)建2個(gè)終止密碼子的編碼序列（終止密碼子為5'-UAA-3'，其DNA模板鏈的編碼序列為3'-ATT-5'），所以引物P2的堿基序列為5'-GTCGACTTATTACTTAGC-3'。

（3）觀察質(zhì)?？芍?，質(zhì)粒上含有氨芐青霉素抗性基因Ampr，所以該選擇培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基的不同之處是不含亮氨酸、加入氨芐青霉素，這樣可以篩選出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒（含有氨芐青霉素抗性基因）的酵母菌。（4）蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過(guò)基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求?？咕腁D由天然抗菌肽A和抗菌肽D改造拼接而成，其氨基酸序列在自然界中并不存在。本研究采用的部分生物技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程。16．（2025·重慶·三模）酵母雙雜交技術(shù)是研究活細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)之間相互作用的技術(shù)。酵母菌的轉(zhuǎn)錄激活因子包括DNA結(jié)合域（BD）和轉(zhuǎn)錄激活域（AD），這兩個(gè)結(jié)構(gòu)單獨(dú)存在時(shí)不能激活轉(zhuǎn)錄。將蛋白X與BD融合形成“誘餌”，蛋白質(zhì)Y與AD融合稱為“獵物”，蛋白X和Y有相互作用時(shí)，兩結(jié)構(gòu)域能呈現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子活性，從而激活報(bào)告基因的表達(dá)，原理如圖1所示。研究人員以酵母菌為受體細(xì)胞，運(yùn)用酵母雙雜交技術(shù)找出了柑橘黃龍病致病菌分泌的SDE19蛋白在柑橘中發(fā)揮作用的靶蛋白。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：注：Ampr為氨芐青霉素抗性基因，TRP基因、LEU基因分別編碼合成Trp、Leu兩種氨基酸的酶；SalI、NdeI、EcoRI，BamHI，NotI，HindIII為酶切位點(diǎn)。(1)研究人員將編碼SDE19蛋白基因連接到含有編碼BD多肽基因的質(zhì)粒pBD中，獲得BD-SDE19融合表達(dá)載體。通過(guò)PCR獲取SDE19蛋白基因時(shí)，需在引物1和引物2的（“3'”或“5'”）端分別添加酶切位點(diǎn)和。(2)為尋找SDE19在柑橘中的靶蛋白，需要提取柑橘細(xì)胞的RNA，通過(guò)獲得cDNA，再將其插入（“質(zhì)粒pAD”或“質(zhì)粒pBD”）中，構(gòu)建相應(yīng)表達(dá)載體。(3)研究人員選用Trp、Leu氨基酸合成缺陷型酵母菌作為受體菌，原因是，若所利用的報(bào)告基因?yàn)闊晒獾鞍谆颍瑒t含有SDE19蛋白發(fā)揮作用的靶蛋白的酵母菌菌落會(huì)表現(xiàn)為?！敬鸢浮?1)5＇salⅠNdeⅠ(2)逆轉(zhuǎn)錄質(zhì)粒pAD(3)只有同時(shí)獲得含pBD和pAD兩種基因表達(dá)載體的酵母菌才能在缺乏Trp、Leu氨基酸的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，便于篩選發(fā)出熒光〖祥解〗基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因——DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA——分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)——抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！驹斘觥浚?）為獲得BD-SDE19融合表達(dá)載體，需要將SDE19蛋白基因插入啟動(dòng)子1和終止子1之間，由于SDE19蛋白基因上有EcoRⅠ酶切位點(diǎn)，為避免目的基因受到破壞，不能選擇EcoRⅠ酶切位點(diǎn)，轉(zhuǎn)錄是從模板鏈的3'至5’端進(jìn)行的，因此應(yīng)該需在引物1和引物2的5'端分別插入SalI和NdeI的酶切位點(diǎn)。（2）RNA需要經(jīng)過(guò)逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA，根據(jù)題干信息“將蛋白X與BD融合形成“誘餌”，蛋白質(zhì)Y與AD融合稱為“獵物”，蛋白X和Y有相互作用時(shí)，兩結(jié)構(gòu)域能呈現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子活性，從而激活報(bào)告基因的表達(dá)”，SDE19插入的pBD質(zhì)粒，所以其靶蛋白需要單獨(dú)存在，插入pAD質(zhì)粒中。（3）pAD只能合成Trp，不能合成Leu，pBD只能合成Leu，不能合成Trp，只有同時(shí)獲得含pBD和pAD兩種基因表達(dá)載體的酵母菌才能在缺乏Trp、Leu氨基酸的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，便于篩選，所以選用Trp、Leu氨基酸合成缺陷型酵母菌作為受體菌，若所利用的報(bào)告基因?yàn)闊晒獾鞍谆颍瑒t含有SDE19蛋白發(fā)揮作用的靶蛋白的酵母菌菌落會(huì)表現(xiàn)為發(fā)出熒光。17．（2025·重慶萬(wàn)州·模擬預(yù)測(cè)）科研團(tuán)隊(duì)為了研究番茄抗蟲基因（SIJA2）的功能，進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。圖1為SIJA2基因